α-黑素细胞刺激素在自体移植皮片中的mRNA表达及意义

目的初步探索α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulatinghormone,α-MSH)在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法标本取自颈部自体中厚移植皮片术后1年,局部需再次矫正的18例患者。在切取颈部自体中厚移植皮片同时于每例移植皮片受区及原供区腹部周围分别切取正常皮肤作对照,切取范围1.0cm×0.5cm。分别利用RT-PCR、银染-丽春红染色法计算自体中厚移植皮片、原供区及受区周围自体正常对照皮肤中α-MSHmRNA电泳条带及表皮的灰度值,测定各组中α-MSHmRNA的半定量表达及黑色素的含量。结果α-MSH在自体中厚移植皮片中的mRNA表达明显高于自体正常对照皮肤,差异有统计学意义(P<0.01);自体中厚移植皮片表皮中黑色素含量较自体正常对照皮肤表皮中的黑色素含量明显增多,差异亦有统计学意义(P<0.01);且表皮中黑色素的含量与α-MSH的mRNA表达量呈正相关。结论α-MSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,致皮片中黑色素含量升高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。     

自体移植皮片中黑皮素-1受体mRNA的表达及意义

目的：探讨黑皮素-1受体在自体移植皮片过度色素沉着中的作用.方法：利用RT-PCR、Ma sson-Fontana stain方法检测人体自体中厚移植皮片与原供区及受区周围自体正常对照皮肤中黑皮素-1受体mRNA的表达及表皮中黑色素的含量,并行统计学分析.结果：黑皮素-1受体在自体中厚移植皮片中的mRNA表达明显高于自身正常对照皮肤,其表达差异有显著性意义（P＜0.01）;自体中厚移植皮片表皮中黑色素含量较自身正常对照皮肤表皮中的黑色素含量亦明显增多,其含量的差异亦有显著性意义（P＜0.01）;且表皮中黑色素的含量与黑皮素-1受体的mRNA表达量呈正相关.结论：黑皮素-1受体在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用.     

自体移植皮片中黑皮素1受体表达与黑色素含量的相关性研究

目的检测黑皮素1受体(melanocortin 1 receptor,MC-1R)及黑色素在不同类型自体移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识MC-1R在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法取颈部自体皮片移植术后1年的皮片(包括全厚皮片、中厚皮片及刃厚皮片),以及原供区、受区周围皮肤作为正常对照,采用免疫组织化学方法、银染-丽春红法检测自体移植皮片与正常皮肤中MC-1R表达及黑色素含量。结果MC-1R的表达定位于表皮基底部黑色素细胞、角质形成细胞胞浆;在各类自体移植皮片中均呈阳性表达,皮片愈薄MC-1R表达愈明显;MC-1R在各类移植皮片中的表达与两类正常对照皮肤比较差异均有统计学意义(P<0.01),但两类正常对照皮肤内的表达差异无统计学意义(P>0.01)。不同类型移植皮片表皮中黑色素含量较两种正常对照皮肤均明显增加,且差异有统计学意义(P<0.01);且不同类型移植皮片表皮中黑色素含量的差异亦均有统计学意义(P<0.01),皮片愈薄,黑色素含量愈多;皮片中黑色素含量与MC-1R表达量呈正相关。结论自体移植皮片中黑色素含量与MC-1R表达量呈正相关,MC-1R在自体移植皮片中的高表达能使皮片中黑色素含量增加,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。     

I型IP_3受体在自体中厚移植皮片中的表达

目的：检测I型1,4,5--三磷酸肌醇受体（type I inositol 1,4,5-t riphosphate receptor,IP3R1）在人自体中厚移植皮片中的表达,初步认识由IP3受体介导的钙信号转导在自体中厚移植皮片过度色素沉着发生机制中的作用。方法：利用免疫组化SP方法,检测IP3R1在自体移植中厚皮片、受区周围与供区正常皮肤中的表达并进行统计学分析。结果：IP3R1的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角质形成细胞胞浆,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,与自体正常对照皮肤中的表达差异有显著性意义（P〈0.05）;IP3R1在受区周围和供区正常对照皮肤中的表达差异无显著性意义。结论：IP3R1在自体中厚移植皮片中的表达比自体正常对照皮肤中显著提高,推测由IP3R1介导的胞内钙库钙离子释放参与了钙信号转导在自体移植皮片过度色素沉着中的调控作用。     

α-黑素细胞刺激素在自体中厚移植皮片中的表达

目的检测α黑素细胞刺激素(αmelanocytestimulatinghormone,αMSH)在人体自体中厚移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识αMSH在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法利用免疫组织化学方法,检测人体自体中厚移植皮片与原供区及受区周围自体正常对照皮肤中αMSH的蛋白表达,并行统计学分析。结果αMSH的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角朊细胞胞浆,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,表达率为611%,与自体正常对照皮肤中的表达差异有非常显著性意义(P<001);αMSH在受区与原供区周围正常对照皮肤中的表达差异无显著性意义。结论αMSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。     

黑皮素受体-1在自体中厚移植皮片中的表达

目的检测MC-1R在自体移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识MC-1R在自体移植皮片过度色素沉着中的作用.方法利用免疫组织化学方法检测自体中厚移植皮片与供区及受区周围自体正常对照皮肤中MC-1R的表达,并行统计学分析.结果 MC-1R的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角朊细胞的胞浆及胞膜,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,其强阳性表达率为67.7%,与在自体正常对照皮肤中的表达差异有显著意义(P＜0.01);MC-1R在受区周围与供区正常对照皮肤中的表达差异无显著意义(P＞0.01).结论 MC-1R在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用.     

黑皮素受体-1在自体中厚移植皮片中的表达

目的　检测MC - 1R在自体移植皮片中的表达 ,并与自身正常皮肤作对照 ,初步认识MC - 1R在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法　利用免疫组织化学方法检测自体中厚移植皮片与供区及受区周围自体正常对照皮肤中MC - 1R的表达 ,并行统计学分析。结果　MC - 1R的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角朊细胞的胞浆及胞膜 ,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达 ,其强阳性表达率为 6 7.7% ,与在自体正常对照皮肤中的表达差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;MC - 1R在受区周围与供区正常对照皮肤中的表达差异无显著意义 (P >0 .0 1)。结论　MC - 1R在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高 ,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。     

干细胞生长因子在自体移植中厚皮片中的表达

目的检测干细胞因子（Stem cell factor，SCF）在人自体移植中厚皮片中的表达，初步认识干细胞因子在自体移植皮片色素沉着发生机制中的作用。方法取面颈部自体中厚皮片移植术后1年左右的色素沉着皮片，以自身正常皮肤作为对照，组成配对资料（n=16），利用S—P免疫组化方法，检测SCF在受区移植皮片、受区周围与供区周围正常皮肤的表达与分布，使用MIQAS医学图像定量分析系统，定量检测各组标本中SCF阳性表达面积（PA）、阳性表达强度（OD），计算出阳性表达指数（PI，PI=PA×OD），并就PI值行统计学分析。结果SCF表达定位于表皮基底层的黑素细胞与角朊细胞的胞浆及胞膜表面。SCF在受区移植皮片、受区周围及原供区周围正常皮肤中的PI值分别为158830±53753、86839±21381、85033±16972。SCF在受区移植皮片组的表达与两正常对照组相比具有显著性差异（p〈0．01）；SCF在受区周围正常对照皮肤与原供区周围正常皮肤中的表达无差异。结论SCF在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高，推测SCF在自体移植皮片色素过度沉着中可能起重要调控作用。     

钙调蛋白在自体中厚移植皮片中的表达

目的 检测钙调蛋白在人自体中厚移植皮片中的表达,初步认识钙信号转导途径在自体移植皮片过度色素沉着发生机制中的作用.方法 利用免疫组织化学方法,检测钙调蛋白在受区移植皮片、受区周围与供区周围正常皮肤中的表达并进行统计学分析.结果 钙调蛋白的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角质形成细胞的胞浆中;在自体移植中厚皮片组中,其表达的平均光密度值为0.49±0.08,显著高于受区周围正常皮肤对照组的平均光密度值0.23±0.08和原供区周围正常皮肤组的平均光密度值0.17±0.06,并与自体正常皮肤对照组中的表达差异有显著的统计学意义(P <0.01);钙调蛋白在受区和供区周围正常皮肤对照组中的表达差异无统计学意义(P >0.05).结论 钙调蛋白在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤组中显著提高,推测钙信号转导途径在自体移植皮片色素过度沉着中起着重要的调控作用.     

刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中酪氨酸酶的活性影响

目的 检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中酪氨酸酶的活性影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因。方法 建立过度色素沉着的自体移植皮片的动物模型；利用免疫组织化学方法分别检测刺鼠信号蛋白作用前后自体移植皮片中酪氨酸酶的表达,并与对照治疗组及正常皮肤相比较。结果 酪氨酸酶的表达定位于表皮基底部黑色素细胞的胞浆,在大部分组织中呈阳性表达,经刺鼠信号蛋白作用后酪氨酸酶在自体移植皮片中的表达明显减少,与在其他各对照组中的表达差异有极显著意义（P＜0.01）。结论 刺鼠信号蛋白在自体移植皮片中能竞争性拮抗α-MSH的黑色素合成,使皮片着色能力降低,从而证明皮片移植后表皮细胞中α-MSH的表达上调是皮片呈过度色素沉着的重要原因。     

白介素-1对培养人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的:建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度的白介素-1α,白介素-1β对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定白介素-1α及白介素-1β对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果:白介素-1α及白介素-1β对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论:白介素-1α及白介素-1β对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用白介素-1α及白介素-1β治疗色素性疾病提供了实验依据。     

Hypopigmentation in burns is associated with alterations in the architecture of the skin and the dendricity of the melanocytes

Hypopigmentation is a major problem in deep dermal burns. To date, no standard treatment is available for the post burn hypopigmentation disorder. Therefore, understanding the molecular and cellular events are of benefit for therapeutic intervention. Hematoxylin and Eosin (H&E) and Fontana Masson (FM) staining of post burn hypopigmented skin (PBHS) showed an altered architectural pattern in cellular organization, cornified layer and melanin pigment as compared to the normal skin. This was confirmed by immunohistochemistry (IHC) analysis of PBHS samples using specific marker cytokeratin 5 (CK5) for keratinocytes and melanocortin 1 receptor (MCIR) for melanocytes. Validation of these observations was performed by IHC using proliferation and differentiation markers, Ki67 and Loricrin respectively and the melanocyte specific marker tyrosinase related protein 1 (TRP1). Taking a cue from the IHC study, the interaction of keratinocytes and melanocytes was studied by developing a co-culture model from PBHS and normal skin. Culture data exhibited a change of dendritic structure, reduced proliferation rate, faulty melanin synthesis and transfer of melanin from melanocytes to keratinocytes in PBHS samples. To the best of our knowledge, this is the first study showing structural and functional aberrations of melanocytes and keratinocytes, as a potential cause of hypopigmentation in burned patients. Our study, therefore, provides valuable insight for the basis of hypopigmentation in post burn patients, which may pave the way for clinical intervention in the future.     

人源Dickkopf1原核表达产物对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的:观察人源Dickkopf1原核表达产物(DKK1蛋白)对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖情况;光学显微镜观察细胞形态学变化;氢氧化钠裂解法测定黑素合成;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:DKK1蛋白对黑素细胞的增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少(P<0.05);光学显微镜观察到DKK1蛋白作用的黑素细胞胞体较大,形态略呈多角形,树突较粗短;并能使黑素合成显著下降(P<0.05);使酪氨酸酶活性显著减弱(P<0.05)。结论:DKK1蛋白能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性,为DKK1蛋白应用于治疗色素增多性疾病奠定实验基础。     

Q-开关激光对黄褐斑动物模型黑素细胞黑素合成的影响

目的：观察Q开关激光不同能量照射对黄褐斑动物模型黑素细胞的增殖、黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法：用Q开关激光不同能量照射黄褐斑动物模型,取表皮黑素细胞进行细胞培养,采用MTT法测定细胞活力的影响;氢氧化钠裂解法测定黑素的含量;体外多巴氧化反应法测定酪氨酸活性的变化;光学显微镜观察细胞形态学变化。结果：除高能高频组外各能量密度和频率组激光照射后即刻黑素细胞形态无明显变化。第5次治疗后高能量密度照射组明显可见黑素细胞数目减少、体积变小、树突数量减少,长度缩短。而低能量高频率照射组仅黑素细胞体积变小,树突数量减少,长度缩短。与术前比较,低能量低频率照射组黑素细胞增殖、黑素含量、酪氨酸活性无显著差异,但其他三组显著性下降。然而,3周术后黑素细胞增殖、黑素含量、酪氨酸活性增强趋势,有显著性意义（P〈0．05）。结论：当激光能量和频率达到一定阈值时能抑制黑素细胞的合成和酪氨酸活性,而这种损伤在一定范围内是可逆性的。从而为临床应用Q开关Nd：YAG 1064nm激光治疗色素性疾病提供了实验依据。     

病理性瘢痕中Langerhans细胞的形态学研究

目的：探讨Langerhans细胞与病理性瘢痕的相关性.方法：应用免疫组织化学法（ABC法）观察瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤组织中S-100蛋白和CD1a的表达,用透射电镜观察这三种组织中的Langerhans细胞的超微结构.结果：瘢痕疙瘩及增生性瘢痕组织中对S-100蛋白和CD1a免疫反应阳性的Langerhans细胞较正常皮肤中明显增多.瘢痕疙瘩及增生性瘢痕与正常皮肤之间有显著性差异（P＜0.05）.瘢痕疙瘩与增生性瘢痕之间差异不显著（P＞0.05）.电镜下表皮细胞层中Langerhans细胞核形多不规则,胞质中等电子密度,有较多线粒体和溶酶体,扁平囊泡较多.结论：Langerhans细胞在瘢痕疙瘩及增生性瘢痕组织中明显增多,且功能活跃.