慢性牙周炎通过PERK-CHOP信号通路介导睾周脂肪细胞凋亡的研究

目的 探讨慢性牙周炎通过蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)-C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)信号通路对大鼠睾周脂肪细胞凋亡的影响。方法 将20只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组构建大鼠慢性牙周炎模型,对双侧上颌第二磨牙行丝线结扎并龈沟内注射牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharid,P. gingivalis-LPS);对照组大鼠龈沟内注射等量PBS。建模3个月后处死大鼠,通过测量牙龈出血指数(gingival bleeding index,GBI)及牙周袋探诊深度(probing pocket depth,PPD)评价牙周组织炎症,采用Micro-CT分析大鼠第二磨牙牙槽骨吸收程度。原位细胞凋亡检测法(TUNEL)染色观察睾周脂肪细胞凋亡情况。蛋白质印迹法(Western blot)检测PERK、p-PERK、CHOP、Caspase-12、Cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平。结果 实验组大鼠GBI、PPD及釉牙骨质界至牙槽嵴顶距离显著高于对照组(P<0.05),出现明显牙龈软组织炎症和牙槽骨破坏吸收,大鼠慢性牙周炎模型建立成功。实验组大鼠睾周脂肪细胞凋亡率显著增加(P<0.05),p-PERK、CHOP、Caspase-12、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论 慢性牙周炎通过PERK-CHOP信号通路介导大鼠睾周脂肪细胞的凋亡。     

磨牙缺失对幼年大鼠空间学习记忆能力的影响

目的：探讨不同磨牙缺失数对幼年大鼠空间学习记忆能力的影响。方法：健康幼年大鼠60只随机分成3、6、9、12颗磨牙缺失组、麻醉对照、正常对照6组。在造模后1周,采用Morris水迷宫系统测试各组大鼠学习记忆能力,每周1次,连续6周。结果：9颗、12颗磨牙缺失组间大鼠游泳平均逃逸潜伏期（the swimming average escape latency,SAEL）无明显差异,但均显著高于其它4组（P〈0.001）;6颗磨牙缺失组大鼠与3颗磨牙缺失组、麻醉组及正常对照组间SAEL比较有差异（P〈0.05）;3颗磨牙缺失组、麻醉组及正常对照组组间SAEL比较均无显著性差异。各磨牙缺失组大鼠随着磨牙缺失数目的增多tP/tT值有逐渐下降趋势,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）,但3颗磨牙缺失组与正常组及麻醉组间tP/tT值无明显差异,其他各磨牙缺失组与正常组及麻醉组间tP/tT值均有差异（P〈0.05）。结论：较多数目磨牙缺失会对幼年大鼠空间学习记忆能力造成不同程度的损伤,而个别磨牙缺失对幼年大鼠空间学习记忆能力无显著性影响。     

流体剪切力对成骨细胞凋亡及bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨流体剪切力对成骨细胞凋亡及相关蛋白bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法:对培养的第3代新生大鼠成骨细胞分别加载0(对照组)、0.6、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 Pa流体剪切力1h后,静止培养24h.应用TUNEL法检测凋亡.采用免疫组化法检测bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白.采用SPSS11.5软件包对数据进行单因素方差分析.结果:在0、0.6、1.0、2.0 Pa组,细胞凋亡及bcl-2、Caspase-3表达量无显著差异,P＞0.05.3.0、4.0、5.0 Pa组间,随剪切力增大,细胞凋亡增加,Bcl-2表达量减少,Caspase-3增加,P＜0.05.所有实验组间Bax无显著差异,P＞0.05.结论:生理范围的流体剪切力对成骨细胞凋亡无影响,而过大力值导致bcl-2表达减少,进而活化caspase-3,成骨细胞凋亡增加.     

���������յ�����Ԫ����������ػ������ʵ���о�

目的 研究大鼠面神经总干离断伤后神经元的形态学改变及对TUNEL、Fas和Caspase-3、Caspase-8表达的影响。方法 2009年1 — 8月于中国医科大学实验技术中心手术制作大鼠右侧面神经总干切断伤模型,左侧为正常对照。伤后各时间点,通过HE染色观测面神经核神经元的形态学变化;TUNEL检测细胞凋亡;免疫组化检测Fas和Caspase-3、Caspase-8表达的变化。结果 伤后3 d开始面神经元存活率逐渐下降,28 d时存活率达最低;伤后第7d开始可见TUNEL阳性表达,14 d时数量达高峰;伤后1 d时,Fas表达增高,于7 d时达高峰。伤后3 d时,Caspase-3、Caspase-8表达增高, 14 d时达高峰。结论 面神经总干离断伤可引起面神经元凋亡;Fas和Caspase-3、Caspase-8参与面神经总干离断伤后诱导其神经元凋亡过程的调控。     

磨牙缺失对大鼠海马氨基酸类神经递质含量的影响

目的研究磨牙缺失对大鼠海马区氨基酸类神经递质含量的影响。方法24只无明显认知功能障碍Wistar大鼠随机分为对照组、单侧磨牙拔除组和双侧磨牙拔除组，拔牙6周后，测定大鼠海马氨基酸类神经递质的含量。结果双侧磨牙拔除组较对照组大鼠海马的谷氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸含量均升高（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）；双侧磨牙拔除组较单侧磨牙拔除组的γ-氨基丁酸含量也升高（P〈0．05）。结论双侧磨牙缺失可以造成大鼠海马氨基酸类神经递质含量的改变。     

糖基化终产物及其受体对牙周膜成纤维细胞凋亡影响的实验研究

目的观察糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)促进糖基化终产物受体(receptor foradvanced glycation end products,RAGE)在大鼠牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLF)中的表达情况,并研究RAGE在大鼠PDLF凋亡中的作用。方法第3代大鼠PDLF在含有终浓度为200 mg/L的糖基化牛血清白蛋白(advanced glycation end products-bovine serum albumin,AGE-BSA)培养基内培养,根据孵育时间分为实验组A1、A2、A3、A4组;相同条件下PDLF于终浓度200 mg/L的BSA孵育,按与A1～A4组相同的孵育时间分为实验组B1、B2、B3、B4;在无AGE-BSA、BSA的培养基内培养第3代PDLF设为对照组C组。检测各组细胞活性、细胞凋亡情况、RAGE及细胞凋亡蛋白酶3 mRNA表达情况。结果 AGE干预的大鼠PDLF在细胞形态学及细胞活性检测方面均发生改变。相同时间点A、B各组细胞活性组间比较差异具有统计学意义(P<0.01),A1、A2、A3、A4 4组细胞活性的组间差异无统计学意义(F=2.353,P=0.088),B1、B2、B3、B4 4组的组间差异亦无统计学意义(F=0.468,P=0.706)。经流式细胞术检测,实验组A1、A2、A3、A4组细胞凋亡比例依次明显增高,与C组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。受AGE干预的细胞可以表达RAGE且细胞凋亡蛋白酶3表达阳性。结论 AGE可以刺激大鼠PDLF表达RAGE,促进细胞凋亡。     

环孢素对大鼠牙龈上皮细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

SPF级7周龄雄性Wistar大鼠80只,随机分为实验组和对照组,每组又分为10、20、30、40d亚组,实验组胃饲含CsP鲜牛奶,对照组胃饲等量鲜牛奶。经心灌注4%多聚甲醛,固定取材,制作下颌第一磨牙颊舌向石蜡切片,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测牙龈上皮细胞原位凋亡,免疫组化PV两步法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。利用图像分析系统计算牙龈上皮细胞凋亡率和Caspase-3蛋白阳性细胞表达率,并测量Bcl-2蛋白平均灰度,行完全随机分组两因素析因设计方差分析。     

咬合支持丧失后大鼠海马区神经组织形态学变化的透射电镜观察

目的:研究咬合支持丧失对高龄大鼠神经组织形态学方面的影响,从而探讨咬合支持对维持生理功能的重要性.方法:24只10月龄Wistar大鼠随机分为对照组、单侧磨牙拔除组和双侧磨牙拔除组,6周后,大鼠快速断头处死,透射电镜观察大鼠海马区神经组织形态.结果:与对照组相比,拔牙组大鼠海马区神经细胞核溶解、细胞膜完整性破坏和一些重要的蛋白合成细胞器消亡,以及突触数量减少,其中以双侧磨牙拔除组变化更为明显.结论:咬合支持丧失后6周,大鼠海马区神经组织形态学发生退行性变.     

磨牙缺失对老年大鼠大脑边缘叶胆碱能纤维密度的影响

目的探讨磨牙缺失时老年大鼠大脑边缘叶皮质胆碱能纤维密度的影响。方法选用SD大鼠40只，分为老年缺牙组、老年对照组（18个月龄）和青年缺牙组、青年对照组（3个月龄）。缺牙组大鼠拔除左侧磨牙，2个月后大脑定位取材，乙酰胆碱脂酶（AChE）组化染色，光镜下观察海马CA1区、齿状回、扣带回前区和后区胆碱能纤维密度。结果老年拔牙组海马CA1区辐射层、齿状回分子层AChE阳性纤维密度明显少于老年对照组（P〈0．05）；老年拔牙组扣带回后区第Ⅳ层AChE阳性纤维密度明显少于老年对照组（P〈0.01）。结论单侧磨牙缺失可加速老年机体边缘叶胆碱能系统退变，这可能是缺牙引起老年性学习记忆减退机制之一。     

渐进性咬合紊乱对幼、成年雌性大鼠髁突软骨中VEGFR-1,2表达的影响

目的：探讨渐进性咬合紊乱对幼年和成年雌性大鼠髁突软骨中血管内皮生长因子受体（VEGFR）1,2表达情况的影响。方法：建立大鼠渐进性咬合紊乱模型,采用免疫组化方法检测髁突软骨中VEGFRs的表达情况,通过计算阳性细胞数的方法,分析大鼠髁突软骨适应性改建过程中VEGFRs的表达变化规律。结果：VEGFR-1,VEGFR-2在大鼠髁突软骨中的分布趋势基本相同,均主要分布在大鼠髁突软骨的肥大层和过渡层,在增殖层少量表达,在纤维层未见到其阳性细胞表达;正常雌性大鼠髁突软骨从7~11周龄VEGFRs表达逐渐增强,11周龄后降低,并保持在一个稳定水平;幼年及成年实验2周组、幼年实验8周组、成年实验6周组VEGFRs阳性细胞数与其同龄对照组相比均无显著差异;幼年实验4周组及6周组,成年实验4周组VEGFRs阳性细胞数分别明显低于其同龄对照组（P〈0.05）,而成年实验8周组则明显高于其同龄对照组（P〈0.05）。结论：VEGFRs参与了大鼠渐进性咬合紊乱所致髁突软骨的改建活动。