五味子乙素对染矽尘大鼠肺组织一氧化氮水平和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达动态变化的影响

目的观察五味子乙素(Sch-B)对染矽尘大鼠肺组织一氧化氮(NO)水平和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA动态变化的影响。方法将96只大鼠随机分为对照组、染矽尘组、Sch-B组,每组32只,气管暴露法建立大鼠矽肺模型,造模后d 1开始灌胃给予Sch-B治疗,药物治疗3 d、7 d、14 d和28 d后,HE染色检测肺组织病理改变;硝酸还原酶法测肺组织NO含量;RT-PCR检测肺组织iNOS mRNA的表达。结果 HE染色显示Sch-B组大鼠肺损伤较染矽尘组明显减轻。NO含量和iNOS mRNA表达在染尘后各个时间点均较相应的对照组明显升高(P<0.01),其中NO含量在d 7时达到高峰后开始下降,iNOS mRNA的峰值出现在d 14。五味子组与染矽尘组相比,各时间点NO含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),而iNOS mRNA表达仅在d 3和d 7时降低明显(P<0.05)。结论染矽尘大鼠肺组织存在着NO含量和iNOS mRNA的动态变化。Sch-B能减轻染矽尘大鼠肺组织的纤维化程度,其机制可能与染尘初期Sch-B降低iNOS mRNA转录水平,抑制NO炎症介质的合成与释放有关。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用三七总皂甙对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法采用Allen’s法将64,只成年SD大鼠造成脊髓中度损伤模型,再随机分为损伤组和三七总皂甙组,分别给予生理盐水及三七总皂甙注射液治疗,损伤后不同时间点(1、3、7、14d)处死大鼠,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组;两组均发现iNOS表达及凋亡细胞,且损伤组iNOS表达及神经细胞凋亡指数均高于三七总皂甙组(P<0．05)。结论三七总皂甙注射液能抑制脊髓损伤后iNOS表达及神经细胞凋亡。     

大剂量甲强龙冲击治疗大鼠脊髓挫伤的形态学研究

目的评价大鼠脊髓挫伤模型的稳定性及大剂量甲强龙冲击治疗的效果。方法采用BenchmarkTM颅脑撞击器建立大鼠脊髓挫伤模型。甲强龙组在伤后30 min尾静脉注射甲强龙(30 mg.kg-1BW)。运用Image J软件测量撞击区域的损伤体积。斜板试验评价动物后肢运动功能。采用Harris氏HE染色法结合尼氏染色、Luxol固蓝染色观察损伤组织的形态学改变。结果脊髓的平均损伤体积为(4.12±0.17)mm3,范围在3.95～4.29 mm3之间。甲强龙组随着训练天数的增加,大鼠在斜板上维持的角度逐渐增大,与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。伤后28 d,脊髓损伤中心及邻近部位囊腔区域面积明显减小。伤后1、3 d,损伤中心灰质部神经元存活数量较多,与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。伤后各个时间点,距损伤中心前后3、5 mm处灰质部前角神经元存活数量较多,与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。伤后14、28 d,脊髓损伤中心及前后3 mm、5mm处髓鞘面积均高于模型组(P<0.05)。结论建立的控制性脊髓挫伤大鼠模型稳定性高。大剂量甲强龙冲击治疗可能通过保护神经元和髓鞘免受继发性损害而改善后肢运动功能。     

罗格列酮和甲基泼尼松龙联合治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的通过建立脊髓损伤动物模型,探讨甲基泼尼松龙(MP)、罗格列酮联合用药与单独用药对脊髓损伤的疗效差别。方法参照动脉瘤夹压迫法制作大鼠的脊髓损伤模型,并随机分为6组,分别为假手术组、单纯损伤组、脊髓损伤后生理盐水注射组、MP注射组、罗格列酮注射组、MP和罗格列酮联合应用治疗组。于伤后3、7、14、21、28d行神经功能评分,RT-PCR检测脊髓损伤12、24h、3、7、14、21、28d后炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA的表达,Western-bloting法检测伤后24h凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果伤后各个时间点的神经功能评分上,两药联合应用组较其他各组显著增高(P<0.01),伤后炎性因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达方面,两药联合应用治疗后炎性因子mRNA表达均显著降低(P<0.05),脊髓损伤24h后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降,两药联合应用组表现Bax蛋白表达下降Bcl-2蛋白表达升高更明显(P<0.05)。结论脊髓损伤后应用MP及罗格列酮治疗均有效,二者合用显示出明显的协同作用。     

热休克预处理在大鼠脊髓损伤后细胞凋亡中的作用

目的探讨大鼠脊髓损伤后热休克蛋白70(HSP70)和氧化氮合酶(iNOS)在细胞凋亡中的作用。方法将96只大鼠分为对照组、损伤组和热休克预处理组。采用静压型脊髓损伤模型,分别在伤后6h,12h,1天,2天,3天,1周,2周和3周处死动物。用原位杂交技术检测HSP70mRNA在以上各时点的表达。同时用免疫组化法检测HSP70、iNOS在各时点的表达。运用TUNEL法检测凋亡细胞。另外,用CBS评分来评估神经功能。结果CBS评分显示,热休克预处理组的神经功能明显好于损伤组(P<0.05)。凋亡细胞数在损伤组显著高于热休克预处理组(P<0.05)。通过原位杂交和免疫组化发现,HSP70mRNA和蛋白水平在热休克预处理组明显高于损伤组(P<0.05)。免疫组化的结果还显示,iNOS的量在热休克预处理组明显低于损伤组(P<0.05)。结论热休克预处理能减轻脊髓损伤后的细胞凋亡,其机理可能同HSP70合成增加,并进一步抑制iNOS的表达有关。     

大鼠创伤性脊髓损伤模型的建立

目的:建立一种控制性脊髓挫伤大鼠模型。方法:采用BenchmarkTM立体定位颅脑撞击器制备大鼠创伤性脊髓损伤,并在伤后1、2、3、5、7、142、8 d借助斜板试验及BBB评分评价其运动功能,然后观察损伤部位及其邻近区域的形态学改变。结果:脊髓损伤后大鼠在斜板上维持的角度以及BBB评分显著低于假手术组(P<0.01)。损伤部位可见神经纤维肿胀。灰质部运动神经元肿胀、坏死,尼氏体淡染,甚至溶解。小胶质细胞明显增生。通过铜银染色和Luxol固蓝染色,可见运动神经元溃变以及髓鞘脱失。结论:建立的控制性脊髓挫伤大鼠模型重复性好,适合神经保护药物的药效学筛选。     

FK506对肾脏缺血再灌注损伤预防与治疗作用的实验研究

目的探讨FK506对Wistar大鼠肾脏缺血再灌注损伤的预防与治疗作用。方法建立30只Wistar大鼠肾脏缺血再灌注模型,随机分为预防组、治疗组和对照组,前两组经肠系膜上静脉给予FK506,剂量为0.1mg/kg,对照组给予等量生理盐水,分别检测各组大鼠血液中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度,检测肾脏组织中MDA、SOD含量,观察肾脏组织学变化并进行改良Miller's评分。结果预防组与治疗组血BUN、Cr值和Miller's评分之间的差异无显著性意义(P>0.05),但均明显低于对照组(P<0.01);组织学观察显示前两组大鼠肾小管上皮细胞坏死程度明显减轻;预防组与治疗组MDA含量明显低于对照组(P<0.01),SOD含量明显高于对照组(P<0.01),但两组间差别无显著性意义(P>0.05)。结论FK506能够有效地保护缺血再灌注肾脏的结构和功能,为临床应用提供了可靠的理论基础。     

黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质表达的影响

目的探讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白质表达水平的影响。方法♂Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质的表达。结果①RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的COX-2 mRNA表达明显增加(P<0.01);而Clau(50、25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2mRNA表达明显降低(P<0.01);②免疫组化结果显示,糖尿病大鼠海马COX-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),Clau(50、25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2的蛋白质表达明显降低(P<0.01)。结论黄皮酰胺可能通过抑制海马的COX-2mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠海马的保护作用。     

条件培养基对大鼠慢性脊髓损伤后胶质GFAP表达的影响实验研究

目的研究总结骨髓间充质干细胞条件培养基对大鼠慢性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白表达的影响。方法随机选取脊髓神经损伤研究实验室84只雄性Wistar大鼠,两组大鼠均为慢性脊髓损伤,依据大鼠的受伤情况并运用随机数字表法将其分为对照组(n=42)与观察组(n=42),对照组予以等渗盐水治疗,观察组予以BMSC-CM治疗。观察两组大鼠受伤后1、4、11、21、35、60、90d后的免疫组织化学检测结果,同时观察大鼠生物行为学变化与组织病理学变化。结果观察组大鼠的伤后恢复时间为(21.01±0.28)d,明显短于对照组(30.05±1.25)d,并且在11、21d的BBB评分与对照组相比差异较大;同时观察组大鼠在受伤第4,11,21天时的GFAP灰度值与对照组相比差异较大,具有统计学意义(P<0.05),在第21天至痊愈期间观察组大鼠的GFAP平均灰度值下降水平快于对照组。结论 BMSC-CM能够有效的修复大鼠慢性脊髓损伤,并且能够降低胶质纤维酸性蛋白表达,对于损伤大鼠脊髓功能的恢复具有重要意义。     

他克莫司对大鼠心肌肥厚及TOLL受体4的影响

目的探讨他克莫司(FK506)对压力负荷性心肌肥厚的影响及机制。方法♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、FK506给药组(F组),每组10只。制造腹主动脉缩窄大鼠模型,F组术前3天到术后4周给予FK506(0.5 mg.kg-1.d-1)肌肉注射,其他组给予等剂量溶剂。行心脏超声学检查,并采用Real-time PCR、Westernblot、免疫荧光、ELISA等方法检测ANP、钙调神经素(calci-neurin,CaN)及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)系统相关信号蛋白的表达。结果 M组与S组相比,心脏体积及心肌细胞变大(P<0.01),伴有ANP、CaN mRNA水平明显升高和TLR4系统相关信号蛋白表达升高(均有P<0.05)。FK506抑制心脏体积及心肌细胞变大(P<0.05),下调ANP、CaN及TLR4系统相关信号蛋白表达水平(均有P<0.05)。结论 CaN信号系统在心肌肥厚中发挥重要作用;FK506可能通过CaN及TLR4信号系统抑制心肌肥厚。     

米诺环素对脊髓损伤大鼠凋亡机制探索和神经红蛋白表达的影响

目的 探讨米诺环素对脊髓横断损伤大鼠凋亡蛋白 Bcl-2、Bax和 Caspase-3的表达及神经红蛋白 Ngb表 达的影响。方法 36只健康成年雄性 Wistar大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、米诺环素干预组,每组 12只。假 手术组只暴露脊髓,脊髓损伤组和米诺环素干预组制备胸3~4脊髓节段全横断损伤模型。米诺环素干预组于术前腹 腔注射米诺环素（90 mg/kg）,1次/d,连续5 d,脊髓损伤组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水。术后22 d处死所有 大鼠,采用免疫组化染色和 Western blot法检测脊髓组织 Bcl-2、Bax和 Caspase-3蛋白的表达;Hoechst 染色检测凋亡 细胞;免疫荧光染色检测神经红蛋白（Ngb）的表达。结果 与假手术组相比,脊髓损伤组脊髓组织中 Bcl-2表达增 多,Bax和 Caspase-3蛋白的表达增多,凋亡细胞数明显增多,Ngb荧光强度明显增强（均P＜0.05）。与脊髓损伤组相 比,米诺环素干预组Bcl-2表达进一步增高（P＜0.05）,Bax和Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而凋亡细胞数有所 减少,Ngb的平均荧光强度较其明显增强。结论 米诺环素干预可通过降低 Bax和 Caspase-3的表达,升高 Bcl-2的 表达来抑制细胞凋亡,提高神经红蛋白表达。     

Neuroprotective Effect of Ginsenoside Rd in Spinal Cord Injury Rats

In this study, the neuroprotective effects of ginsenoside Rd (GS Rd) were evaluated in a rat model of spinal cord injury (SCI). Rats in SCI groups received a T8 laminectomy and a spinal contusion injury. GS Rd 12.5, 25 and 50 mg/kg were administered intraperitoneally 1 hr before the surgery and once daily for 14 days. Dexamethasone 1 mg/kg was administered as a positive control. Locomotor function was evaluated using the BBB score system. H&E staining and Nissl staining were performed to observe the histological changes in the spinal cord. The levels of MDA and GSH and the activity of SOD were assessed to reflect the oxidative stress state. The production of TNF‐α, IL‐1β and IL‐1 was assessed using ELISA kits to examine the inflammatory responses in the spinal cord. TUNEL staining was used to detect the cell apoptosis in the spinal cord. Western blot analysis was used to examine the expression of apoptosis‐associated proteins and MAPK proteins. The results demonstrated that GS Rd 25 and 50 mg/kg significantly improved the locomotor function of rats after SCI, reduced tissue injury and increased neuron survival in the spinal cord. Mechanically, GS Rd decreased MDA level, increased GSH level and SOD activity, reduced the production of pro‐inflammatory cytokines and prevented cell apoptosis. The effects were equivalent to those of dexamethasone. In addition, GS Rd effectively inhibited the activation of MAPK signalling pathway induced by SCI, which might be involved in the protective effects of GS Rd against SCI. In conclusion, GS Rd attenuates SCI‐induced secondary injury through reversing the redox‐state imbalance, inhibiting the inflammatory response and apoptosis in the spinal cord tissue.     

川芎嗪对大鼠脊髓损伤后行为学改变的影响

目的：探讨川芎嗪对大鼠脊髓损伤后行为学改变的影响。方法70只健康成年 SD 大鼠随机分为对照组（ n ＝10）、损伤组（ n ＝30）和药物治疗组（ n ＝30），其中损伤组和药物治疗组接受不同处理措施后，分别于术后1、3、14 d 采用 HE 染色和电镜观察不同组大鼠脊髓形态学变化，同时采用 Jacobs 分级标准和 BBB 评分方法评价不同组大鼠后肢运动功能。结果HE 染色结果显示应用川芎嗪治疗后正常神经元数目相比较于损伤组多。电镜下可见川芎嗪治疗组神经细胞核固缩程度和染色质浓染程度较损伤组减轻，胞浆空泡化也较损伤组减轻。药物治疗14 d 组截瘫率显著低于损伤，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。药物治疗14 d 组 BBB 评分高于相应损伤组，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论川芎嗪治疗可改善大鼠脊髓损伤后行为学变化，对脊髓损伤有一定治疗作用。     

Fasudil促进大鼠损伤脊髓神经功能恢复的研究

目的研究Rho激酶抑制剂Fasudil对大鼠脊髓损伤的促修复作用。方法用健康成年SD大鼠建立脊髓损伤模型,通过腹腔注射盐酸法舒地尔,并设立对照。术后1、2、4周,运用BBB功能评分进行后肢运动功能评价;损伤后4周,脊髓损伤局部行SABC法ROCK2免疫组织化学染色。结果术后1、2、4周,Fasudil治疗组与对照组比较,评分明显增高(P<0.05);术后4周Fasudil治疗组损伤局部组织内ROCK2的表达较对照组明显减少(P<0.05)。结论腹腔注射Fasudil能够减少脊髓损伤局部ROCK2表达,改善大鼠的运动功能。     

miR-196b-5p减轻大鼠脊髓损伤后组织水肿和星形胶质细胞活化机制探讨

目的 探讨miR-196b-5p靶向水通道蛋白4(AQP4)促进大鼠脊髓损伤（SCI）后组织修复和神经元轴突再生的机制。方法 双荧光素酶报告检测miR-196b-5p与AQP4靶向关系;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测SCI后1 d、2 d、3 d、5 d和7 d miR-196b-5p与AQP4变化;RT-qPCR检测假手术（Sham）组、单纯脊髓损伤（SCI）组、agomiR-196b-5p干预（miRNA）组和miR-196b-5p阴性对照（NC）组脊髓miR-196b-5p与AQP4 m RNA相对表达水平,Western blot检测各组脊髓AQP4、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、增殖细胞核抗原（PCNA）和生长相关蛋白43(GAP-43)蛋白相对表达水平,干湿质量法和苏木精-伊红（HE）染色检测脊髓含水量及脊髓空洞大小。结果 双荧光素酶报告显示AQP4是miR-196b-5p的靶基因。与Sham组比较,SCI后各时间点miR-196b-5p表达水平降低（P<0.05）,而AQP4 mRNA表达升高并在2 d时达到高峰,随后逐渐降低。与Sham组比较,SCI组...     

大鼠T7脊髓半横切损伤模型的建立及饲养护理

目的制备SD大鼠T7脊髓半横切动物模型,模拟脊髓损伤,为后期治疗脊髓损伤研究提供实验数据。方法24只健康SD大鼠随机分为对照组及脊髓损伤组,每组12只。SCI组咬除T6～8棘突及相应椎板,暴露相应脊髓,定量切除T7右半侧脊髓组织;对照组仅切除相应椎板。术后行人工排尿、排便等护理,于3d、7d分别进行BBB运动功能评分及感觉诱发电位（sensory evoked potentials,SEP）检测,并取T7脊髓行组织学观察。结果SCI组所有动物在术后均表现出典型的脊髓半切症状;BBB运动功能评分低于8分;术后3d及7d损伤组检测不到SEP,而对照组潜伏期轻度延长及波幅轻度下降;脊髓形态学观察显示该方法达到脊髓半横切要求;术后SCI组大鼠无死亡。结论大鼠T7脊髓半横切损伤模型建立成功,有效的术后护理可提高模型大鼠的生存率。     

马钱子抑制兔脊髓损伤的细胞凋亡作用

目的：探讨马钱子是否通过抑制细胞凋亡来治疗脊髓损伤。方法：采用改良的Allen＇s法建立兔脊髓损伤模型。设立假脊髓损伤组、对照组、炙马钱子40mg组（M40组）及炙马钱子80mg组（M80组）,分别在给药后1d、7d及用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测c-fos蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达。结果：与对照组相比,M40组及M80组治疗第7天及14天,可不同程度地抑制损伤脊髓中NO、c-fos蛋白、Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达。其中,M40组和M80组分别治疗第7天的NO含量与对照组有统计学差异（P〈0.05）;M80组治疗第7天时c-fos蛋白与对照组有统计学差异（P〈0.05）,治疗14d时有重要统计学差异（P〈0.01）;M80组治疗第7天时Bax蛋白、Bcl-2蛋白及两者的比值与对照组间有统计学差异（P〈0.05）,M80组治疗14d后Bax蛋白与对照组有统计学差异（P〈0.05）。结论：马钱子通过减少损伤脊髓局部NO、c-fos蛋白的表达、下调Bax/Bcl-2比值从而抑制细胞凋亡,阻止脊髓继发性损伤,促进脊髓损伤后神经功能的恢复。     

黄芩素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的 影响及机制研究

目的 探讨黄芩素（BAI）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠的防治作用及其对中枢神经系统小胶 质细胞（MG）极化和炎性因子的影响。方法 将50只雌性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白对照组,EAE模 型组及BAI低、中、高剂量组,每组10只。空白对照组不做处理,其余各组建立EAE模型。BAI低、中、高剂量组每日 分别给予BAI 75、150、300 mg/kg灌胃,空白对照组及EAE模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d。观察小鼠的 神经功能缺损和脊髓组织炎性脱髓鞘情况。采用免疫荧光双重染色法检测小鼠脊髓组织离子钙接头蛋白1（Iba-1） 阳性MG中M1型MG标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、M2型MG标志物精氨酸酶1（Arg1）的表达情况及分歧指数 （RI）变化,实时荧光定量PCR法检测小鼠脊髓组织中iNOS、Arg1及炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介 素-10（IL-10）mRNA的表达情况。结果 空白对照组小鼠未见发病,其余各组均不同程度发病。与EAE模型组比 较,BAI各剂量组小鼠发病潜伏期及达高峰期时间延长,神经功能障碍评分降低（均P＜0.05）,脊髓组织脱髓鞘程度 减轻（均P＜0.05）,Iba-1阳性MG中iNOS表达降低,Arg1表达升高,RI值减小（均P＜0.05）,MG的形态倾向于M2型 极化,脊髓组织中iNOS、TNF-α mRNA表达降低,Arg1、IL-10 mRNA表达升高（均P＜0.05）,且BAI剂量越大,变化越 明显。结论 BAI对EAE小鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与纠正M1/M2型MG失衡及调节炎 性因子TNF-α、IL-10表达有关。     

苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CCL5、CCR5及CCR5mRNA表达的影响

目的:观察苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血清中趋化因子CCL5和脊髓中趋化因子CCL5相应的受体(CCR5)及CCR5mRNA表达的影响,探讨苦参素对EAE大鼠的防治机制。方法:用豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂混合制成抗原乳剂,诱导EAE模型,将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、苦参素低剂量组(150mg·kg^-1)、苦参素高剂量组(250mg·kg^-1),苦参素高、低剂量组均连续腹腔给药16d,同期正常组和模型组腹腔注射等量生理盐水,观察大鼠体质量变化,神经功能学评分,进行HE及C-2R-BG病理染色,用ELISA法测定大鼠血清中CCL5的含量、免疫组化法检测大鼠脊髓组织中CCR5的阳性表达、RT-PCR法检测脊髓中CCR5mRNA的表达。结果:苦参素高、低剂量组大鼠的体质量均高于模型组(P<0.05),神经功能学评分,炎症浸润和髓鞘脱失评分,血清中CCL5的水平,脊髓中CCR5、CCR5mRNA的表达均低于模型组(P<0.05),且高低剂量组有组间差异(P<0.05)。结论:苦参素对EAE大鼠具有一定的防治作用,其作用机制可能与下调大鼠CCL5、CCR5及CCR5mRNA的表达有关。