表皮生长因子对子宫内膜细胞体外增殖的影响

本研究观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）在体外对子宫内膜上皮细胞及基质细胞增殖的影响。采用酶消化加物理方法分离人子宫内膜上皮细胞及基质细胞,分别在体外培养,细胞汇合后消化,一部分用盖片法培养,用特异性抗体鉴定细胞纯度,另一部分做细胞增殖实验。在细胞中加入不同浓度的ＥＧＦ,培养２４、４８、７２小时,用ＭＴＴ法及流式细胞仪测定ＥＧＦ对子宫内膜上皮细胞及基质细胞增殖的作用。结果：ＥＧＦ浓度为５．０及１０．０ｎｇ／ｍｌ时,明显刺激子宫内膜上皮细胞及基质细胞的增殖,ＭＴＴ与流式细胞仪两法一致。ＥＧＦ不刺激细胞凋亡。结论：采用酶消化结合物理方法分离的人子宫内膜基质细胞及上皮细胞,方法简便、快速,细胞纯度高,在体外生长良好,可用于体外研究着床及异位子宫内膜生长的机制。当ＥＧＦ浓度为５．０及１０．０ｎｇ／ｍｌ时,确实刺激子宫内膜细胞的增殖。     

中药三棱对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖及上皮生长因于受体磷酸化的影响

目的 探讨中药三棱对体外培养的常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）囊肿衬里上皮细胞增殖及上皮生长因子受体（ＥＧＦ－Ｒ）磷酸化的影响。方法 体外培养的囊肿衬里上皮细胞经ＥＧＦ、三棱作用后，采用 Ｂｒｄｕ掺入法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＥＧＦ－Ｒ磷酸化。结果 与对照组比较，ＥＧＦ（２．５～２０ ｎｇ／ｍｌ）可刺激衬里上皮细胞增殖（Ｐ＜０．０１）；与对照血清比较，三棱含药血清（１％～５％）能明显抑制经ＥＧＦ刺激后的衬里上皮细胞增殖（Ｐ＜００１），阻止细胞从Ｇ_０－Ｇ_１期进入Ｇ_２－Ｍ期，其作用效果呈浓度依赖性；三棱含药血清能抑制囊肿衬里上皮细胞ＥＧＦ－Ｒ的磷酸化（Ｐ＜０．０５）。结论 ＥＧＦ在多囊肾病发病中起促进作用，三棱可能通过对ＥＧＦ－Ｒ磷酸化的干预而达到抑制细胞增殖的作用，从而为延缓多囊肾病的发生与发展提供理论根据。     

TGFβ1，bFGF对前列腺基质细胞增殖和分化的影响

目的　探讨前列腺基质增生的机制。　方法　系用ＭＴＴ和ＴＵＮＥＬ法检测体外原代无血清培养的前列腺基质细胞的增殖,用免疫组化、ＲＴＰＣＲ 方法检测平滑肌细胞特异性标记蛋白的表达。　结果　ＴＧＦβ有多重效应：浓度为０－０１ ～１０．００ｎｇ／ｍｌ 的ＴＧＦβ可抑制指数增生期前列腺基质细胞增殖;浓度低于０－１ｎｇ／ｍｌ 的ＴＧＦβ刺激平顶期前列腺基质细胞增殖;浓度高于１ｎｇ／ｍｌ 的ＴＧＦβ促增殖平顶期的成纤维细胞向平滑肌细胞分化。ｂＦＧＦ对于指数增生期和平顶期细胞均有刺激增殖的作用,并抑制增殖平顶期的成纤维细胞向平滑肌细胞分化。　结论　ＴＧＦβ１／ｂＦＧＦ比例的改变有调节前列腺基质细胞的稳态平衡的作用。     

米非司酮抑制人子宫内膜基质细胞增殖

目的在改良子宫内膜细胞原代分离培养方法的基础之上,探讨米非司酮对原代分离培养的人子宫内膜基质细胞增殖的抑制作用。方法利用改良后的"二次消化法"分离培养增殖期人子宫内膜基质和上皮细胞,进行细胞形态学观察,并通过流式细胞术检测人子宫内膜基质和上皮细胞的波形蛋白和角蛋白表达阳性的细胞比率,计算分离培养的基质和上皮细胞的纯度;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测米非司酮对原代分离培养人子宫内膜基质细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果原代分离培养的基质细胞较上皮细胞生长迅速。流式细胞检测结果显示,分离培养的基质细胞波形蛋白阳性率达97%,上皮细胞角蛋白阳性率达90%。米非司酮处理人子宫内膜基质细胞2d或3d后,结果均显示,随着米非司酮浓度增加,基质细胞的细胞抑制率(IR)逐渐升高。米非司酮作用基质细胞2d后,50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05);米非司酮作用3d后,25、50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。通过对IR值进行直线回归分析,结果表明:米非司酮处理2d和3d对原代人子宫内膜基质细胞的IC50分别为52.85μmol/L和86.46μmol/L。结论改良后的"二次消化法"可获得高纯度人子宫内膜基质细胞和上皮细胞。米非司酮对原代人子宫内膜基质细胞有抑制作用,并呈时间和剂量依赖效应。     

表皮生长因子和维生素A对高浓度葡萄糖抑制腹膜间皮细胞增殖？…

目的 研究表皮生长因子（ＥＧＦ）和维生素对高浓度葡萄糖抑制腹膜间皮细胞增殖和分化的影响，以探讨ＥＧＦ和ＶｉｔＡ在腹膜修复中的作用。方法 采用胰蛋白酶消化法，从人腹膜组织中分离间皮细胞，并建立体外人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）培养模型，以＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入法测定细胞内ＤＮＡ含量示细胞增殖程度；以免疫组织化学染色法，用图像分析仪测细胞表面角蛋白和波形蛋白表达量示细胞分化程度。结果 随着葡萄糖浓度增高     

表皮生长因子和维生素A对高浓度葡萄糖抑制腹膜间皮细胞增殖和分化的影响

目的　研究表皮生长因子（ Ｅ Ｇ Ｆ） 和维生素 Ａ（ Ｖｉｔ Ａ） 对高浓度葡萄糖抑制腹膜间皮细胞增殖和分化的影响，以探讨 Ｅ Ｇ Ｆ和 Ｖｉｔ Ａ 在腹膜修复中的作用。方法　采用胰蛋白酶消化法，从人腹膜组织中分离间皮细胞，并建立体外人腹膜间皮细胞（ Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ） 培养模型；以３ Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ Ｈ Ｔｄ Ｒ） 掺入法测定细胞内 Ｄ Ｎ Ａ 含量示细胞增殖程度；以免疫组织化学染色法，用图像分析仪测细胞表面角蛋白和波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ） 表达量示细胞分化程度。结果　随着葡萄糖浓度增高和培养时间的延长， Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入降低； Ｅ Ｇ Ｆ 和 Ｖｉｔ Ａ 可增加 Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ 对３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 的掺入，但两者ｃｐｍ 值比较无显著性差异（ Ｐ＞ ００５） ；在含高浓度葡萄糖的培养液中分别加入 Ｅ Ｇ Ｆ或 Ｖｉｔ Ａ 后， Ｅ Ｇ Ｆ 可明显促进 Ｈ Ｐ Ｍ Ｃ 的增殖，其３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量明显增加，与 Ｖｉｔ Ａ 组比较有显著性差异（ Ｐ＜ ００５） 。 Ｅ Ｇ Ｆ 和 Ｖｉｔ Ａ 不影响细胞表面角蛋白和波形蛋白的表达。结论　 Ｅ Ｇ Ｆ和 Ｖｉｔ Ａ 对腹膜间皮细胞的分化未显示出明显作用，但两者均可刺激细胞的增殖，特别是 Ｅ Ｇ Ｆ可改善     

雌二醇及孕酮对离体子宫内膜腺体和基质细胞合成前列腺素的影响

为了研究甾体激素对子宫内膜合成前列腺素（ＰＧＳ）的影响，采用雌二醇（Ｅ２）１０－８ｍｏｌ／Ｌ和孕酮（Ｐ４）１０－７ｍｏｌ／Ｌ培养增生晚期（ｎ＝７）和分泌晚期（ｎ＝５）子宫内膜的分离腺体和基质细胞。结果表明，Ｅ２１０－８／Ｌ和Ｅ２１０－８ｍｏｌ／Ｌ＋Ｐ４１Ｏ－７ｍｏｌ／Ｌ刺激增生晚期的子宫内膜腺体细胞产生ＰＧＦ２α明显增加，对分泌晚期子宫内膜腺体细胞以及增生晚期和分泌晚期子宫内膜基质细胞均无明显影响。ＰＧＥ２，水平不受甾体激素的影响。     

表皮生长因子与三苯氧胺对兔子宫内膜细胞生长的影响

本实验以兔子宫内膜细胞株为样品进行培养实验，观察雌二醇（Ｅ２）、表皮生长因子（ＥＧＦ）对兔子宫内膜细胞的生长及ＤＮＡ合成的影响。结果表明：单独给予Ｅ２或ＥＧＦ兔子宫内膜细胞的增殖及ＤＮＡ合成没有明显变化，如同时加入上述两种药物则有明显的加强作用，然而这种作用又能被三苯氧胺（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）所阻断。提示三苯氧胺能翻转Ｅ２、ＥＧＦ在刺激细胞的增殖过程中的协同作用。     

黄芪当归合剂对肾病综合征鼠肾转化生长因子β1的影响

目的探讨黄芪当归合剂降脂及减少肾小球细胞外基质沉积的作用是否与肾脏转化生长因子（ＴＧＦ）β１表达的改变有关。方法用嘌呤霉素致肾病综合征大鼠，随机分肾病对照、中药、西药治疗三组。用免疫组化及原位杂交观察肾脏ＴＧＦβ１表达及细胞外基质（ＥＣＭ）沉积。以计算机图象分析进行半定量比较。结果正常组，可见ＴＧＦβ１蛋白及ｍＲＮＡ于肾小管上皮细胞微弱表达，肾小球系膜区ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ弱表达。其余各组ＴＧＦβ１蛋白表达位于肾小管上皮细胞，ｍＲＮＡ表达位于肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞，而后者表达更明显。两治疗组ＴＧＦβ１表达较肾病组明显降低（Ｐ＜０．００１），两治疗组间比较，无显著性差异。两治疗组细胞外基质沉积均明显少于肾病对照组。结论黄芪当归合剂及ＨＭＧＣｏＡ还原酶抑制剂对肾病综合征鼠能明显减少肾小球细胞外基质沉积，同时使ＴＧＦβ１表达的下调。提示黄芪当归合剂可能通过这一下调作用减少肾小球细胞外基质的沉积     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞粘附特性影响的实验研究

目的 针对骨组织工程中成骨细胞与基质材料间促粘附问题,研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对成骨细胞粘附特性的影响。方法 取兔骨髓基质干细胞来源的成骨细胞体外培养,分别用５、１０、５０、１００及２００ｎｇ／ｍｌ浓度的ｂＦＧＦ诱导培养２４小时作为实验组;不含ｂＦＧＦ的培养基作为对照组。观察接种后０．５、１、２、４、及８小时各时间点成骨细胞粘附情况,体现学计量粘附细胞数量。结果 １０ｎｇ／ｍｌｂＦＧ     

生长因子对间皮细胞增殖及合成细胞外基质的影响

目的　探讨血小板源生长因子ｂｂ（ＰＤＧＦｂｂ） 、转化生长因子β（ＴＧＦβ） 对人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）增殖及合成细胞外基质（ＥＣＭ） 的影响。方法　建立ＨＰＭＣ体外培养体系。３ＨＴｄＲ 掺入法测定细胞增殖；放射免疫法检测细胞上清中Ⅲ型前胶原（ ⅢＰＣ） 。结果　ＰＤＧＦｂｂ 促进、但ＴＧＦβ抑制ＨＰＭＣ增殖，均呈剂量依赖性（ Ｐ＜ ０－０１） 。２ 者均能刺激ＨＰＭＣ 产生ⅢＰＣ（ Ｐ＜ ０－０１）。结论　ＣＡＰＤ相关性腹膜炎时腹腔中高浓度的ＰＤＧＦｂｂ 、ＴＧＦβ能调节间皮层的修复和重塑，刺激其合成分泌ＥＣＭ，后者可能是腹膜炎（ＰＩ）反复发生最终导致腹膜硬化的重要机制之一。     

人子宫内膜体外构建的实验研究

目的探讨体外构建人子宫内膜的新方法。方法将采用筛网分离法获得的原代人子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞依次接种到自制的液态胶原材料上共培养,形成子宫内膜组织,并与二维条件下正常培养的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞进行比较。采用组织学和免疫组织化学方法观察所构建的子宫内膜的组织学特征,以及两种细胞在不同培养条件下的生长和分布情况。结果分离获得的子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的纯度分别达到95%和90%。在Ⅰ型液态胶原形成的凝胶内,子宫内膜基质细胞排列紧密,腺上皮细胞呈腺体样结构。结论两种细胞与Ⅰ型液态胶原凝胶复合后构建的子宫内膜具有正常子宫内膜组织的结构。     

人正常尿路移行上皮细胞无血清培养

目的建立一种比较简便的人正常尿路上皮细胞无血清培养方法。方法标本组织块用冷消化法分离出尿路上皮细胞,培养于无血清生长培养基。观察传代细胞形态及生长情况,并用ＴＧＦβ１抑制细胞增殖试验检验细胞在有血清或无血清培养基中对ＴＧＦβ１的反应。结果培养的总成功率为７３％,细胞具有典型的移行上皮细胞形态学特征,细胞能在２４小时后增殖进入对数生长期,传代９～１１次后开始衰退。另外,无血清培养体系比含血清培养体系更能反映出ＴＧＦβ１对细胞抑制作用。结论此培养体系具有简单、短期内可扩增出大量纯净上皮细胞、应用范围广和培养成功率高的特点。     

转化生长因子－β对离体前列腺增生及前列腺癌细胞的作用

将前列腺癌及前列腺增生组织在体外进行消化，分离出上皮细胞及成纤维细胞并进行原代培养，原代培养的前列腺癌及前列腺增生上皮细胞及成纤维细胞均可被转化生长因子－β所抑制，且这种抑制作用可被转化生长因子β抗体所克服，提示ＴＧＦ－β参与前列腺上皮细胞及成纤维细胞增殖的调节。     

转化生长因子—β对离体前列腺增生及前列腺癌细胞的作用

将前列腺癌及前列腺增生组织在体外进行消化，分离出上皮细胞及成纤维细胞并进行原代培养，原代培养的前列腺癌及前列腺增生上皮细胞及成纤维细胞可被转化生长因子－β所抑制，且这种抑制作用可被转化生长因子β抗体所克服，提示ＴＧＦ－β参与前列腺上皮细胞及成纤维细胞增殖的调节。     

重组人生长激素促进烧伤病人创面愈合机制初探

目的观察严重烧伤病人接受重组人生长激素（ｒｈＧＨ）治疗后血清生长激素（ＧＨ）、胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）、创面ＤＮＡ合成。细胞增殖活性及表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达的变化，探讨生长激素促进烧伤创面愈合的机制。方法３３例严重烧伤病人随机分成ｒｈＧＨ组（１８例）和对照组（１５例）。ｒｈＧＨ组每晚１０点接受ｒｈＧＨ皮下注射（０．１ｍｇ· ｋｇ~(－１)），疗程 １４ｄ。ＥＬＩＳＡ检测血清 ＧＨ和 ＩＧＦ－１浓度；流式细胞计检测细胞 ＤＮＡ增殖指数（ＰＩ）和合成期细胞百分数（ＳＰＦ）；免疫组化学检测增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。ＥＧＦＲ、细胞角蛋白（ＣＫ）的表达。结果ｒｈＧＨ组血清ＧＨ、ＩＧＦ－１浓度较高，创面ＰＩ、ＳＰＦ明显高于用药前和对照组。免疫组化显示ＰＣＮＡ、ＥＧＦＲ、ＣＫ的表达明显增加。结论ｒｈＧＨ可以提高严重烧伤病人血清ＧＨ、ＩＧＦ－１水平，促进烧伤创面细胞ＤＮＡ合成和上皮细胞增殖，增加 ＥＧＦＲ表达，加速创面上皮化，促进烧伤创面愈合。     

转移生长因子—β,碱性成纤维细胞生长因子诱导人成骨细胞表达血小板衍生生

目的 探讨转移生长因子（ＴＧＦ）－β、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对人成骨细胞血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）－ＢｍＲＮＡ表达的影响及其意义。方法 体外分离培养人成骨细胞。在体外培养的成骨细胞中分别加入１０、２０、４０、８０、１６０ｕｇ／Ｌ梯度浓度的ＰＤＧＦ－ＢＢ培养细胞２４ｈ,以摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ为细胞增殖指标检测细胞增殖状况。以４ｕｇ／Ｌ的ＴＧＦ－β和１０ｕｇ／Ｌ的ｂＦＧＦ培养细胞２４ｈ,寡核苷酸探针检测细胞ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ的表达。结果 １０～１６０ｕｇ／Ｌ的ＰＤＧＦ－ＢＢ可促进成骨细胞增殖（Ｐ〈０．０５）。在普通培养条件下,细胞下表达ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ;当培养体系中加入ＴＧＦ－β和ｂＦＧＦ,可见ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ的表达。结论 ＰＤＧＦ－Ｂ基因的表达可能是骨组织生长的储备因素,ＴＧＦ－β和ｂＲＮ     

经肝动脉化疗栓塞后TGF—β1,TGF—α在肝癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨经肝动脉化疗栓塞后ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－α在肝癌细胞凋亡中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测１９例未经肝动脉化疗栓塞（ＴＡＣＥ）和３６例ＴＡＣＥ治疗的肝癌组织中ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－α的表达,采用ＩＳＥＬ法检测肝癌细胞凋亡。结果经ＴＡＣＥ治疗和未经ＴＡＣＥ治疗的肝癌组织中ＴＧＦ－β１表达率分别为８６．１１％和３６．８４％;ＴＧＦ－α表达率分别为３６．１１％和８４．２１％;肝癌细胞凋亡指数分别为０．００８８和０．１９０１。结论 经ＴＡＣＥ治疗后ＴＧＦ－β１表达增强,促进了肝癌细胞凋亡。ＴＧＦ－α主要与肝癌细胞增殖有关,其表达减弱亦可能促进了肝癌细胞凋亡。     

表皮生长因子受体和转化生长因子—α在前列腺癌表达中的临？…

目的：探讨表皮生长因子本（ＥＧＦＲ）和转化生长因子－α（ＴＧＦα）在前列腺癌（ＰＣａ）中表达的临床意义。方法；采用免疫组化法检测４３例ＰＣａ组织和５例正常前列组织中ＥＧＦＲ和ＴＧＦα的表达。结果：正常前列腺组织中ＥＧＦＲ和ＴＧＦα和ＴＧＦα分别表达在上皮细胞和基质中，ＥＧＦＲ和ＴＧＦα在ＰＣａ细胞上的共同表达率为５５．８％，二者密切相关，并与ＰＣａ分期有关；此类患者的生存时间明显短于ＥＧＦＲ和ＴＧ     

肽类生长因子及苏拉明对体外培养人脑膜瘤细胞生长的影响

目的　探讨上皮生长因子（ Ｅ Ｇ Ｆ） 、碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ） 和苏拉明（ Ｓｕｒａｍｉｎ） 对体外培养人脑膜瘤细胞生长的影响。方法　通过细胞计数、 Ｍ Ｔ Ｔ 法及流式细胞技术检测,对体外培养手术切除的１０ 例脑膜瘤组织进行 Ｅ Ｇ Ｆ、ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 及 Ｓｕｒａｍｉｎ 干预实验。结果　苏拉明对脑膜瘤细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞停滞于 Ｇ１／ Ｇ２ 及 Ｓ 期,并可阻止肽类生长因子对细胞的生长刺激作用。结论　苏拉明对体外培养脑膜瘤的生长抑制作用可能通过中和肽类生长因子及影响细胞周期分布实现。