微小RNA在免疫调节中的作用研究进展

微小RNA(miRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达.研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用.近年来,一系列的miRNA已被证实参与了免疫反应调控,如固有性免疫应答,T、B淋巴细胞的分化,病原体感染与免疫及炎症的免疫调控等.文中就miRNA在固有性与获得性免疫应答中的调控作用作一综述.     

微小RNA与心血管系统

微小RNA(miRNA)是一种长度为18~25核苷酸单链的内源性非编码性小RNA,通过与靶基因序列特异性相互作用在转录水平调节基因表达。先前对miRNAs功能理解主要集中在发育依赖性表达和进化保守方面,因此对发育调节和肿瘤形成进行了大量研究。近来,miRNAs和心血管疾病方面的研究如火如荼,一些相关机制得以阐明。现对miRNAs和心血管系统最新研究进展进行总结并探讨其相关分子机制。     

微小RNA与肿瘤相关性研究

微小(microRNA,miRNA)是一种内源性的类似于siRNA的小RNA分子,由高等真核生物基因组编码、非编码蛋白,长度大约为22个核苷酸RNA片段,通过核酸序列的互补性结合到特定的靶mRNA上,并调节、翻译或降解靶mRNA来调控基因表达。近年来,miRNA作为生物体重要的基因调控分子与疾病的关系尤其是与肿瘤的关系备受关注。现就miRNA与肿瘤相关性作一综述。     

微小RNA在结肠癌中的研究进展

结肠癌是世界三大最常见癌症之一,其发病机制已被广泛研究。而近年来微小RNA(microRNA,miRNA)与肿瘤的相关性研究已成为热点。miRNA参与了包括肿瘤的发生发展和肿瘤细胞凋亡增殖等相关机制的调控。最近的研究显示miRNA可作为新的肿瘤生物标记物,从而对肿瘤的化疗敏感性及预后进行预测。然而,在临床应用miRNA之前还有许多问题有待解决。通过更为广泛的研究以及数据的积累找出更适合作为生物标记物的miRNA,并能更好的了解其在结肠癌中的作用。文中对miRNA作为结肠癌的诊断、预后及药物反应预测的生物标志物的潜在作用进行总结与阐述。     

微小RNA在骨肉瘤中的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是指长度约21～25 nt的某些特殊的小型非编码RNA组成的家族。miRNA在转录后水平通过促进靶mRNA降解或抑制翻译过程而发挥负性调控作用。miRNA与肿瘤的发生、发展关系密切。文中综述miRNA的主要特点及其在骨肉瘤中的研究进展。     

微小RNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究微小RNA（MicroRNA）在直肠癌组织与正常直肠组织中的表达差异。方法提取60例直肠癌及癌旁正常组织中总RNA,对标本中MicroRNA表达状况应用实时荧光定量PCR方法进行检测。对其他20例直肠癌组织及其癌旁正常组织应用问题分析（PAM）法进行定性判断。结果在直肠癌发生过程中有41种MicroRNA表达量显著下降（〈0.66）。对20例直肠癌组织应用PAM法进行定性判断的结果与病理检查结果基本一致。结论 MicroRNA与直肠癌联系密切,可以成为直肠癌早期预测和诊断的有效手段。     

微小RNA在宫颈癌中的研究进展

微小RNA(miRNAs)是近年来发现的一类长度约22个核苷酸的编码小分子RNA,它通过促使靶mRNA降解或抑制其翻译来调节靶基因的表达,在细胞的分化、增殖,个体发育,机体代谢以及肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,是女性第二大恶性肿瘤以及与癌症相关死亡的原因,严重威胁女性健康。miRNAs在宫颈癌组织及血清中表达上调或下调,推断其可能参与宫颈癌的发生、发展,在宫颈癌的发生、发展过程中起着癌基因或抑癌基因的作用。     

微小RNA在肿瘤发生、发展中的作用

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类长度为22 nt左右的内源性非编码核苷酸构成的单链小RNA分子.1993年Lee等在秀丽(隐杆)线虫(Caenorhabditis elegans)中发现了第1个miRNA分子(miRNA-lin-4),随后许多实验室在植物、多细胞动物以及病毒的基因组中鉴别出了数百个miRNA.     

微小RNA与器官纤维化研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长21～25个核苷酸的内源性非编码小RNA,在转录后水平调控靶基因的表达。近年来研究发现,miRNA也参与了机体多个器官如心脏、肺脏、肾脏、肝脏、皮肤的纤维化过程。本文对miRNA生物学特征及其在脏器纤维化过程中的作用的相关研究进展进行综述。     

微小RNA及其在泌尿系统肿瘤中的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)突变、缺失或表达水平的异常会导致生理的异常与疾病的发生,它与人类肿瘤的发生密切相关,具有类似于癌基因或抑癌基因的作用,参与肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移及凋亡等调控过程。其表达谱可作为肿瘤诊断和预后的指标,并可望成为肿瘤诊疗的新靶点。文中主要讨论miRNA及其     

绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用

自20世纪60年代被发现以来,绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）因其化学性质稳定、无光漂白现象、用甲醛固定和石蜡包埋亦不影响其荧光性质等引起科学家的广泛关注。目前．GFP基因作为报告基因广泛应用于细胞生物学、分子生物学以及临床医学等研究中。     

psiCHECK-2-eGFP-mLumin双荧光蛋白报告基因质粒的构建及在真核细胞中的表达

［摘要］目的: 以psiCHECK-2质粒为骨架,构建带有远红外荧光蛋白mLumin和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,eGFP）的双荧光蛋白报告基因质粒psiCHECK-2-eGFP-mLumin。方法： PCR扩增mLumin和eGFP基因片段,分别取代海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶插入psiCHECK-2质粒中,构建psiCHECK-2-eGFP-mLumin双荧光蛋白报告基因重组质粒mLumin。通过测序验证插入序列,并将此质粒转入HEK293T细胞,分别用PCR和荧光显微镜鉴定eGFP和mLumin在细胞中的表达。结果： DNA测序结果证实连接在psiCHECK-2质粒上的eGFP和mLumin基因序列与基因库中的序列一致。将psiCHECK-2-eGFP-mLumin质粒转染HEK293T细胞,能成功表达eGFP和mLumin蛋白。结论： 成功构建psiCHECK-2-eGFP-mLumin双荧光蛋白报告基因质粒,且可在真核细胞中表达。     

舒洛地特调控miR-27a介导自噬调控糖尿病肾病足细胞损伤机制研究

目的分析舒洛地特调控微小RNA-27a(miR-27a)介导自噬调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制。方法选取45只中15只大鼠作为正常组不做任何处理,其余大鼠建立糖尿病肾病大鼠模型,随机分为模型组、舒洛地特组各15只。舒洛地特组大鼠给予舒洛地特肌内注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水肌内注射。观察各组大鼠病理组织学变化,血糖、血脂和肾功能指标、足细胞自噬体情况、凋亡率,足细胞特异性蛋白Nephrin、Desmin、GPR124及miR-27a、AMPK-mTOR信号通路蛋白表达量。结果舒洛地特组血糖、血脂和肾功能指标、足细胞凋亡率、Desmin、miR-27a、AMPK-mTOR信号通路蛋白表达量均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。舒洛地特组足细胞自噬体数量、Nephrin、GPR124蛋白表达量均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论舒洛地特可通过下调miR-27a介导AMPK、mTOR、Bax蛋白表达量降低,进而抑制AMPK-mTOR信号通路,促进糖尿病肾病足细胞自噬、抑制糖尿病肾病足细胞凋亡、减轻糖尿病肾病足细胞损伤。     

慢病毒介导的miR-27a下调对U87胶质瘤细胞的影响

目的:探讨下调miR-27a对U87胶质瘤细胞的影响?方法:分别用慢病毒干扰质粒miRZip-27a anti-miR-27a microRNA construct或慢病毒空质粒pGreenPuro Scramble Hairpin Control-Construct与慢病毒包装质粒混合物共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒命名为Lt-I和Lt-NC?然后分别用慢病毒Lt-I和Lt-NC感染U87胶质瘤细胞,通过流式细胞仪筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞?通过定量PCR法分别检测稳定感染的U87细胞和未感染的空白U87细胞miR-27a,CCK-8法检测胶质瘤细胞增殖情况,Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭能力?结果:相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调?细胞增殖减缓?侵袭能力降低,而感染Lt-NC组(阴性对照组)则未见此改变?结论:miR-27a的下调能有效抑制U87胶质瘤细胞的增殖,降低U87胶质瘤细胞的侵袭能力?     

血清miR-222、miR-874-3p和miR-27a联合诊断多囊卵巢综合征的应用价值

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清miR-222、miR-874-3p和miR-27a水平,并评估其在PCOS中的潜在诊断价值。 方法选取PCOS患者98例为PCOS组,因单纯输卵管不孕或男性因素不孕的妇女98例为对照组。根据体质指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和游离雄性激素指数(FAI),将PCOS组分为正常体质量组、超重组和肥胖组;非胰岛素抵抗组和胰岛素抵抗组;高雄激素组和低雄激素组。qRT-PCR检测各组miR-222、miR-874-3p和miR-27a水平,ROC曲线分析miR-222、miR-874-3p和miR-27a在PCOS中的诊断价值。 结果PCOS组BMI、HOMA-IR和FAI及血清miR-222、miR-874-3p、miR-27a均高于对照组(P＜0.05)。超重组和肥胖组miR-27a高于正常体质量组,胰岛素抵抗组miR-222和miR-27a高于非胰岛素抵抗组,高雄激素组miR-874-3p高于低雄激素组(P＜0.05)。miR-222、miR-874-3p和miR-27a联合诊断PCOS诊断效能最高。 结论PCOS患者血清miR-27a、miR-222和miR-874-3p表达上调,可能与胰岛素抵抗、脂代谢和高雄激素血症有关,三者联合检测有助于PCOS的诊断。     

miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

目的:探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因。实时聚合酶链式反应（Realtime PCR） 检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1 mRNA的水平。结果:（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P<0.05）。而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果。（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系。miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中。上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1 mRNA水平无明显变化（P>0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调。结论:体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/ FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略。     

miR-181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达

目的目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用。方法收集怀孕0～6.5 d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达。制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24 h后采用0.5 mmol/L 8-Br-cAMP和1μmol/L Medroxyproges-terone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用。结果早孕小鼠子宫组织中miR-181a的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕4.5 d达到高峰(2.60±0.15倍,P<0.01,n=5),孕5.5 d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P<0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P<0.01)。荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P<0.05)。结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控。     

顺铂诱导SPC-A1人肺腺癌细胞凋亡过程中miR-27a的表达及意义

目的:检测miR-27a在顺铂(DDP)体外诱导人肺腺癌细胞株SPC-A1凋亡过程中的表达变化,探讨其与细胞凋亡之间的相关性及其检测的临床意义?方法:体外培养SPC-A1细胞,实验组加入终浓度为2.5 μg/ml DDP,同时设置不加DDP的对照组?观察12?24?48和72 h后显微镜下细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time PCR检测培养上清液中和SPC-A1细胞内miR-27a的表达变化?结果:DDP(2.5 μg/ml)组SPC-A1细胞形态呈凋亡改变,在48和72 h凋亡率分别为(59.3 ± 2.5)%和(76.4 ± 3.1)%,均显著高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)?DDP (2.5 μg/ml)组培养上清液中和SPC-A1细胞内miR-27a含量在24?48和72 h均显著高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)?DDP (2.5 μg/ml)组培养上清液中miR-27a含量在12?24?48和72 h逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-27a在DDP诱导的SPC-A1细胞凋亡中表达升高,提示其可能参与细胞凋亡调控;对miR-27a进行定量检测有望用于对肺腺癌化疗疗效的评估?     

血清miR-27a水平与多囊卵巢综合征及其临床特征的相关性

目的:分析多囊卵巢综合征(PCoS)患者血清miR-27a水平及其与临床特征的相关性.方法:收集2018年10月-2019年10月在郑州人民医院就诊的PCOS患者96例(PCOS组)、健康女性60名(对照组)为研究对象,qRT-PCR检测两组血清miR-27a水平,超声检测两组受试者卵泡数和卵巢体积,采血检测卵泡刺激素...     

miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响

目的研究miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响。 方法构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。细胞实验分为空白对照组(HEC-1-A不做任何处理)、NC-miR组(转染miR-27a空载体)及miR-27a inhibitor组(转染miR-27a抑制剂)。qRT-PCR法检测各组细胞miR-27a表达情况;MTT比色法和平板克隆技术检测各组细胞增殖能力。 结果成功构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。miR-27a inhibitor组miR-27a水平及细胞增殖能力均低于NC-miR组及空白对照组(P＜0.05)。 结论miR-27a低表达抑制子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖能力。