碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验.选用含1、5、10、50、100、500 ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72 h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P＜0.05),且具有剂量依赖性.②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%.凋亡细胞百分比由7.2%±O.56%递减为2.3%±0.49%(P＜0.05).结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对虹膜色素上皮细胞增殖及细胞周期的影响

目的:了解重组腺相关病毒(rAAV)载体介导碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对体外培养的虹膜色素上皮细胞(IPE)增殖及细胞周期的影响.方法:在体外培养的IPE细胞中加入转染rAAV-bFGF基因细胞和未转染细胞的培养液上清,继续培养4 h或1 d后分别应用MTT法和流式细胞仪检测IPE细胞的生长状况.结果:MTT法结果显示,加入rAAV-bFGF基因转染组培养液上清的IPE细胞D值为0.338±0.047,对照组为0.277±0.064,2组相比,t=3.745,P<0.05.流式细胞仪检测结果显示:加入rAAV-bFGF基因转染组培养液上清的S期IPE细胞为(21.19±1.93)%,与对照组(16.47±2.37)%相比.t=-3.448,P<0.05.结论:转染rAAV-bFGF的IPE细胞分泌的bFGF具有生物活性,这为rAAV-bFGF转染IPE细胞移植治疗视网膜色素变性提供了理论支持.     

补益营卫方对衰老人皮肤成纤维细胞数量及细胞周期的影响

目的观察经补益营卫方药物血清作用后,衰老人皮肤成纤维细胞数量和细胞周期的变化。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞,将细胞分为年轻对照组、老龄对照组、补益营卫高剂量组、补益营卫中剂量组、补益营卫低剂量组。年轻对照组和老龄对照组用10%胎牛血清常规培养;补益营卫高、中、低剂量组分别用10%补益营卫方高、中、低剂量大鼠血清培养,五组细胞连续培养8d。通过细胞计数法观察细胞数量的变化;流式细胞术观察细胞周期。结果补益营卫高、中、低药物血清组的细胞数量和S期细胞比例均增高,且均高于年轻对照组和老龄对照组(P<0.05),以高剂量组增高比例明显。结论补益营卫方可促进衰老人皮肤成纤维细胞增殖(S期细胞比例增高),此作用有剂量依赖性。     

驻极体对成纤维细胞生长周期的影响

目的: 研究驻极体对成纤维细胞生长周期的影响及其调控机制。方法: 利用流式细胞术通过二维点图研究聚四氟乙烯(PTFE)驻极体对成纤维细胞(3T3)生长周期的时相参数的影响。结果: (1)负极性PTFE驻极体作用于3T3细胞24 h后, S期内的细胞数明显增加。(2)负极性驻极体在促进细胞生长的同时对部分细胞有促进其凋亡的作用。(3)正极性驻极体作用于3T3细胞24 h后,G1期内的细胞数增加,G2期和S期中的细胞数减少。结论: 负极性驻极体具有促进细胞生长的作用,正极性驻极体具有抑制3T3细胞生长的作用。     

驻极体对成纤维细胞生长和表面电荷的影响

目的：研究驻极体对成纤维细胞表面电荷的影响及其细胞表面电荷与细胞生长、细胞凋亡的关系。方法：选用±300 V和±1 000 V驻极体分别作用成纤维细胞24、48和72 h,用流式细胞术和细胞电泳技术测定成纤维细胞的生长周期和细胞表面电荷。结果：(1)负极性驻极体作用成纤维细胞使细胞的电泳率和S期内的细胞数显著增加。(2)成纤维细胞表面负电荷和S期内细胞数的增加量与驻极体的表面电位成正比。(3)负极性驻极体能减少凋亡细胞的表面电荷量。(4)正极性驻极体作用成纤维细胞使G2和S期中的细胞数减少,同时减少了细胞表面的负电荷数量。结论：负极性驻极体具有促进成纤维细胞生长和增加细胞表面负电荷量的作用。正极性驻极体具有抑制成纤维细胞生长和降低细胞表面电荷密度的作用。凋亡细胞的表面电荷量较正常细胞要少。     

FSP1、肾成纤维细胞与肾脏间质纤维化

肾小管萎缩 ,肾间质淋巴细胞和单核细胞浸润和纤维化在慢性肾脏疾病中总是伴同出现 ,三者关系密切 ,互为因果 ,称为肾脏间质纤维化 (ｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ,ＲＩＦ)或肾小管间质纤维化[1 ] (ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ ,ＴＩＦ)。肾脏间质纤维化是多种肾脏疾病走向终末期肾衰的共同途径[2 ,3 ] ,近年研究发现成纤维细胞特异蛋白 (ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ,ＦＳＰ1 )和肾成纤维细胞 (ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ)在ＲＩＦ的产生中具有重要作用 ,下面就此…     

神经生长因子对成纤维细胞游离细胞核的促转录作用

据Ｇｒｅｎｆｅｌｌ法提取和纯化了小鼠正常成纤维细胞及其恶性转化细胞的细胞核。通过电镜观察和标志酶的测定，表明此法纯化的细胞核不存在胞膜和细胞浆成分的污染。然后我们用ＮＧＦ刺激纯化的细胞核，发现ＮＧＦ能提高细胞核的体外转录活性。正常细胞比转化细胞更敏感，并且随ＮＧＦ的浓度的升高，作用更为明显。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为热门的生物因子,为具有多种功能的多肽生长因子,能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞的增殖,是体内重要的创伤愈合因子之一。bFGF有主动诱导分化和加速生长作用,可以促进牙周膜成纤维细胞的分化和增殖,促进牙周组织的修复和再生。     

Hath1基因的重组腺病毒转染新生小鼠耳蜗成纤维细胞的初步研究

目的检测含有人Hath1基因的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1对新生小鼠耳蜗成纤维细胞的转染情况及Hath1基因在新生小鼠耳蜗成纤维细胞中的表达情况。方法培养新生小鼠耳蜗成纤维细胞,用含有目的基因Hath1的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1对其进行转染,转染后24 h通过荧光显微镜观察新生小鼠耳蜗成纤维细胞的转染情况,并通过免疫荧光的方法检测Hath1基因在新生小鼠耳蜗成纤维细胞中的表达情况。结果含有人Hath1基因的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1能高效转染新生小鼠耳蜗成纤维细胞,Hath1基因在新生小鼠耳蜗成纤维细胞中能有效表达。结论含有人Hath1基因的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1对新生小鼠耳蜗成纤维细胞的高效转染和有效表达为研究Hath1基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。     

IL-17抑制大鼠肾脏成纤维细胞NRK-49F向肌成纤维细胞转化

目的:研究白细胞介素-17(IL-17)对大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F)转化为肌成纤维细胞?表达细胞外基质的影响,并进一步探讨该调节作用可能涉及的分子机制?方法:以转化生长因子β(TGF-β)诱导培养NRK-49F细胞,采用Western blot检测IL-17对NRK-49F表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞外基质Ⅰ型胶原和纤连蛋白的影响;并运用real-time PCR分析NRK-49F 在诱导培养24?48?72 h后细胞外基质Ⅰ型胶原和纤连蛋白mRNA的表达水平及IL-17的调节作用?最后,运用Western blot检测细胞内Smad与非Smad通路中相关信号分子的表达及其磷酸化水平,以解释IL-17对NRK-49F 调节作用的分子机制?结果:IL-17抑制NRK-49F细胞表达α-SMA,并抑制其表达细胞外基质Ⅰ型胶原和纤连蛋白?当IL-17对NRK-49F发挥上述抑制作用时,并未影响经典Smad 信号分子的表达,而是通过抑制非Smad通路Akt-TSC2-p70S6K的活化来实现的?结论:IL-17通过抑制TGF-β的非Smad通路Akt-TSC2-p70S6K的活化,从而抑制NRK-49F转化为肌成纤维细胞,并抑制其表达细胞外基质?     

PTEN体外转染对乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响

目的探讨外源野生型PTEN基因对人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法利用脂质体介导法将重组质粒pBP-wt-PTEN导入人乳腺癌细胞ZR-75-1中,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果经嘌呤霉素筛选得到稳定表达细胞株;重组质粒pBP-wt-PTEN稳定转染可明显抑制ZR-75-1细胞的体外增殖,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个较为明显的凋亡峰。结论转染外源性野生型PTEN基因可使ZR-75-1细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。     

大肠杆菌脂多糖对皮肤成纤维细胞数量及增殖周期的影响

目的:观察大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,皮肤成纤维细胞数量和增殖周期的变化规律。方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度(0.005~1.0μg/m l)的大肠杆菌LPS(E.coli055:B5),通过细胞计数法连续观察1~9 d细胞数量的变化;于LPS加入后第6天细胞处于对数生长期时,采用流式细胞术观察细胞增殖周期。结果:LPS刺激浓度在0.005~0.1μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高,且呈浓度依赖性;当LPS浓度为0.5μg/m l时,上述作用开始降低,但仍高于对照组;当浓度达到1.0μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例均低于对照组。结论:在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖,而过高浓度LPS则呈现抑制效应。     

PTEN对大鼠肾成纤维细胞增殖能力的影响

目的 观察PTEN基因编码蛋白对大鼠肾成纤维细胞增殖能力的影响。方法 用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞，MTT法检测细胞增殖活力，免疫细胞化学检测PCNA蛋白表达。结果 PTEN基因编码蛋白明显抑制大鼠肾成纤维细胞增殖，并显著减少PCNA的表达。结论 PTEN能抑制大鼠肾成纤维细胞增殖，可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用。     

青蒿琥酯对大鼠肾小球系膜细胞细胞周期的影响

目的 观察青蒿琥酯（An）对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMC）细胞周期的影响。方法 用不同浓度的青蒿琥酯刺激多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,流式细胞仪检测其细胞周期的变化。结果 青蒿琥酯使细胞有丝分裂被阻滞于G0期,S期细胞比例下降,G0期细胞比例增加。结论 青蒿琥酯能够抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖,这种作用可能是通过其抑制细胞分裂、复制实现的。     

抑癌基因PTEN对人原代子宫内膜细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:通过人原代子宫内膜细胞实验研究第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对子宫内膜异位症发生?发展的作用和意义?方法:利用慢病毒载体分别在人原代子宫内膜细胞中过表达和静默PTEN基因的表达;流式细胞仪检测慢病毒感染之后不同PTEN表达组的细胞周期及凋亡变化情况?结果:PTEN过表达组人原代子宫内膜细胞G0/G1期比例增加,与对照组比较差异具有统计学意义,G2/M期比例逐渐减少,细胞周期阻滞在G0/G1期;空白对照组?PTEN过表达组?PTEN静默组的细胞凋亡率分别是(11.70 ± 0.03)%?(15.80 ± 0.14)%?(5.33 ± 0.08)%?结论:PTEN可显著增加人原代子宫内膜细胞凋亡,抑制细胞周期,对子宫内膜异位症的发生发展有一定抑制作用?     

TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响

目的研究TNP-470对血管平滑肌细胞生长的影响。方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响。结果TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L。TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001)。TNP-470处理组CyclinD1蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组(32.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001)。结论TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinD1、CDK4和p27蛋白的表达有关。     

转染p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响

目的 探讨p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响。方法 通过脂质介导的基因转移技术将野生型P16基因导入人膀胱癌细胞系T24中,绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果 与对照组相比,转染p16基因的膀胱癌细胞生长速率降低,流式细胞仪检测显示S期及增殖指数明显降低。结论 p16基因能阻止肿瘤细胞进入S期,抑制肿瘤细胞DNA的合成,对膀胱癌细胞生长起明显抑制作用。     

血清饥饿法处理胎儿成纤维细胞周期同步化的研究

目的 探讨不同的血清饥饿方法和饥饿时间对水牛胎儿成纤维细胞(BFF)周期的影响.方法 用血清直接饥饿和梯度饥饿处理水牛胎儿成纤维细胞.结果 血清直接饥饿处理或梯度饥饿处理后其G_0/G_1期成纤维细胞的比例均显著高于一般培养组[(88.40±0.75)%、(87.00±0.78)%vs(84.09±1.16)%;P＜0.05],但血清直接饥饿组和梯度饥饿组之间差异无显著性(P＞0.05).用血清直接饥饿法处理水牛胎儿成纤维细胞3d时的G_0/G_1期细胞比例显著高于0、1、2及6d的细胞比例(P＜0.05),但3、4及5d的G_0/G_1期细胞比例之间差异不显著(P＞0.05).结论 血清直接饥饿和梯度饥饿法均能有效地使水牛胎儿成纤维细胞同步于G_0/G_1期;血清直接饥饿处理细胞3d可取得较好的细胞周期同步化效果.