汉坦病毒重组核蛋白抗体用于鼠肺组织病毒抗原的检测

目的纯化汉坦病毒(HV)SEO型L99株重组核蛋白(rNP),制备抗体用于鼠肺组织HV抗原的检测。方法重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET32a-L99S经IPTG诱导表达rNP,采用Ni亲和层析方法纯化,纯化蛋白免疫日本大耳白兔,获取抗血清用于间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺组织的HV抗原;并与病人混合血清作为一抗的IFA结果进行比较,部分标本进一步用RT-PCR法进行验证。结果rNP表达量占菌体总蛋白的52.2%,纯化蛋白的总回收率为22.9%;纯化蛋白Western blot分析为单带,纯度达95%以上,用其制备多克隆抗体滴度达1∶512000。IFA检测59份鼠肺标本,用兔rNP抗体和病人混合血清作为一抗其阳性率分别为23.7%和16.9%;两者结果不一致的6份鼠肺经RT-PCR检测HV核酸,均与兔rNP抗体的IFA结果相一致。结论采用rNP抗体进行IFA检测,可显著地提高鼠类HV感染监测的准确性,值得推广使用。     

用聚合酶链反应检测肾综合征出血热患者血、尿中汉坦病毒RNA

目的探讨肾综合征出血热患者病毒血症在体内消长过程以及与肾脏损伤关系。方法应用套式逆转录聚合酶链反应对６０例肾综合征出血热患者的１６５份血清、８５份外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）和７９份尿沉渣细胞标本中汉坦病毒ＲＮＡ进行检测。结果发病早期（１～７天）血清、ＰＢＭＣ和尿沉渣细胞中病毒ＲＮＡ的检出率分别为９１３％、１００％和１００％。病程８～１２天时分别为４３９％、７６２％和８１０％。在病程１３～２２天分别降至２６３％、３１８％及６１０％。尿沉渣细胞中病毒ＲＮＡ的检出率与肾脏损伤成正比。结论在肾综合征出血热发病过程中，病毒血症为一急性过程。ＰＢＭＣ携带病毒时间较血中长４～５天，是向血中及靶器官播散病毒的重要途径。肾脏为出血热病毒早期原发性损伤的靶器官。病毒是导致肾综合征出血热病情轻重的重要因素之一。     

5株鼠样品中分离汉坦病毒毒株S基因序列比较与分析

目的 了解近年来从宁波口岸捕获的鼠类样品中分离的5个汉坦病毒株遗传学差异。方法 利用RT-PCR方法,对5个汉坦病毒株S基因全长进行扩增、克隆和测序,并将这5个毒株的S基因序列分别与GenBank登录的20个汉坦病毒感毒株进行比较分析。结果 DX1507株和DX1408株S基因核苷酸序列长度为1766 bp与汉城型(SEOV)病毒株 Rn-DH27同源性最为接近,LJ1112株S基因核苷酸序列长度为1772 bp与汉城型(SEOV)病毒株Cherwell同源性最为接近,DX0903株和BL1402株S基因核苷酸序列长度为1725 bp与大别山型(DABV)病毒株 Yongjia-Nc-95和Yongjia-Nc-38同源性最为接近。结论 宁波口岸分离到的汉坦病毒株分别为汉城型和大别山型,对宁波口岸开展汉坦病毒传播防控有重要意义。     

黑龙江口岸地区鼠类动物中汉坦病毒感染情况调查

目的 了解黑龙江省中俄边境11个口岸鼠类宿主动物携带汉坦病毒(Hantavirus,HV)状况及其分子流行病学特征。方法 采用夹夜法和鼠笼法捕获鼠类,应用巢式PCR方法对鼠肺样本进行检测,对阳性样本测序并分型,获得序列用MEGA6进行分析。结果 此次调查共捕获鼠类动物346只,经鉴定隶属3科9属11种。检测出汉坦病毒核酸阳性样本17份,平均带毒率为4.90 %,包括汉滩型病毒(Hantaan virus, HNTV)6例,汉城型病毒(Seoul virus, SEOV) 11例,首次在黑龙江口岸东方田鼠中检测到1例SEO型HV。进化分析表明,6株HNT型HV均与HNT型HV原型株76-118亲缘性较远(86.82%~88.43%),分别与HNT型HV株BAO14、HXZ244同源性最高;11株SEO型HV分别与SEO型HV株Gongzhuling97、北京株BjHD01、越南株HaiPhong3-11同源性最高。结论 黑龙江中俄边境口岸宿主动物感染汉坦病毒至少2个类型,相对较高的感染率提示着中俄边境地区开展肾综合征出血热监测和防控的迫切性。     

肾综合征出血热患者血清中汉坦病毒的检测及其序列分析

目的　为了进一步探讨RT -PCR用于HFRS临床标本中病毒基因检测的可行性及陕西西安地区近年主要流行汉坦病毒 (HV)毒株的分子流行病学特点。方法　本研究设计并合成了两套分别互补于HVM基因片段和S基因片段的引物 ,建立了检测HFRS患者临床血清标本中HV基因的RT -nestedPCR方法 ,并对扩增的部分HV靶基因进行了测序分析和比较。结果　 119份HFRS病人血清 (经临床和IFA确诊 )经用S基因片段引物的RT -nestedPCR检测 ,阳性率分别为 :6 0 .5 % (<1w) ,34.1% (1～ 2w) ,4% (2～ 3w) ,0 % (>3w) ,31份HFRS急性期病人血清用M基因片段引物的RT -nestedPCR检测 ,仅 12份阳性 ,阳性率 40 %。结论　表明S基因片段引物的扩增效果优于M基因片段引物。 6份S基因片段引物扩增产物的测序结果显示 ,陕西西安地区HFRS感染的主要毒株为汉滩型 ,将PCR扩增的 6个靶基因序列与 76 - 118株S基因片段相应的核苷酸序列进行分析比较 ,同源性为 87.2 %～ 96 .0 % ;其推导的氨基酸序列与 76 - 118株核衣壳蛋白相应的氨基酸序列比较 ,同源性为 89.0 %～ 96 .0 %。     

河北省肾综合征出血热疫区鼠携带汉坦病毒基因特征分析北大核心CSCD

目的了解河北省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠携带汉坦病毒(HV)的基因特征。方法收集2019年河北省各地市捕获的鼠类标本,无菌下解剖取肺组织,应用Real-time PCR对阳性鼠标本进行HV G2片段扩增并测序,运用DNASTAR 7.1软件包对核苷酸序列进行同源性比较,采用MEGA 5.22软件构建系统发生树分析。结果共收集951份鼠肺标本,经Real-time PCR检测HV阳性标本共24份,均为汉城型(SEO)。对12份标本进行序列测定,鼠肺标本病毒间变异不大,同源性达97.3%~100.0%。新测序株与以往测序株比较同源性为97.3%~99.7%。系统发生树分析显示12份标本均为S3亚型HV。结论河北省HFRS疫区HV基因型以SEO型为主,亚型为S3亚型,同亚型病毒基因高度同源,无明显变异,遗传物质具有区域稳定性特征。     

黑龙江口岸地区鼠类动物中汉坦病毒感染情况调查北大核心CSCD

目的了解黑龙江省中俄边境11个口岸鼠类宿主动物携带汉坦病毒（Hantavirus,HV）状况及其分子流行病学特征。方法采用夹夜法和鼠笼法捕获鼠类,应用巢式PCR方法对鼠肺样本进行检测,对阳性样本测序并分型,获得序列用MEGA6进行分析。结果此次调查共捕获鼠类动物346只,经鉴定隶属3科9属11种。检测出汉坦病毒核酸阳性样本17份,平均带毒率为4.90%,包括汉滩型病毒（Hantaan virus,HNTV）6例,汉城型病毒（Seoul virus,SEOV）11例,首次在黑龙江口岸东方田鼠中检测到1例SEO型HV。进化分析表明,6株HNT型HV均与HNT型HV原型株76-118亲缘性较远（86.82%～88.43%）,分别与HNT型HV株BAO14、HXZ244同源性最高;11株SEO型HV分别与SEO型HV株Gongzhuling97、北京株BjHD01、越南株HaiPhong3-11同源性最高。结论黑龙江中俄边境口岸宿主动物感染汉坦病毒至少2个类型,相对较高的感染率提示着中俄边境地区开展肾综合征出血热监测和防控的迫切性。     

汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒。方法根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立检测两型汉坦病毒的实时荧光定量PCR方法。结果建立的检测方法特异性良好,与其他常见病原不发生交叉反应;最低检测限为101copies/μl,灵敏度高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间线性关系表达式分别为y=-3.4607x＋40.988（HTN）,y=-3.5307x＋39.356（SEO）,扩增效率分别为92.2%（HTN）和92.6%（SEO）,相关系数R2分别为0.9968（HTN）和0.9997（SEO）,呈良好的线性关系,且重复性好。结论建立的实时荧光定量PCR灵敏度高,重复性好,可用于汉坦病毒的快速检测,并可初步辨别汉滩型和汉城型汉坦病毒,对肾综合征出血热的病原早期诊断和流行病学调查有较好的应用价值。     

从保定地区病人血清中扩增出与76-118株同亚型的汉坦病毒核苷酸序列分析

通过对1996年我院收治的肾综合征出血热(HFRS)病人应用 RT-PCR方法进行分型研究发现2例为野鼠型(HTN)汉坦病毒感染。经过对其中一例的病毒部分核苷酸序列的扩增、克隆、序列测定与分析,结果其核苷酸序列与已知HTN型病毒具有较高的同源性,特别是与韩国的76-118株的核苷酸序列极为相似,同源序列占 98.7％,故为同一亚型,证     

大林姬鼠中汉坦病毒的分离及M片断全基因序列分析

目的研究吉林省疫区大林姬鼠中携带的汉坦病毒的分子生物学特征，并探讨其分子进化规律。方法应用直接免疫荧光、RT-PCR法进行分型检测；阳性鼠肺标本用Vero-E6细胞分离病毒；测定汉坦病毒CJilin 93株的M片断序列，并进行同源性比对和进化树分析。结果从58份大林姬鼠肺组织标本中共检测到4个阳性标本，从中分离出2株病毒：CJilin 89和CJilin 93；测序结果显示CJilin 93株M基因全长3577bp，编码一个含有1135氨基酸的G蛋白前体(GPC)。序列分析表明CJilin 93株与分离自黑线姬鼠的Bao14株核苷酸序列同源性为97．2％，氨基酸同源性为99．4％；而与同样分离自俄罗斯远东地区大林姬鼠的AMR系病毒的同源性较远。系统发生树表明CJilin 93株和Bao14株最为接近，共处于同一分支。结论在俄罗斯远东地区和我国东北地区的大林姬鼠中携带不同种系的汉坦病毒。     

云南省27县(市)大绒鼠体表恙螨寄生状况研究

目的了解云南省大绒鼠体表恙螨的寄生状况,包括恙螨的种类构成、优势螨种及其在不同宿主个体间的空间分布情况、主要螨种的种间关系以及雌雄宿主(大绒鼠)体表恙螨感染差异。方法汇总2001—2012年在云南省27县(市)的现场调查资料,常规统计计算大绒鼠体表恙螨的种类数和各种恙螨的构成比、感染率、平均多度和感染度等指标,并以此来反映大绒鼠体表恙螨的感染状况;用扩散系数、I指数、Cassie指数、聚块指数测定主要恙螨在大绒鼠不同个体间的空间分布情况;用协调系数分析主要恙螨之间的种间协调关系,分析比较雌雄大绒鼠体表恙螨的感染差异。结果从云南省27县市共捕获大绒鼠1 961只。从1 961只大绒鼠体表共采集到44 235只恙螨,总感染率和感染度均较高,分别为58.8%和38.3只螨/鼠。所采集到的44 235只恙螨被分类鉴定为3科12属130种。在130种恙螨中,小板纤恙螨的构成比最高,为22.6%(9 986/44 235),是云南省大绒鼠体表最主要的优势种;其次是中华纤恙螨,构成比为13.1%(5 776/44235)。空间分布分析显示,小板纤恙螨与中华纤恙螨等主要恙螨在大绒鼠不同个体间呈聚集分布格局。种间协调分析显示,小板纤恙螨与中华纤恙螨存在正协调关系(V=0.5574,P0.01)。雌性大绒鼠与雄性大绒鼠恙螨的寄生状况有一定的差异,雄性大绒鼠的总平均多度和总感染度分别为25.1和41.0,均高于雌性大绒鼠的19.6(t=2.479,P0.05)和34.1(t=1.985,P0.05)。结论云南省大绒鼠体表恙螨感染普遍,恙螨种类十分丰富,小板纤恙螨是云南省大绒鼠体表最重要的优势螨种,其次是中华纤恙螨,二者之间存在正协调关系。恙螨在雌雄大绒鼠间的感染情况存在差异,雄性大绒鼠的感染度和平均多度均高于雌性。     

云南省19县(市)大绒鼠体表恙螨群落的初步分析

用生态学统计方法研究云南省19个县(市)采集到的大绒鼠体表恙螨幼虫的群落结构、种-多度分布和种-样方关系。共捕获1 741只大绒鼠,在其体表采集到3亚科13属111种40 052只恙螨。种-多度分布显示,随着恙螨个体数量逐渐增加,恙螨种数逐渐减少,且多数为稀有种。种-样方关系显示,恙螨种数随着宿主数目的增加而增加,现捕获到的1 741只大绒鼠尚不能预测出其体表寄生恙螨种类的总体情况。     

云南省16县（市）大绒鼠体表寄生恙螨调查

目的 了解云南省大绒鼠体表寄生恙螨的种类、空间分布情况、优势种及其种间关系。 方法 选取2000～2004年云南省16县（市）现场用鼠笼加食饵诱捕大绒鼠,收集耳壳及耳窝部所有恙螨,进行分类和鉴定。恙螨种间关系与种群的空间分布格局分别用协调系数（V）和聚块指数（m*/m）判定。 结果 捕获大绒鼠1 157只。收集恙螨37 613只,隶属3亚科9 属80种。大绒鼠总带螨率（68.2%）和总螨指数（32.5）较高,其中小板纤恙螨、中华纤恙螨、西盟合轮恙螨、绒鼠纤恙螨、枪棒爬虫恙螨、寒冬纤恙螨6种恙螨为优势种,在不同大绒鼠个体之间呈聚集型分布;优势恙螨之间存在正协调和负协调关系。 结论 大绒鼠体表恙螨种类繁多、数量大、物种多样性高,主要恙螨在大绒鼠体表的寄生有聚集性。     

福建省首次检出Aichi病毒及其分子流行病学调查

目的了解福建地区Aichi病毒的存在和流行情况。方法对2008 2009年福建省多家医院的5岁以下腹泻儿童粪便179份,采用RT PCR方法进行分子流行病学调查。结果检出Aichi病毒阳性粪便1份。测序后与国外已发表的毒株比较,表明了所测定FJ081021毒株序列（GU459258）与Qld/2008/204/Australia最接近,同源性达98.1%,证实其为B型Aichi病毒。结论首次发现福建地区人群中存在Aichi病毒。     

Hantavirus Research in Finland: Highlights and Perspectives

Finland has the highest incidence of hantavirus infections globally, with a significant impact on public health. The large coverage of boreal forests and the cyclic dynamics of the dominant forest rodent species, the bank vole Myodes glareolus, explain most of this. We review the relationships between Puumala hantavirus (PUUV), its host rodent, and the hantavirus disease, nephropathia epidemica (NE), in Finland. We describe the history of NE and its diagnostic research in Finland, the seasonal and multiannual cyclic dynamics of PUUV in bank voles impacting human epidemiology, and we compare our northern epidemiological patterns with those in temperate Europe. The long survival of PUUV outside the host and the life-long shedding of PUUV by the bank voles are highlighted. In humans, the infection has unique features in pathobiology but rarely long-term consequences. NE is affected by specific host genetics and risk behavior (smoking), and certain biomarkers can predict the outcome. Unlike many other hantaviruses, PUUV causes a relatively mild disease and is rarely fatal. Reinfections do not exist. Antiviral therapy is complicated by the fact that when symptoms appear, the patient already has a generalized infection. Blocking vascular leakage measures counteracting pathobiology, offer a real therapeutic approach.     

Seasonal variation in prevalence of antibody to hantaviruses in rodents from southern Argentina

We conducted a small mammal trapping study to investigate temporal variation in prevalence of infection in hantavirus reservoir populations in the Patagonian Andes mountain range, Rio Negro province, Argentina. Rodent blood samples collected in natural and periurban habitats and at the home of an hantavirus pulmonary syndrome (HPS) case patient were analysed by enzyme-linked immunosorbent assay. Organ tissue samples were tested by polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequence analysis. Eight species of 1032 rodents were captured in 15 551 trap nights, giving an overall trap success of 6.6%. Hantavirus antibody was detected in 30 of 555 Oligoryzomys longicaudatus (reservoir of Andes virus), three of 411 Abrothrix longipilis, and one of 10 Loxodontomys micropus. Antibody prevalences in O. longicaudatus were 13.7% in spring 1996, 59.3% in summer 1996, 2.1% in autumn 1997, 12.4% in winter 1997 and 3.1% in spring 1997. A much higher antibody prevalence (33%) was found during trapping around the residence of an HPS case patient. Higher prevalences were found in older male O. longicaudatus. There was no apparent correlation of antibody prevalence with rodent population density, or of rodent population density or antibody prevalence with numbers of human cases. For an HPS case that occurred in our study area in 1997, we identified the probable rodent reservoir and likely site of exposure by matching the genetic sequences of virus obtained from a rodent and the HPS case patient.     

Characterization of Juquitiba Virus in Oligoryzomys fornesi from Brazilian Cerrado

The Juquitiba virus, an agent of Hantavirus Cardiopulmonary Syndrome, is one of the most widely distributed hantavirus found in South America. It has been detected in Oligoryzomys nigripes, Akodon montensis, Oxymycterus judex, Akodon paranaensis in Brazil and in O. nigripes, Oryzomys sp. and Oligoryzomys fornesi rodents in Argentine, Paraguay and Uruguay. Here, we report the genomic characterization of the complete S segment from the Juquitiba strain, isolated from the lung tissues of O. fornesi, the presumed rodent reservoir of Anajatuba virus in Brazilian Amazon, captured in the Cerrado Biome, Brazil.     

Rapid Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Hantavirus-Specific Antibodies in Divergent Small Mammals

We assessed the utility of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of hantavirus-specific antibodies from sera of Oligoryzomys longicaudatus, the principal reservoir of Andes virus (ANDV), using an antigen previously developed for detection of antibodies to Sin Nombre virus (SNV) in sera from Peromyscus maniculatus. The assay uses a protein A/G horseradish peroxidase conjugate and can be performed in as little as 1.5 hours. Serum samples from Oligoryzomys longicaudatus collected in central-south Chile were used and the assay identified several that were antibody positive. This assay can be used for the rapid detection of antibodies to divergent hantaviruses from geographically and phylogenetically distant rodent species.     

Long-Term Single-Dose Efficacy of a Vesicular Stomatitis Virus-Based Andes Virus Vaccine in Syrian Hamsters

Andes virus (ANDV) is highly pathogenic in humans and is the primary etiologic agent of hantavirus cardiopulmonary syndrome (HCPS) in South America. Case-fatality rates are as high as 50% and there are no approved vaccines or specific therapies for infection. Our laboratory has recently developed a replication-competent recombinant vesicular stomatitis virus (VSV)-based vaccine that expressed the glycoproteins of Andes virus in place of the native VSV glycoprotein (G). This vaccine is highly efficacious in the Syrian hamster model of HCPS when given 28 days before challenge with ANDV, or when given around the time of challenge (peri-exposure), and even protects when administered post-exposure. Herein, we sought to test the durability of the immune response to a single dose of this vaccine in Syrian hamsters. This vaccine was efficacious in hamsters challenged intranasally with ANDV 6 months after vaccination (p = 0.025), but animals were not significantly protected following 1 year of vaccination (p = 0.090). The decrease in protection correlated with a reduction of measurable neutralizing antibody responses, and suggests that a more robust vaccination schedule might be required to provide long-term immunity.     

云南首次从患者体内分离到基孔肯雅病毒

本文报告1987年从云南西双版纳地区97份急性发热期病人血中分离到一株基孔肯雅病毒,并在分离到病毒患者恢复期血清中查到中和抗体,指数为316。首次证实云南有基孔肯雅轻型病例及自然疫源地存在。