MicroRNA-24对心肌梗死后心肌细胞凋亡的调控作用

 目的：研究microRNA-24（miR-24）在心肌梗死小鼠心肌组织中的表达变化,并研究miR-24对心肌细胞凋亡及心肌梗死后心功能的调控作用。方法：建立小鼠心梗模型及心肌细胞缺血缺氧模型,qRT-PCR检测心梗后心肌组织中miR-24表达情况;构建携带miR-24的慢病毒及脂质体,心梗组织局部注射慢病毒转染miR-24及心肌原代细胞转染miR-24;caspase-3/7检测心肌细胞凋亡情况;超声心动图及Masson染色检测心功能及心梗面积;TUNEL染色检测细胞凋亡;表达谱芯片检测及生物信息学分析预测靶位点。结果：miR-24在心梗部位及心梗周边区表达显著降低（P<0.01）,心梗模型转染miR-24能够改善心梗后2周心功能（P<0.05）,并减少心梗面积,抑制心梗局部细胞凋亡水平;原代心肌细胞转染miR-24能减少缺血缺氧引起的细胞凋亡（P<0.01）,芯片检测发现miR-24可能通过BCL2L11、ANK3及SGPL1等基因起作用。结论：miR-24在心梗后心肌组织中低表达。miR-24能抑制心肌细胞缺血缺氧条件下的凋亡水平,进而改善心梗后心功能。     

心肌缺血再灌注损伤中白介素-17A诱发心肌细胞凋亡的作用机制

目的探讨心肌缺血再灌注损伤小鼠心机组织中白细胞介素-17A(IL-17A)的表达及其对心肌细胞凋亡的影响机制。方法采用结扎小鼠左冠状动脉前降支(LAD)法进行心肌缺血再灌注损伤模型构建;伊文思蓝(Evan’s blue)和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色与心肌损伤标记物肌酸激酶(CK)、肌钙蛋白T(c TnT)血清含量检测小鼠心肌损伤情况;Western blot检测心肌缺血再灌注(I/R)后3 h、24 h、72 h不同时间点心肌组织IL-17A的表达水平,TUNEL染色和Caspase 3活力检测进一步反映细胞凋亡情况;原代分离培养心肌细胞,不同质量浓度(10、20、40、80 ng/ml)IL-17A处理细胞24 h,TUNEL染色检测细胞凋亡率、Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase 3、Bax、Bcl-2及PI3K/Akt通路蛋白表达变化。结果 I/R后心肌梗死区与缺血区(I/AAR)比率显著增加(P0.05),而心肌缺血区与左心室的比率(AAR/LV)无明显变化,且心肌损伤标记物肌酸激酶(CK)、肌钙蛋白T(cTnT)血清含量也明显增加;与Sham组(假手术组)相比,I/R后3 h、24 h、72 h时间点心肌组织IL-17A表达显著增加,心肌细胞凋亡率和Caspase 3活性亦明显增加;不同浓度IL-17A能够促进原代心肌细胞凋亡,诱导Caspase 3、Bax表达,抑制Bcl-2及PI3K/Akt通路蛋白表达。结论心肌缺血再灌注损伤小鼠IL-17A明显增加,高表达的IL-17A可能通过抑制PI3K/Akt通路来诱导心肌细胞凋亡。     

远隔缺血预适应通过上调miR-21-5p减轻脑缺血模型大鼠细胞凋亡

目的:研究远隔缺血预适应(RIPC)对脑缺血模型大鼠的保护作用及分子机制。方法:18只成年雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组(sham)、缺血再灌注组(MCAO/R)组、RIPC+MCAO/R组；术前利用间断夹闭双侧股动脉的方法给予大鼠RIPC处理，利用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠缺血性脑卒中模型，利用转棒实验检测大鼠运动功能，利用TUNEL染色检测缺血区细胞凋亡，利用real time RT-PCR检测大脑缺血区皮质中miR-21-5p及SPRY1和程序性细胞死亡因子4 (PDCD4)mRNA的表达。结果:与MCAO/R组大鼠相比，RIPC处理组大鼠运动功能有所改善，皮质细胞凋亡减少。miR-21-5p表达增加，而SPRY1和PDCD4 mRNA表达下调(P<0.05)。结论:RIPC处理对减轻缺血性脑卒中大鼠miR-21-5p表达上调，后者通过抑制靶分子SPRY1和PDCD4的表达抑制细胞凋亡。     

多不饱和脂肪酸改善小鼠心肌脂质成分及缺血再灌注后线粒体功能

目的 探讨增加不饱和脂肪酸摄入比例对心脏ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)比值及心肌缺血-再灌注时缺血区炎症状态及线粒体功能的影响.方法 C57BL/6小鼠80只,随机分为普通饮食组及植物油脂组(n=40).喂养1个月后,建立心脏缺血再灌注模型.气相色谱法检测心脏ω-3及ω-6 PUFAs含量.TTC染色检测心肌梗死面积.差速离心法分离心肌线粒体,氧电极法测定线粒体呼吸控制率.实时定量PCR检测缺血区心肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达,ELISA法检测心肌TNF-α及白细胞介素-1(IL-1)蛋白含量.结果 与普通饮食组相比,植物油脂组小鼠心脏ω-6/ω-3 PUFAs比值显著减低(P＜0.05),心肌梗死面积显著减小(P＜0.01),缺血区心肌线粒体呼吸控制率显著改善(P＜0.05),TNF-αmRNA表达、TNF-α及IL-1蛋白含量均显著降低(P＜0.05).结论 不饱和脂肪酸改善小鼠心肌脂质成分及缺血再灌注后线粒体功能.     

黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌的保护作用及其机制

目的:探讨黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心脏的保护作用及其机制。方法:将造模成功的2型糖尿病KKAy小鼠随机分为模型组和治疗组(黄芪注射液联合葛根素注射液腹腔注射),同周龄雄性KKAy小鼠作为正常对照组,并于21、24和28周龄时分别处死小鼠。HE染色观察心肌组织形态变化;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡;real-time PCR检测小鼠心脏组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和p53上调凋亡调控因子(PUMA) mRNA的表达;Western blot检测小鼠心脏组织中GRP78、CHOP、PUMA、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、cleaved caspase-9、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和cleaved PARP蛋白的表达。结果:模型组小鼠心肌细胞发生肥大,可见到部分细胞出现肌浆溶解和坏死,治疗组小鼠病变减轻;与对照组比较,模型组小鼠心肌细胞凋亡数显著增加(P0.01),治疗组小鼠心肌细胞凋亡数较模型组显著降低(P0.05);模型组小鼠21、24和28周龄心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平,以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平与正常对照组比较显著增加(P0.01);治疗组小鼠心肌组织中GRP78、CHOP和PUMA mRNA和蛋白水平以及cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP蛋白表达水平均显著低于模型组(P0.01)。结论:黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病小鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激和caspase通路的活化,从而抑制细胞凋亡有关。     

乌司他丁下调脂多糖诱导小鼠急性肺损伤肺组织中miR-21表达

目的乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)肺组织miR-21、程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达及炎性反应的影响。方法将小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、低和高剂量乌司他丁干预组(UTI-L group,UTI-H group),每组10只。造模后72 h,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变;吉姆萨染色计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中多形核白细胞(PMN)分类计数;BCA法测BALF中蛋白含量;酶联免疫吸附(ELISA)法测其中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;髓过氧化物酶(MPO)试剂盒测MPO活性;Western blot测肺组织PDCD4蛋白表达;实时荧光定量PCR测肺组织miR-21和PDCD4 mRNA转录水平。结果与对照组比,LPS组表现出典型的ALI病理改变,肺部炎性反应明显,肺湿干重比(W/D)增加(P0.05);BALF中PMN百分比、IL-1β含量、TNF-α含量和MPO活性明显增高(P0.05);伴随肺miR-21水平增高(P0.05),PDCD4蛋白表达降低(P0.05)。与LPS组比,乌司他丁干预后小鼠肺部ALI病理改变减轻,肺湿干重比(W/D)降低(P0.05);BALF中PMN计数、IL-1β、TNF-α含量和MPO活性降低(P0.05);伴随肺miR-21水平降低及PDCD4蛋白表达增加(P0.05),且作用呈剂量相关性。结论乌司他丁可下调miR-21,可能在转录后水平调控PDCD4 mRNA的翻译,增加PDCD4蛋白表达,发挥对脂多糖诱导的急性肺损伤的保护作用。     

依托咪酯上调miR-290-5p减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞系H9C2损伤

目的探讨依托咪酯(Eto)对脂多糖(LPS)所致大鼠心肌细胞系H9C2损伤的保护机制。方法将H9C2细胞分为对照(Co)组、LPS组(1μg/mL的LPS处理6 h)、Eto+LPS组、miR-con+LPS组、miR-290-5p+LPS组、Eto+anti-miR-con+LPS组和Eto+anti-miR-290-5p+LPS组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞计量术分别检测细胞活力及细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-290-5p的表达水平。酶连免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量。结果与对照组比较,LPS组H9C2细胞miR-290-5p表达降低(P0.05),细胞存活率降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),TNF-α和IL-6的含量升高(P0.05);与LPS组比较,Eto+LPS组H9C2细胞miR-290-5p表达升高(P0.05),细胞存活率升高(P0.05),凋亡率降低(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量降低(P0.05);与miR-con+LPS组比较,miR-290-5p+LPS组H9C2细胞存活率升高(P0.05),凋亡率降低(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量降低(P0.05);与Eto+anti-miR-con+LPS组比较,Eto+anti-miR-290-5p+LPS组H9C2细胞存活率降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量升高(P0.05)。结论依托咪酯上调miR-290-5p可减轻LPS诱导的心肌细胞凋亡及炎性反应。     

白藜芦醇通过抑制TNF-α的释放缓解大鼠缺血再灌注心脏损伤

目的在大鼠心肌缺血再灌注模型中,研究白藜芦醇通过抑制TNF-α的释放改善心肌缺血再灌注的梗死以及心肌细胞损伤的效应。方法对大鼠左前降支冠状动脉进行缺血再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MIR)构造心肌缺血再灌注模型,用Evans blue染料和TTC染色检测梗死区面积变化。用Western blot技术检测缺血心肌在第1天和第2天TNF-α的表达水平变化,缺血再灌注模型尾静脉注射白藜芦醇后用Western blot技术检测TNF-α的蛋白水平的变化。离体实验中,对白藜芦醇预处理的H9C2细胞用TNF-α处理,观察心肌细胞凋亡的水平变化。结果大鼠心肌缺血再灌注模型中,缺血区面积在第1、2天显著增大,TNF-α表达水平显著上升(P0.05);白藜芦醇处理后,缺血区的TNF-α蛋白水平显著下降(P0.05)。对H9C2细胞用白藜芦醇预处理再用TNF-α刺激,细胞凋亡水平显著下降(P0.05)。结论在大鼠心肌缺血再灌注模型中,白藜芦醇可能通过抑制TNF-α等细胞因子发挥对心肌细胞损伤的保护作用。     

miR-21通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭

目的探讨miR-21在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达及其可能调控的靶基因。方法检测miR-21在HCC组织和细胞系中的表达,使用miR-21抑制剂后,观察HCC细胞活力和侵袭能力的变化;运用生物信息学分析预测miR-21可能的靶基因。应用miR-21抑制剂后,双荧光素酶报告基因系统检测其对靶基因活性的影响。结果HCC组织中miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P0.05);HCC细胞中miR-21的表达水平显著高于肝细胞(P0.01)。抑制miR-21后,HCC细胞的活力和侵袭能力降低(P0.01)。抑癌基因程序性死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01),在肝癌细胞中的表达水平显著低于肝细胞(P0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的活力和侵袭能力提高(P0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,使用miR-21抑制剂后,PDCD4表达上调(P0.01),肝癌细胞的侵袭和增殖能力降低(P0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的侵袭和增殖能力升高(P0.001)。结论miR-21可通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭。     

miR-195缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应

目的探讨miR-195对脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分成空白对照组、脂多糖组(LPS)、LPS+miR-NC组、LPS+miR-195组;RT-PCR检测转染后miR-195表达量;ELISA检测心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI);流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核形的变化;Western blot检测氧化应激相关蛋白表达(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α);试剂盒检测氧化应激标记物SOD活性;ELISA检测炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)。结果与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组miR-195表达量、氧化应激标记物水平(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α)、抗氧化酶SOD活性均显著升高(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI)、细胞凋亡率、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)均显著降低(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-...     

miR-181b在动脉粥样硬化血管中的表达及对H2O2诱导的血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨miR-181b在动脉粥样硬化血管中的表达及miR-181b对H2O2诱导的血管内皮细胞增殖与凋亡的影响.方法 qPCR法检测动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞中miR-181b的表达情况;酶联免疫法检测miR-181b对鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-10含量的影响;克隆形成实验检测miR-181b对H2O2诱导的血管内皮细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-181b对H2O2诱导的血管内皮细胞凋亡能力的影响;qPCR和Western blot法检测miR-181b对主动脉和H2o2诱导的血管内皮细胞中Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响.结果 miR-181b在动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞表达水平显著下调,血清中TNF-α、IL-6含量均增加,IL-10含量减少;过表达miR-181b使小鼠血清中TNF-α、IL-6含量均减少(P＜0.05),IL-10含量增加(P＜0.05).与对照组比较,H2O2诱导的血管内皮细胞的增殖能力显著下降,凋亡能力显著提高,miR-181b过表达使血管内皮细胞增殖能力提高,凋亡能力下降;与对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞中Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平均上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下调,miR-181b过表达使动脉粥样硬化模型组小鼠主动脉和H2O2诱导的血管内皮细胞中Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平均下调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05).结论 miR-181b在动脉粥样硬化血管和H2O2诱导的血管内皮细胞中低表达,过表达miR-181b抑制细胞凋亡及促进细胞的增殖,可能在动脉粥样硬化的治疗中起到积极作用.     

罗布麻叶提取物预处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用

目的:观察罗布麻叶提取物(AVLE)预处理对心肌缺血再灌注(MI/R)大鼠心肌细胞凋亡和细胞信号转导系统中丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的影响。方法:采用SD大鼠MI/R模型(结扎冠脉左前降支起始部30min后再灌注4h),随机分为Sham组(假手术)、MI/R组、AVLE预处理组[AVLE(500mg/kg)灌胃,每日一次,连续灌胃7天后再行MI/R]。用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡,计算凋亡指数(AI);荧光免疫分析法检测各组心肌组织凋亡蛋白Caspase-3活性;Western Blotting测定心肌组织Akt和ERK1/2的表达水平和磷酸化水平。结果:与Sham组比较,MI/R组心肌细胞AI显著升高(P0.05),心肌组织Caspase-3活性明显升高(P0.05),心肌Akt和ERK1/2的磷酸化水平显著降低(P0.05);与MI/R组比较,AVLE预处理组AI明显下降(P0.05),心肌组织Caspase-3活性显著降低(P0.05),Akt和ERK1/2磷酸化水平显著升高(P0.05)。结论:AVLE能够抑制缺血再灌注所致心肌细胞损伤,其作用与生存信号通路蛋白PI3K/Akt和ERK1/2的活化水平有关。     

miR-138在乙醇诱导的大鼠心肌细胞系H9C2氧化应激中表达增加

目的观察miR-138对乙醇诱导的大鼠心肌细胞系H9C2的Sirt1表达及其下游氧化应激和线粒体凋亡相关蛋白表达的影响。方法将心肌细胞分为对照组(control组)、乙醇组(E组)、miR-138抑制剂组(I组);分别用含不同浓度乙醇的细胞培养液培养;MTT法检测H9C2细胞的活力;选择细胞活力接近80%的200 mmol/L乙醇浓度为最佳干预浓度。用Lipo2000,将miR-138抑制剂转染I组H9C2心肌细胞,孵育12 h后,分别用羟胺法测定心肌细胞中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力;硫代巴比妥酸(TBA)法测定心肌细胞丙二醛(MDA)含量;用RT-qPCR检测心肌细胞内miR-138与Sirt1 mRNA的表达;用Western blot测定心肌细胞内Sirt1、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达。结果 1)乙醇可以抑制心肌细胞的活力。2)与对照组相比,乙醇组心肌细胞中miR-138 mRNA的表达及MDA的含量、Bax和caspase-3的蛋白表达均明显升高(P0.05),T-SOD的活力、Sirt1 mRNA的表达及Sirt1和Bcl-2蛋白的表达均明显降低(P0.05);与乙醇组相比,miR-138抑制剂组心肌细胞中miR-138 mRNA的表达及MDA的含量及Bax、caspase-3的蛋白表达均明显降低(P0.05),T-SOD的活力、Sirt1 mRNA的表达、Sirt1和Bcl-2蛋白的表达和均明显升高(P0.05)。结论 miR-138在乙醇诱导的大鼠H9C2心肌细胞氧化应激中表达增加。Sirt1可能是miR-138的作用靶点。     

PI3K/Akt通路介导TRPV1抑制离体小鼠心脏缺血再灌注后的细胞凋亡

目的研究瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对离体小鼠心脏缺血/再灌注(I/R)后心肌细胞凋亡的影响及与PI3K/Akt通路的关系。方法 TRPV1基因敲除(TRPV1~(-/-))和野生型(WT)小鼠各54只,均各随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)和LY294002处理组(LY)。建立Langendorff离体心脏灌注模型,检测心功能;灌注结束后,TTC染色法检测心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt和p-Akt的蛋白表达水平。结果 I/R后,TRPV1~(-/-)小鼠较WT小鼠的LVDP明显降低(P0.001),LVEDP明显升高(P0.001),同时心肌梗死面积和心肌凋亡细胞明显增加(P0.01),Bcl-2/Bax和p-Akt表达水平下降(P0.001)。LY294002阻断PI3K后,与相应的I/R组相比,WT小鼠心肌梗死面积明显扩大(P0.001),心肌凋亡细胞明显增加(P0.01),Bcl-2/Bax和p-Akt蛋白表达水平降低(P0.001)。结论 TRPV1可能通过PI3K/Akt通路抑制离体小鼠心脏缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡。     

MicroRNA-30a调控Beclin-1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护效应

目的: 观察microRNA-30a(miR-30a)在原代心肌细胞缺氧复氧中的作用,探讨miR-30a保护缺血再灌注心肌的分子机制。方法: 重组构建慢病毒miR-30a表达载体(LV-GFP-miR-30a)感染原代乳鼠心肌细胞,构建缺氧复氧损伤模型。实验分为正常培养组、单纯缺氧复氧组、LV-GFP加缺氧复氧组、LV-miR-30a-GFP加缺氧复氧组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)加缺氧复氧组。Real-time PCR检测缺氧复氧和慢病毒感染对miR-30a的表达影响,Western blotting检测LC3和Beclin-1蛋白表达变化,TUNEL和PI染色检测缺氧复氧后心肌细胞死亡情况。结果: (1)缺氧复氧后心肌miR-30a表达水平下调(P<0.05);(2)慢病毒miR-30a表达载体高效感染后心肌细胞miR-30a表达水平上调(P<0.05),心肌过表达miR-30a下调Beclin-1蛋白表达(P<0.05);(3)心肌过表达miR-30a抑制缺氧复氧后Beclin-1表达(P<0.05);3-MA处理减少缺氧复氧后心肌Beclin-1表达,减少缺氧复氧后LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ(P<0.05);(4)过表达miR-30a和3-MA处理减少缺氧复氧后心肌细胞凋亡(P<0.05)。结论: 心肌细胞过表达miR-30a显著下调Beclin-1;抑制自噬可以减少缺氧复氧后心肌细胞死亡。     

miR-21在白藜芦醇诱导A549肺癌细胞株凋亡中的作用

目的探讨白藜芦醇对A549肺癌细胞株凋亡的影响,并揭示miR-21参与其中的机制。方法以高糖DMEM培养基培养A549肺癌细胞株,给予100μmol/L的白藜芦醇,过表达(或不过表达)miR-21培养3 d。Real-time PCR检测miR-21表达;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色观察细胞凋亡;Western blot检测细胞凋亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)的表达。结果白藜芦醇能抑制A549肺癌细胞株miR-21的合成,上调PDCD4的表达,抑制细胞生长,降低细胞活力,诱导A549细胞凋亡(P0.05)。过表达miR-21能显著抑制白藜芦醇的抗肿瘤作用,PDCD4表达变化不明显,细胞生长状态、活力以及凋亡等均无明显变化(P0.05)。结论白藜芦醇能通过抑制miR-21合成,降低PDCD4表达,诱导A549肺癌细胞株凋亡。     

缺血预适应对大鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的：探讨缺血预适应对大鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响。方法：以DNA电泳和TUNEL分析检测大鼠心肌组织的细胞凋亡情况，免疫组织化学方法检测bcl-2、bax蛋白的表达。结果：缺血再灌注组缺血区心肌DNA电泳呈现典型的DNA梯形，而缺血预适应组和假手术对照组未见梯形。缺血预适应组心肌细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组（P<0.01）。Bcl-2在各组均无阳性表达，bax在各组表达无显著差异（P>0.05）。结论：缺血预适应显著减少了缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡程度。     

沉默miR-26a减轻缺血/再灌注大鼠心肌损伤

目的探讨微核糖核酸(miR-26a)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(I/R)的影响。方法将大鼠随机分为对照组(n=20)、I/R组(n=20)和siRNA组(n=20)。建立大鼠I/R模型前7 d,尾静脉注射miR-26a siRNA沉默内源性miR-26a。超声心动图检测心脏射血分数(EF%)和缩短分数(FS%);2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定心肌梗死面积;HE染色法检测心肌细胞形态;TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平;Western blot检测心肌组织中促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活性半胱天冬酶-3(caspase-3)和Rho/RhoA信号通路相关蛋白表达。结果 I/R组心肌组织中miR-26a的表达明显高于对照组(P0.05)。siRNA组心功能不全显著改善,大鼠的EF%和FS%均提高(P0.05)。此外,siRNA组I/R所致的心肌梗死程度明显减轻,心肌梗死面积百分比由43.08%±2.43%减小到21.54%±1.82%(P0.05)。siRNA组肌丝排列较整齐,心肌坏死程度较低,细胞水肿较I/R组明显减轻。siRNA组大鼠心肌细胞凋亡水平明显低于I/R组(P0.05),Bax和caspase-3表达水平也明显下降(P0.05)。miR-26a抑制可以显著降低I/R时Rho/RhoA信号通路蛋白表达(P0.05)。结论 miR-26a沉默可能通过降低Rho/RhoA信号通路蛋白表达抑制I/R所致心肌细胞凋亡。     

miR-214-5p靶向PAK4对缺血再灌注大鼠的心肌损伤和免疫反应的调节作用

目的:探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)靶向p21活化蛋白激酶4(PAK4)对缺血再灌注(I/R)大鼠的心肌损伤和免疫反应的作用。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、Ad-Scramble组和Ad-miR-214组(n=9)。在大鼠左心室前壁6个不同的位点注入腺病毒;4 d后,缝合左前部下行冠状动脉构建I/R模型。RT-qPCR检测miR-214的表达水平,HE染色观察心肌损伤,ELISA检测心肌损伤标志物(CK-MB、Mb和cTnI)和炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测MDA含量和SOD活性,基因软件预测靶基因并通过双萤光素酶报告验证,Western blot检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax、PAK4、p-Akt和p-mTOR表达水平。结果:miR-214在I/R大鼠心肌细胞中低表达(P<0.01);miR-214-5p过表达减轻I/R大鼠心肌损伤程度,下调CK-MB、Mb和cTnI表达,降低心肌细胞凋亡率,上调Bcl-2表达,下调Bax、cas...     

miR-205对体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌的影响北大核心CSCD

目的:探讨miR-205对体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌的影响。方法:qRT-PCR方法分析脓毒症大鼠心肌组织中miR-205表达变化,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α、IL-6水平。心肌细胞分成Control组、LPS组(LPS诱导)、miR-NC+LPS组(转染mimics control,LPS诱导)、miR-205+LPS组(转染miR-205 mimics,LPS诱导),CCK-8方法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测C-Caspase-3、NF-κBp65蛋白表达,二硝基苯肼法检测LDH水平,硫代巴比妥酸法检测MDA水平,黄嘌呤法检测SOD水平,比色法检测GSH-Px水平,ELISA法检测TNF-α、IL-6水平。用NF-κB信号激活剂处理上调miR-205的心肌细胞,同样检测细胞增殖、凋亡、氧化损伤以及细胞炎症因子分泌水平。结果:脓毒症大鼠心肌组织中miR-205表达水平降低,心肌组织中细胞凋亡指数增加,TNF-α、IL-6水平升高。LPS组心肌细胞中miR-205水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达增多,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-6水平升高,细胞中MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,与Control组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-205+LPS组心肌细胞中miR-205水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3蛋白表达减少,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-6水平降低,细胞中MDA水平降低,SOD、GSH-Px水平升高,与miR-NC+LPS组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB信号激活剂逆转miR-205对LPS诱导的心肌细胞损伤作用。结论:miR-205抑制体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌,机制可能与下调NF-κB信号有关。