HSV-1糖蛋白B和糖蛋白D的T细胞表位重组核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)的T细胞表位重组核酸疫苗,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性.方法 登录免疫表位数据库(IEDB),查阅已发表的无症状表位,联合运用SYFPEITHI、IEDB等生物信息学软件,预测潜在的HSV-1 gB和gD的T细胞表位.将已知表位和预测表位串联,...     

单纯疱疹病毒Ⅱ型gD模拟抗原表位的筛选及分析

目的:用抗-HSV-2gD单克隆抗体(mAb)从噬菌体随机12肽库中筛选HSV-2gD抗原模拟表位序列.方法:利用HSV-2gD McAb淘筛噬菌体随机12肽库,经四轮富集筛选,随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA进行序列测定,并利用生物信息学软件对包膜糖蛋白D(gD)进行B细胞抗原表位分析.结果:经四轮生物淘筛后,特异性噬菌体克隆得到了富集.经过对阳性克隆携带的随机12肽序列进行综合生物信息学分析,得到了PYH-H和P-PLW两个模拟HSV-2gD抗原表位的主要氨基酸基序.结论:用噬菌体随机12肽库成功筛选到了两个模拟HSV-2gD抗原表位的主要氨基酸基序,可模拟McAb针对的抗原表位,可能是HSV的替代抗原.该研究方法为研制更有效及更广谱的HSV基因疫苗提供了依据.     

免疫印迹技术在B病毒与单纯疱疹病毒鉴别中的应用

目的从免疫学的角度对分离的B病毒147株与单纯疱疹病毒在蛋白多肽水平上进行分析。方法利用Westernblot技术对新分离的B病毒147株及单纯疱疹病毒感染的细胞多肽进行分析。结果得到了八条含有B病毒特异抗原表位的多肽。结论该方法可以明确区别R、和HSV-l、HSV-2,并为寻找特异抗原进行表达奠定了基础。     

双融膜嗜肿瘤病毒对肺腺癌细胞的杀伤效果研究

目的:构建双融膜嗜肿瘤病毒,并观察其杀伤肺癌细胞的效果.方法:将长臂猿白血病病毒融膜糖蛋白基因(Fusogenic glycoprotein gene of gibbon ape leukemia virus,GALV.fus)构建入嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 1,HSV-1)中,使其成为具有双重融细胞膜作用的嗜肿瘤病毒(Doubly fusogenic oncolytic herpes simplex virus,Synco-2D).与单一的重组嗜肿瘤病毒HSV-1比较,在显微镜下观察两种嗜肿瘤病毒融细胞现象,并观察其体外杀伤肺腺癌细胞A549的效率及体内对肿瘤生长的抑制作用.结果:显微镜下发现,双融膜病毒融细胞作用更明显,大量多核巨细胞形成,细胞结构模糊,细胞溶解.体外实验显示,两种病毒都有明显的杀死肿瘤细胞效果,双融膜嗜肿瘤病毒杀伤肿瘤细胞率较单一的HSV-1明显增强.体内动物实验显示双融膜嗜肿瘤病毒对肿瘤组织的生长有显著的抑制作用.结论:将融膜糖蛋白基因GALV.fus构建入嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒中,可以显著增强病毒杀伤肺腺癌细胞效力.     

单纯疱疹病毒2型泛素化新型DNA疫苗构建

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)早期表达蛋白感染细胞蛋白(ICP)27强制泛素化的DNA疫苗表达质粒。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术从人基因组DNA和HSV-2基因组中分别扩增出泛素全长基因和HSV-2、ICP27 377-459,PCR鉴定后酶切连接获得融合基因片段,插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中,构建出重组真核表达质粒Ub-ICP-pcDNA3．1,并对其进行测序鉴定。结果构建的重组质粒Ub-ICP-pcDNA3．1克隆基因插入方向正确,与预期序列完全一致。结论成功构建了HSV-2早期表达蛋白ICP27强制泛素化DNA疫苗。     

HSV-Ⅰ亚单位疫苗新制备方法的初步探讨

本实验从Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染的 Hep-2细胞提取单纯疱疹病毒的亚单位疫苗。以去污剂 NP-40溶解下病毒的亚单位以及与细胞膜结合的病毒特异性糖蛋白,用超速离心的方法将其分离出来。经免疫双扩散方法检测.提取物亚单位疫苗显示了特异的抗原性。疫苗接种小鼠之后,以间接免疫荧光技术测得小鼠血清中出现的 HSV-1抗体。     

生殖器疱疹患者的单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原及抗体检测结果分析

目的:通过检测生殖器疱疹患者的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)抗原及抗体,探讨HSV-2抗原抗体对生殖器疱疹(GH)的临床诊断意义。方法:对性病门诊的280例现症GH患者采用ELISA方法进行HSV-2抗原及抗体检测。结果:有水疱现症GH患者HSV-2抗原检测阳性率为89.7%,而HSV-2IgG阳性率为66.4%,HSV-2IgM阳性率为14.5%。对初发患者:HSV-2抗原检测阳性率为89.3%(140/156);HSV-2IgG阳性率为39.7%(62/156);HSV-2IgM阳性率为25.6%(40/156)。对复发患者:HSV-2抗原检测阳性率为88.7%(110/124);HSV-2IgG阳性率为100%(124/124);HSV-2IgM阳性检出率为零。结论:有水疱的现症GH患者HSV-2抗原检测阳性检出率较高。HSV-2IgM作为GH患者的诊断指标仍需要探讨。     

绿原酸通过调节TLR3-TRIF通路抑制小胶质细胞炎性反应的机制研究

目的:研究绿原酸(chlorogenic acid,CGA)在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1,HSV-1)感染的BV2小胶质细胞中的抗炎作用.方法:把不同浓度梯度的CGA加入到正常BV2细胞中,通过CCK-8试剂盒测定CGA最大无毒浓度范围,以HSV-1感染BV2细胞建立HSV-1细胞模...     

具有抗疱疹病毒作用及抗真菌作用的药物现状与进展

1具有抗疱疹病毒作用的药物现状与进展人类疱疹病毒(HerpesVirus)分为8型,其中单纯疱疹病毒1型(HerpesSimplexVirus-1,HSV-1)、单纯疱疹病毒2型(HerpesSimplexVirus-2,HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(Varicella-ZosterVirus,VZV)、巨细胞病毒(CytomegaloVirus,CMV)、Epstein-Barr病     

单纯疱疹病毒2型结构的生物学功能分析

单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus 2,HSV-2)是引起全球生殖器溃疡疾病的主要病原体之一.HSV-2病毒基因组庞大、结构复杂、编码蛋白种类繁多,这些蛋白分子不仅在机体免疫系统中作为病毒抗原参与宿主天然和适应性免疫过程,也能够作为结构分子和功能分子参与病毒的复制和宿主细胞的病理性反应.因此对该...