白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常

目的 明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位异常.方法 应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达,同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平.结果 皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处(P＜0.05),MDA水平显著高于正常供皮处(P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达,而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质,胞核中表达量非常低.蛋白质印迹结果显示,核蛋白中Nrf2表达水平,白癜风患者皮损处(0.11±0.03)明显低于正常供皮处(0.27±0.06)和健康对照(0.32±0.02,均P＜0.01);胞质蛋白Nrf2表达水平,皮损处(0.63±0.04)与正常供皮处(0.61±0.03)和健康对照(0.65±0.04)差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常.     

蕈样肉芽肿患者HLA-DR、LFA-1、ICAM-1、CD4和CD8抗原的表达

目的:探讨蕈样肉芽肿(MF)患者外周血淋巴细胞和皮损中人白细胞DR抗原(HLA-DR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、分化群抗原4、8(CD4、CD8)抗原表达及其意义。方法:应用流式细胞仪和免疫组化技术检测15例MF患者的外周血和皮损HLA-DR、LFA-1、ICAM-1、CD4、CD8抗原的表达并与正常人相比较。结果:MF患者外周血HLA-DR 、LFA-1 及ICAM-1 淋巴细胞比正常对照增高(P均<0.01);MF患者外周血CD4 淋巴细胞较正常对照下降(P<0.001);MF患者皮损中HLA-DR 细胞、CD4 细胞、CD8 细胞及LFA-1 、ICAM-1 细胞的表达均比正常对照增高。结论:MF患者外周血淋巴细胞和皮损HLA-DR和LFA-1、ICAM-1、CD4、CD8抗原表达普遍存在异常,与MF的发病密切相关。     

CD28、CD80、CD86在银屑病皮损中的表达

目的研究共同刺激分子CD28、CD80、CD86在银屑病患者皮损中的表达及其在银屑病发生、发展中的作用.方法采用免疫组织化学ABC法检测22例银屑病患者皮损和15例正常对照皮肤中CD28、CD80、CD86的表达水平.结果银屑病皮损中CD28在真皮乳头、表皮基底层及棘层有较强的表达,与正常皮肤相比有显著性差异(P＜0.01);CD80、CD86在表皮颗粒层、棘层的表达相对正常皮肤均有明显的增强(P＜0.01).结论CD28、CD80、CD86在银屑病发病中起重要作用.     

雌激素可导致白癜风患者外周血淋巴细胞过氧化氢的产生和醌介导的DNA损伤

迄今为止,已有大量的体内外试验证实白癜风患者表皮内和系统性过氧化氢(H2O2)水平增加,并可通过外用一种能导致表皮过氧化氢酶水平及外周血细胞的其他酶恢复正常的假性过氧化氢酶-K.U.Schallreuter(PC-KU S)而降低其水平。最近,有资料显示雌激素和其他芳香族类固醇的氧化代谢可     

系统性红斑狼疮患者血清中IL-10抑制抗原递呈细胞表面HLA-DR和CD80的表达

目的:研究系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者血清中的IL-10对正常单核细胞分化形成的树突状细胞(dendriticcells,DCs)及其前体单核细胞抗原递呈相关膜表面分子表达的影响。方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),并采用GM-CSF IL-4方案诱导分化形成DCs,在此过程中加入不同IL-10水平的SLE患者血清或混有IL-10中和抗体的SLE患者血清,联合培养7天后收集细胞,经形态学鉴定,以流式细胞术检测HLA-DR、CD80、CD86的表达。结果:在SLE血清的作用下,DCs的HLA-DR、CD80的表达下调,CD86表达不受影响;中和SLE血清中的IL-10后,HLA-DR、CD80表达能够恢复。其前体细胞单核细胞的HLA-DR、CD80的表达也可被SLE血清下调,用中和抗体中和IL-10后,其表达可部分恢复。结论:高IL-10水平的SLE血清能够抑制DCs及其前体单核细胞表面分子HLA-DR、CD80的表达,对抗原递呈细胞的功能可能产生影响。     

三甲氧苄嗪对脂肪来源间充质干细胞氧化应激损伤的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究三甲氧苄嗪（TMZ）对脂肪来源间充质干细胞（ADSCs）氧化应激凋亡的影响及其机制。 方法 使用双酶消化获得SD大鼠脂肪组织的ADSCs,进行流式细胞学鉴定和多向分化潜能评估;应用过氧化氢（H2O2）诱导的ADSCs损伤凋亡模型,使用不同浓度的TMZ（250 μmol/L、500 μmol/L）干预氧化应激损伤的过程;Hoechst 33342染色定性分析凋亡细胞形态;JC-1线粒体膜电位染色和线粒体电镜检测观察TMZ作用下线粒体损伤逆转情况;Western blot检测TMZ对线粒体凋亡通路蛋白的影响;通过检测活性氧簇（ROS）、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛(MDA)水平评价TMZ对ADSCs抗氧化能力的作用。结果 获取的ADSCs,阳性表达CD29和CD90抗原,低或不表达CD34、CD45及CD31;ADSCs能够成功被诱导分化为脂肪细胞和骨性细胞;H2O2处理ADSCs,细胞凋亡数量增加,线粒体膜电位降低,线粒体结构破坏崩解,保护性凋亡蛋白（Bc12）表达下降,凋亡蛋白（Bax、Bad、Caspase3）表达上调;胞内ROS含量与MDA的质量摩尔浓度上升,SOD的活性和GSH的质量摩尔浓度降低。TMZ对ADSCs有浓度依赖性的保护作用,可降低H2O2诱导的细胞凋亡,逆转线粒体低电位,减轻H2O2对线粒体结构的损伤,提高Bc12的表达和下调Bax、Bad及Caspase3的表达,减低过量的ROS和 MDA,恢复SOD和GSH的抗氧化系统功能。结论 TMZ通过调控保护性蛋白的表达和提高内源性抗氧化能力,提高ADSCs 的存活率,从而逆转氧化应激损伤。     

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对过氧化氢（H2O2）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的改善作用。方法：体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H2O2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H2O2损伤组细胞经H2O2（400 μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H2O2损伤12 h后加入含50 μg/mL AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果：H2O2损伤后HAECs 丙二醛（MDA）含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧（ROS）水平显著增加,超氧化物歧化酶（SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性及线粒体膜电位显著降低;H2O2损伤的HAECs 经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论：AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一     

尖锐湿疣皮损区的免疫状态与免疫治疗疗效的关系

目的研究尖锐湿疣患者皮损区的免疫状态与免疫治疗疗效的关系。方法观察5%咪喹莫特乳膏治疗30例尖锐湿疣的临床疗效,并采用免疫组化方法检测治疗前皮损区人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)、CD1a、CD16、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达。结果治疗后8周,20例(66.7%)患者有效。咪喹莫特治疗有效者,治疗前其皮损HLA-DR、CD1a、CD16及ICAM-1阳性表达明显多于无效者(P<0.05)。结论尖锐湿疣皮损处HLA-DR、CD1a、CD16及ICAM-1阳性表达多者提示免疫治疗有效。     

IL-13a1及IL-13Ra2在特应性皮炎患者皮损中的表达

目的：探讨IL-13Ra1及IL-13Ra2在特应性皮炎(AD)中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学EnVision两步法检测35例AD患者(21例进行期，14例静止期)皮损区、非皮损区和15例正常人皮肤组织中IL-13Ra1及IL-13Ra2蛋白表达。结果：IL-13Ra1和IL-13Ra2在AD非皮损区以及正常人皮肤的基底层细胞低表达，在AD皮损区中呈表达高(P<0.01),并且表达范围扩大至表皮全层和真皮乳头层；在AD非皮损区和正常人皮肤之间无明显差异(P>0.05)。进行期AD皮损区IL-13Ra2表达高于静止期(P<0.05);而IL-13Ra1在进行期和静止期AD皮损区中无明显差异(P>0.05)。结论：IL-13Ra1及IL-13Ra2与AD发生发展有关，针对IL-13Ra1和IL-13Ra2的生物制剂可以成为AD治疗的新策略。     

HlA-DR、CD40和CD1a在桥本甲状腺炎甲状腺滤泡上皮中的表达

目的 通过检测正常人和桥本甲状腺炎（HT）患者中甲状腺组织HLA-DR、CD40和CD1a的表达,探讨HLA-DR、CD40和CD1a在桥本甲状腺炎发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学技术（S-P法）检测桥本甲状腺炎36例和正常对照组（甲状腺腺瘤旁正常甲状腺）10例甲状腺上皮细胞中HLA-DR、CD40和CD1a的表达水平.结果 正常甲状腺组织甲状腺滤泡上皮细胞（TEC）几乎不表达HLA-DR、CD40和CD1a,而桥本甲状腺炎甲状腺滤泡上皮高表达HLA-DR、CD40和CD1a,两组间有显著性差异（P＜0.01）.结论 HLA-DR、CD40和CD1a的异常表达可能与桥本甲状腺炎的发病有关.     

多参数流式细胞术分析骨髓增生异常综合征患者原始细胞的免疫表型特点

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者原始细胞免疫表型特点及其在诊断、分型及预后中的临床意义.方法:应用多参数流式细胞术,对41例MDS患者和24例非MDS患者原始细胞免疫标志的表达率进行检测.结果:MDS组与非MDS(non-MDS)组相比,CD34、CD123和CD133在原始细胞群表达显著增高(P＜0.01)...     

多巴色素异构酶突变对体外培养黑素小体成熟和抗氧化应激能力的影响

目的 研究多巴色素异构酶(Dct)突变对黑素细胞黑素小体成熟和活性氧基(ROS)清除能力的影响.方法 用透射电子显微镜技术和Fontana-Masson嗜银染色观察小鼠Dct突变slaty黑素细胞和野生型melan-a黑素细胞胞内黑素小体发育及嗜银着色的优黑素颗粒分布;用分光光度计法和蛋白印迹技术测定酪氨酸酶活性和酪氨酸酶,酪氨酸酶相关蛋白1(Tyrp-1)和Dct蛋白表达水平;用二氯荧光素标记法测定两种黑素细胞在3 J/cm2长波紫外线(UVA)照射前后胞内ROS水平的变化.结果 透射电子显微镜观察发现slaty黑素细胞胞内缺乏成熟的Ⅳ期黑素小体,Fontana-Masson嗜银染色也证实slaty黑素细胞胞质几乎完全缺乏嗜银染阳性的优黑素颗粒.与melan-a黑素细胞相比,slaty黑素细胞的离心团块颜色变浅,但slaty细胞的酪氨酸酶活性及蛋白质表达水平与melan-a细胞接近.UVA照射前slaty和melan-a细胞胞内的ROS相对荧光强度分别为8.9±0.7和8.9±2.5,但照射后slaty细胞胞内的ROS相对荧光强度急剧增加,与melan-a黑素细胞相比,差异有统计学意义(18.0±0.3比13.6±3.0,P=0.024).结论 Dct突变导致黑素细胞低色素化表型,影响黑素小体的发育成熟和降低细胞对氧化应激的抵抗能力,尤其是在UVA诱导氧化应激存在时更为明显.     

甲状腺相关眼病患者与正常人眼眶前脂肪细胞表面抗原表达的比较

目的:研究甲状腺相关眼病(TAO)与正常人眼眶前脂肪细胞表面抗原的表达.方法:采用组织块培养法对TAO和正常人的眼眶前脂肪细胞进行体外培养,用流式细胞术对其细胞表面抗原CD29,CD44,CD49d,HLA-DR进行检测.结果:TAO和正常人眼眶前脂肪细胞均表达CD29,CD44和CD49d,TAO患者较正常人表达HLA-DR明显增强(P＜0.05).结论:TAO患者与正常人的眼眶前脂肪细胞均来源于间充质干细胞,TAO的眼眶前脂肪细胞可能参与了TAO的眶内炎症.     

The expression of CD40 and CD40L on the surface of peripheral blood mononuclear cells in asthmatic rats and the effect of anti-CD40L McAb on Th1 and Th2 cytokines

Objective： To investigate the expression of CD40 and CD40 ligand （CD4OL） on the surface of peripheral blood mononuclear cells（PBMCs） in asthmatic rats and the effect of anti-CD40L McAb on cytokines of PBMCs. Methods： Flow cytometry and RT-PCR were used to detect the expression of CD40 and CD40L of PBMCs in asthmatic rats. After the PBMCs was treated with anti-CD40L McAb, ELISA was used to detect the IL-4 and IFN-γ levels of culture supernatants. Results： Compared with the normal control group, the expression of CD40 and CD40L of PBMCs in asthmatic rats increased （P 〈 0.05）. Compared with the untreated group, the level of IL-γ and the ratio of IL-4/IFN-γ decreased after the PBMCs was treated with anti-CD40L McAb（P 〈 0.05）. Conclusion： The expression of CD40 and CD40L on the surface of PBMCs in asthmatic rats was up-regulated. Anti-CD40L McAb can rectify the imbalance of Th1 and Th2 cytokines.     

催乳素对人甲状腺细胞表面HLA-DR和CD40表达的影响

目的研究催乳素(PRL)对人甲状腺细胞表面HLA-DR和CD40表达的调节作用,以探讨PRL影响Graves'病(GD)发生、发展的可能机制.方法将传代培养的GD和对照组(取自结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤病变周围组织)甲状腺细胞分别经羊PRL(oPRL)、IFN-γ或IL-4以及oPRL和IFN-γ(10 U/ml)或IL-4(5 ng/ml)作用7天.利用免疫荧光染色和流式细胞仪测定其表面HLA-DR和CD40的表达.结果 oPRL(12.5-1000 ng/ml)对甲状腺细胞表面HLA-DR和CD40的表达均没有明显的直接影响.而且它对IFN-γ刺激两组甲状腺细胞及IL-4刺激GD甲状腺细胞表达HLA-DR的作用亦无明显影响.oPRL能够拮抗IFN-γ对两组甲状腺细胞表面CD40表达的刺激作用和IL-4的抑制作用.此拮抗作用与PRL的浓度有关.在200(GD:P＜0.01及P＜0.05;对照组:P＜0.05)和1000 ng/ml(P＜0.01及P＜0.05)时,它能使IFN-γ刺激的阳性细胞百分率及平均荧光强度(dMF)均显著减少.在12.5和1000 ng/ml时能使受到IL-4抑制作用的两组甲状腺细胞中CD40+细胞百分率以及在1000 ng/ml时能使GD甲状腺细胞相应的dMF明显增加(P＜0.05).对于后者,与IL-4单独作用时比,oPRL在12.5和1000 ng/ml时GD甲状腺细胞的dMF明显增加(P＜0.05).结论 PRL能够通过拮抗IFN-γ和IL-4的作用而间接影响甲状腺细胞表面CD40的表达,并且此作用与PRL的浓度有关.这可能是PRL影响GD发生、发展的一个重要机制.     

中药治疗白癜风的作用机制研究进展

综述中药治疗白癜风的作用机制研究进展。目前现代医学对白癜风发病机制提出四种学说:自身免疫学说、氧化应激学说、黑素细胞自毁学说、遗传学说。从免疫调节、抗氧化应激、黑素细胞保护与功能调节等方面总结中药治疗白癜风的现代研究进展,为治疗白癜风的新药研发提供思路与科学依据。     

缺氧及氧化损伤后GEC粘附分子表达与粘附性改变

目的：探讨缺氧、氧化损伤对培养人肾小球内皮细胞（GEC）粘附分子表达及GEC与PMN粘附力的影响。方法：采用化学缺氧、氧化损伤模型，免疫荧光观察GEC粘附分子P、E选择素和ICAM-1的表达，微管吸吮直接测定单个GEC、PMN细胞间粘附力的改变。结果：缺氧、氧化损伤均可导致GEC细胞、P、E选择素和ICAM-1的表达增强，以ICAM-1最明显，同时GEC、PMN间粘附力增强，加用ICAM-1抗体可显著抑制这一粘附力的增加。结论：缺氧、氧化损伤后GEC粘附分子表达增强，GEC、PMN细胞间粘附力的改变与GEC粘附分子变化密切相关。     

脂肪组织来源干细胞的细胞生物学研究

目的 探索从脂肪抽吸物中脂质部分分离、培养脂肪组织来源干细胞(ASCs)的方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定.方法 酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;MTT比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性.结果 原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;MTT比色法活性测定均证实ASCs具有很强的增殖活性,细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性.丫啶橙染色3、4、6、8代无明显衰老.流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均成阳性;HLA-DR、CD133表达为阴性;免疫化学染色发现Ⅷ因子、CD31、CD34、CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"0"染色可见胞浆内有大量红染颗粒.结论 自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化.