大鼠颅骨成骨细胞和骨细胞的分离纯化与比较研究

目的探讨大鼠颅骨中骨细胞和成骨细胞的分离纯化方法,并分别比较细胞形态、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和成骨特异性蛋白的表达情况。方法分别采用序列酶消化和EDTA螯合法,从SPF级新生SD大鼠的颅骨中分离培养骨细胞和成骨细胞,对其进行HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色、骨钙素(BGP)免疫荧光染色;采用偶氮偶合法对两种细胞ALP进行染色,并检测其活性;应用蛋白质印迹(Western blot)检测两种细胞的Ⅰ型胶原和BGP的表达量。结果细胞形态学观察及HE染色表明,骨细胞多呈星状或树枝状且有较多突触,而成骨细胞呈长梭形且突触较少;Ⅰ型胶原免疫组化染色与Western blot结果表明,Ⅰ型胶原在成骨细胞中表达量较高,呈棕黄色,骨细胞中表达量较低;而BGP免疫荧光染色与Western blot显示,成骨细胞中BGP表达较低,而在骨细胞中表达较高,细胞荧光染色与HE染色结果相似;ALP染色结果表明,ALP在成骨细胞中表达较高,骨细胞中表达较低;ALP活性检测与ALP染色结果相似。结论采用序列酶消化及EDTA螯合法,可以从大鼠颅骨中分离得到较纯的骨细胞及成骨细胞,利用HE染色、免疫组化、免疫荧光染色、Western blot等技术,可以对骨细胞和成骨细胞进行分离纯化与研究。     

补骨脂素和异补骨脂素的急性毒性和相互作用

目的 探究补骨脂素、异补骨脂素的急性毒性及两者（1∶1）混合使用后的相互作用。方法 补骨脂素（1 125、843、633、475 mg/kg）、异补骨脂素（475、404、343、292 mg/kg）以及两者1∶1的混合物（633、538、457、389、330 mg/kg）1次性ig给予小鼠,连续观察并记录14 d小鼠的毒性反应和死亡情况,用SPSS计算补骨脂素、异补骨脂素以及两者混合使用后的半数致死量（LD₅₀）,用等效线图解法判断两者的相互作用。结果 给药组小鼠均出现僵直、腹部贴地、活动力减弱,甚至抽搐、口眼周有分泌物,心率减慢直至死亡的现象,与助溶剂组比较,体质量呈降低趋势;补骨脂素LD₅₀为638.69 mg/kg,95%可信限为526.91～785.78mg/kg;异补骨脂素LD₅₀为351.72 mg/kg,95%可信限为248.17～394.57 mg/kg;两者1∶1混合给药的LD₅₀为454.66 mg/kg,95%可信限为422.58～489.59;两者合用的LD₅₀在补骨脂素和异补骨脂素相加等效线上。结论 补骨脂素和异补骨脂素大剂量给予小鼠时,引起药物急性毒性反应,1∶1混合给药具有相加作用。     

高效液相法测定补骨脂生品和炮制品中补骨脂素与异补骨脂素含量

目的:建立补骨脂中主要成分含量的HPLC测定方法,为评价补骨脂质量标准打下基础.方法:色谱柱填料为Kromasil-C18,4.6×250mm,流动相为甲醇-水-冰醋酸(50:50:1),检测波长246nm.结果:测定方法的回收率分别为99.83%、102.57%.结论:该方法准确、稳定、简单,可以作为补骨脂饮片的质量控制方法.测定结果表明,不同产地的生、制品中,两类成分相差很大.     

HPLC法测定不同来源补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的：建立HPLC法测定不同来源补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量的方法。方法：选用Hypersil C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,以甲醇：0．015％磷酸溶液（40：60）为流动相,流速1．0ml·min^-1,检测波长246／1／11,柱温25℃。结果：补骨脂素在4．16～14．56μg·ml^-1间呈良好的线性关系（r=0．9997）,平均加样回收率为99．9％（RSD=0．90％,n=9）;异补骨脂素在4．16～14．56μg·ml^-1间呈良好的线性关系（r=0．9996）,平均加样回收率为98．0％（RSD=0．78％,n=9）。结论：该方法快速、准确,可用于补骨脂的质量控制。     

祛白酊中补骨脂素和异补骨脂素透皮效果的实验研究

目的 :考察祛白酊中君药补骨脂有效成分补骨脂素和异补骨脂素的透皮效果。方法 :采用简单小室法 ,以离体大鼠皮肤为透皮屏障 ,用双波长薄层扫描法测定体外接收液中补骨脂素和异补骨脂素的含量 ,进而计算累积透皮量和透皮率 ,并与未加月桂氮酮和二甲基亚砜的祛白酊透皮效果进行了实验性比较。结果 :补骨脂素的 8h累积透皮量与透皮率分别为 (92 6 5±2 91) μg·ml-1和 (84 6 6± 2 6 6 ) % ,异补骨脂素的 8h累积透皮量与透皮率分别为 (86 37± 2 6 7) μg·ml 1和 (82 2 9± 2 5 4 ) % ,与未加月桂氮酮和二甲基亚砜制剂的透皮效果比较 ,有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :祛白酊的透皮效果良好     

补骨脂微乳液中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定

摘要目的建立高效液相色谱法测定补骨脂微乳液中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法采用Kromasil C18柱,以甲醇 0.6%醋酸溶液（50：50）为流动相,检测波长246 nm。结果补骨脂素在4.24～50.88 μg·mL－1浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.3%（RSD＝1.51%）;异补骨脂素在4.48～53.76 μg·mL－1浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.6%（RSD＝1.65%）。结论该方法简便可行,重复性好,可用于补骨脂微乳液中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定。     

HPLC法测定肺气肿片中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的建立肺气肿片中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法采用HPLC法,用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(50∶50)为流动相;检测波长246 nm。结果方法线性良好,平均加样回收率:补骨脂素为97.8%,RSD为0.20%(n=5);异补骨脂素为98.8%,RSD为0.13%。结论本法简便快速,结果准确,可作为控制肺气肿片质量的方法。     

HPLC法测定肠胃宁片中补骨脂素、异补骨脂素的含量

目的建立HPLC法测定肠胃宁片中补骨脂素、异补骨脂素含量的方法。方法采用Agilent Extend-C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82)为流动相,流速为1.0mL.min-1,检测波长为246nm,柱温为30℃。结果补骨脂素在0.0542～0.8124μg范围内线性良好,r=1.0000;异补骨脂素在0.0530～0.7956μg范围内有较好的线性关系,r=1.0000;补骨脂素的平均回收率为97.82%,RSD=1.17%;异补骨脂素平均回收率为97.26%,RSD=1.00%。结论所建立的方法简便、准确,可用于肠胃宁片的质量控制。     

高效液相色谱法测定壮骨颗粒中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的 建立高效液相色谱法测定壮骨颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法 色谱柱为Agilent Zorbax C₁₈柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-水（45：55）,检测波长为245 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为25 ℃,进样量为10 μl。采用70%乙醇水浴方法提取壮骨颗粒中的补骨脂素和异补骨脂素。结果 补骨脂素与异补骨脂素在3.75~40 μg/ml范围内呈良好的线性关系,对方法精密度（n=6）、重复性（n=6）和稳定性（12 h）进行考察,相对标准偏差（RSD）均小于2%。加样回收率（n=6）为94%~105%。结论 该测定方法简便、快速、准确,可用于壮骨颗粒的临床快速质量控制。     

补骨脂酊中补骨脂素、异补骨脂素的含量测定

目的建立补骨脂酊中补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱（150mm×4．6mm,5μm）．流动相为甲醇-水（40：60）．流速为1．0mL·min^-1;检测波长为246nm。结果补骨脂素在0．022～0．44μg（r=0．9999）,异补骨脂素在0．02388～0．4776μg（r=0．9999）具有良好线性关系。补骨脂素平均回收率为98．10％（n=9．RSD=1．20%）,异补骨脂素平均回收率为97．74％（n=9,RSD=1．10％）。结论本方法简便、准确、可靠,可用于补骨脂酊中补骨脂素、异补骨脂素的含量测定。     

反相高效液相色谱法同时测定大鼠单向肠灌流液中补骨脂素和异补骨脂素

目的建立同时测定大鼠在体单向肠灌流液中补骨脂素和异补骨脂素的RP-HPLC方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为ShimadzuC18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-水（55∶45）,柱温：30℃,流速：1.0mL·min^-1,检测波长：245nm。结果补骨脂素、异补骨脂素分别在0.8236～32.94μg·mL^-1、1.140～45.60μg·mL^-1与峰面积呈良好线性关系,相关系数r均为0.9999。其平均回收率分别为98.98%、99.59%,RSD均〈3%。结论该法操作简便、结果准确、灵敏度高,可同时测定大鼠单向肠灌流液中补骨脂素和异补骨脂素。     

HPLC法测定丹芪和血片中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的建立HPLC法测定丹芪和血片中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法采用Sim-Pack C18柱,甲醇-水（45∶55）为流动相,柱温25℃,流速1 ml·min^-1,检测波长为247 nm。结果补骨脂素和异补骨脂素分别在5.65～56.5 mg·L^-1,4.52～45.2 mg·L^-1范围内线形关系良好,相关系数分别为r补骨脂素=0.9998,r异补骨脂素=0.9996。两组份的回收率分别为补骨脂素99.42%,RSD=1.64%;异补骨脂素98.68%,RSD=2.31%。结论本法可同时测定补骨脂素和异补骨脂素,方法简便、准确、可作为制剂的定量分析方法。     

HPLC法测定补肾宝颗粒中补脂素和异补脂素的含量

目的利用HPLC测定补肾宝颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法色谱条件:色谱柱:C18柱;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60),检测波长:245 nm。结果测得补骨脂素在0.2100~1.0500μg(r=0.999 6)、异补骨脂素在0.2084~1.0420μg(r=0.999 7)范围内呈线性。平均回收率分别为96.72%(RSD=1.79%)和96.91%(RSD=1.34%)。结论该法操作简便,结果准确无干扰,可作为补肾宝颗粒的质控方法。     

反相高效液相色谱法测定强筋健骨胶囊中补骨脂素及异补骨脂素的含量

目的:建立反相高效液相法测定强筋健骨胶囊中补骨脂素及异补骨脂素的含量.方法:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(43∶57),检测波长245 nm.结果:补骨脂素平均加样回收率为99.50%,RSD为1.20%,异补骨脂素平均加样回收率为99.29%,RSD为1.01%.结论:本法简便,快速,灵敏,准确,重现性好,可以控制强筋健骨胶囊的质量.     

高效液相色谱法测定驱白巴布期片中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的建立高效液相色谱法测定驱白巴布期片中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法高效液色谱法。Krom asil C18柱,乙腈-水(36∶64)为流动相,检测波长247nm。结果补骨脂素进样量在10~90ng,异补骨脂素进样量在9.6~86.4ng内线性关系良好,相关系数补骨脂素r=0.9999,异补骨脂素r=0.9999,平均回收率补骨脂素为99.87%(RSD=1.07%),异补骨脂素为98.70%(RSD=1.07%)。结论本法操作简便,结果准确,重现性好,可用于驱白巴布期片的质量控制。     

HPLC法测定孕康糖浆中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的建立HPLC法测定孕康糖浆中补骨脂素和异补骨脂素含量的方法。方法采用高效液相色谱法测定。色谱柱:Agilent C18柱,流动相:甲醇-水(40∶60),流速:1.0 ml.min-1,检测波长:246 nm。结果补骨脂素在0.0334～0.334μg(r=0.9999),异补骨脂素在0.047 5～0.475μg(r=0.999 9)之间线性关系良好;补骨脂素的平均回收率为98.31%,RSD=1.49%;异补骨脂素的平均回收率97.30%,RSD=1.18%。结论试验表明,该方法操作简单,分离效果好,灵敏度高,可以用于孕康糖浆的质量控制。     

HPLC法测定癃闭舒片中补骨脂素和异补骨脂素

目的 建立癃闭舒片中补骨脂素和异补骨脂素的定量方法。方法 对国内3个企业生产的6个批次的癃闭舒片,采用HPLC法检测,Agilent TC-C₁₈(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相是甲醇-水(43:57),体积流量1.0 mL/min,检测波长为246 nm,柱温30℃。结果 补骨脂素回归方程为:Y=84.44X+9.994,r=0.9999(n=12)。异补骨脂素回归方程为:Y=82.434X+8.8952,r=0.9999(n=12)。补骨脂素和异补骨脂素的线性范围均在4.04~151.5μg。结论 本方法操作简便、准确、专属性强、稳定,可用于癃闭舒片中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定。