维拉帕米对肝星状细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的:观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)凋亡的影响以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。方法:流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HSCs细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测Bcl-2表达的变化。结果:AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs细胞凋亡,且有剂量相关性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化检测显示,与对照组比较,维拉帕米组Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:维拉帕米可诱导HSCs凋亡,减弱Bcl-2的表达。     

肝星状细胞凋亡机制研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)是肝脏产生细胞外基质的主要来源，其大量增殖和凋亡相对不足在肝纤维化(hepatic fibrosis)的发生中起桉心作用，抑制其增殖和诱导其凋亡是逆转肝纤雏化的重要对策。肝星状细胞的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等的调控。现将Fas／Fasl系统、Bcl-2、Bax、p^53、Caspase家族及p^53与肝星状细胞凋亡研究概况综述如下。     

川芎嗪衍生物影响肝星状细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究川芎嗪衍生物H168对大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响及其作用机制。方法采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察药物对LDH活性的影响;MTT实验检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染方法检测药物对细胞凋亡率影响;应用Western blot方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响。结果细胞毒性实验发现当H168作用终浓度低于150μmol.L-1时,不具有明显细胞毒作用;MTT实验研究发现药物浓度为10μmol.L-1和25μmol.L-1具有抑制细胞增殖的作用;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡率的影响,发现H168具有促进HSC凋亡的作用,且呈量效关系;Western blot结果显示H168通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡。结论 H168具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白的表达实现的。     

肝星状细胞凋亡信号途径及其药物治疗的研究进展

各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活是肝纤维化发生发展的中心环节,促进其凋亡被认为是肝纤维化逆转的始动因素。HSC的凋亡机制十分复杂,调控活化HSC凋亡的信号转导途径研究甚少。目前已知的HSC凋亡信号途径主要包括线粒体途径、死亡受体途径和非死亡受体途径。基于这些信号转导途径,研究出选择性诱导HSC凋亡的药物将成为抗肝纤维化治疗的重要手段。该文将对HSC凋亡信号转导通路的最新进展进行综述,并对目前已知的具有促HSC凋亡作用的药物进行总结分类。     

肝复康经JNK信号通路在肝星状细胞凋亡中的调节机制

目的探讨中药肝复康经JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在肝星状细胞凋亡中的调节机制。方法将SD大鼠随机分为5组:正常对照组(C),模型组(M),肝复康高(HT)、中(MT)、低(LT)剂量治疗组,每组给予相应的处理;HSC-T6细胞株随机分为3组:正常对照组、乙醛组及肝复康治疗组。HE染色法观察肝组织形态结构变化;RT-PCR法测定MKK4、MKK7、JNK1、JNK2、COX-2、Survivin、Caspase-3、α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的基因表达水平;免疫组织化学法和免疫蛋白印记法观察COX-2在肝组织和肝星状细胞中的表达。结果正常组中COX-2几乎不表达。与正常组相比,模型组中COX-2表达显著增加(P<0.05)。与模型组相比,肝复康治疗组各组中COX-2表达均明显降低,其中,中剂量组最明显(P<0.05)。与正常组相比,模型组中MKK4、MKK7、JNK1、JNK2、COX-2、Survivin的基因表达水平均显著上调(P<0.05)。与模型组相比,肝复康治疗组各基因表达水平均明显减弱,中剂量组最明显(P<0.05),其中Caspase-3基因表达呈相反趋势。COX-2和Survivin的表达呈正相关,和Caspase-3的表达呈负相关。检测α-SMA、collagenⅠ与collagenⅢ基因表达,与模型组相比,中剂量治疗组表达水平明显下调(P<0.05)。结论肝复康可通过抑制JNK信号通路的传导诱导肝星状细胞凋亡,发挥抗纤维化作用。     

乌索酸对人肝星状细胞凋亡及TGFβ_1 mRNA表达的影响

肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是肝纤维化形成的主要效应细胞,TGFβ_1是目前已知最重要的致肝纤维化细胞因子之一~([1]).因此,降低TGFβ_1表达,抑制HSC增殖,诱导其凋亡是治疗肝纤维化的重要策略~([2,3]).国内外研究资料显示乌索酸具有护肝作用~([4～7]),本研究拟观察乌索酸对人HSC凋亡及TGFβ_1 mRNA表达的影响,以探索其在抗肝纤维化方面的作用.     

肝纤维化形成过程中大鼠肝组织Bcl-2、Bax表达的动态研究

目的研究CCl4肝纤维化模型形成过程中Bcl-2、Bax蛋白在大鼠肝组织中的动态表达。方法雄性wistar大鼠制备CCl4肝纤维化动物模型,设正常对照组、4周模型组、8周模型组。实验结束后用v-G法染色观察肝纤维化程度并分级,同时用免疫组织化学法(SABC法)检测各组大鼠肝组织Bcl-2、Bax的表达情况。结果模型组大鼠肝纤维化程度均达肝纤维化的Ⅲ-V期以上。BcI-2在正常组、4周及8周模型组表达量分别为(3.19±0.79)％、(12.36±4.71)％及(17.39±5.98)％(P<0.01或P<0.05)。Bax在正常组、4周及8周模型组表达量分别为(2.04±0.58)％、(18.05±5.64)％及(13.56±4.77)％(P<0.01或P<0.05)。凋亡指数、Bax/Bcl-2比值在CCl4肝纤维化模型组中明显增加,尤以4周模型组增加最明显,且凋亡指数与Bax/Bcl-2比值呈正相关(r=0.347,P<0.05)。 结论肝纤维化时Bcl-2、Bax的表达加强,且在肝纤维化发生过程中存在动态变化。     

丹参对体外培养肝星状细胞TGF-β的影响

肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程,是所有慢性肝病共有的病理改变。目前认为肝星状细胞(HSC)的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节,其中以转化生长因子β(TGF-β)最为重要[1]。为此我们拟观察注射用丹参(冻干)对体外培养HSC增殖及TGF-β1表达的影响。     

大鼠肝星状细胞的分离和培养

目的:本文参考Friedman等的不连续密度离心法并作改良,建立了一种经济、简便、可靠的分离大鼠肝星状细胞(HSC)的方法。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离HSC,并进行体外培养,结果:分离培养的HSC经台盼蓝拒染实验活细胞大于98％,细胞得率为3.95×10个/肝脏。结论:该方法简便、实用、稳定、可靠,而且本方法的建立为进一步研究HSC与肝纤维化的关系,尤其是细胞水平及分子生物学水平的研究奠定了基础。     

苏拉明在肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖和凋亡中的作用(英文)

本研究旨在探究苏拉明在肝星状细胞（HSCs）增殖、凋亡中的作用。将HSCs株分别在不同浓度的苏拉明和无苏拉明的培养基中体外培养。应用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术测定细胞周期和增殖指数;TUNEL法检测细胞凋亡率;显微镜下观察细胞形态学变化。结果显示苏拉明干预后,与对照组比较HSCs增殖率均显著减低;苏拉明(1.4×10^-5mol/L)干预72小时,HSCs增殖率降低最明显,且呈时间和剂量依赖性;苏拉明(1.4×10^-5mol/L)干预24小时,G₁期HSCs百分比显著升高,增殖指数显著降低,而HSCs凋亡率无显著变化。苏拉明对HSCs形态无显著影响。我们认为在实验剂量范围内,苏拉明可抑制HSCs增殖,而对HSCs凋亡无影响。     

缬沙坦治疗免疫性肝纤维化大鼠及其对Bcl-2/Bax表达的影响

目的 评价缬沙坦对免疫性大鼠肝纤维化的治疗作用,并观察其对免疫性肝纤维化大鼠肝组织中凋亡相关因子Bcl-2/Bax表达的影响.方法 36只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组和治疗组.治疗组在造模第6周开始予以缬沙坦干预;第10周实验结束后,观察三组在肝组织纤维化程度、血清透明质酸(HA)、羟脯氨酸(Hyp)水平的变化,免疫组化检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Bcl-2、Bax的表达.结果 治疗组大鼠肝纤维化程度、炎症活动度均较模型组明显减轻.模型组和治疗组肝胶原面积分别为(12.5±2.15)%和(5.21±1.21)% (P＜0.05).与模型组比较,治疗组血清HA、Hyp水平均降低(P＜0.05).模型组肝组织α-SMA、Bcl-2和Bax的表达较空白对照组明显增强(P＜0.05);而治疗组α-SMA表达明显低于模型组(P＜0.05).治疗组Bcl-2表达较模型组显著降低(P＜0.05), Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05).结论 缬沙坦能明显减轻猪血清诱导的肝纤维化大鼠的肝纤维化程度、炎症活动度,其机制可能与下调Bcl-2的表达及降低Bcl-2/Bax比值有关.     

肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控

肝纤维化是对慢性肝损伤的愈合反应,为一个可逆的过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝脏分泌细胞外基质(extra cellular matrixc,ECM)的主要细胞,在肝纤维化的发展机制中占有重要的地位。如何控制HSC的活性并逆转肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。在肝纤维化病程中,一系列细胞因子通过旁分泌和自分泌方式作用于邻近的HSC,影响其增殖、趋化、代谢及凋亡。鉴于Kupffers细胞为细胞因子的主要来源,其在肝纤维化病程中对HSC细胞的活化增殖、凋亡发挥着重要的调控作用。HSC、Kupffers细胞及细胞因子与肝纤维化的发生发展关系极为密切,阐明其关系,有助于以HSC为靶点的肝纤维化方面的研究,现就其关系综述如下。     

丹皮酚体外对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的影响。方法 HSC加入丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h后,MTT比色法和锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚33.2 mg·L-1分别作用6,12,24,36和48 h,锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚1.66～69.7 mg·L-1作用48 h用细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒检测细胞上清中LDH活性。丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1与HSC作用24 h分别用光学显微镜、Hoechst 33258染色和流式细胞术检测HSC细胞形态、细胞凋亡和凋亡率;丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h用流式细胞术检测细胞周期。结果 MTT实验结果表明,丹皮酚16.6～49.8 mg·L-1对HSC增殖具有明显抑制作用,且具有浓度效应关系(r=0.955,P<0.05),作用48 h时IC50值为105.4 mg·L-1。锥虫蓝染色实验结果表明,丹皮酚对HSC存活率的抑制作用不仅具有浓度效应关系(r=-0.936,P<0.05),浓度为33.2 mg·L-1时还具有时间效应关系(r=-0.965,P<0.05)。丹皮酚16.6～69.7 mg·L-1作用48 h无明显细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示,丹皮酚8.3～49.8 mg·L-1作用24 h能显著促进HSC细胞凋亡(P<0.05),且具有浓度效应关系(r=0.920,P<0.05)。丹皮酚33.2和49.8 mg·L-1作用48 h可调节细胞周期,G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),具有浓度依赖性(r=0.980,P<0.05)。结论丹皮酚具有促进HSC凋亡和抑制HSC增殖的作用,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

以肝星状细胞为靶标的抗肝纤维化治疗进展

任何病因导致的慢性肝损伤,均可发展为肝纤维化。损伤肝脏的纤维化形成过程中,活化肝星状细胞(HSC)是主要细胞类型,并有重要细胞因子参与。目前治疗都以阻止活化HSC在损伤部位聚集和细胞外基质沉积为目标。该文就以HSC为靶标的抗肝纤维化最新治疗方案作一综述。     

维拉帕米对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的维拉帕米对HSCs处理48 h,CCK-8试剂盒(cell counting Kit-8)检测细胞增殖抑制率,HE染色观察细胞形态超微结构的变化,流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测HSCs的凋亡率。结果维拉帕米可抑制HSCs的增殖,且有剂量相关性,其IC50值为(150±10)mmol·L-1;HE染色可见维拉帕米组出现不同程度的细胞体积变小、核浓缩深染等凋亡形态改变;Annexin-V/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs凋亡,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论维拉帕米可抑制HSCs的增殖,诱导其凋亡。     

姜黄素衍生物对原代大鼠肝星状细胞作用的体外研究

目的：观察姜黄素衍生物（Curc-OEG）抑制原代肝星状细胞（HSC）增殖、活化以及诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法：采用IV型胶原酶、DNA酶消化SD雄性大鼠肝脏,percoll梯度离心得到纯化的肝星状细胞。细胞分离后1d分别加入0、6.25、12.5μg/mL的姜黄素衍生物,作用7d后用RT-PCR及Western blot检测细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2的mRNA水平和蛋白表达量。活化的肝星状细胞在第14天分别加入0、6.25、12.5、25、50、75μg/mL的姜黄素衍生物,作用24h后RT-PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2的mRNA水平和纤维化相关基因TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA水平。结果：药物作用7d后,6.25μg/mL和12.5μg/mL浓度药物处理组与对照组相比,细胞数目分别减少了56%和86%。在12.5μg/mL浓度药物作用下,原代肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及Smad2的mRNA表达水平分别下调83%、85%及75%,蛋白表达水平分别下调94%、92%及73%（P〈0.05）。25μg/mL浓度药物作用24h后,细胞凋亡明显。在50μg/mL浓度药物作用下,活化的肝星状细胞Bax的mRNA表达水平上调约2.3倍,Bcl-2的mRNA表达水平下调约5.6倍;TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA表达水平分别下调90%、83%、74%、65%（P〈0.05）。结论：姜黄素衍生物可以明显抑制原代肝星状细胞的增殖和活化,促进活化的肝星状细胞凋亡及减少细胞外基质的沉积。     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对大鼠肝星状细胞的影响

目的：探讨α-肾上腺素激动剂去甲肾上腺素和拮抗剂酚妥拉明对体外活化的肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法：体外对HSC-T6进行复苏和培养传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法检测HSC-T6培养上清液中透明质酸(HA)和III型前胶原（PCIII）的浓度;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属酶-13(MMP-13)蛋白的表达。结果：在体外培养的活化HSC-T6中,去甲肾上腺素（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能促进细胞增殖,升高分泌HA和PCIII水平,增强TIMP-1蛋白的阳性表达并降低其凋亡率;酚妥拉明（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能抑制细胞增殖,促进MMP-13的阳性表达并增加HSC-T6的凋亡率。结论：去甲肾上腺素具有促进肝纤维化的作用,酚妥拉明则具有抗纤维化的作用,该作用与其对HSC-T6增殖、凋亡及HA和PCIII分泌水平调控有关。     

酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞(HSC)活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

高表达SUMO蛋白对人肝星状细胞LX-2纤维化的影响

目的研究在体外培养的人肝星状细胞LX-2中高表达SUMO蛋白对LX-2纤维化指标的影响。方法采用脂质体瞬时转染法分别将SUMO-1／2／3的高表达质粒转染入LX-2细胞中,分别运用RT-PCR和Western Blot检测a-SMA、Collagen I、MMP-2、TIMP-1的mRNA和蛋白表达量。结果转染质粒48h后a—SMA、Collagen I的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P〈0．05）,MMP-2、TIMP-1的mRNA表达量亦显著降低（P〈0．01）,但MMP-2和TIMP-1的蛋白表达水平无明显影响。结论高表达SUMO蛋白能抑制人肝星状细胞LX-2的纤维化过程。     

半枝莲含药血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的影响

目的:探讨半枝莲含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的影响。方法:传代培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6与不同剂量半枝莲(高、中、低剂量组)共同孵育48 h后,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测半枝莲对大鼠HSC-T6凋亡的影响;免疫组化检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达。结果:半枝莲能使大鼠HSC-T6凋亡明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,使凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。结论:半枝莲可下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC-T6凋亡。