丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的　研究天然药物丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗增生性瘢痕的有效药物。方法　以四甲基偶氮唑 (MTT)法和特异性荧光染色及原位末端标记技术检测丹参酮ⅡA对成纤维细胞增殖及凋亡的影响。结果　丹参酮ⅡA对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,且呈浓度和时间依赖性。采用荧光染色和TUNEL法检测凋亡指数 ,均呈剂量依赖性增高 (P <0 0 1)。结论　丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,并且能够诱导其发生凋亡 ,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物提供了新的思路。     

大黄素对肺成纤维细胞增殖及细胞周期的影响

目的　探讨大黄素对体外培养肺成纤维细胞 (L F)增殖的作用。方法　采用体外细胞培养、透射电镜、流式细胞仪和同位素检测等技术 ,比较了在大黄素作用下 L F的增殖 ,并检测大黄素作用下 L F的细胞增殖周期和电镜下的形态学特征。结果　大黄素能够抑制体外培养 L F的增殖 (P<0 .0 1) ,并随着剂量增加抑制效应增强 ,大黄素可以提高 L F细胞周期中 G1 期细胞的比例 (P<0 .0 1) ,减少 S期和 G2 期细胞的比例 (P<0 .0 1)。同时 ,发现大黄素作用组的 L F形态上与对照组无明显差异。结论　大黄素具有抑制 L F增殖和阻止 L F由 G1 期进入 S期和 G2期的作用 ,同时 ,本研究的最大剂量大黄素 (10 0 μg/ ml)对 L F细胞形态无明显损伤。     

敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的:通过观察敏咳清颗粒对体外培养的肺成纤维细胞(lung fibroblast,LFB)增殖、凋亡的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制.方法:将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高浓度组、敏咳清低浓度组、养阴清肺糖浆高浓度组、养阴清肺糖浆低浓组、地塞米松组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用MTT法检测LFB增殖,TUNEL法检测LFB凋亡.结果:①各组含药血清均可以不同程度地抑制肝素刺激下LIB的增殖,以敏咳清颗粒高剂量组抑制LFB增殖的作用最强,48 h的抑制作用强于24 h,呈剂量依赖性;②各组均出现不同程度细胞凋亡的形态改变,以敏咳清高剂量组诱导LFB凋亡细胞最多.结论:敏咳清颗粒能显著抑制LFB增殖,诱导LFB凋亡.     

环孢霉素A联合红细胞生成素治疗纯红细胞再生障碍性贫血7例

异常免疫介导的红系细胞造血抑制是纯红细胞再生障碍性贫血（PRCA）（简称纯红再障）最常见的病理生理机制。目前免疫抑制剂已成为治疗PRCA的主要药物。为了进一步探寻治疗PRCA的合理方案，我们采用环孢霉素A（CsA）（田可胶囊：中国华北制药集团）联合红细胞生成素（Epo）（益比奥：沈阳三生制药股份有限公司）治疗PRCA均达到基本治愈，现报告如下。     

尿激酶对大鼠胸膜成纤维细胞增殖与细胞凋亡的影响

目的:研究尿激酶(UK)对大鼠胸膜成纤维细胞(FB)增殖与细胞凋亡的影响. 方法:将大鼠胸膜FB原代培养,4～12代用于实验,FB与不同浓度UK共培养24～96 h;用光学显微镜观察其形态学改变;荧光染色查找凋亡小体;流式细胞技术观察有无凋亡细胞出现. 结果:UK以时间和浓度依赖的方式抑制细胞生长,但未发现凋亡小体,流式细胞技术没有检测到凋亡细胞. 结论:UK能够抑制FB增殖,其机制与细胞凋亡无关.     

人胚肺二倍体细胞KMB17凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法,具有简便、快速的特点。用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞（ＫＭＢ１７）在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程。结果：无血清诱导后１ｈ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态;３ｈ后,少数细胞（１％～５％）出现圆缩;６ｈ后,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形,体积缩小。荧光及电镜下可将细胞凋亡形态上分为两个阶段,第一阶段细胞出现     

全反式维甲酸对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞（HTCFs）增殖及凋亡的影响。方法：体外培养HTCFs,采用流式细胞仪检测细胞周期改变、细胞凋亡率、抗凋亡基因bcl-2的水平,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA,研究不同浓度的ATRA对体外培养的HTCFs增殖及凋亡的影响,同时与丝裂霉素C（MMC）作比较。结果：用ATRA和MMC处理后,HTCFs细胞周期的分布发生了明显的变化,表现为G⁰/G¹期细胞数增多,S期细胞数减少;1×10_-9mol/L的ATRA即可诱导细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡率显著增高;ATRA组bcl-2的水平比空白对照组大约低了一倍;DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示：ATRA组为呈一定间隔的DNA梯形条带,MMC组呈现弥漫的片状图谱,无明显的条带。结论：ATRA可有效抑制体外培养的HTCFs的增殖,但与MMC的作用方式不同。MMC主要造成细胞坏死,而ATRA则主要诱导细胞凋亡,无明显细胞毒作用。     

尿激酶对大鼠肺成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨尿激酶(Urokinase,UK)对大鼠肺成纤维细胞凋亡的影响。方法:5只SD雄性大鼠气管内灌注博莱霉素造肺纤维化模型,将模型组肺成纤维细胞与不同浓度的尿激酶培养24~96h,流式细胞术测定细胞凋亡。结果:尿激酶以时间和浓度依赖的方式抑制肺成纤维细胞生长,流式细胞术检测到凋亡小体。结论:尿激酶能抑制肺成纤维细胞增殖,与凋亡有关。     

泛素-蛋白酶体抑制剂对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响

目的:探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响,并初步探索其机制.方法:18只SD大鼠随机分成模型组(n=9)与对照组(n=9),模型组气管内一次性注入博莱霉素(5 mg/kg),对照组气管内注入等量无菌生理盐水,分别于7,28,45 d每组处死动物3只,提取成纤维细胞进行培养并用相同浓度的...     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin, DHA ）对人肺腺癌细胞株A549的作用及其机制。方法将对数生长期的A549细胞分成对照组（control）和双氢青蒿素组（DHA）。对照组细胞常规培养,双氢青蒿素组细胞培养体系中加入双氢青蒿素（500 nmol／L）。各组细胞培养72 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR检测细胞p85、 Akt、 Bax、 Bcl－2基因表达,免疫蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞中p85、 Akt、 p－p85, p－Akt、 Bax、 Bcl－2蛋白的变化, Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果与对照组比较, DHA组A549细胞增殖率显著下降（P＜0．01）, p85、 Akt mRNA表达无显著差异, Bax mRNA表达水平增高（P＜0．001）, Bcl－2 mRNA表达水平降低（P＜0．05）; p85、 Akt总蛋白表达无显著变化（P＞0．05）, p－p85、 p－Akt、 Bcl－2蛋白表达显著减少, Bax蛋白表达显著增多（均P＜0．01）, Caspase3活性显著增加（P＜0．001）。结论双氢青蒿素能抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制PI3K／Akt信号传导通路而促进凋亡。     

清金得生片对人肺腺癌细胞(LAC)抑制与凋亡的诱导作用

【目的】观察清金得生片对人肺腺癌细胞(LAC)的抑制与凋亡的影响。【方法】以8 g/kg剂量的清金得生片,0.2 g/kg剂量的替加氟(FT-207)灌胃SD大鼠制备体积分数为10%、20%、30%的中药含药血清和体积分数为20%的FT-207含药血清,并设空白血清对照;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法观察清金得生片对LAC的抑制作用;采用硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色法,以流式细胞仪检测清金得生片对LAC细胞早期凋亡的影响;采用透射电镜观察中药对LAC超微结构的影响。【结果】不同剂量中药含药血清对LAC增殖的抑制作用与药物浓度及作用时间呈一定依赖关系,其中体积分数为30%的中药含药血清作用72 h时的抑瘤率达32%;各剂量组中药含药血清均具有一定诱导LAC细胞凋亡的作用;中药含药血清高、中剂量组透射电镜下可见明显凋亡特征,低剂量组凋亡特征不明显。【结论】清金得生片的抗肿瘤机制可能与其能抑制LAC增殖、诱导细胞凋亡作用有关。     

重组高效复合干扰素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究重组高效复合干扰素(rSIFN-co)对肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法 筛选rSIFN-co对A549细胞的有效浓度,及与顺铂联合用药的最佳浓度和作用时间。分为rSIFN-co（5 μg/mL）组、传统重组集成干扰素α(干复津,5 μg/mL）组、rSIFN-co（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、干复津（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、顺铂（2 μg/mL）组和RPMI-1640液空白组,分别干预A549细胞。MTT法检测各组7 d活细胞数并作生存曲线,流式细胞仪检测48 h各组细胞凋亡率,免疫荧光法检测48 h各组凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2表达。结果 rSIFN-co的有效浓度为1 ～64 μg/mL,顺铂的最低有效浓度为2 μg/mL,与2 μg/mL顺铂联合用药时rSIFN-co 的最佳浓度为5 μg/mL,最佳作用时间为48 h。生存曲线示rSIFN-co对A549的抑制作用强于干复津,rSIFN-co+顺铂的抑制作用强于干复津+顺铂。rSIFN-co可诱导A549细胞凋亡,rSIFN-co组凋亡率高于干复津组(P=0.000),rSIFN-co+顺铂组凋亡率高于rSIFN-co组（P=0.004）及顺铂组（P=0.023）。rSIFN-co能增强A549中Fas的表达,并抑制Bcl-2的表达,其中rSIFN-co组Bcl-2表达低于干复津组(P<0.05)。结论 rSIFN-co能抑制A549增殖,且作用强于干复津,与顺铂联合应用的抑制作用增强,其对A549的抑制作用与调节凋亡相关基因表达有关。     

鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

【目的】探讨中药复方鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株(LAC)增殖和凋亡的影响。【方法】制备中药复方鹤蟾片含药血清,按常规进行人肺腺癌LAC细胞培养。加入体积分数为30%浓度的含药血清培养液5 mL(含药血清组),另设相同浓度的无含药血清组(空白血清组)和RPMI-1640培养液组(空白对照组)。于倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,荧光显微镜下观察细胞核凋亡的形态学改变,并分别采用DNA含量分析法和TUNEL法进行细胞凋亡的流式细胞仪检测。【结果】LAC细胞经鹤蟾片含药血清处理后发生了凋亡特征改变;流式细胞仪DNA含量分析法分析含药血清组凋亡率为5.6%,空白血清组和空白对照组分别为0.9%和0.1%;细胞周期分析结果显示,经体积分数为30%含药血清作用72 h后,LAC细胞S期和G2-M期细胞数减少,低于空白血清组和空白对照组,含药血清组细胞增殖指数低于其他2组;进一步采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生情况,发现含药血清作用72 h后,细胞凋亡发生率为12.3%,空白血清组为5.7%,空白对照组为1.2%。【结论】鹤蟾片含药血清对LAC肿瘤细胞增殖具有一定的抑制作用,其机理可能与抑制LAC细胞DNA的合成和分裂,将细胞周期阻滞于G0-G1期,促进LAC肿瘤细胞的凋亡有关。     

多西紫杉醇对人血管肉瘤细胞株增殖的抑制作用

目的 :观察多西紫杉醇 ( docetaxel,DTX)对人血管肉瘤细胞株 ( ISOHAS)的增殖抑制作用。方法 :采用人血管肉瘤细胞株 ISOHAS进行培养 ,在培养液中分别加入不同浓度的 DTX,作用1、3、6和 9h后 ,观察 ISOHAS细胞形态的变化 ,并通过 Alamar Blue法测定 ISOHAS对抗肿瘤药的感受性。结果 :1 0 0μg· L-1浓度 DTX和 5 0 0μg· L-1浓度 DTX,作用 3h、6h的抑制率差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ;DTX作用 1、3、6和 9h时 ,5 0 μg· L-1浓度 DTX的抑制率与 1 0 0 μg· L-1DTX和 5 0 0 μg·L-1DTX的抑制率差异均有显著性 ( P<0 .0 1 )。结论 :DTX对 ISOHAS细胞具有较强的增殖抑制作用 ,在血管肉瘤的治疗方面是一种有应用前景的抗肿瘤药物     

CSD肽对肺成纤维细胞细胞外基质及Smad信号表达的影响

目的研究CSD肽（CSD-p）对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激下人胚肺成纤维细胞的细胞外基质及Smad信号表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞,分为4组：对照组（无TGF-β1处理）、TGF-β1处理组、CSD-p处理组、TGF-β1及CSD-p联合处理组。RT-PCR测定各组窖蛋白1mRNA的表达;Western blot检测各组窖蛋白1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原Ⅰ、p-Smad2、p-Smad3及Smad7蛋白的表达。结果 TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞后,窖蛋白1的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低（mRNA：0.404±0.027比1.540±0.262;蛋白：0.278±0.054比1.279±0.085;P〈0.01）。经TGF-β1刺激,人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ（1.127±0.078比0.234±0.048）、α-SMA（1.028±0.058比0.295±0.024）,p-Smad2（1.162±0.049比0.277±0.014）、p-Smad3（1.135±0.057比0.261±0.046）蛋白表达增加（P〈0.01）;Smad7表达较对照组明显降低（0.379±0.004比1.249±0.046,P〈0.001）。与TGF-β1处理组比较,CSD肽明显抑制TGF-β1诱导的胶原Ⅰ（0.384±0.040）、α-SMA（0.471±0.071）、p-Smad2（0.618±0.096）、p-Smad3（0.461±0.057）蛋白表达;上调Smad7的蛋白表达（0.924±0.065比0.379±0.004）。结论 CSD肽下调TGF-β1刺激下人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ及α-SMA蛋白的表达,可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路激活,提示使用CSD肽增加窖蛋白1功能可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

IL-13和乙醇对人肺成纤维细胞增殖的影响

目的 研究乙醇和(或)IL-13对人肺成纤维细胞(HFL-1)的促增殖作用.方法 培养HFL-1,通过MTT法检测乙醇和(或)IL-13对HFL-1增殖的影响,并对结果进行分析.结果 ①25、50、100、200 mmol·L-1乙醇对HFL-1的增殖无影响(P>0.05).②10、20、50 μg·L-1的IL-13对乙醇有促增殖作用,且有浓度依赖性(P<0.05).③不同浓度的乙醇(25、50、100、200 mmol·L-1)和10 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果与10 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果差异无统计学意义(P>0.05);除50 mmol·L-1外,其余浓度的乙醇(25、100和200 mmol·L-1)和20 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果高于20 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果(P<0.05);不同浓度的乙醇(25、50、100和200 mmol·L-1)和50 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果明显高于50 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果(P<0.05),且具有浓度依赖性.结论 单独低浓度乙醇(25、50、100和200 mmol·L-1)不会影响HFL-1的增殖,但与一定浓度IL-13共同作用下将对HFL-1的增殖有显著影响.     

吲哚-3-原醇对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨吲哚-3-原醇(indol-3-carbinol,I3C)对人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2的作用及其机制。【方法】将对数生长期的CNE-2细胞分成空白对照组和I3C组。空白对照组细胞常规培养,I3C组细胞培养体系中加入I3C(50μmol/L)。各组细胞培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;Annexin V-碘化丙啶/异硫氰酸荧光素(PI/FITC)检测细胞凋亡,Real-time PCR检测细胞中胞外信号调节激酶(ERK)和Bax、Bcl-2基因表达;Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、Bax、Bcl-2蛋白表达,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。【结果】I3C组与空白对照组比较,CNE-2细胞增殖率显著下降(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Real-time PCR检测显示I3C组与空白对照组比较,ERK m RNA表达无显著性差异,但Bax m RNA表达水平显著增高(P<0.001),Bcl-2 m RNA表达水平显著下降(P<0.05)。Western blot法检测显示,I3C组与空白对照组比较,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),但p-ERK和Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05),Bax蛋白表达和Caspase3活性显著增加(P<0.05)。【结论】吲哚-3-原醇能通过抑制ERK信号传导通路激活而抑制CNE-2细胞增值和促进CNE-2细胞凋亡。