断乳前丰富环境暴露促进大鼠学习记忆及海马神经发生

目的 探讨断乳前丰富环境(Enriched environment)暴露对大鼠空间记忆和海马神经发生的影响.方法 新生大鼠随机分为对照组和丰富环境组,丰富环境组大鼠每日予以丰富环境暴露20 min.50 d龄开始用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力.采用BrdU标记增殖细胞,观察2组海马神经发生情况,并对海马神经发生与Morris水迷宫测试成绩作相关分析.结果 丰富环境组Morris水迷宫成绩优于对照组,差异均有显著性(均P ＜0.05).丰富环境组大鼠海马区BrdU阳性细胞数[(5363±487)个]、神经元分化率[(85.0±2.8)%]和星形胶质细胞分化率[(4.0±0.5)%]均高于对照组[分别为(2984±318)个,(80.2±2.8)%,(2.6±0.6)%](均P ＜0.01).相关分析显示对照组海马DG区新生神经元数目与Morris水迷宫测试成绩相关(r =0.648,0.609,P ＜0.05),但在丰富环境组中相关性消失.结论 断乳前丰富环境暴露可以促进海马神经发生和海马功能.丰富环境暴露在新生期或幼年期脑损伤康复治疗中可能有良好的应用前景.     

断乳前丰富环境暴露促进海马神经发生及其机制研究

目的探讨断乳前丰富环境暴露对海马神经发生的影响及其可能机制。方法36只10日龄的SD大鼠随机分为对照组和丰富环境组,每组18只。10-24日龄时两组大鼠隔日予以Brdu50mg／kg腹腔注射,丰富环境组大鼠每日予以丰富环境暴露20min。24日龄时丰富环境暴露结束后两组各取6只大鼠取海马提核蛋白行钙调蛋白和磷酸化CREB Western印迹检测。63日龄时处死其余大鼠取脑行冰冻切片,取前囟后3．6mm部位切片行尼氏染色,计数右侧海马齿状回细胞数目。BIdu免疫组化后计算右侧海马DG区BrdU阳性细胞数目。免疫荧光双标后计算BrdU阳性细胞分化为神经元（BrdU／NeuN共表达）和星性胶质细胞（BrdU／GFAP共表达）的比率。结果Western印迹检测结果显示与对照组比较,丰富环境组大鼠海马核蛋白的钙调蛋白（0．605±0．03 5 vs 0．245±0．035,t=-10．182,P=0．01）和磷酸化CREB（0．485±0．007 vs 0．220±0．014,t=-23．702,P=0．002）水平较高。尼氏染色后计数前囟后3．6min部位右侧海马齿状回细胞数目,结果显示丰富环境组细胞数目明显多于对照组（1580±72 vs 1375±62,t=-7．461,P〈0．01）。丰富环境组大鼠右侧海马区BrdU阳性细胞数明显多于对照组（5363±487 vs 2984±318,t=-14.177,P〈0.01）,且神经元分化率（85．0％±2．8％ vs 80．2％±2．8％,t=-4．166,P〈0．01）和星形胶质细胞分化率也高于对照组（4．0％±0．5％vs2．6％±0．6％,t=-6．493,P〈0．01）。结论断乳前丰富环境暴露可以促进海马神经发生,其机制有可能与丰富环境暴露促进海马钙调蛋白和CREB活化有关。     

游泳训练对新生大鼠学习记忆和海马神经发生的影响

目的 观察游泳训练对新生大鼠学习记忆和海马神经发生的影响。方法雄性7日龄新生SD大鼠随机分为对照和游泳训练组。训练组大鼠出生后第11天进行无负重游泳训练3周。Morris水迷宫法检测学习记忆能力,BrdU⁺/NeuN⁺免疫荧光双标染色分析海马神经发生,Western blot检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达。结果对照和游泳训练组大鼠随着训练天数增加,寻找平台潜伏期均明显缩短(均P<0.05);定位航行实验的第二、三和四天,游泳训练组大鼠寻找平台潜伏期较对照组均显著减小(均P<0.05)。游泳训练组大鼠穿越目标次数何时间明显增加(均P<0.05)。与对照相比,游泳训练组大鼠海马齿状回NeuN＋/BrdU＋阳性数量显著增加(P<0.05),BDNF表达显著增加(P<0.05)。结论游泳训练提高了新生大鼠的学习记忆能力,其机制可能与游泳训练显著上调大鼠海马BDNF的表达促进海马神经发生有关。     

健脑方促进脑缺血后大鼠海马神经发生的作用研究

目的观察中药健脑方对脑缺血后大鼠海马齿状回神经发生以及空间学习记忆功能的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。采取永久结扎双侧颈总动脉制作全脑缺血模型。术后治疗组给予健脑方灌胃干预,模型组给予等量生理盐水。使用BrdU标记技术观察缺血后海马齿状回的神经发生,采用Morris水迷宫试验评价大鼠空间学习能力。结果模型组和治疗组海马齿状回BrdU阳性细胞数分别在缺血后第7天达到最高峰。而缺血后7、14、20、28 d治疗组BrdU阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05或P<0.01)。水迷宫试验显示术后第14天治疗组大鼠寻台平均时间明显短于模型组(P<0.05)。结论健脑方能持续明显促进脑缺血后大鼠海马齿状回神经发生,并改善大鼠的空间学习能力。     

新生大鼠海马神经干细胞的体外培养及鉴定

目的探讨新生大鼠海马神经干细胞（NSC）的体外培养和诱导分化的条件和特点。方法分离出生1d大鼠海马,在表皮生长因子、碱性成纤维生成因子和B27联合作用下使其稳定增殖,用5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记处于增殖状态的神经干细胞,应用免疫荧光染色方法行巢蛋白（Nestin）、5-溴脱氧尿苷（BrdU）、β-Ⅲ型微管蛋白（Tuj-1）、波形蛋白（Vimentin）和Galc-C免疫荧光染色,对NSC的增殖及其分化的细胞进行鉴定。结果体外培养的NSC增殖成神经干细胞球并传代,鉴定为Nestin染色阳性细胞和5．溴脱氧尿苷（B枷）标记染色阳性细胞,并可诱导分化为神经元细胞（Tuj-1染色阳性细胞）、神经胶质细胞（Vimentin染色阳性细胞）和少突胶质细胞（Galc-C染色阳性细胞）。结论采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的新生大鼠海马NSC。     

丰富环境对大鼠学习记忆及海马CA1区脑源性神经营养因子表达的影响

目的 探讨丰富环境对Wistar大鼠学习记忆的影响及其脑源性神经营养因子(BDNF)机制.方法 20只3周龄Wistar大鼠随机分为丰富环境组和正常对照组,分别在丰富环境和正常环境喂养30d.Morris水迷宫实验评定其学习记忆能力,免疫组化检测海马CA1区BDNF的蛋白表达.结果 丰富环境组大鼠逃避潜伏期[(24.37±5.45)s]显著短于对照组[(31.28±5.39)s],差异具有显著性(P<0.05);丰富环境组跨越平台次数[(3.38±0.79)次]、平台象限游泳距离[(915.52±125.12)cm]明显多于对照组[(2.21±0.49)次、(468.67±70.29)cm],差异具有显著性(P<0.01);丰富环境组海马CA.区BDNF灰度值(128.79±8.45)明显小于正常对照组(142.57±9.36),差异具有显著性(P<0.05).结论 丰富环境明显增强大鼠的学习记忆能力,其可能是通过BDNF机制实现的.     

丰富环境对孕期应激大鼠子代海马糖皮质激素的影响

目的：检测丰富环境对孕期应激大鼠子代海马糖皮质激素受体（GlucocorticoidReceptor,GR）的影响。方法：SD孕鼠随机分为2组,正常组和实验组。正常组动物不做任何处理,其子代断乳后在标准环境下喂养;实验组动物在孕第13～19天接受限制性应激,其子代断乳后一半在标准环境下喂养（构成应激组）,另一半子代在丰富的环境下喂养（构成应激＋丰富环境组）。所有子代出生后第35天被处死。用ABC免疫组织化学和Westernblot方法分别检测海马GR的表达。结果：GR阳性产物广泛分布于海马各区神经元,应激组GR表达明显少于正常组;应激＋丰富环境组海马GR的表达明显多于应激组,与正常组相比差别无统计学意义。结论：丰富环境能有效逆转孕期应激造成的子代海马GR的表达降低。     

神经干细胞植入大鼠海马中的迁移

目的：观察成鼠神经干细胞主切割海马伞侧海马和正常侧海马后的存活和迁移情况。方法：取成鼠前脑室下带（SVZ）组织制成单细胞悬液，接种于含EGF和bFGF和DMEM/F12(1：1）无血清培养基中，待神经球形成后，用有限稀释法进行单细胞克隆。将单克隆细胞球进行消化，分离，加入BrdU标记并扩增成大量来源于同一细胞的亚细胞系神经干细胞克隆球。取SD大鼠，切割其右侧海马伞，术后14天，将标记有BrdU的神经干细胞植入两侧海马齿状回中。移植术后1月，取脑冰冻切片，作Nissl染色和BrdU免疫荧光检测。结果：Nissl染色片两侧海马齿状回中有许多大小不等的深染细胞沿颗粒下层排列。两侧移植区中的BrdU免疫荧光标记细胞均从移植区沿海马颗粒下层迁移，形成一明显的迁移带。切割海马伞侧海马的BrdU免疫荧光亮点密度明显大于正常侧海马内的免疫荧光亮点密度。免疫荧光片Nissl复染发现齿状加的深染细胞与RrdU免疫荧光亮点相对应，在切割海马伞侧海马齿状回内有大胞体的神经元样细胞，而正常侧较少见。结论：移植至海马齿状回中的神经干细胞能存活，并可沿正常海马齿状回中固有的神经干细胞迁移路径即颗粒下层迁移。切割海马伞侧海马内存活和迁移的神经干细胞明显多于正常侧海马内的神经干细胞。提示切割海马伞侧海马齿状回内促进神经干细胞存活并诱导其迁移，分化的物质表达增强。     

大鼠海马神经干细胞的分离、培养及鉴定

目的：探寻出生后1～3d和成年大鼠海马分离、培养并鉴定神经干细胞(NSC)的可行性。方法向培养基添加碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子及其他生长因子，采用单细胞克隆技术，分离出生后1-3d和成年SD大鼠海马组织并分别无血清培养；以免疫细胞化学方法对原代和传代培养形成的克隆细胞，以及其分化后的细胞进行鉴定。结果上述条件下培养可形成悬浮生长的表达巢蛋白的神经球，且具有连续克隆的能力；分化后可得到具有网状联系的、分别呈神经元特异性烯醇化酶阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经元及胶质细胞。结论新生及成年SD大鼠海马存在神经干细胞．     

新生大鼠海马区神经干细胞分离培养和单细胞克隆系建立及鉴定

目的:分离培养新生大鼠海马区神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),建立NSCs单细胞克隆系。方法:取新生SD大鼠海马组织分离NSCs后无血清技术培养,建立其克隆系并行单细胞传代克隆培养。采用细胞免疫荧光和RT-PCR等技术对NSCs进行鉴定,分子标志物选择Nestin和Sox2。NSCs诱导分化的神经元的鉴定,标示物选择早期神经元特异性微管蛋白(β-tubulin),星形胶质细胞标示物为特异性胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),少突胶质细胞特异性标记蛋白为髓鞘相关蛋白(cyclic nucleotide phosphodiesterase,CNP)。结果:无血清培养法可维持NSCs生长和促进其增殖。成功建立NSCs单细胞克隆系,传代可获得大量亚克隆NSCs株团。单细胞克隆NSCs球团经早期酶消化结合后期机械吹打法传代,分散为单细胞或类单细胞后,增殖及分化能力依然存在。单细胞克隆系株经Nestin和Sox2细胞免疫荧光或RT-PCR检测均为阳性表达。在加有胎牛血清培养基条件下进行诱导分化,来自单细胞克隆系的细胞株同样可分化为神经元样、星形胶质细胞样和少突胶质细胞样3种神经细胞,即β-tubulin、GFAP、CNP免疫荧光染色分别呈阳性。结论:无血清培养可成功建立新生SD大鼠海马区NSCs单细胞克隆系,并可稳定传代增殖,并在一定条件下可诱导分化为成熟的神经元和神经胶质细胞。     

血管性痴呆大鼠海马结构神经肽Y的表达

目的：研究血管性痴呆大鼠海马结构神经肽Y（NPY）表达的改变，探讨NPY与血管性痴呆（VD）的关系。方法：随机将30只Wistar大鼠分为实验组、假手术对照组和正常组各10只，实验组按2-VO法间断结扎颈总动脉，对照组与实验组作类似手术，但不夹闭颈总动脉。三组于术后4周进行行为学检查。后断头取脑，免疫组化SABC法观察海马结构NPY阳性神经元的变化。结果：①Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验，实验组与其他两组差异均有统计学意义（P〈0．05）：②免疫组化结构及形态学检查结果：示实验组大鼠海马结构NPY阳性神经元染色降低甚至缺如，正常组和对照组的海马结构有较多的NPY阳性神经元：定量比较海马齿状回分子层NPY阳性纤维密度，实验组与其他两组差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：血管性痴呆大鼠学习记忆功能下降可能与海马结构NPY阳性神经元缺如有关，NPY与血管性痴呆有相关性。     

丰富与贫瘠环境对新生鼠脑损伤后脑功能的影响

目的 研究丰富与贫瘠环境对缺氧缺血性腩损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑功能的影响.方法 制备3 d龄SD大鼠HIBD模型,随机数字表法分为丰富环境组(enriched environment,EE)、贫瘠环境组(impover-ished environment,IE)和标准环境组(standard environment,SE).另设假手术组作为对照.各组大鼠于术后第2天开始分别给予不同环境刺激.术后32 d,应用悬吊和斜坡实验测试感觉运动功能,Morris水迷宫实验了解学习记忆能力,免疫组织化学染色检测皮层和海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达.结果 感觉运动和学习记忆能力测试发现,IE组明显差于SE组(P<0.01),sE组差于Sham组和EE组(P<0.01),Sham组和EE组无显著差异(P>0.05).皮层和海马GFAP免疫组织化学染色结果 显示,Sham组GFAP阳性细胞数分别低于其他3组(P<0.01),而SE组低于EE组,高于IE组(P<0.01).结论 丰富环境增加新生鼠脑损伤后GFAP的表达,改善脑功能;贫瘠环境加重脑功能的损害.     

丰富环境对吗啡依赖大鼠成瘾行为及多巴胺转运体影响

目的研究丰富环境对吗啡所致大鼠成瘾及其对多巴胺转运体的影响。方法将90只雄性SD大鼠随机分为丰富环境成瘾组（n=30）与普通环境成瘾组（n=30）及对照组（n=30）,1月后进行吗啡诱导的条件性位置偏爱行为实验,大鼠成瘾后撤掉成瘾性物质使其自然戒断,观察不同组戒断反应。利用免疫组化法对不同环境对照组及吗啡依赖大鼠戒断后第0、1、3、7天多巴胺转运体动态表达实验。结果①丰富环境组与普通环境组CPP基线值没有显著性差异（P〉0.05）,丰富环境组CPP测试值显著高于普通环境组（P〈0.05）;②丰富环境大鼠戒断后摇体次数显著低于普通环境组;③吗啡依赖大鼠腹侧被盖区DAT蛋白灰度值在戒断第0、1天显著高于对照组（P〈0.05）,第3天普通环境组仍高于对照组,丰富环境组与对照组无显著差异（P〉0.05）,第7天三组间无显著差异。结论丰富环境对吗啡诱导的CPP可能有易化作用;吗啡依赖大鼠腹侧被盖区DAT出现下调,戒断后会逐渐恢复,而丰富环境可加速其过程。     

短期丰富生存环境干预下中老年大鼠海马结构有髓神经纤维的性别差异

目的研究短期丰富生存环境干预下正常中老年大鼠海马结构有髓神经纤维的性别差异。方法将20只14月龄的SD大鼠(雌雄各10只)随机均分为丰富生存环境组与普通环境组,前者在丰富生存环境条件下饲养4个月,后者在普通环境中饲养4个月,运用透射电子显微镜和体视学方法对两组大鼠海马结构有髓神经纤维进行定量研究。结果普通环境组雌性大鼠海马结构内有髓神经纤维的总体积、平均直径均显著大于雄性大鼠(P<0.05),而海马结构总体积、海马结构内有髓神经纤维的总长度雌雄两组之间不存在显著性差异(P>0.05)。丰富生存环境组雌性大鼠海马结构内有髓神经纤维的平均直径显著小于雄性大鼠(P<0.05),而海马结构总体积、海马结构内有髓神经纤维的总体积、总长度雌雄两组之间不存在显著性差异(P>0.05)。结论普通环境组和丰富环境组中老年大鼠海巴结构有髓神经纤维存在的性别差异,提示雌、雄性中老年大鼠对短期丰富生存环境干预的反应不同。     

胰岛素逆转1型糖尿病脑病模型大鼠海马齿状回神经发生障碍与空间学习记忆异常的研究

目的揭示海马齿状回神经发生与1型糖尿病脑病发病的相互关系以及用胰岛素干预后所发生的变化。方法分别用链脲佐菌素和胰岛素建立1型糖尿病脑病大鼠模型和胰岛素治疗大鼠模型,采用Morris水迷宫以及5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU,一种神经干细胞DNA合成的标记物）单标、BrdU＋NF（神经丝,成熟神经元的标志物）双标、BrdU＋GFAP（胶质原纤维酸性蛋白,成熟星形胶质细胞的标志物）双标的免疫组织化学方法,测试大鼠的空间学习记忆能力,并在光镜下观察处于海马齿状回神经发生过程中的细胞存活、迁移和分化的程度。结果1型糖尿病脑病模型大鼠的空间学习能力,海马齿状回BrdU单标、BrdU＋NF双标和BrdU＋GFAP双标的阳性细胞数均明显下降（P〈0.01）;用胰岛素治疗后可提升以上各项指标几乎接近正常水平（P〈0.01）,但各种阳性细胞形态以及细胞迁移的方向、路径和终点均不受到明显的影响。结论个体内长期缺乏胰岛素,导致海马齿状回神经干细胞生存率和分化率下降,可能是诱发1型糖尿病脑病的一个因素;尽早用胰岛素进行干预可逆转神经发生障碍和学习记忆异常,这将有利于防治该脑病的发生。     

外源性胆囊收缩素对大鼠学习记忆的影响及相关机制的研究

目的 探讨大鼠海马注射CCK－8对其光辨别学习记忆的影响。方法 采用核团微量注射和放射免疫分析的方法。结果（1）海马CA3区注射CCK－8,大鼠光辨别学习能力明显提高;海马CA3区注射L－365＋CCK－8,大鼠光辨别学习能力明显减弱;（2）大鼠海马CA3区注射CCK－8,海马谷氨酸转运体功能明显增强;海马CA3区注射L－365＋CCK－8,海马谷氨酸转运体功能明显减弱。结论 CCK－8可促进大鼠的学习记忆,这可能是通过CCK－B受体而实现的;谷氨酸转运体可能参与了这一过程。     

幼年Wistar大鼠空间学习记忆与海马CA3区苔藓纤维分布

目的探讨空间学习记忆与海马CA3区苔藓纤维可塑性的关系.方法Morris水迷宫内对正常幼年Wistar大鼠进行定位航行试验后,用Timm显影染色方法,观察海马CA3区苔藓纤维分布的可塑性变化.结果大鼠在14天学习训练间,其逃避潜伏期逐日缩短,由平均(57.4±29.3)s下降到(7.9±3.5)s.苔藓纤维主要集中在门区和CA3透明层,但学习和对照两组大鼠海马CA3区始层都多少不等地存在苔藓纤维终扣分布,两组苔藓纤维分布面密度分别为0.03432±0.01516,0.03694±0.01657.经t检验,P＞0.05,差异无显著性.结论幼年Wistar大鼠Morris水迷宫14天空间学习记忆训练没能引起海马CA3区始层苔藓纤维分布的变化.