c-erbB-2的表达与非小细胞肺癌多药耐药的关系

目的探讨c-erbB-2基因表达和非小细胞肺癌的化疗耐药性的关系,初步明确c-erbB-2基因在介导非小细胞肺癌(NSCLC)耐药机制中的作用。方法应用MTT法对54例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物敏感性测试,观察非小细胞肺癌分别对环磷酰胺、阿霉素、顺铂+氟尿嘧啶三种单药和联合用药方案耐药情况;用免疫组织化学方法检测c-erbB-2基因的表达,并对其表达情况与对应的化疗耐药性进行相关分析。结果54例NSCLC化疗敏感性检测结果显示:32例(59.3%)对环磷酰胺耐药,31例(57.4%)对阿霉素耐药,25例(46.3%)对顺铂+氟尿嘧啶耐药。其中,11例(20.4%)对3种用药均敏感,16例(29.6%)对3种用药均耐药,其耐药性与组织学类型和分化程度无关(P>0.05)。c-erbB-2在54例非小细胞肺癌中总的阳性表达率为53.7%,其中鳞癌和腺癌相比c-erbB-2的表达无显著性差异(P>0.05)。c-erbB-2的表达与3种化疗用药的耐药性均呈显著正相关(P<0.05),并且不同表达程度间也有显著差异性(P<0.05)。结论c-erbB-2在非小细胞肺癌中有较高的阳性表达,其参与介导了NSCLC固有化疗耐药的机制。     

MRP的表达与非小细胞肺癌耐药性的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)的化疗耐药性和参与介导多药耐药的相关基因和蛋白(MRP)的表达,对比分析非小细胞肺癌的多药耐药性与三种耐药相关基因表达的关系。方法应用肿瘤细胞体外培养和药敏实验法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物敏感性测试,观察非小细胞肺癌分别对环磷酰胺、阿霉素、顺铂 氟尿嘧啶三种单药和联合用药方案耐药情况和总的耐药情况,并用免疫组织化学方法对其进行MRP基因表达的检测,并将其表达情况与对应的化疗耐药性进行相关分析。结果91例NSCLC化疗敏感性检测结果显示:53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂 氟尿嘧啶耐药。其中,19例(20.9%)对三种用药均敏感,27例(29.8%)对三种用药均耐药,尚不能认为其耐药性与组织学类型和分化程度有关(P>0.05)。MRP在91例非小细胞肺癌中总的阳性表达率为73.6%。鳞癌和腺癌相比MRP的表达差异无统计学意义(P>0.05),而且MRP的表达与对三种化疗用药的耐药性均呈正相关(P<0.05),并且不同表达程度间差异也有统计学意义(P<0.05)。结论MRP在非小细胞肺癌中均有较高的阳性表达并共同介导参与了非小细胞肺癌固有的多药耐药机制。     

体外肿瘤细胞培养法对非小细胞肺癌化疗药物敏感性的研究

[目的]通过常见非小细胞肺癌对不同抗癌药物敏感性作比较,以期寻找各自的合理的化疗用药方案,从而指导不同肺癌的化疗。[方法]通过肿瘤细胞体外药敏试验(即四甲基偶氮唑盐着色法,MTT),对35例非小细胞肺癌(腺癌23例、磷癌12例)新鲜瘤组织原代培养进行顺铂(DDP)、卡铂(CBP)、足叶乙甙(VP-16)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、环磷酰胺(CTX)、紫杉醇(PTX)、长春瑞滨(NVB)、金喜素(TPT)9种化疗药物敏感检测,其结果作以比较。[结果]非小细胞肺癌对PTX、TPT、ADM、CBP、NVB的高度敏感率分别为51.43%、42.86%、40.00%、37.14%、31.4%,提示肺癌对上述药物敏感,其余DDP、VCR、VP-16三种药物高度敏感率不足30%,提示治疗效果差。而CTX高度敏感率为0.00%,提示CTX治疗非小细胞肺癌不敏感。[结论]非小细胞肺癌对化疗药物的反应虽有一定的共性,但不同个体间差异有显著性意义。不同类型非小细胞肺癌对不同化疗药物的敏感性也有差别。     

LRP的表达与非小细胞肺癌耐药性的关系

目的探讨非小细胞肺癌的化疗耐药性和参与介导多药耐药的相关基因LRP和蛋白的表达,对比分析非小细胞肺癌的多药耐药性与LRP的关系。方法应用肿瘤细胞体外培养和MTT法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物敏感性测试,观察非小细胞肺癌分别对环磷酰胺、阿霉素、顺铂 氟尿嘧啶三种单药和联合用药方案耐药情况和总的耐药情况,并用免疫组织化学方法对其进行LRP表达的检测,并将其表达情况与对应的化疗耐药性进行相关分析。结果91例NSCLC化疗敏感性检测结果显示:53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂 氟尿嘧啶耐药。其中,19例(20.9%)对三种用药均敏感,27例(29.8%)对三种用药均耐药,其耐药性与组织学类型和分化程度无关(P>0.05)。LRP在91例非小细胞肺癌中总的阳性表达率为53.8%鳞癌和腺癌相比LRP的表达无显著性差异(P>0.05)。且LRP的表达与三种化疗用药的耐药性均呈显著正相关(P<0.05),并且不同表达程度间也有显著差异性(P<0.05)。结论LRP在非小细胞肺癌中均有较高的阳性表达并参与介导了非小细胞肺癌固有多药耐药机制。     

p53蛋白与非小细胞肺癌多药耐药性的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)的化疗耐药性与p53蛋白表达的关系。方法对43例未经化疗的NSCLC组织进行体外化疗药物敏感性实验,观察细胞分别对紫杉醇、阿霉素、顺铂+吉西他滨3种用药方案的耐药情况,用免疫组织化学方法进行p53蛋白表达的检测,并将p53表达情况与化疗耐药性进行相关分析。结果43例中,22例(51.16%)对紫杉醇耐药,23例(53.49%)对阿霉素耐药,13例(30.23%)对顺铂+吉西他滨耐药,9例(20.93%)对3种用药均敏感,13例(30.23%)对3种用药均耐药。43例NSCLC p53蛋白阳性表达33例,阳性表达率76.74%,此表达与3种用药方案耐药性成正相关(P<0.05),且在鳞癌中的表达明显高于腺癌(P<0.05),但与分化程度无关(P>0.05)。结论p53蛋白在NSCLC细胞中过表达参与并介导了NSCLC化疗耐药的机制。     

鬼臼乙叉甙与高剂量顺铂联合使用对晚期非小细胞肺癌近期疗效评价

本组采用鬼臼乙叉甙(VP-16)与高剂量顺铂(HD-DDP)为主要药物联合治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)20例,取得较好疗效。完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)8例,缓解率45%,缓解期2～9月。通过比较,显示 VP-16与HD-DDP 联合化疗对非小细胞肺癌的疗效显著优于 HD-DDP 联合其它药物化疗疗效。     

mdrl的表达在非小细胞肺癌多耐药机制中的意义

目的探讨非小细胞肺癌的化疗耐药性和mdrl基因表达的关系,明确mdrl在非小细胞肺癌耐药中的作用。方法应用肿瘤细胞体外培养和MTT法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物(环磷酰胺、阿霉素、顺铂 氟尿嘧啶)敏感性测试,并用免疫组化方法进行mdrl表达的检测,并进行相关分析。结果化疗敏感性:53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂 氟尿嘧啶耐药。mdrl在91例中总的阳性表达率为58.2%。鳞癌和腺癌相比mdrl的表达差异无统计学意义(P>0.05),而且mdrl与耐药性均呈显著正相关(P<0.05),并且不同表达程度间差异也有统计学意义(P<0.05)。结论mdrl参与介导了非小细胞肺癌固有化疗耐药的机制。     

Notch1在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用

目的探讨Notch1在小细胞肺癌多药耐药中的作用。方法首先通过QRT-PCR和Western-blot从基因和蛋白水平检测小细胞肺癌敏感细胞株(H69)和耐药细胞株(H69AR)中Notch1的差异表达;应用siRNA抑制耐药细胞株H69AR中的Notch1的表达,通过CCK8检测细胞对各种化疗(ADM,DDP,VP-16)的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果 Notch1在H69AR中的表达明显高于H69,抑制耐药细胞株中Notch1的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞的凋亡。结论 Notch1可能参与了调节小细胞肺癌对多药耐药性。     

非小细胞肺癌组织Bcl-2蛋白的表达和多药耐药检测

目的:观察非小细胞肺癌组织(NSCLC)中Bcl-2蛋白的表达及其化疗耐药性.方法:应用MTT法,观测91例未经化疗的NSCLC组织对环磷酰胺、阿霉素、顺铂 氟尿嘧啶3种用药方案的药物敏感性.用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中Bcl-2蛋白的表达,并将其表达情况与化疗耐药性进行相关分析.结果:91例中53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂 氟尿嘧啶耐药.其中,19例(20.9%)对3种用药均敏感,27例(29.8%)对3种用药均耐药.91例中Bcl-2蛋白总的阳性表达率为52.7%,其表达与组织学类型和分化程度无关(P＞0.05),但与3种化疗用药方案耐药性均有关(P＜0.05).结论:NSCLC存在固有的化疗耐药性,Bcl-2蛋白参与介导了NSCLC化疗耐药的机制.     

人非小细胞肺癌细胞药物敏感性检测及其与耐药因子p53抗体和GST-π表达的关系

目的：研究人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对常用抗肿瘤药物的耐药情况及其与两种耐药因子p53抗体和GST-π表达的关系。方法：对58例NSCLC手术标本进行原代细胞培养,然后以MTT法检测其对顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、足叶乙甙（VP16）、羟基喜树碱（HCPT）、阿霉素（ADM）及环磷酰胺（CTX）6种临床常用化疗药物的敏感性;同时以酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测患者血清中p53抗体及GST-π两种耐药因子表达情况。结果：6种药物的有效率（即化疗药物对肿瘤细胞的活性抑制率）分别为DDP 41.4%、VCR 24.1%、 VP16 22.4%、 HCPT 20.7%、ADM 17.2%及CTX 17.2%;p53抗体及GST-π表达情况不同,其表现出不同耐药程度。结论：以MTT法检测NSCLC的药物敏感性,尤其对p53抗体及GST-π表达情况的检测,对于指导肺癌化疗是可行而且必要的。     

GRP94表达在大细胞肺癌NCI-H460细胞对顺铂耐药中的作用

[目的]检测在诱导剂A23187与抑制剂BAPTA - AM作用下,大细胞肺癌细胞NCI - H460中GRP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对顺铂耐药发生中的作用.[方法]将NCI - H460细胞分为诱导剂A23187组、抑制剂BAPTA - AM组和对照组,RT - PCR、Western blot方法检测...     

GRP94表达在肺癌细胞对VP-16化疗耐药中的作用

[目的]检测在Ca2+拮抗剂A23187诱导下,人肺腺癌细胞SPCA1中GRiP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对VP-16耐药中的作用.[方法]采用RT-PCR、免疫荧光细胞化学方法检测不同浓度A23187处理组细胞的GRP94核酸及蛋白表达,用MTT法测定细胞在VP-16作用下的生存率.[结果]A23187可...     

葡萄糖调节蛋白78对非小细胞肺癌患者吉西他滨 化疗敏感性的影响

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达与非小细胞肺癌（NSCLC）患者吉西他滨化疗的关系及GRP78对肺腺癌SPCA1细胞活力和吉西他滨化疗敏感性的影响,并阐述其作用机制。方法：选取32例NSCLC患者的癌组织石蜡标本,采用免疫组织化学染色检测NSCLC癌组织中GRP78阳性表达率。选取GRP78高表达的SPCA1细胞作为研究对象。采用RNA干扰技术在SPCA1细胞中下调GRP78的表达水平（干扰组）,并设对照组（给予shNC）;MTT法检测各组SPCA1细胞活力。实验分为阴性对照组、干扰组、对照＋吉西他滨组和干扰＋吉西他滨组,克隆形成实验检测各组SPCA1细胞克隆形成率,Western blotting法检测各组SPCA1细胞中Akt、p-Akt、PI3K和p-PI3K的表达量。结果：免疫组织化学染色法检测,与经吉西他滨治疗缓解的NSCLC患者癌组织比较,经吉西他滨治疗未缓解NSCLC患者癌组织中GRP78阳性表达率明显升高（P<0.05）。MTT法检测,与对照组比较,干扰组细胞活力明显降低（P<0.05）。克隆形成实验,与阴性对照组比较,干扰组SPCA1细胞克隆形成率明显降低（P<0.05）,干扰＋吉西他滨组SPCA1细胞克隆形成率降低更加明显（P<0.05）。Western blotting法检测,与阴性对照组比较,干扰组细胞中p-Akt、p-PI3K表达量明显降低,干扰＋吉西他滨组细胞中p-Akt和p-PI3K表达量降低更加明显。结论：干扰GRP78可以增加吉西他滨化疗的敏感性,GRP78可能通过PI3K/Akt途径降低NSCLC患者对吉西他滨的敏感性。     

胃癌中葡萄糖调节蛋白78和葡萄糖调节蛋白94表达的临床意义及与预后的相关性

目的确定葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）和葡萄糖调节蛋白94（glucose-regulated protein 94,GRP94）与胃癌（gastric cancer,GC）临床病理特征及预后的相关性。方法应用Western blotting和免疫组织化学方法检测GC和切缘组织中GRP78和GRP94的表达;Kaplan-Meier或卡方检验GRP78、GRP94和临床病理资料与GC术后整体生存期相关性。结果 GRP78和GRP94蛋白主要表达于胃癌细胞的胞质及胞膜,其阳性表达与淋巴结转移、TNM分期呈负相关,与分化程度正相关（P〈0.05）;GRP78、GRP94高表达及低表达GC患者术后平均生存时间分别为（23.51±2.32）个月和（37.54±3.24）个月、（21.31±1.46）个月和（40.02±2.19）个月,5年整体生存率分别为21.23%和41.42%、20.73%和43.86%（log-rank test,P〈0.01）,TNM分期、GRP78和GRP94是影响GC预后的独立因素。结论 GRP78和GRP94高表达可能是GC预后不良的分子标志物之一。     

三种肿瘤耐药基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨肺耐药蛋白（Lung resistance protein，LRP），多药耐药蛋白（Multldrug resistance—associated protein，MRP）和多药耐药基因（Multidrug resistance，MDR1）的mRNA在非小细胞肺癌（Non-small cell cancer，NSCLC）中共表达及临床意义。方法RT—PCR检测NSCLc冰冻组织中上述耐药基因的mRNA水平。结果LRP、MRP、MDR1mRNA阳性率分别为71．2％、81．8％和37．9％；MRP与、MDR1、MRP与LRP、LRPYUMDR1及MRP、LRPYUMDR1共表达者分别为16．7％（11／66）、53．0％（35／66）、19．7％（13／66）及12．1％（8／66）。LRP与MRP阳性相关（t=0．47，P=0．001），LRP、MRP与MDR1无相关性（r=0．98，P=0．0r77；r=0．25，P=0．053）．3种耐药基因表达在NSCLC各期、各分化组中差异无显著性（P≥0．05）。肺腺癌换了有效组LRP、MBPmRNA（0．53±0．08；0．41±0．01）及鳞癌化疗有效组LRPmRNA表达（0．42±0．03）明显低于换了无效组（1．14±0．3，0．82±0．04，0．97±0．01，P〈0．05）；LRP与MRP、LRP、MRP与MDR1共表达者，中位生存期明显缩短（P〈0．05）。多变量Cox回归分析，仅LRP＋MRP、LRP＋MRP＋MDR1共表达有预后意义。结论非小细胞肺癌原发耐药与LRP、MRP、MDR1共同作用有关。     

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1d（HIF-1α）、多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP1）在脊索瘤细胞系CM－319中的表达及临床意义。[方法]用RT—PCR检测HIF－1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF－1α、MRPl蛋白在CM－319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF～1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达（P〈0．01）,间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF－1α和MRP1相关。     

Gefitinib获得性耐药产生时非小细胞肺癌上皮性标志EGFR及E-cadherin表达的变化

[目的]了解gefitinib获得性耐药产生时非小细胞肺癌上皮性标志EGFR及E-cadherin表达的变化。[方法]采用逐步递增药物浓度、间歇作用体外诱导法诱导人肺腺癌NCI-H1975细胞株gefitinib获得性耐药;倒置显微镜下观察亲本细胞株和耐药细胞株在gefitinib作用前后的细胞形态学变化差异;细胞计数法描绘耐药细胞株和亲本细胞株的生长曲线并计算群体倍增时间;免疫细胞化学法检测耐药细胞株及亲本细胞株的EGFR及E-cadherin蛋白表达状态,并比较二株细胞间两种蛋白表达的差异。[结果]历时6个月诱导建成人肺腺癌gefitinib耐药细胞株NCI-H1975/GR。Gefitinib作用后耐药细胞株NCI-H1975/GR的细胞形态变化与亲本株NCI-H1975有所不同;在gefitinib的作用下,NCI-H1975/GR细胞体积变小,部分细胞变为纺锤形;NCI-H1975/GR细胞株群体倍增时间延长7.14 h(P<0.05);免疫细胞化学结果显示:与亲本株比较,虽然耐药细胞株NCI-H1975/GR细胞细胞膜EGFR蛋白的表达无明显变化,但在细胞浆的表达明显增高;E-cadherin在细胞膜的表达明显降低。[结论]非小细胞肺癌产生gefitinib获得性耐药后EGFR蛋白在细胞浆积聚;而以E-cadherin为代表的上皮分化标记表达减弱。     

Expression of endoplasmic reticulum molecular chaperon GRP94 in human lung cancer tissues and its clinical significance

Objective To investigate the relationship between the expression of glucose regulated protein 94 (GRP94) at the level of mRNA and protein in vivo and in human lung cancer. Methods RT-PCR, immunohistochemistry and/or Western blot were used in 54 cases of lung cancer tissues and corresponding normal lung tissues.Results There was a significant overexpression of GRP94 mRNA and protein in lung cancer tissues as compared with lung normal tissues.In lung cancer tissue, the relative level of GRP94 mRNA as evaluated by RT-PCR was 3.48±2.06, the level of GRP94 protein as evaluated by immunohistochemistry was ++ to +++, and by Western blot was 256.7±80.6.In lung normal tissue, the relative level of GRP94 mRNA was 2.01±1.83, the level of GRP94 protein was + to ++ and 108.1±42.3.The differences in expression of GRP94 between the two tissues were significant ( P &lt;0.05).Furthermore, the over-expression of GRP94 in the lung cancer tissues was correlated to grade of differentiation and stage of tumors.There was stronger expression in poor-differentiated tumors than in mild-to-high differentiated tumors ( P &lt;0.05).There was also a stronger expression in stage Ⅲ than in stage Ⅰ and Ⅱ tumors ( P &lt;0.05).No statistically significant difference was found among various pathological types of tumors. Conclusion GRP94 was related with the occurrence, differentiation and progress of human lung cancer.Ascertaining the levels of GRP94 mRNA and protein may be valuable in evaluating the grade of differentiation and clinical stage of human lung cancer.     

CEAmRNA、CK19mRNA、LUNXmRNA在非小细胞肺癌患者外周血微转移中的表达和意义

【目的】研究非小细胞肺癌外周血CEAmRNA、CK19mRNA和LUNXmRNA的表达及联合检测的临床意义。【方法】采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测59例NSCLC患者、31例肺良性疾病患者及20例健康志愿者外周血CK19mRNA、LUNXmRNA及巢式RT-PCR检测CEAmRNA的表达。【结果】59例NSCLC患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA、LUNXmRNA阳性率分别为23.7%（14/59）、33.8%（20/59）、57.6%（34/59）。31例肺良性疾病及20例健康志愿者外周血上述三者的阳性率分别为3.2%（1/31）、12.9%（4/31）、0%（0/31）;0%（0/20）。统计结果显示：LUNXmRNA与临床分期、细胞分化程度有关,CEAmRNA与病理类型有关。【结论】CEAmRNA、CK19mRNA和LUNXmRNA均可作为检测NSCLC患者外周血微转移的标志物。CEAmRNA对判断病理类型有一定临床意义。LUNXmRNA表达阳性率与肺癌TNM分期、细胞分化程度有关。     

ERCC1基因蛋白表达与非小细胞肺癌顺铂辅助化疗的关系

目的探讨核苷酸切除修复交叉互补组（ERCC1）基因蛋白表达与非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂辅助化疗之间的关系及铂类药物在NSCLC辅助化疗中发生耐药的机制。方法应用免疫组化方法对112例NSCLC患者手术切除标本石蜡包埋组织切片ERCC1基因蛋白表达进行了测定，并结合患者年龄、组织病理学类型、TNM分期、化疗及生存情况尤其是ERCC1基因蛋白表达与NSCLC患者铂类药物辅助化疗之间的生存情况进行分析。结果ERCC1基因蛋白表达阳性NSCLC患者，应用顺铂辅助化疗，其生存时间明显低于未用顺铂辅助化疗者，差异有统计学意义（P＜0.01）；ERCC1基因蛋白表达阴性NSCLC患者，应用顺铂辅助化疗其生存时间与未用顺铂辅助化疗者的生存时间无统计学意义（P＞0.05），但前者有优于后者的趋势。在排除了ERCC1基因蛋白表达的影响后，NSCLC患者不同年龄、TNM分期、组织病理学类型与生存时间关系的分析显示，NSCLC患者年龄与生存时间之间无明显相关性（χ²=1.008, P=0.297）；TNM分期与生存时间之间呈明显相关性（χ²=51.326, P=0.000）；组织病理学类型与生存时间之间有相关性（χ²=6.339, P=0.012），腺癌的生存时间要高于鳞癌。分析结果显示，ERCC1基因蛋白表达阳性患者无论在年龄、TNM分期、病理类型等方面，其生存时间均都明显长于阴性者。结论① ERCC1基因蛋白表达阴性患者应用顺铂辅助化疗可能获得生存受益；② ERCC1基因蛋白表达阳性提示对于铂类药物耐药而言，ERCC1基因蛋白表达可能成为NSCLC患者是否应用顺铂辅助化疗的指标之一；③ ERCC1基因蛋白表达可能成为NSCLC患者的一个重要的预后指标。