体外培养破骨细胞的功能观察

观察破骨细胞在离体状态下的骨吸收功能。新鲜牛皮质骨经锯式切片机横切成５０μｍ厚０．５×０．５ｃｍ大小骨片。参照已建立的破骨细胞分离培养方法，从新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠四肢长骨分离破骨细胞，培养于２．５ｃｍ细胞培养皿内或上述骨片上，相差倒置显微镜或扫描电镜观察，可见培养的细胞具有典型破骨细胞的形态特点，接种子骨片上的破骨细胞分别培养１、３、５、７天，扫描电镜观察，可见破骨细胞能在骨片表面形成吸收陷窝，其形态多样，深浅不一，边界清晰，底面粗糙，而且随培养时间延长，陷窝扩大，数量增多。结论，破骨细胞在体外培养条件下具有良好的骨吸收功能，可进行药物干预的研究。     

破骨细胞及其骨吸收调控研究进展

一、概述破骨细胞是一个高度分化的多核巨细胞,直接参与骨吸收,是骨组织吸收的主要功能细胞。破骨细胞的来源:由于长期以来对于破骨细胞(Osteoclast,OC)的来源问题一直不清楚,给研究工作带来许多困难,因而对临床各种骨疾患的诊断及其防治水平,也不可能进一步深入和提高。对于破骨细胞来源的认识,在本世纪40～70年代,普遍应用的经典理论为多潜能的骨源细胞学说,认为破骨细胞是由骨源细胞融合而成。直至70年代中期还认为OC与成骨细胞(OB)为共同的祖代来源。这种观点多年来一直是疑问,不能被证实,现已被否定。自80年代初开始,提出了OC来源…     

破骨细胞体外培养研究进展

破骨细胞是骨吸收的主要功能细胞,体外培养破骨细胞是骨吸收研究和抑制骨吸收药物开发研究的基础.该文综述破骨细胞体外培养常用的5种方法及近年研究进展,并对各种方法进行比较.成熟破骨细胞分离培养法仍是目前获得成熟破骨细胞的最佳途径;骨髓诱导破骨细胞培养法是目前最常用的破骨细胞培养法;脾干细胞诱导培养法和外周血单核细胞诱导培养法是近年新发展起来的培养方法,能排除骨髓基质细胞及其他造血干细胞干扰,更具有应用价值;骨巨细胞瘤破骨细胞样细胞分离培养法是其他破骨细胞培养方法的一个重要补充.     

体外培养破骨细胞的标志酶染色

破骨细胞体外培养是从细胞与分子水平研究骨吸收机理与骨质疏松症防治药物的基础［１］。由于破骨细胞数量少,很难分离到纯的破骨细胞,体外培养所获破骨细胞常与其他细胞混合存在,因此从这些混杂细胞内辨别出破骨细胞尤为重要。鉴别破骨细胞的方法有多种,其中最方便而具特异性的指标为标志酶ＴＲＡＰ与ＴｒＡＴＰａｓｅ染色,作者应用细胞化学方法成功地对体外培养破骨细胞的标志酶进行了染色,报道如下。１　材料和方法１１　动物　出生２４小时内的Ｗｉｓｔａｒ大鼠,本所实验动物房提供,沪医实验动物准字：３４。１２　试剂　Ｍ…     

新伐他汀体外对破骨细胞性骨吸收及大鼠骨代谢的影响

目的探讨新伐他汀体外对破骨细胞骨吸收功能的作用及其大鼠骨代谢的影响.方法采用体外成熟破骨细胞和大鼠颅盖骨培养体系,检测新伐他汀作用7 d后破骨细胞骨吸收陷窝和培养上清钙的变化;检测大鼠颅盖骨培养上清碱磷酶和钙含量,组织学观察颅盖骨形态学变化.结果新伐他汀体外可明显抑制破骨细胞骨吸收陷窝的形成及培养上清钙的释放,新伐他汀体外可增强大鼠颅盖骨培养上清碱磷酶的活性,组织学观察到新伐他汀使大鼠颅盖骨矿化增强.结论新伐他汀体外不仅可促进大鼠颅盖骨的成骨活性,并且可明显抑制破骨细胞骨吸收功能,对骨质疏松有重要的防治作用.     

氟对破骨细胞骨吸收陷窝的影响

目的 观察氟对大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)形成的骨吸收陷窝的影响。方法 通过机械分离新生大鼠乳鼠四肢长骨方法体外培养Oc,并于1 d后加入含不同浓度氟的培养基,观察氟对OC形成的骨吸收陷窝数量及面积的影响。结果 随染氟剂量的增加,骨吸收陷窝数及陷窝面积逐渐增加,各剂量组与对照组比差异均有显著性(P<0.05),其中尤以4.0mg/L染氟组最为明显(P<0.01)。结论 在一定的剂量范围内,随染氟剂量的增加,OC的骨吸收作用是增强的。     

破骨细胞骨吸收机制的研究进展

人体骨骼依赖于骨吸收和骨形成之间的动态平衡 ,当破骨细胞的骨吸收功能超过成骨细胞的骨形成作用后 ,这一平衡的失调将导致骨质疏松或骨质破坏。因妇女绝经、过量服用糖皮质激素等多种因素引起的骨质疏松 ,Ｐａｇｅｔ’ｓ病 ,以及癌症骨转移造成的骨破坏 ,都与破骨细胞异常活跃的分化增殖和骨吸收功能有关。因此 ,破骨细胞 (ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ,ＯＣ)是治疗上述疾病的靶细胞[1,2 ] 。1　破骨细胞分化形成的微环境ＯＣ是一种特殊类型的多核巨细胞 ,来源于ＣＤ3 4+ 的骨髓造血干细胞 ,其分化主要受骨髓基质细胞和成骨细胞所分泌的集落细胞…     

重组人骨保护素对体外培养兔破骨细胞的影响

目的观察重组人骨保护素(recombinanthumanosteoprotegerin,rhOPG)对体外培养兔破骨细胞(osteoclast,OC)生存和功能的影响。方法将rhOPG用于干预从新生兔分离出的OC,于干预后1、3、7d取细胞玻片、皮质骨片进行HE、Giemsa、甲苯胺蓝染色,并观察抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性细胞和骨片吸收陷窝,扫描电镜进一步观察吸收陷窝形态。结果分离培养的兔OC多核形态明显;rhOPG对TRAP阳性OC生存的影响,1、3d结果差别不明显,7d的结果差异有显著性(P<0.05);rhOPG能够明显地抑制OC在骨片上形成吸收陷窝,三个时点计数结果差异均有显著性(P<0.01)。结论rhOPG可明显地抑制体外培养兔OC的骨吸收功能。     

体外破骨细胞分离培养方法的建立

本研究采用出生２４小时内的新生兔，从其四肢长骨中分离出破骨细胞，与盖玻片、骨磨片共同培养。相差显微镜观察到分离的多核细胞能够移动，并在骨片上形成吸收陷窝，扫描电镜观察到这些吸收陷窝内的胶原原纤维。另外，这些细胞用目前公认的鉴定破骨细胞的标志－酸性磷酸酶和降钙素染色，呈阳性反应。这些结果均表明：分离、培养破骨细胞的实验技术是成功的。     

破骨细胞骨吸收机制研究进展

以绝经后骨量迅速下降为主要特征的绝经后骨质疏松症是生殖健康领域中的重要问题。破骨细胞 (osteoclast)作为骨吸收的主要细胞 ,对于骨量的变化具重要作用。因此 ,研究破骨细胞的生物学特性及骨吸收的机理对于预防和治疗骨质疏松症等代谢性骨病具有十分重要的意义。本综述着重论述破骨细胞的生物学特性及骨吸收的分子生物学机制和机理 ,抑制破骨细胞骨吸收的相关因素 ,以期进一步推动破骨细胞骨吸收功能的研究 ,加强骨质疏松等骨代谢疾病的治疗。一、破骨细胞的生物学特性破骨细胞来源于希腊文“Osteon”(骨 )和“klio”(破坏 )两词的组合…     

应用体外分离培养破骨细胞的技术评价人工骨

本文介绍如何应用分离培养破骨细胞的技术评价人工骨。家兔４８只,随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四组,每组１２只,人工造成家兔同侧桡骨１０ｍｍ缺损。分别植入不同材料的骨移植物,Ａ组为珊瑚羟基磷灰石,Ｂ组为人工合成羟基磷灰石,Ｃ组为人工多聚体,Ｄ组为自体骨。移植术后６、８、１２、１６周,分期处死动物,取出植入动物体内骨移植物并制成骨磨片,与体外分离的破骨细胞共同培养１周,扫描电镜发现,破骨细胞能够在植入动物体内     

应用颅骨-破骨细胞联合培养体系研究先天性成骨不全破骨细胞骨吸收活性

目的 先天性成骨不全(OI)的主要临床表现为骨矿化过程不良,骨量丢失,骨骼畸形和骨折.但是其发病机理,尤其在其骨再建过程中成骨细胞(OB)及破骨细胞(OC)的功能改变尚不清楚.本实验以先天性成骨不全小鼠模型,oim/oim为基础,应用破骨细胞-颅骨联合培养体系研究OB和OC两种细胞在骨再建过程中的功能改变和相互作用.方法 本实验采用小鼠颅骨(CAL)组织培养模型.本模型采用颅骨组织培养,利用颅骨中成骨细胞可以从颅骨片游离出到培养皿及颅骨表面,从而支持培养皿及颅骨表面前体破骨细胞分化成为成熟破骨细胞,并吸收颅骨产生吸收陷窝.本实验中,共2组颅骨-破骨细胞联合培养体系:(1) 对照组(WT)颅骨与对照破骨细胞(WTCAL-WTOC);(2) OI颅骨与OI破骨细胞(OICAL-OIOC).联合培养颅骨及骨髓组织14日后,以TRAP免疫组化染色方法识别破骨细胞,ALP免疫组化染色方法识别成骨细胞,计算OC/OB.破骨细胞骨吸收活性以颅骨表面骨吸收陷窝占颅骨表面百分比并除以培养系统中的破骨细胞数表达.结果 第14日,OICAL-OIOC组的破骨细胞数低于WTCAL-WTOC组(92.50+23.18/mm2 对比 379.00+ 136.53/mm2,P<0.01); OICAL-OIOC组的OC/OB明显低于WTCAL-WTOC组(0.68+0.57对比1.65+0.67,P<0.01);OICAL-OIOC组OI破骨细胞的吸收能力高于WTCAL-WTOC组(27.76+22.81对比7.32+5.09,P<0.001).结论 oim/oim小鼠破骨细胞-颅骨培养体系中破骨细胞的数目明显减少,成骨细胞支持破骨细胞分化能力减低;但其破骨细胞骨吸收活性明显增强,以代偿成骨细胞功能,维持骨再建过程中成骨过程及骨吸收过程的平衡.     

破骨细胞体外培养技术

由于破骨细胞在骨质疏松及相关疾病中的关键作用,对它的研究成为攻克这些疾病的必由之路。选择便捷高效的体外培养方法,是开展体外破骨细胞研究的前提。破骨细胞是终末分化细胞,不能增殖传代,因此破骨细胞的体外培养一直是一个具有挑战性的难题。本文就常见的破骨细胞体外培养技术和鉴定方法做简要概述。     

破骨细胞与骨吸收

骨吸收可发生于骨骼系统的各个部位．可见于全身性疾患与局部病变，骨骼肿瘤与骨囊肿，还可见于正常的生理性骨吸收，维持骨的生长、代谢平衡。骨吸收与破骨细胞相伴随，对破骨细胞的形态、结构、功能及来源的研究探讨，对各种骨疾病防治，具有重要的意义。     

破骨细胞骨吸收的机制

破骨细胞骨吸收的机制Ｓ．Ｌ．Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ，Ｘ．Ｃａｏ，Ｃ．Ｌｉ，破骨细胞是单核细胞／巨噬细胞家族的一员，是主要的骨吸收细胞。生成或分离破骨细胞技术的发展使人们了解这些细胞是怎样降解骨组织的。吸收起始于破骨细胞前体附着于骨处，在那里它们变为多核...     

黔岭藿对体外培养的破骨细胞作用的研究

从新生兔四肢长骨中分离的破骨细胞与牛骨片在体外培养后，加入不同浓度黔岭霍注射液再培养，并设立对照，用倒置相差显微镜观察黔岭霍对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响。结果显示黔岭著３个浓度组（０．１５ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ）与对照组比较均能抑制破骨细胞在骨片上形成吸收陷窝的数量，增加药物浓度抑制作用亦趋增强（Ｐ＜０．０５）。     

高产量高纯度的破骨细胞分离培养

目的 获得高产量高纯度破骨细胞，为骨吸收的体外研究提供丰富的细胞来源。方法 将经典分离乳兔四肢骨破骨细胞的方法与1，25(OH)2D3诱导骨髓干细胞生成破骨样细胞的方法相结合，并应用0．05％胰蛋白酶／0．02％ EDTA联合消化的方法将其纯化。结果 该方法可诱导生成大量的破骨样细胞，0．05％胰蛋白酶／0．02％ EDTA联合消化可使破骨细胞纯化率达95％。诱导生成的破骨样细胞TRAP染色阳性，体外培养具有噬骨能力。结论 该培养方法可产生大量高纯度的破骨样细胞，可为破骨细胞的体外分子生物学研究提供丰富的细胞来源。     

破骨细胞的骨吸收机制

破骨细胞是一种巨大的多核细胞,起源于单核巨噬细胞/单核系造血前体细胞,在骨吸收过程中发挥重要作用。破骨细胞的形成和活性异常可导致骨质疏松、类风湿关节炎、关节置换后假体无菌性松动等许多疾病,因此破骨细胞是治疗这些疾病的靶点之一。目前对破骨细胞的分化形成研究较多,但对破骨细胞如何识别、降解骨组织方面的研究较少。骨盐被认为是破骨细胞识别的重要成分,但是近年来的研究发现骨基质不是破骨细胞激活的必需成分,玻连蛋白包被的培养皿也能使破骨细胞出现骨吸收的特有形态,玻连蛋白对破骨细胞的激活有重要的作用。此外,最近的研究证明骨基质降解产物的吞入和分泌对破骨细胞的分化和功能的保持有重要意义。这些分子机制的研究可能为骨骼疾病提供新的治疗靶点。     

BM210955对破骨细胞骨吸收的抑制作用

细胞水平研究国产双磷酸盐药物－ＢＭ２１０９５５的骨吸收抑制作用。由１日龄ＳＤ大鼠四肢长骨分离破骨细胞（ＯＣ）并接种于牛皮质骨薄切片上,在不同浓度ＢＭ２１０９５５作用下培养,定时取骨片作ＴＲＡＰ免疫组化染色,计数阳性多核细胞后,经超声去除细胞后作甲苯胺蓝染色,光镜下作吸收陷窝计数,数据以ｘ±ｓ表示,并与对照比较作ｔ检验。结果显示：①ＢＭ２１０９５５能降低体外培养ＯＣ的数目,１０－８ｍｏｌ／Ｌ组的ＴＲＡＰ阳性多核细胞较对照组减少７３％,差异具有非常显著性,Ｐ＜０．０１。②ＢＭ２１０９５５抑制ＯＣ的陷窝形成能力,１０－１０、１０－８ｍｏｌ／Ｌ组的抑制率分别为７６．３２％和８７．９９％,均与对照有明显差异,Ｐ＜０．０１。③上述结果与剂量有关,剂量越高,抑制效应越明显     

应用体外分离培养破骨细胞的技术评价人工骨

本文介绍如何应用分离培养破骨细胞的技术评价人工骨。家兔48只,随机分成A、B、C、D四组,每组12只,人工造成家兔同侧桡骨10mm缺损。分别植入不同材料的骨移植物,A组为珊瑚羟基磷灰石,B组为人工合成羟基磷灰石,C组为人工多聚体,D组为自体骨。移植术后6、8、12、16周,分期处死动物,取出植入动物体内骨移植物并制成骨磨片,与体外分离的破骨细胞共同培育1周,扫描电镜发现,破骨细胞能够在植入动物体内的人工骨片上产生骨吸收。实验比较表明各组植骨材料的成骨能力依次为:自体骨>珊瑚羟基磷灰石>人工合成羟基磷灰石>人工多聚体(P<0.01或P<0.05),珊瑚羟基磷灰石的成骨能力优于其它两种人工骨,但逊于自体骨。