新型Ⅰ型人类免疫缺陷病毒疫苗

目前,新型的HIV-1疫苗主要包括HIV-1DNA疫苗、HIV-1活病毒载体,以及基于这两种疫苗发展起来的异源的致敏-强化疫苗策略.本文就HIV-1DNA疫苗引发免疫反应的原理,疫苗设计中所采用的抗病毒靶点以及提升其免疫效果的策略作了介绍.同时介绍了目前应用广泛的几种HIV-1活病毒载体,以及基于HIV-1DNA疫苗和HIV-1活病毒载体这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略.     

人类免疫缺陷病毒1型感染基因诊断方法的建立

目的 建立人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因诊断方法。方法 随机选取80份全国送检的已确认的HIV阳性样品，从健康献血员中选取40份HIV阴性样品。分别提取人DNA和病毒RNA，再分别扩增HIV-1的gp41、pol和gag各基因区的3套反应系统，进行巢氏聚合酶链反应(nPCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。将结果与血清学方法比较，观察结果是否一致。同时检测3套反应系统的敏感性、重复性和对HIV-1各亚型参考病毒株的扩增情况。结果 用3套反应系统对80份阳性样本进行nPCR检测的阳性率为：gp41反应系统88．8％；pol反应系统83．8%；gag反应系统81．3％；3套系统联合应用检出率90.0％。用RT-PCR检测阳性率为：gp41反应系统96．3％；pol反应系统91．3％；gag反应系统95．0％；3套反应系统联合应用检出率可达98．8％。阴性样品扩增均阴性，特异性为100％。3套反应系统不但可扩增HIV-1型M组的A、B、C、D、CRF01-AE、F、G、H亚型，还可扩增其N和O组毒株，且与HIV-2无交叉反应。nPCR最低检测限为1拷贝／PCR。gag和pol反应系统RT-PCR最低检测限为750拷贝／ml；gp41反应系统最低检测限为150拷贝／ml。nPCR和RT一：PCR扩增gp41、pol和gag基因区的重复性分别为：93．3％、90．0％、86．70h，和100%、96．7％、100％。结论 建立的HIV-1基因诊断方法敏感性、特异性和重复性较好，且成本低廉，适合我国HIV检测实验室应用。     

不同人类免疫缺陷病毒2型检测方法的比较研究

目的通过随访调查16例人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）可疑感染者，初步评价HIV一2的几种检测方法。方法从贵州省采集既往经HIV-1／2免疫印迹（WB）试验检测出现HIV-2指示带的16份受检者的全血样品，进行HIV-2抗体和核酸检测。血浆中的抗体用HIV-1／2ELISA初筛一复检，其中阳性样品再分别用HIV-1／2线性免疫试验（LIA）和HIV-2WB检测。外周血单核细胞（PBMC）中的前病毒DNA用HIV-2巢式PCR检测。结果16份血浆样品经HIV-1／2ELISA筛查均为HIV抗体阳性；用HIV-1／2 LIA检测，全部为HIV-1抗体阳性，15份为HIV-2抗体阴性、1份不确定；用HIV-2WB检测，有3份为HIV-2抗体阳性、13份不确定。由于这批样品的采样时间距首次检测至少1年以上，可以排除窗口期感染，上述检测结果不确定的受检者均可判为HIV-2抗体阴性。此外，用巢式PCR检测所有PBMC样品均为HIV一2核酸阴性。结论16例受检者全部为HIV-1而非HIV-2感染，HIV-1／2uA的抗体检测结果与HIV-2核酸检测结果基本相符，而HIV-2WB则产生了大量的不确定甚至假阳性结果。     

新型Ⅰ型人类免疫缺陷病毒疫苗

目前，新型的HIV-1疫苗主要包括HIV-1 DNA疫苗、HIV-1活病毒载体，以及基于这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略。本文就HIV-1 DNA疫苗引发免疫反应的原理，疫苗设计中所采用的抗病毒靶点以及提升其免疫效果的策略作了介绍。同时介绍了目前应用广泛的几种HIV-1活病毒载体，以及基于HIV-1 DNA疫苗和HIV-1活病毒载体这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略。     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型基因序列分析中的质量控制研究

目的研究DNA序列分析中各种影响因素的作用，建立排除污染、进行序列质量控制的方法。方法通过对950份HIV-1样品DNA基因序列结果的分析，查找序列读取及序列分析中存在的各种影响因素，对各种可能导致污染的原因进行分析和解释。结果在使用各种软件进行序列分析时，两样本之间的基因距离为0；两样本所测区段的核苷酸或氨基酸序列完全一致或相差甚微；样本与实验室内所构建的克隆株之间的基因距离过近，同源性达到99％以上；两个独立传播的群体之间个别样本的互混等指标均提示存在污染的可能。结论构建基因进化树和将样本的核苷酸序列翻译成蛋白质的氨基酸序列后构建共享序列，是一种很好的发现序列质量问题、进行序列质量控制的方法。     

人类免疫缺陷病毒1型耐药性检测方法及其应用进展

近年来，艾滋病临床治疗失败中的耐药性问题，已经引起了越来越多的关注。在此背景下，耐药性检测逐步成为优化艾滋病联合化疗方案的有力工具。临床医生们能够依据耐药性检测的结果，为艾滋病感染者选择具有最大疗效和最小副作用的抗病毒药物。由于人类免疫缺陷病毒不仅在免疫学和基因水平上可以将其分为两型，而且在流行病水平上，两者也存在着明显的不同。     

某国产人类免疫缺陷病毒1型核酸定量检测试剂的临床试验研究

目的 评价某国产人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸定量检测试剂(考核试剂)和对比试剂的相关性及一致性.方法 采用国产HIV-1考核试剂和对比试剂,对197例标本进行平行检测.采用相关性分析、Bland-Altman模型等统计方法分析2种检测试剂之间的相关性和一致性.结果 197例标本中该国产HIV-1考核试剂与对比...     

转录介导扩增试验筛查供血者人类免疫缺陷病毒-1RNA、丙型肝炎病毒RNA和乙型肝炎病毒DNA的多中心效能评估

背景 最近启动的Proeleix Ultrio（Chiron／Gen-Probe）筛检血液HIV-1、HCV和HBV的欧洲多中心研究。研究设计与方法 连续稀释参比物以测定检测限。交替检测高载量HCV RNA阳性和阴性标本，并作8份混合的2912组样品测定以评估其敏感度和特异性。     

应用捕获酶联免疫测定法估算2010-2012年浙江省重点人群人类免疫缺陷病毒1型新发感染率

目的 估计浙江省2010-2012年重点人群人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)新发感染情况及其发展趋势。 方法 收集浙江省2010-2012年665例HIV哨点监测阳性样本和4030例新报告确证阳性病例样本,应用BED HIV-1捕获酶联免疫测定法(BED HIV-1 capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)检测新发感染,利用公式I=[F×(365/W)×R]/[N+F×(365/W)×R/2]×100% 估算人群的HIV-1新发感染率,并对同期新报告确证阳性病例计算新发感染比例。 结果 浙江省2010-2012年HIV监测哨点重点人群的男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)HIV-1新发感染率最高,分别为3.52%(2.22%~4.83%)、6.63%(4.65%~7.94%)和6.33%(4.83%~7.84%),其他人群均较低。浙江省2010-2012年报告阳性病例新发感染比例分别为27.08%、26.09%和30.35%,2011年和2012年MSM报告阳性病例新发感染比例分别为40.17%和42.05%。 结论 浙江省MSM人群HIV-1新发感染率2010 2011年增长较快,2011-2012年稍有下降但仍维持较高水平,其他人群相对较低。报告阳性病例中MSM人群新发感染比例也较高。浙江省MSM人群HIV流行形势仍然非常严峻,应加大对该人群的干预力度。     

应用NucliSens Easy Q定量检测人类免疫缺陷病毒1型RNA

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）而导致的一种致死性疾病。     

治疗前血浆和全血干血斑样品HIV-1 Pol区基因型耐药检测结果比较

目的 比较治疗前静脉血浆和全血干血斑(DBS)人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)Pol区基因型耐药检测结果的差异,并分析DBS样品用于HIV-1基因型耐药检测的可行性.方法 采集44例HIV-1感染者治疗前静脉全血,分别制备全血DBS样品和血浆样品,提取RNA,检测病毒载量.采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增Pol区...     

Xpert HIV-1病毒载量检测系统用于HIV-1病毒载量检测的临床价值

目的探讨Xpert HIV-1病毒载量(Xpert HIV-1 VL)检测用于HIV-1病毒载量检测的临床价值。方法采用Xpert HIV-1 VL和Abbott m2000 Real Time检测系统(Abbott m2000)同时检测191份血浆样本的HIV-1病毒载量。采用符合率、卡方检验和Kappa值等统计分析两种检测方法定性检测结果的一致性,采用相关性、回归分析和Bland-Altman模型等统计分析两种检测方法定量检测结果的一致性。结果两种检测方法的阳性符合率、阴性符合率和总符合率均为100%,两种方法检测结果一致性分析的Kappa值为1.00(P<0.001);两种方法检测结果的相关系数为0.9576,回归分析表现出较高的相关性(R2=0.9170),Bland-Altman模型分析显示两种方法检测有95.3%(164/172)的样本在95%一致性界限内。结论Xpert HIV-1 VL用于检测HIV-1 RNA具有很高的灵敏度、准确性和稳定性,且操作简单、方便、安全,适合临床用于对HIV-1患者血浆样本中HIV-1 RNA的检测。     

艾滋病患者抗病毒治疗初期不同部位HIV-1 DNA比较研究

目的 了解抗逆转录病毒治疗早期,外周血、肠黏膜相关淋巴组织及淋巴结中单个核细胞中HIV-1 DNA量的差异.方法 收集2006至2011年首都医科大学附属北京佑安医院规律随诊的留取有外周血、肠黏膜相关淋巴组织及淋巴结标本的HIV-1/AIDS患者,共11例.平均年龄39(25～55)岁,收集治疗前及治疗12周后患者的外周血、肠黏膜相关淋巴组织及淋巴结标本,用密度梯度离心法分离单个核细胞,用DNA抽提试剂盒提取DNA,用实时定量聚合酶链反应的方法检测HIV-1 DNA拷贝数.用非参数检验方法分析比较各实验组之间HIV-1 DNA拷贝数的差异.结果 治疗前,不同部位HIV-1 DNA量的差异具有统计学意义(x2=17.636,P＜0.01),肠黏膜相关淋巴组织的HIV-1 DNA量[(10714±2043)拷贝/106细胞]和淋巴结内[(9145±1202)拷贝/106细胞]高于外周血[(66±8)拷贝/106细胞,差异有统计学意义(U值均为0.00,P值均＜0.05)],治疗前淋巴结与肠黏膜相关淋巴组织中的HIV-1 DNA量之间差异无统计学意义(U=46.00,P＞0.05);抗逆转录病毒治疗12周后,不同部位HIV-1 DNA量的差异有统计学意义(x2=22.000,P＜0.01);肠黏膜相关淋巴组织的HIV-1 DNA量[(1701±790)拷贝/106细胞]和淋巴结内[(11591±1781)拷贝/106细胞]高于外周血[(18±3)拷贝/106细胞(U值均为0.00,P值均＜0.05)];肠黏膜相关淋巴组织HIV-1 DNA水平从平均10714拷贝/106细胞降低至平均1701拷贝/106细胞,差异有统计学意义(Z=-2.934,P＜0.05)外周血HIV-1 DNA水平从平均66拷贝/106细胞降低至平均18拷贝/106细胞,差异有统计学意义(Z=-2.934,P＜0.05).结论 肠黏膜相关淋巴组织及淋巴结是HIV-1 DNA储存的重要场所.     

Enzyme immunoassay of free thyroxin in dried blood samples on filter paper

We describe a double-antibody enzyme immunoassay for determination of free thyroxin (FT4) in dried blood samples on filter paper, with use of a T4-beta-D-galactosidase complex. The measurable range of FT4 concentration in two 3-mm blood discs, each of which contained about 2.7 microL of blood, was 1.9 to 93 ng/L, as determined by comparison with concentrations of FT4 in known serum standards. FT4 in blood samples dried on filter paper was stable for at least four weeks when kept dry at -20 degrees C, room temperature, or 37 degrees C. The mean coefficients of variation were 7.6% (within assay) and 6.4% (between assays). Results for FT4 by this method correlated well with those for serum determined by radioimmunoassay (r = 0.98). The proposed method can be used to differentiate persons with hyper- and hypothyroidism from normal subjects and those with abnormal concentrations of thyroxin-binding globulin. The procedure seems suited for screening studies.     

滤纸片干血斑检测TT病毒DNA

目的 建立一种快速、方便、准确的方法检测TT病毒的基因片段。方法 采集被检者全血滴在经EDTA--蛋白酶预处理的滤纸片上,室温干燥后,密封并保存于-20℃,然后进行PCR检测;同时取血清用传统方法作对照。结果 在相同时间内,本法测得的结果,与传统方法所得结果无异。结论 该方法具有特异、敏感、方便等特点,用此法检测TTV DNA是切实可行的。     

1型HIV感染多重PCR检测方法的建立

重复性,能覆盖我国最主要的流行病毒株.     

The analysis of dried blood spot samples using liquid chromatography tandem mass spectrometry

Assays using dried blood samples have been in use for a number of years particularly for the diagnosis of inborn errors of metabolism. This sampling technique has been greatly helped by the sensitivity and specificity offered by liquid chromatography tandem mass spectrometry because of the limited amount of sample available for analysis. There are advantages for patients to take samples at home but these must be weighed against potential problems with the sampling technique. Some assays appear to work very well whilst others suffer from poor recovery because of adsorption of the analyte onto the filter paper. Some newer strategies including impregnation of the filter paper and filter filtration will be discussed. Calibration of assays and the problems with matrix matching of standards are also important issues that need to be addressed before an assay can be used routinely.     

对in-house HIV-1基因型耐药性检测方法的评价

目的 评价in-house HIV-1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法 收集2004年4月至2008年10月全军艾滋病检测中心检测的来自河南、广西130份血浆标本。以美国FDA批准的HIV-1基因型耐药性检测系统(ViroSeqTM v2.0)为参考方法,并与建立起的基因型耐药性检测方法(in-house)平行检测待检样本,比较二者在扩增效率、耐药突变位点检测以及耐药报告等方面的一致性。结果已知的14 850个耐药突变位点中,2种方法可同时对99.3％(14 752/14 850)的耐药突变位点准确检出;在对不同突变位点的检测中,2种方法对蛋白酶抑制剂耐药突变位点、逆转录酶抑制剂耐药突变位点及两类抑制剂耐药突变位点检测一致率分别为99.7％、99.0％和99.3％（Kappa值分别为0.909 9、0.952 1和0.948 8,P值均＜0.01）;2种方法出具的两类药物的耐药结果报告一致率94.6％（Kappa=0.637 4,P＜0.01）。本研究共检测到34个ViroSeqTM数据库(ViroSeqTM software v2.7)未收录位点,其中2个突变位点对耐药的影响较大。结论in-house基因型耐药性检测方法与ViroSeqTM基因型耐药性检测系统在耐药突变位点检测以及评价上具有高度一致性,是一种快速准确、性价比高的HIV-1基因型耐药检测方法,同时在耐药数据库方面具有一定优势。