巴豆生物碱上调TRAIL配体、caspase-8的表达诱导HeLa细胞凋亡的体外研究

目的研究巴豆生物碱对人宫颈HeLa细胞诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法 MTT法观察巴豆生物碱对HeLa细胞的抑制率;流式细胞仪检测HeLa细胞TRAIL及其受体DR5的表达及其巴豆生物碱对HeLa细胞TRAIL配体表达的影响;Caspase-8活性检测;RT-PCR检测TRAIL配体及Caspase-8、Caspase-3 mRNA的表达。结果巴豆生物碱对HeLa细胞生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系。流式细胞仪检测HeLa细胞TRAIL及其受体DR5的表达阳性,巴豆生物碱处理HeLa细胞后发现TRAIL配体的表达明显上调,Caspase-8活性明显增加,TRAIL配体、Caspase-3及Caspase-8 mRNA高表达。结论巴豆生物碱对人宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其诱导机制可能与上调TRAIL配体和Caspase-8mRNA的表达有关。     

马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的本研究旨在观察马钱子碱（Brucine）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的调控作用。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞以L-15培养基体外培养,用MTT法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高。结论Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

维康醇诱导小鼠B16F0细胞凋亡的研究

目的本研究探讨维康醇诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡的机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测维康醇对小鼠B16F0细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞致死率;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法观察细胞凋亡形态;Hoechst 33258染色观察药物处理后细胞形态的变化;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;Caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性;实时荧光定量(Real-Time PCR)法检测Bax、Bcl-2基因表达水平。结果维康醇能抑制B16F0细胞的恶性增殖,并呈剂量依赖性(P<0.05或P<0.01);细胞致死率也不断上升(P<0.05或P<0.01);在荧光显微镜下发现维康醇作用于B16F0细胞后出现明显的凋亡形态;随着维康醇浓度的增加,细胞凋亡率呈剂量依赖性增长(P<0.05或P<0.01);Caspase-3、Caspase-9活性逐渐升高(P<0.05或P<0.01);Bax/Bcl-2表达的比率上调(P<0.01)。结论维康醇能够通过抑制B16F0细胞的恶性增殖,最终诱导细胞的凋亡。其机制是通过上调Bax/Bcl-2表达的比率,活化Caspase-9并进一步激活Caspase-3诱导B16F0细胞凋亡。推测维康醇诱导B16F0细胞凋亡是通过线粒体调控的内源通路介导的。     

蓝萼甲素对人肝癌细胞HepG2细胞株的作用

目的观察蓝萼甲素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用。方法不同浓度蓝萼甲素处理HepG2细胞后,MTT检测24h,48h细胞生长抑制率,LDH试剂盒检测细胞LDH释放量,倒置显微镜观察细胞形态,RT-PCR法对凋亡相关基因Bc-l 2,bax和c-myc的mRNA表达进行检测,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在1.25~20μmol.L-1剂量范围内,蓝萼甲素对HepG2的生长有显著抑制作用,并呈剂量依赖性。蓝萼甲素5,10,20μmol.L-1能够使HepG2培养液中的LDH释放量显著增加,倒置相差显微镜观察,可见细胞明显皱缩。同时蓝萼甲素可使细胞Bc-l2表达减少,Bax表达增加,c-myc表达减少。结论蓝萼甲素可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与调控Bc-l2,Bax,c-myc的mRNA的表达有关。     

儿茶素对人肝癌细胞HepG2的影响

目的研究儿茶素[(+)-catechin,Cat]不同时间、不同浓度对人肝癌细胞(HepG2)的增殖、迁移能力的抑制及诱导凋亡作用。方法 HepG2细胞分别与不同浓度Cat作用,MTT法检测细胞增殖率的变化,显微镜观察细胞形态学变化,划痕法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色法检测HepG2的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 Cat(4~100mg·mL-1)能明显抑制人肝癌细胞HepG2的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示Cat(4mg.L-1)作用于HepG2细胞24h即可诱导细胞凋亡。免疫组织化学结果显示Cat(4~20mg·mL-1)的Bax和Caspase-3的表达呈浓度依赖性升高,而Bcl-2的表达呈浓度依赖性降低。结论 Cat可以一定程度的抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与其下调HepG2细胞内Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而促进Caspase-3活化有关。     

藻蓝蛋白联合全反式维甲酸诱导HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨全反式维甲酸和藻蓝蛋白联合用药对HeLa细胞生长的影响,并分析两者联合用药诱导细胞凋亡可能的分子机制。方法 MTT法检测全反式维甲酸和藻蓝蛋白单独及联合用药对HeLa细胞生长的影响,TUNEL法检测单独及联合用药HeLa细胞凋亡情况,免疫组化法检测Bcl-2基因的表达情况,Westren blot法检测Caspase-3的表达情况。结果 全反式维甲酸和藻蓝蛋白均具有抑制HeLa细胞生长的作用,当达到相同的抑制率时,联合藻蓝蛋白使用可以显著降低全反式维甲酸的使用剂量从而达到降低毒副作用的目的。2种药物联合用药处于中高抑制率时,2种药物为协同作用。两者联合用药可以显著下调Bcl-2和增加Caspase-3的表达水平从而引发细胞凋亡。结论 2种药物单独使用均能抑制HeLa细胞的生长,联合用药时该抑制作用更为显著。全反式维甲酸和藻蓝蛋白联合用药诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能是通过抑制bcl-2基因的表达、促进Caspase-3蛋白的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞死亡的。 关键词：全反式维甲酸;藻蓝蛋白;HeLa细胞;凋亡;增殖抑制     

红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其作用机制。方法以MTT法检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L分别在24、48、72 h对人宫颈癌HeLa细胞增殖作用的影响,并在倒置显微镜下观察HeLa细胞形态学改变。流式细胞仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡的影响。实时荧光定量PCR仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡中调节基因Bax、Bcl-2表达水平的影响。结果红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,表现为时间、浓度的相关性。红三叶异黄酮对HeLa细胞的形态学改变,表现为随药物浓度增加细胞固缩变小,并出现凋亡小体。流式细胞仪检测分析显示红三叶异黄酮能引起HeLa细胞凋亡,并随药物浓度的增加而明显,当红三叶异黄酮达到一定有效浓度时,诱导其细胞凋亡。通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖,能使Bax表达上升、Bcl-2表达下降,且呈剂量相关性。结论红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有抑制作用,并呈一定的剂量和时间相关性,提示通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖。     

新型金属铜络合物对SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的研究新型金属铜络合物(N-Cu)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法将不同浓度的N-Cu(0.3～24μmol.L-1)作用于体外培养的SMMC-7721细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 N-Cu可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈明显的量效与时效关系。随着药物浓度的增加,G0/G1期的细胞比率上升,G2/M和S期细胞比率下降,并促进凋亡率增加。N-Cu可上调细胞中Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,抑制Bcl-2基因及蛋白的表达,且均呈剂量依赖性。结论一定浓度的N-Cu可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。上调Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax比值,可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。     

姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)PI单染检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期,可以诱导细胞凋亡,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2的表达减少.结论 姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡.其分子作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关.     

姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用研究

目的 研究姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 实验分为4组,分别为对照组和10、20和40 μmol/L姜黄素组.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活性;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染检测Bel-7402细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达,Western blot检测细胞色素C和Caspase-3蛋白的表达.结果 姜黄素显著抑制Bel-7402细胞的活性(P＜0.01).姜黄素处理后,Bel-7402细胞的凋亡率明显增加,与对照组相比具有统计学差异(P＜0.05),且具有剂量依赖性.另外,姜黄素使Bax的mRNA表达上升,Bcl-2的mRNA表达下降,Bax/Bcl-2比值明显上升(P＜0.05).同时,细胞色素C和Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P＜0.01).结论 姜黄素可以抑制Bel-7402细胞的活性和增殖,促进Bel-7402细胞的凋亡,其机制可能与与姜黄素激活Bel-7402细胞线粒体凋亡途径有关.     

杨梅素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及凋亡通路的研究

目的研究杨梅素体外对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡,计算机分析细胞周期;Western Blot法检测caspase-3、caspase-9和survivin含量。结果杨梅素对HeLa细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度和时间依耐性;杨梅素体外诱导HeLa细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;杨梅素促进caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制survivin蛋白表达。结论杨梅素可抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡途径同时涉及细胞内途径和细胞外途径。     

活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨活血消瘿片(Huoxuexiaoying Tablet)含药血清对大鼠甲状腺细胞FRTL-5增殖和凋亡的影响。方法:用SD大鼠制备活血消瘿片含药血清及空白血清;采用CCK-8法检测不同浓度活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖活性的影响;按含药血清比例分为对照组和活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组,加药作用24h后,采用流式细胞术检测活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞周期及凋亡的影响;采用Western blot法检测各组细胞中特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、半胱天冬氨酸酶-9(Caspase-9)以及活化的Caspase-9(Cleaved-Caspase-9)蛋白的表达情况。结果:活血消瘿片含药血清呈浓度依赖趋势将FRTL-5细胞周期阻滞于G0/G1期;与对照组比较,各给药组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Western blot结果表明活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组细胞中Cyclin D1、PCNA、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量显著降低,Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导其凋亡。其机制可能与抑制CyclinD1、PCNA的表达,促进Caspase-3、Caspase-9的活化有关。     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

姜黄素对人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1凋亡的影响及相关机制研究

目的：探讨不同浓度姜黄素对人皮肤鳞状细胞癌细胞系SCL-1增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法：以体外培养的人皮肤鳞癌细胞系SCL-1为研究对象,用不同浓度的姜黄素处理后,CCK-8法观察姜黄素对SCL-1细胞的生长抑制作用,AnnxinV-FITC/PI法检测细胞早期凋亡,实时荧光定量RT-PCR法检测Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达,酶标比色法检测Caspase-3 及-9的活性.结果：浓度大于10 μmol·L-1姜黄素能显著抑制SCL-1细胞的增殖,诱导其凋亡,并上调细胞内Caspase-3及-9 mRNA的表达及活性.结论：姜黄素能抑制SCL-1细胞的增殖、诱导其凋亡,上调Caspase-3及-9的表达及活性是其可能的分子机制之一.     

葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性,采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用,且此作用呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

Norcantharidin induces apoptosis in HeLa cells through caspase, MAPK, and mitochondrial pathways

AIM: To investigate the mechanism of norcantharidin (NCTD)-induced HeLa cell apoptosis. METHODS: HeLa cell growth inhibition was measured by MTT method. Apoptosis was detected by Hoechst 33258 staining and agarose gel electrophoresis. Caspase activities were assayed using caspase apoptosis detection kit. Western blot analysis was used to evaluate the level of ICAD, ERK/p-ERK, JNK/p-JNK, and Bcl-XL/Bax expression. RESULTS: Norcantharidin inhibited HeLa cell growth in a time- and dose-dependent manner. HeLa cells treated with norcantharidin showed typical characteristics of apoptosis including the morphological changes and DNA fragmentation. Caspase family inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-8, -9 inhibitor (z-IETD-fmk, Ac-LEHD-CHO, respectively) and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) partially prevent norcantharidin-induced apoptosis, but initiator caspase-1 inhibitor (Ac-YVAD-fmk) did not. The activities of caspase-3, -8, and -9 were up-regulated after norcantharidin treatment. Furthermore, NCTD-induced activat     

志苓胶囊通过激活caspase-3抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究志苓胶囊(ZLJN,抗癌复方Ⅱ号)对人慢性髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响。方法将志苓胶囊按其不同中西药成分比例配制成中药、西药和复方组,与K562细胞共培养后,采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率;Annexin V-FITC/PI标记法、DNA倍体分析及DNA片段化分析检测细胞凋亡;流式细胞仪检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3酶原(pro-caspase-3)表达。结果不同药物组与K562细胞共培养后,细胞生长受抑制,集落形成率降低。Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;DNA倍体分析可见亚二倍体峰(凋亡峰);琼脂糖电泳见典型的DNA梯状带。流式细胞检测caspase-3活性增强,Western blot检测pro-caspase-3表达减弱。结论志苓胶囊可有效抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与caspase-3活性增强有关。     

尼美舒利抑制肺腺癌细胞增殖机制研究

目的探讨尼美舒利对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用噻唑蓝比色法（MTT）法观察尼美舒利对肺腺癌细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,RT-PCR测定suvivin mRNA的表达变化,Western blot检测suvivin和caspase-3蛋白的表达变化。结果各浓度尼美舒利可抑制A549细胞的生长,其半数抑制量（IC50）为162.25μmol/L。尼美舒利可诱导肺腺癌细胞凋亡,最高凋亡率为（21.4±3.1）%。细胞周期分析表明,尼美舒利能使肺腺癌细胞G0/G1期比例增高,S期比例降低。尼美舒利作用后,环氧合酶2（COX-2）和survivin mRNA及蛋白的表达较对照组降低（P〈0.05）,而caspase-3蛋白的表达则较对照组明显增高（P〈0.05）。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利通过抑制COX-2和survivin的表达,导致caspase-3上调,抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响。方法 水蒸气蒸馏法提取黔产莪术挥发油,配制成40、80、120、160、200、240、280 mg/L浓度梯度,干预SW1463细胞24、48、72 h,MTT法检测莪术油对SW1463细胞的增殖抑制率;Giemsa染色法观察莪术油对SW1463细胞凋亡形态的影响;蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测Capase-3、Bax与Bcl-2蛋白表达。结果 莪术油对SW1463细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间-剂量相关性,24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为144.33、134.11、120.04 mg/L;Giemsa染色可见细胞明显的凋亡形态学特征;莪术油干预SW1463细胞24 h后,与对照组比较,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上调、Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.05）。结论 莪术油能明显抑制SW1463细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3和Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。