ERK/MAPK信号转导途径在急性髓系白血病发病机制中的作用

目的:研究急性髓系白血病细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(M APK)的表达水平及其意义。方法:以急性髓系白血病细胞株HL-60细胞,31例初治急性髓系白血病(AM L)、14例AM L完全缓解(CR)和15例正常供髓者骨髓细胞为研究对象,应用流式细胞术检测磷酸化ERK 1/2信号分子的表达。结果:HL-60细胞,初治AM L、AM L-CR及正常骨髓细胞均表达磷酸化ERK 1/2,但表达水平不同。HL-60、初治AM L细胞与AM L-CR、正常细胞相比,磷酸化ERK 1/2表达水平均显著增高(P<0.05),高表达磷酸化ERK 1/2的初治AM L比例为80.6%(25/31)。结论:ERK/M APK信号途径的构成性激活在急性髓系白血病的发病中起重要作用。     

三氧化二砷诱导粒细胞性白血病原代细胞凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对慢性粒细胞性白血病（CML）慢性期原代细胞生长的影响。方法：通过细胞增殖,活力检测,形态学观察,粒系髓系集落形成（CFU－GM）集落培养,凝胶电泳等方法检测。结果：As2O3可抑制CML原代细胞增殖,经平均浓度5．0umol.L^-1 As2O3处理5d时抑制率为50％,经大于等于2．6－5．0umol.L^-1 As2O3培养2－5d,可引起细胞凋亡的形态学改变及DNA片段化,As2O3浓度2．5umol.L^-1,CFU－GM的形成抑制率＞50％,结论：As2O3可以抑制CML慢性期原代细胞的增殖,并诱导凋。     

三氧化二砷对慢性髓细胞性白血病VEGF表达的影响

目的 研究慢性髓细胞性白血病(ＣＭＬ)患者血管内皮生长因子(ＶＥＧＦ)的表达及三氧化二砷(Ａｓ２Ｏ３)对其表达的影响。方法 采用酶联免疫吸附法(ＥＬＩＳＡ)检测正常人和初治ＣＭＬ患者骨髓细胞及ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２细胞培养上清液中ＶＥＧＦ的含量。结果ＣＭＬ患者(ｎ＝２０)骨髓细胞培养上清液ＶＥＧＦ浓度为 ６４９．１６ｐｇ/ｍｌ,明显高于正常对照组的 １５２．１６ｐｇ/ｍｌ(Ｐ＜０．００１),而 ５×１０－６ｍｏｌ/ＬＡｓ２Ｏ３可明显降低ＶＥＧＦ的表达水平(Ｐ＜０．０５);细胞系Ｋ５６２有ＶＥＧＦ的过高表达,Ｋ５６２经２．５×１０－６ｍｏｌ/Ｌ及５×１０－６ｍｏl/Ｌ浓度Ａｓ２Ｏ３处理７２小时后ＶＥＧＦ浓度分别下降６６．４%和 ７８．０%。结论 ＶＥＧＦ在 ＣＭＬ患者骨髓细胞存在高表达;Ａｓ２Ｏ３可能通过抑制 ＶＥＧＦ的表达而阻断血管形成。     

小剂量阿糖胞苷联合三氧化二砷治疗老年急性髓系白血病的临床研究

目的观察小剂量阿糖胞苷（LD-Ara－c）联合三氧化二砷（As2O3）治疗老年急性髓系白血病的疗效。方法17例患者应用三氧化二砷每个疗程的第1～5及8-12天,静脉给药,剂量为0．25mg／kg,半个小时内并加用维生素C1g加强As：0,的作用,同时第1～14天皮下注射小剂量阿糖胞苷,2次／d,剂量为10mg／m2,第21天复查骨髓;完全缓解（CR）患者,骨髓造血恢复者予以每月维持治疗,方案为：第1～5天皮下注射阿糖胞苷10mg／m。2次／d,第1和第4天静注三氧化二砷剂量同;未达缓解者继续原方案诱导治疗。结果完全缓解5例（29．4％）,部分缓解4例（23．5％）,总有效率（52．9％）;8例在治疗中出现疾病进展放弃治疗,治疗中死亡2例,化疗相关死亡率（11．8％）。结论小剂量阿糖胞苷（LD-Ara-c）联合三氧化二砷（As2O3）治疗老年急性髓系白血病有明显的疗效且耐受性较好。     

三氧化二砷对APL促凋亡作用的研究

目的：研究如何调控细胞凋亡（Apoptosis)的相关基因,诱导白血病细胞凋亡达到治疗白血病。应用三氧化二砷（As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）并研究其作用机理及其临床相关指标的改变,方法：应用原位末端标记法对18例APL（以FAB分类标准做骨髓形态学分析确诊）患者在使用As2O3治疗前后进行程序化细胞死亡（programmed cell death,PCD)检测,同时做骨髓形态学分析,观察骨髓增生程度,早幼粒细胞计数等临床指标的改变,结果：使用As2O3治疗后,APL患者骨髓细胞PCD明显增高,与治疗前比较有显著性差异（P＜0．01）,FAB形态学分析,治疗后骨髓中颗粒增多的异常早幼粒细胞明显减低（达到PR,CR水平）,与治疗前比较有显著性差异（P‘＜01）,。骨髓有核细胞增生度治疗后比治疗前稍低,多为增生或明显,结论：As2O3可诱导APL白血病细胞凋亡,降低骨髓早幼粒细胞计数,且不引起骨髓抑制,使患者达到部分缓解至完全缓解的作用。     

三氧化二砷诱导宫颈癌细胞凋亡的研究

目的:研究三氧化二砷能否诱导宫颈癌细胞凋亡。方法:AnnexinV/PI双染,流式法检测早期凋亡;倒置显微镜观察、HE染色检测凋亡过程的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡晚期出现的DNALadder。结论:适合浓度的三氧化二砷可以诱导宫颈癌细胞发生明显凋亡。     

三氧化二砷对APL促凋亡作用的研究

目的 :研究如何调控细胞凋亡 (Apoptosis)的相关基因 ,诱导白血病细胞凋亡达到治疗白血病。应用三氧化二砷 (As2 O3)治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)并研究其作用机理及其临床相关指标的改变。方法 :应用原位末端标记法对 18例APL(以FAB分类标准做骨髓形态学分析确诊 )患者在使用As2 O3 治疗前后进行程序化细胞死亡 (programmedcelldeath ,PCD)检测 ,同时做骨髓形态学分析 ,观察骨髓增生程度、早幼粒细胞计数等临床指标的改变。结果 :使用As2 O3 治疗后 ,APL患者骨髓细胞PCD明显增高 ,与治疗前比较有显著性差异(P <0 .0 1)。FAB形态学分析 ,治疗后骨髓中颗粒增多的异常早幼粒细胞明显减低 (达到PR、CR水平 ) ,与治疗前比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ;骨髓有核细胞增生度治疗后比治疗前稍低 ,多为增生活跃或明显活跃。结论 :As2 O3 可诱导APL白血病细胞凋亡 ,降低骨髓早幼粒细胞计数 ,且不引起骨髓抑制 ,使患者达到部分缓解至完全缓解的作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达。利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况。结果血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调。成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株。ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调。随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞。结论血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异。     

丝裂原细胞外激酶抑制剂致垂头综合征文献病例分析CSCD

目的探讨丝裂原细胞外激酶(MEK)抑制剂相关垂头综合征(DHS)的临床特点。方法检索PubMed和Embase数据库(截至2020年12月20日),收集报道MEK抑制剂致DHS的临床研究和病例报告类文献,提取患者相关信息(性别、年龄、原发病、MEK抑制剂应用情况、DHS发生时间、临床表现、治疗与转归等)进行描述性统计分析。结果纳入分析的患者共7例,美国4例,法国2例,德国1例;男性4例,女性3例;年龄56~76岁;原发病为黑色素瘤者6例,Erdheim-Chester病1例;所用MEK抑制剂为司美替尼者3例,考比替尼2例,比美替尼和曲美替尼各1例。首次用药至发生DHS的时间为0.5~20个月,中位时间1(1,2)个月;主要症状为颈部疼痛、颈伸肌无力和抬头受限,可伴有颈部僵硬,疼痛可扩散至肩部、头枕部,个别表现为肩胛间疼痛。诊断DHS时7例患者血清肌酸激酶(CK)水平均升高(150~1011 U/L)。诊断DHS后,5例患者停服MEK抑制剂,DHS症状缓解或消失;2例患者加用糖皮质激素治疗1~4周,DHS症状未缓解,停服MEK抑制剂,DHS症状改善。7例患者DHS症状缓解、血清CK恢复正常的时间为停药后14~30 d。3例患者减量再次用药,1例DHS未复发;2例DHS轻度复发,可自行缓解或维持病情稳定。结论MEK抑制剂相关DHS多发生在用药1个月内,伴有血清CK升高。及时停药,DHS症状可缓解或消失,血清CK水平可恢复正常。     

急性髓细胞白血病FLT3-ITD基因的表达及临床意义

目的 通过对初诊急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者进行FLT3 -ITD基因突变检测,探讨FLT3-ITD基因突变与AML临床特征的相关性,为AML的临床分层治疗、分子靶向治疗及预后判断提供理论依据.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCB)检测60例初治AML患者和10例对照组患者骨髓FLT3-ITD基因突变.结果 60例初治AML患者突变阳性率为25.0％( 15/60),10例对照组患者骨髓均未检测到该突变;依据法美英协作组(FAB)分型标准备亚型FLT3 -ITD突变率不同,其中以M3、M5型突变率较高;60例初治AML中,28例老年AML组与32例非老年AML组FLT3-ITD基因表达水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05);FLT3-ITD阳性组患者具有外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高的临床特点,并且FLT3-ITD阳性组化疗后完全缓解率(CR)低于FLT3-ITD阴性组(P＜0.05).结论 FLT3-ITD基因突变在AML患者中存在一定的突变率,且多见于M3、M5型患者,FLT3-ITD阳性患者具有外周血白细胞数、骨髓白血病细胞比例高,CR低的临床特点.     

Inhibition of mitogen-activated protein kinase kinase enhances apoptosis induced by arsenic trioxide in human breast cancer MCF-7 cells

Arsenic trioxide (As2O3) has recently been used to treat acute promyelocytic leukaemia and has activity in vitro against several solid tumour cell lines where the induction of differentiation and apoptosis are the prime effects. The mechanism of As2O3-induced cell death has yet to be clarified, especially in solid cancers. In the present study, the human breast cancer cell line MCF-7 was examined as a cellular model for As2O3 treatment. The involvement of extracellular signal-regulated kinase (ERK), p38 and c-Jun N-terminal kinase (JNK) was investigated in As2O3-induced cell death. 3. It was found that As2O3 activates the prosurvival mitogen-activated protein kinase kinase (MEK)/ERK pathway in MCF-7 cells, which, conversely, may compromise the efficacy of As2O3. Hence, a combination treatment of As2O3 and MEK inhibitors was investigated to determine whether this treatment could lead to enhanced growth inhibition and apoptosis in MCF-7 cells. 4. Inhibition of MEK/ERK with the pharmacological inhibitors U0126 (10 micromol/L) or PD98059 (20 micromol/L) together with As2O3 (2 and 5 micromol/L) resulted in a significant enhancement of growth inhibition in breast cancer MCF-7 cells as determined by the 3-(4,5-dimethyl-2 thiazoyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay and [Methyl-3H]-thymidine incorporation. Furthermore, the results demonstrated that combined treatment with As2O3 and the MEK1/2 inhibitor U0126 could augment breast cancer MCF-7 cell apoptosis approximately twofold compared with the effects of the two drugs alone, as determined by Hoechst 33258 or annexin V/propidium iodide (PI) staining and flow cytometry. 5. In addition, As2O3 activated p38 in a dose-dependent manner, but had no effect on JNK1/2. Treatment with a p38 inhibitor did not prevent As2O3-induced apoptosis. 6. In conclusion, the results of the present study showed that enhanced apoptosis is detected in breast cancer MCF-7 cells in the presence of As2O3 and an MEK inhibitor, which may be a new promising adjuvant to current breast cancer treatments.     

As_2O_3诱导MGC803细胞凋亡中TRF1、TRF2蛋白表达及端粒稳定性的作用

目的分析三氧化二砷(As2O3)对人胃癌MGC803细胞端粒重复序列结合因子1、2(TRF1、TRF2)表达及端粒稳定性的影响,探讨As2O3诱导细胞凋亡的机制。方法体外培养MGC803细胞,MTT比色实验分析As2O3对MGC803细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测MGC803细胞凋亡,进行染色体端-端融合分析及Westernblot检测TRF1、TRF2蛋白表达。结果MTT法显示As2O3对人胃癌MGC803细胞有明显的抑制作用,且呈时间、剂量依赖关系。流式细胞术检测出现典型的凋亡峰,并随As2O3浓度增加和作用时间延长而增高,对照组未见此改变。染色体端-端融合分析显示5μmol·L-1As2O3处理MGC803细胞48h染色体融和率明显高于对照组。Westernblot分析结果表明TRF1在5μmol·L-1As2O3处理MGC803细胞48h后,表达上升,而TRF2表达下降。结论实验结果提示As2O3通过下调TRF2蛋白表达、上调TRF1蛋白表达及使染色体端-端融合,从而诱导MGC803细胞凋亡。     

三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及其端粒酶hTERT-mRNA表达影响的实验研究

目的　探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法　不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达。结果　在 0 1、1 0和 5 0 μmol·L-13种浓度的As2 O3作用下 ,HL 60细胞凋亡率分别为 2 2 8%± 0 40 %、2 5 5 %± 0 2 2 %和 47 5 7%± 2 79% ;端粒酶亚单位hTERT mRNA表达的相对值分别为 73 97%、63 70 %和 2 9 0 4%。细胞凋亡率在 5 0 μmol·L-1与 0 1和 1 0μmol·L-1浓度组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;端粒酶亚单位表达的差异也有显著性 (P <0 0 5 )。As2 O3诱导HL 60细胞凋亡效应与其抑制端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达相关。结论　As2 O3对HL 60细胞具有凋亡诱导效应 ,且对其端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达具有抑制作用 ,两者均呈现浓度依赖效应。As2 O3可能通过抑制HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达而诱导肿瘤细胞凋亡     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对K5 6 2 ADM细胞的诱导凋亡效应 ,探讨其作用机制。方法 :应用噻唑蓝 (MTT)比色法、Wright Giemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术 (FCM)观察K5 6 2 ADM细胞凋亡 ;FCM测定K5 6 2 ADM细胞Fas、Bcl 2、P5 3蛋白水平的变化 ;比色法检测Caspase3活性变化。结果 :As2 O3 可抑制K5 6 2 ADM细胞增殖 ;K5 6 2 ADM呈典型凋亡形态改变 ;DNA电泳可见梯状条带出现 ;FCM分析示亚G1期细胞比例增高 ,G2 M期阻滞 ;Fas、P5 3蛋白表达明显上调 ;Caspase3活性明显增强。结论 :As2 O3 可通过Fas依赖性Caspase3激活而诱导K5 6 2 ADM细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡及对NF-κB表达的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡及对NF-κB表达的影响。方法:流式细胞仪(FCM)检测不同浓度As2O3作用后48 hSGC-7901的凋亡率,凝胶电泳迁移改变分析法(EMSA)及免疫组织化学法检测As2O3处理48 h后NF-κB活性及表达。结果:As2O3可诱导SGC-7901凋亡(P<0.05)并降低NF-kB的活性及表达(P<0.05),有浓度依赖性。结论:As2O3能诱导SGC-7901凋亡,并降低NF-κB活性及表达,这可能是As2O3抗肿瘤的机制之一。     

Molecular mechanisms in C-Phycocyanin induced apoptosis in human chronic myeloid leukemia cell line-K562

C-Phycocyanin (C-PC), the major light harvesting biliprotein from Spirulina platensis is of greater importance because of its various biological and pharmacological properties. It is a water soluble, non-toxic fluorescent protein pigment with potent anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-cancer properties. In the present study the effect of highly purified C-PC was tested on growth and multiplication of human chronic myeloid leukemia cell line (K562). The results indicate significant decrease (49%) in the proliferation of K562 cells treated with 50 microM C-PC up to 48 h. Further studies involving fluorescence and electron microscope revealed characteristic apoptotic features like cell shrinkage, membrane blebbing and nuclear condensation. Agarose electrophoresis of genomic DNA of cells treated with C-PC showed fragmentation pattern typical for apoptotic cells. Flow cytometric analysis of cells treated with 25 and 50 microM C-PC for 48 h showed 14.11 and 20.93% cells in sub-G0/G1 phase, respectively. C-PC treatment of K562 cells also resulted in release of cytochrome c into the cytosol and poly(ADP) ribose polymerase (PARP) cleavage. These studies also showed down regulation of anti-apoptotic Bcl-2 but without any changes in pro-apoptotic Bax and thereby tilting the Bcl-2/Bax ratio towards apoptosis. These effects of C-PC appear to be mediated through entry of C-PC into the cytosol by an unknown mechanism. The present study thus demonstrates that C-PC induces apoptosis in K562 cells by cytochrome c release from mitochondria into the cytosol, PARP cleavage and down regulation of Bcl-2.     

蒽贝素对三氧化二砷抑制白血病干细胞生长的影响

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白小分子抑制剂蒽贝素对三氧化二砷抑制白血病干细胞生长的影响.方法 将白血病干细胞分成三氧化二砷干预组、蒽贝素干预组、联合干预组和生理盐水阴性对照组.采用MTT法考察各组对白血病干细胞增殖的影响.采用流式细胞术考察各组对三氧化二砷诱导的细胞凋亡的影响.细胞划痕实验考察各组对白血病干细胞的运动性和迁移能力.以非糖尿病型严重的联合免疫缺陷(non-obese diabetic severely combined immunodeficient,NOD-SCID)小鼠制备白血病动物模型,考察蒽贝素联合三氧化二砷对白血病荷瘤小鼠生存期的影响.结果 与生理盐水组和单独给药组相比,联合干预组能明显抑制白血病干细胞的增殖,差异有统计学意义(P＜0.05).流式结果显示蒽贝素能够通过抑制X连锁凋亡抑制蛋白,促进白血病干细胞凋亡.细胞划痕实验结果显示联合干预能够有效抑制白血病干细胞的迁移.体内治疗实验结果显示,蒽贝素与三氧化二砷联合干预能够显著延长荷瘤小鼠的中位生存期.结论 X连锁凋亡抑制蛋白小分子抑制剂蒽贝素能够有效增强三氧化二砷对白血病干细胞的增殖抑制作用,蒽贝素联合三氧化二砷是一种潜在治疗白血病干细胞的方法.     

扇贝多肽对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的建立中波紫外线对体外培养的HaCat细胞辐射损伤病理模型,探讨扇贝多肽(PCF)对HaCat细胞辐射损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCat细胞分组并给予相应的药物,经UVB照射后,琼脂糖凝胶电泳观察各组的DNA ladder;流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的含量;Western-blot检测ERKs,JNKs和p38的水平。结果PCF能减少UVB所致的HaCat细胞DNA片段的出现,减少UVB诱导的HaCat细胞内的Caspase-3的含量,还能提高ERKs的水平,但降低JNKs及p38的水平。结论PCF能抑制UVB辐射诱导的细胞凋亡,对UVB辐射损伤的细胞具有保护作用。其作用机制可能是通过调节MAPKs的信号通路和Caspase级联实现。     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡途径的研究

目的　探讨细胞线粒体跨膜电位 (Δψm)和半胱氨酶3(Caspase 3)在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　以Namalwa、SGC790 1和Bcap37细胞为体外模型 ,流式细胞仪检测亚G1期细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻量等方法鉴定细胞凋亡 ;碘化丙啶 (PI) /Rhodamine(Rh12 3)双染色检测Δψm变化并观察了Caspase 3抑制剂DEVD CHO对As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡的影响。结果　As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡效应与其诱导细胞Δψm下降和Caspase 3活性升高相关 ,抑制Caspase 3活性后As2 O3 使细胞选择坏死通路。结论　As2 O3 可能通过诱导细胞Δψm下降激活Caspase 3并最终使肿瘤细胞凋亡。