大鼠脊髓鞘内注射阿米洛利及混合替扎尼定 治疗炎症性疼痛的研究

 【目的】 评价脊髓鞘内注射阿米洛利及混合替扎尼定对炎症性疼痛的治疗效能&;#65377;【方法】 96只SD大鼠,质量250 ~ 300 g,随机分成16组(n = 6):对照组&;#65380;阿米洛利组(12.5 ~ 100 μg)&;#65380;替扎尼定组(0.5 ~ 5 μg)&;#65380;混合药物组(1/2&;#65380;1/4&;#65380;1/8&;#65380;1/16)&;#65380;各拮抗组&;#65377;鞘内置管后7 d采用20 g/L的多聚甲醛溶液50 μL皮下注射方法制作炎症性疼痛模型&;#65377;观察记录2时相大鼠缩足舔足次数&;#65377;计算各药物的半数有效抑制剂量(ID50)及95%的可信区间&;#65377;使用Isobolographic 分析评价药物的相互作用&;#65377;【结果】 鞘内单独注射阿米洛利(12.5 ~ 100 μg)和替扎尼定(0.5 ~ 5 μg)可产生剂量依赖性的抗急性及慢性炎症性疼痛的作用&;#65377;鞘内阿米洛利和替扎尼定混合,可以产生明显的协同效应&;#65377;鞘内育亨宾预处理可以拮抗鞘内阿米洛利&;#65380;替扎尼定及阿米洛利混合替扎尼定的抗炎症性疼痛的作用&;#65377;【结论】 鞘内单独注射阿米洛利&;#65380;替扎尼定可以产生明显的剂量依赖性的抗急性及慢性炎症性疼痛的作用&;#65377;鞘内注射阿米洛利可以增强替扎尼定的抗炎症性疼痛的作用&;#65377;鞘内注射阿米洛利产生的抗炎症性疼痛的作用可能与中枢α2-肾上腺素受体有关&;#65377;     

慢病毒携带shRNA抑制CR-1基因表达对 CNE-2细胞特性的影响

 【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响&;#65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]&;#65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞&;#65377;应用荧光定量PCR&;#65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR-1基因的细胞群&;#65377;并用MTT法&;#65380;平板克隆形成实验及Boyden侵袭小室观察CR-1干扰后对CNE-2细胞生物学行为的影响&;#65377; 【结果】 PCR 和测序证实,成功构建了CR-1 shRNA的慢病毒载体pLVTHM-shCR-1&;#65377;荧光定量PCR 和Western blot结果表明,所获得的细胞中CR-1 mRNA及蛋白表达水平较阴性对照组&;#65380;空白对照组均显著降低(P < 0.05)&;#65377;CR-1干扰后的细胞生长明显减慢,克隆形成能力减弱,侵袭运动能力下降&;#65377; 【结论】 通过RNAi技术阻断CR-1的表达,可抑制CNE-2细胞的生长&;#65380;增殖&;#65380;迁徙,提示CR-1在鼻咽癌的发生&;#65380;发展过程中起重要作用&;#65377;     

改良新辅助放化疗加术中温热灌洗治疗低位直肠癌的临床应用

 【目的】 评估低位直肠癌手术前行改良新辅助放化疗+术中温热灌洗治疗的近期疗效及肿瘤的病理学改变,探索治疗低位直肠癌的新途径&;#65377;【方法】 45例低位直肠癌患者DukesB期(17)&;#65380;DukesC期(28)随机分为:A组15例行自行设计改良的新辅助治疗:术前放疗&;#65380;区域动脉介入微泵灌注化疗,按时辰多通道程控输液泵给药;B组15例,术前放疗+区域动脉介入一次性灌注化疗;C组15例诊断明确后手术;45例患者均行术中腹腔温热灌洗化疗&;#65377;【结果】 A&;#65380;B&;#65380;C组在术前降低肿瘤临床分期&;#65380;提高保肛率和复发率方面相比较有显著性差异(P < 0.05 ),A &;#65380;B&;#65380;C组肿瘤的病理改变相比较差异有统计学意义(P < 0.05 )&;#65377;【结论】 改良新辅助放化疗+术中腹腔温热灌洗化疗治疗低位直肠癌具有较好的临床疗效,能提高保肛率和生存率&;#65377;     

游离睾酮指数对诊断多囊卵巢综合征高雄激素 血症不孕患者的价值

 【目的】 探讨游离睾酮指数在诊断多囊卵巢综合征(PCOS) 高雄激素血症不孕患者的价值&;#65377;【方法】 对1113例不孕患者进行前瞻性研究,观察组(PCOS组) 533例;对照组(排卵正常的非PCOS不孕妇女) 580例&;#65377;其中观察组根据体质量指数(BMI)分肥胖PCOS组(109例)和非肥胖PCOS组(424例)&;#65377;检测基础生殖内分泌激素&;#65380;性激素结合球蛋白(SHBG)&;#65380;空腹血糖(FPG)&;#65380;空腹胰岛素(FINS),并计算游离睾酮指数(FAI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)&;#65377;比较各组各项指标的变化,探讨游离睾酮指数在诊断多囊卵巢综合征(PCOS) 高雄激素血症不孕患者的价值&;#65377;【结果】 PCOS组基础黄体生成素(LH)水平&;#65380;LH/卵泡刺激素(FSH)比值&;#65380;FAI&;#65380;FINS&;#65380;HOMA-IR均高于正常组,SHBG水平低于正常组(P < 0.05),差异有统计学意义&;#65377;两组的总睾酮水平差异无统计学意义&;#65377;通过Logistc回归分析提示HOMA-IR&;#65380;LH/FSH比值&;#65380;FAI&;#65380;基础LH均是PCOS危险因素&;#65377;其中LH/FSH比值以1.1为阈值&;#65380;FAI以3.08为阈值&;#65380;HOMA-IR以1.95为阈值,其ROC曲线下面积(AUC-ROC)分别为0.738&;#65380;0.792&;#65380;0.772&;#65377;在肥胖PCOS组,HOMA-IR对诊断PCOS灵敏度及阴性预测值最高(91.74%,83.63%),且与LH/FSH比值灵敏度及阴性预测值(52.29%,50.94%)差异有显著性,与FAI灵敏度及阴性预测值(88.07%,76.36%)差异无显著性;在非肥胖PCOS组中,LH/FSH比值灵敏度及特异度(69.10%,79.0%)最高,与HOMA-IR指数灵敏度及特异度(58.72%,68.60%)差异有统计学意义,与FAI差异无显著性&;#65377;【结论】 诊断高雄激素血症生化指标中首选FAI,因为其不仅反映游离睾酮水平还反映胰岛素抵抗水平,较单纯查总睾酮或游离睾酮优越,有临床应用价值&;#65377;     

非诺贝特改善伴高甘油三酯糖代谢异常患者急性 胰岛素分泌反应

 【目的】 观察微粒化非诺贝特对伴高甘油三酯(TG)糖代谢异常患者急性胰岛素分泌反应和胰岛素抵抗的改善作用&;#65377; 【方法】 53例入选者为按2:1随机分为非诺贝特组[36例,其中空腹血糖调节受损(IFG) 3例,糖耐量减低(IGT) 19例,IFG合并IGT 6例,2型糖尿病T2DM 8例]和对照组(17例,其中IFG 1例,IGT 9例,IFG合并IGT 4例,T2DM 3例),为期3月&;#65377;治疗前后测血糖&;#65380;血脂&;#65380;游离脂肪酸(FFA),行静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)&;#65377;计算IVGTT中急性胰岛素分泌反应(AIR)和胰岛素分泌峰值(CINS,MAX)与空腹胰岛素(FINS)比值&;#65380;差值(CINS,MAX / FINS&;#65380; ΔCINS)&;#65377;计算HOMA IR&;#65377; 【结果】 非诺贝特组治疗后血TG&;#65380;低密度脂蛋白胆固醇&;#65380;FFA明显下降,高密度脂蛋白胆固醇显著升高,腰围明显减小;对照组上述指标无改变&;#65377;非诺贝特组ΔCINS&;#65380; CINS,MAX / FINS 治疗后均增加(分别是808 ± 473 pmol/L比660 ± 472 pmol/L和中位数8.4比5.3,P < 0.000 1);AIR显著改善(5 585 ± 3 441 比4 444 ± 3 642 pmol&;#8226;L-1&;#8226;min-1,P < 0.000 1);FINS&;#65380;HOMA IR显著下降(108 ± 65 pmol/L比166 ± 115 pmol/L,P = 0.002;3.8 ± 2.3 比6.0 ± 4.2,P = 0.001)&;#65377;对照组3月后复查CINS,MAX / FINS&;#65380;ΔCINS&;#65380;AIR降低(4.6比7.0,P = 0.01;641 ± 286 pmol/L比720 ± 321 pmol/L,P = 0.039;4 313 ± 1 943 pmol&;#8226;L-1&;#8226;min-1比5 362 ± 2 861 pmol&;#8226;L-1&;#8226;min-1,P = 0.024),HOMA IR增加(7.8 ± 4.2比5.6 ± 3.2,P < 0.000 1)&;#65377;AIR改善与TG&;#65380;FFA下降显著相关(r = 0.41,0.36,P = 0.002, 0.014)&;#65377;【结论】 非诺贝特短期调脂治疗可显著改善糖代谢异常的高TG血症患者血脂谱,降低FFA水平,减小腰围,改善急性胰岛素分泌反应,减轻胰岛素抵抗;非诺贝特对胰岛素分泌功能的改善作用和减轻脂毒性相关&;#65377;     

环孢素A对肾小管上皮细胞MMP-2和 MMP-9表达和活性的影响

 【目的】 观察环孢素A(CSA)对近端肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2 和 MMP-9)表达和活性的影响&;#65377;【方法】 体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E细胞至完全融合时,分别给予不同浓度的CSA 0,0.42,0.84,4.2,8.4 μmoL/L,实验观察48 h和72 h&;#65377;收集培养液,用明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性&;#65377;提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-2和MMP-9的mRNA水平&;#65377; 【结果】 CSA刺激NRK52E细胞呈剂量依赖性抑制MMP-2活性和mRNA表达&;#65377;与对照组(CSA 0 μmoL/L)比较,CSA0.42,0.84,4.2,8.4 μmoL/L的MMP-2活性分别下降为27%,24%,11%,9%;差异均有统计学意义,P < 0.05&;#65377;CSA刺激NRK52E细胞增加MMP-9活性和mRNA表达&;#65377;与对照组比较,CSA 4.2 μmoL/L 刺激48 h MMP-9活性上调为438%,72 h上调为237%,差异均有统计学意义,P < 0.05&;#65377; 【结论】 CSA对肾小管上皮细胞MMP-2表达和活性呈剂量依赖性抑制,以及对MMP-9表达和活性的诱导作用可能与CSA所致肾小管间质损害相关&;#65377;     

白细胞介素8和载脂蛋白E基因多态性与迟发性 阿尔茨海默病的相关分析

 【目的】 探讨白细胞介素8基因(interleukin-8,IL-8)基因A-251T和载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与迟发性阿尔茨海默病(LOAD)的相关性&;#65377;【方法】 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)观察185例广东汉族人群 (研究组:LOAD患者88例,正常对照组97例) IL-8基因A-251T基因&;#65380;ApoE基因多态性的分布并进行关联分析&;#65377;【结果】 ① IL-8 基因A-251T各基因型及等位基因在研究组及对照组间的差异均无统计学意义&;#65377;② ApoE ε4等位基因频率在研究组中高于对照组,差异有统计学意义,为LOAD的患病危险因素(OR = 2.272, P = 0.003)&;#65377;③ 按是否携带ApoE ε4等位基因将研究组和对照组均分为携带ε4组与非携带ε4组&;#65377;无论是否携带ApoE ε4等位基因,IL-8 基因A-251T各基因型频率在研究组和对照组间无统计学差异(携带ε4组:P = 0.965;非携带ε4组:P = 0.523)&;#65377; 【结论】 IL-8 基因A-251T多态可能与LOAD无关,与ApoE ε4可能不存在相互作用&;#65377;     

最低流量麻醉中七氟醚在两种挥发罐设定浓度下 的摄取规律及有效性观察

 【目的】 比较最低流量麻醉中七氟醚在体积百分数为8%与6%两种挥发罐设定浓度下的摄取规律及其临床实施的有效性&;#65377;【方法】 气管插管全身麻醉下行胃肠道手术的患者40名,ASAⅠ-Ⅱ级,年龄20 ~ 60岁,按七氟醚挥发罐开启浓度(Fd)随机分为两组:8%组(G1组)和6%组(G2组),每组20例&;#65377;经静脉诱导行气管插管接麻醉机后即将新鲜气流量调至0.5 L/min并维持在这一水平,按分组方法开启七氟醚挥发罐浓度至8%(G1组)或6%(G2组),维持呼气末CO2分压(EtCO2)于30 ~ 40 mmHg&;#65377;每隔两分钟记录一般生命体征&;#65380;七氟醚吸入浓度(Fi)&;#65380;肺泡浓度(Fa,以呼末浓度表示)&;#65380;最小肺泡浓度(MAC)值以及脑电双频指数(BIS),直至呼末七氟醚浓度达1.3 MAC (2.6%)&;#65377;【结果】 开启挥发罐10 min后G1组的Fi&;#65380;Fa值分别达(2.82 ± 0.21)%及(2.14 ± 0.20)%;G2组分别达(1.92 ± 0.17)%及(1.45 ± 0.18)%&;#65377;两组Fi/Fd&;#65380;Fa/Fd在2&;#65380;4 min时无差别;在6&;#65380;8&;#65380;10 min G1组高于G2组(P < 0.05);摄取期末G2组高于G1组(P < 0.05);G1组的Fa达1.3MAC的时间为(13.61 ± 2.12) min,G2组为(27.89 ± 7.62) min,差异有统计学意义(P < 0.001)&;#65377;【结论】 七氟醚用于最低流量麻醉时,8%的挥发罐设定浓度可使呼吸道浓度在(13.61 ± 2.12) min即达到1.3 MAC,且BIS值已达到临床麻醉所需深度,心血管稳定性好,适于临床推广;而6%的挥发罐设定浓度则需(27.89 ± 7.62) min才能达到1.3 MAC,未能理想达到临床应用的要求&;#65377;     

大鼠Parv中间神经元形态学特征及其在纹状体 分布规律的探察

 【目的】 纹状体Parv中间神经元被认为是连接纹状体传入和传出神经元之间的枢纽&;#65377;本实验旨在观察证实纹状体Parv神经元胞体&;#65380;树突和轴突的形态学特征和在纹状体的分布及其与纹状体不同区域之间的关系&;#65377; 【方法】 对成年雄性SD大鼠常规灌注固定和取脑;半导体冰冻切片之后进行免疫组化PAP方法单标记和双标记;光镜观察阳性神经元的形态并进行计数和计算其百分比;应用SPSS软件统计处理&;#65377; 【结果】 Parv阳性神经元在纹状体呈现散在不均匀分布,在纹状体背外侧区的分布多于其它区域(P < 0.001);Parv阳性神经元在Matrix间区分布的百分比显著高于Patch间区(82.0%比18.0%,P < 0.001);纹状体Parv阳性细胞为典型的中等大小的中间神经元(平均直径11.68 μm),胞体呈多边形或卵圆形,外侧区胞体直径大于内侧区(P < 0.01);阳性神经元树突密集,表面光滑和未见树突棘;神经元轴突细长,在纹状体可见其分支&;#65377; 【结论】 Parv阳性中间神经元在纹状体背外侧区的密集分布&;#65380;高百分比聚集于Matrix间区和典型的中间神经元特征,提示其可能对纹状体不同区域的投射神经元具有选择性和特异性作用&;#65377;     

24 个常用STR基因座的突变观察与分析

 【目的】 观察24个常用STR基因座等位基因突变的现象及特点&;#65377; 【方法】 对5 084例肯定亲权关系的案例进行分析,筛选等位基因突变事件,确定突变等位基因的来源,统计各STR基因座的突变率,分析突变的规律及其特点&;#65377; 【结果】 在24个STR基因座中共观察到172个突变事件,STR基因座的突变率介于0 ~ 0.492%&;#65377;每个突变案例的突变基因座数目为1 ~ 3个&;#65377;突变模式符合逐步突变模式,最多突变步数为四步&;#65377;父系突变与母系突变比例为3.55:1&;#65377; 【结论】 STR基因座等位基因突变现象较为常见&;#65377;当出现STR基因座突变时,应结合突变的STR基因座信息计算PI值&;#65377;     

Palmitic and linoleic acids impair endothelial progenitor cells by inhibition of Akt/eNOS pathway

BACKGROUND: Endothelial progenitor cells (EPCs) are involved in adult neovasculogenesis and maintenance of vascular integrity. Scarce data have been provided for the individual effect of elevated free fatty acids (FFAs) on EPCs. This study was designed to investigate the association between Akt/eNOS signal pathway changes and the proliferation/function of EPCs in the presence of palmitic and linoleic acids. METHODS: After 14-day culture, EPCs were stimulated with different concentrations of palmitic and linoleic acids, with or without SNP, L-NAME, or LY294002. The proliferation and ability of adhesion, migration and tube structure formation of EPCs were observed and the level of phosphorylated Akt protein expression and eNOS protein expression were assayed. RESULTS: Incubation with palmitic and linoleic acids at concentrations of 0.2 muM or higher inhibited EPCs proliferation, significantly reduced migratory rate, reduced adhesion to fibronectin and impaired ability of EPCs to form tube structure in a dose-dependent manner. A simultaneous dose-dependent NO generation and Akt phosphorylation decrease as well as eNOS expression reduction at protein levels were also observed. However, all of the detrimental effects were attenuated by pretreating EPCs with SNP, NO donor. AKT and eNOS inhibitor, LY294002 and L-NAME, respectively, augmented palmitic and linoleic acids inhibitory effects on EPCs. CONCLUSIONS: These findings suggest that palmitic and linoleic acids downregulated AKT/eNOS signal pathway, which contributed to overall poor function and decrease proliferation of EPCs. These changes induced by palmitic and linoleic acids in signaling offer a novel explanation for the overall poor function of EPCs in diabetes mellitus.     

邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯（di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP）对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响及机制。方法 体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,分为5组：不加干预药物（对照组）、加17β-雌二醇（17β-estradiol,E₂组）、加DEHP（DEHP组）、同时加E₂和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K）抑制剂LY294002（E₂ + LY294002组）、同时加DEHP和LY294002（DEHP + LY294002组）。检测各组细胞0、2、5 d时光吸收度值（absorbance value,AV）,5 d时DNA增殖指数（proliferation index,PI）,凋亡指数（apoptotic index,AI）、Capase-3蛋白、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（protein-serine-threonine kinase,Akt）以及磷酸化Akt（phosphor-AktSer473,p-AktSer473）蛋白表达。结果 E₂和DEHP组2、5 d时AV值及5 d时PI值均较对照组明显增高（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显降低（P<0.01）,各组AI及Caspase-3蛋白表达无明显变化。5 d时p-AktSer473蛋白表达,E₂和DEHP组较对照组增加（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显减少（P<0.01）,各组Akt蛋白表达无明显变化。结论 DEHP可促进人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞体外增殖,作用与雌激素相仿。该促增殖效应可能通过PI3K/Akt信号通路起作用,与细胞凋亡途径无关。     

瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响。方法 培养原代心肌微血管内皮细胞,取1代细胞分为四组：低糖组（5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3 mmol/L葡萄糖）、瑞舒伐他汀组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀）和LY294002组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀+10 μmol/L LY294002）,其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的抑制剂。采用Matrigel、Transwell和MTT法分别观察四组微血管内皮细胞的管腔形成、迁移及增殖能力。采用Western blotting技术检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt）、内皮一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（Ser1117）（p-eNOS）蛋白的表达。结果 与低糖组相比,高糖组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显降低（P<0.05）;瑞舒伐他汀组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显高于高糖组及LY294002组,但仍低于低糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）。瑞舒伐他汀组p-Akt和p-eNOS蛋白的相对表达量均明显高于高糖组和LY294002组（P<0.05）,并基本恢复至低糖组水平（P>0.05）。结论 瑞舒伐他汀可明显改善高糖导致的内皮细胞的血管形成障碍,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路相关。     

PI3K/Akt-NO信号通路在Ang Ⅳ诱导大鼠心肌肥大中的作用

目的研究PI3K/Akt-NO信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度AngⅣ对心肌细胞的作用,并观察PI3K阻断剂LY294002和NO合成酶(NOS)抑制剂L-NAME对AngⅣ作用的影响;利用Real-time PCR和Western blot方法检测mR-NA及蛋白水平的表达;硝酸还原法和ELISA法分别检测NO和内皮型NOS(eNOS)含量。结果 AngⅣ浓度依赖地(0.01、0.1及1nmol/L)诱导心肌细胞肥大;使Akt mRNA和蛋白表达明显降低,eNOS mRNA表达以及细胞培养液中eNOS的含量减少,NO的释放下降(P<0.05);LY294002和L-NAME均使AngⅣ的作用加强(P<0.05)。结论 AngⅣ诱导的心肌肥大作用至少部分地与PI3K/Akt-NO信号通路被抑制有关。     

塞来昔布通过调节PI3K/Akt通路活化影响人膀胱肿瘤细胞株T24的增殖和凋亡

探讨PI3K/Akt通路在选择性环氧化酶2(Cox-2)抑制剂塞来昔布抗膀胱肿瘤机制中的可能作用。方法常规培养的贴壁生长的T24细胞,加入不同浓度PI3K抑制剂LY294002共培养,MTT法测定其对T24细胞增殖活性的影响;贴壁生长及悬浮培养的T24细胞,分别加入塞来昔布、PGE2、LY294002等共培养,流式细胞仪测定T24细胞凋亡率。Western blot检测塞来昔布及PGE2作用后悬浮生长的T24细胞Akt活化情况。结果塞来昔布对贴壁及悬浮培养的T24细胞均可诱导其凋亡;PGE2及LY294002均对贴壁的T24细胞增殖和凋亡无明显影响,但PGE2对悬浮生长的T24细胞可减少其凋亡,而LY294002可显著增加T24细胞的失巢凋亡率。Western blot结果提示塞来昔布显著降低而PGE2增加Akt的活化。结论塞来昔布对PI3K/Akt信号通路的主要作用是阻遏Akt的磷酸化,通过阻止Akt活化抑制T24细胞增殖并诱导其产生凋亡。更多还原     

整合素β1信号通路参与非小细胞肺癌吉非替尼获得性耐药

目的 探讨整合素β1及其下游信号转导通路在非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用。方法 以人肺腺癌细胞株PC-9和吉非替尼耐药株PC-9/G作为研究对象,用MTT法检测吉非替尼和/或磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂PD98059对细胞增殖抑制率的影响;用Annexin Ⅴ/PI试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。免疫印迹分析检测整合素β1、Akt、磷酸化Akt蛋白的表达。结果 吉非替尼耐药株PC-9/G高表达整合素β1,RNAi抑制整合素β1表达能够抑制PC-9/G细胞的生长、促进调亡。ERK抑制剂PD98059不能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性。PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt的磷酸化的抑制作用弱于PC-9细胞。PI3K抑制剂LY294002能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性,RNAi抑制整合素表达后Akt的磷酸化水平降低。结论 表达升高的整合素β1通过PI3K途径激活下游信号分子可能是一种重要的EGFR-TKI耐药机制。     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的：探讨莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（5、10、25、50、100 μmol/L）莪术醇,0 μmol/L莪术醇为对照组,干预SKOV3细胞24 h、48 h的增殖抑制率,并计算IC50值;划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达的影响。结果：莪术醇对SKOV3细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性但不呈现时间依赖性,IC50值为48 μmol/L;莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的迁移与侵袭,促进其凋亡（均P＜0.01）,降低细胞PI3K、AKT总蛋白表达（均P＜0.05）,显著降低其活化形式p-PI3K、p-AKT的表达（均P＜0.01）;莪术醇与LY294002联用后表现出良好的协同作用,较单独用莪术醇时下调p-PI3K、p-AKT蛋白更为显著（P＜0.05）。结论：莪术醇能抑制SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT通路有关。     

雷公藤甲素对离体子宫内膜癌细胞株增殖及凋亡信号通路PI3K/PKB的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B增殖和凋亡的影响,初步探讨其与凋亡信号通路磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)的关系?方法:观察PI3K/PKB通路抑制剂(LY294002)对雷公藤甲素致子宫内膜癌细胞株HEC-1B凋亡的影响;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测雷公藤甲素对细胞增殖的减轻情况;Western blot观察HEC-1B的PKB磷酸化蛋白表达?结果:MTT实验显示PI3K/PKB通路抑制剂能明显减轻雷公藤甲素对HEC-1B细胞生长的抑制作用,呈浓度依赖性(P < 0.05);Western blot结果显示细胞株磷酸化蛋白的表达水平与雷公藤甲素作用浓度呈反比(P < 0.05)?结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞株HEC-1B的增殖产生抑制作用,并能影响PI3K/PKB信号通路诱导细胞凋亡?     

新藤黄酸通过PTEN-PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的研究

目的 探究PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）抑制人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial, HUVECs）迁移中的作用。方法 倒置显微镜下观察HUVECs形态变化;Boyden chamber实验以及细胞划痕实验观察GNA对HUVECs迁移能力的影响;硝酸还原酶法检测NO水平;Western blot法检测GNA及LY29400预处理对HUVECs内磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT表达水平的影响;HUVECs转染PTEN-siRNA后,RT-PCR实验检测VEGF mRNA的表达水平。结果 GNA能有效抑制HUVECs迁移,其抑制效果与剂量相关（P＜0.05）。GNA和抑制剂LY294002以及L-NAME均能有效抑制NO的产生,且GNA+LY294002组、GNA+L-NAME组抑制效果更好（P＜0.05）;Western blot检测结果显示,GNA上调PTEN蛋白表达水平,下调eNOS、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平（P＜0.05）。RT-PCR检测结果表明,PTEN-siRNA转染后,GNA能上调VEGF mRNA基因的表达水平（P＜0.05）。结论 GNA通过PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号传导通路,抑制HUVECs迁移,阻止HUVECs血管生成。     

芸香苷通过 PI3K/AKT 信号通路抑制 H2 O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的：探讨 PI3K/ AKT 信号通路是否参与芸香苷对过氧化氢(H2 O2)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的抑制作用。方法将培养的 HLEC 分为4组：空白对照组、H2 O2组、芸香苷组、LY294002组;采用 MTT 法测细胞存活率,Western blot 法检测 p-AKT 及 AKT 的表达,Annexin V-FITC/ PI 双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果H2 O2可诱导 HLEC 发生凋亡,与 H2 O2组相比,芸香苷组不仅使 AKT 的磷酸化水平显著升高,还降低了细胞凋亡率(P<0．01);在 LY294002干预组, PI3K/ AKT 信号通路的特异性阻断剂 LY294002明显抑制了芸香苷组中各项指标的变化,差异有统计学意义(P <0．01),但与 H2 O2组比较,差异无统计学意义。结论芸香苷抑制 H2 O2诱导的 HLEC 凋亡可能与 PI3K/ AKT 信号通路有关。