视网膜母细胞瘤的化学治疗及耐药性研究进展

视网膜母细胞瘤（RB）是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,其治疗手段包括化学治疗、眼球摘除、外放射治疗、冷冻治疗及经瞳孔温热疗法。近年来,化学治疗作为一种常见且有效的治疗方法日益受到重视。国内外的研究包括化学治疗药物的机制、化学治疗方案的研究、化学治疗后耐药性的研究等,均取得了一定的进展。其中化学疗法药物的多药耐药性与多种机制有关,p-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、拓扑异构酶、谷胱甘肽-s-转移酶以及多种细胞凋亡相关蛋白等都与化学治疗耐药性有关,就其研究进展进行综述。     

lncRNA HIF1A-AS1对长春新碱耐药视网膜母细胞瘤细胞化疗敏感性的影响

目的：探讨长链非编码RNA-HIF1A-AS1(lncRNA HIF1A-AS1)调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α))表达对长春新碱(VCR)耐药视网膜母细胞瘤(RB)细胞化疗敏感性的影响。

方法：建立人RB VCR耐药细胞株SO-RB50/VCR，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SO-RB50与SO-RB50/VCR细胞lncRNA HIF1A-AS1表达； 在SO-RB50/VCR细胞中抑制lncRNA HIF1A-AS1表达或同时过表达HIF-1α，检测SO-RB50/VCR细胞对VCR的半数抑制浓度(IC₅₀)及细胞增殖、凋亡情况； Western blot检测HIF-1α、多药耐药相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达。

结果：与SO-RB50细胞相比，SO-RB50/VCR细胞中lncRNA HIF1A-AS1与HIF-1α蛋白表达水平升高(P<0.05)； 在SO-RB50/VCR细胞中抑制lncRNA HIF1A-AS1表达后，细胞凋亡率显著升高(P<0.05)，细胞吸光度(OD₄₅₀)值显著降低，VCR对细胞的IC₅₀值及HIF-1α、MRP、P-gp蛋白表达水平显著降低(P<0.05)； 过表达HIF-1α可减弱下调lncRNA HIF1A-AS1表达对SO-RB50/VCR细胞耐药性的抑制作用。

结论：lncRNA HIF1A-AS1在SO-RB50/VCR细胞中高表达，抑制lncRNA HIF1A-AS1表达可通过下调HIF-1α表达，降低SO-RB50/VCR细胞对VCR的耐药性。     

耐长春新碱视网膜母细胞瘤细胞株的建立

目的：研究视网膜母细胞瘤获得性多药耐药现象，探讨其产生机制。方法：利用长春新碱(vincristree，VCR)对人视网膜母细胞瘤细胞系HXO-RB₄₄细胞在体外进行浓度递增法逐步诱导实验，建立一株耐长春新碱视网膜母细胞瘤细胞亚株HXO—RB/VCR。并对其细胞生长，药物含量，药物敏感性与放射性敏感性进行检测。 结果：该耐药细胞株HXO—RB/VCR细胞对长春酰胺、丝裂霉素C、阿霉素、足叶乙甙、顺铂、卡铂等有交叉耐受，对卡氮芥、氟尿嘧啶无明显抗药性，而对氨甲喋呤的敏感性反而增加。对⁶⁰ Coγ射线有轻度耐受性。细胞内药物含量测定显示：耐药细胞内长春新碱浓度明显低于敏感细胞，钙通道阻断剂异博定可使细胞内VCR浓度增加，部分逆转其耐药性。 结论：VCR可诱导视网膜母细胞瘤产生多药耐药和轻度放射耐受，获得性多药耐药作用可被异博定逆转。 （中华眼底病杂志，1997，13：6-9）     

survivin和c-myc蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达

细胞凋亡和增殖异常在肿瘤的发生和发展中起重要作用。survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成员，具有抗凋亡和参与细胞周期G2期调控的作用，与化疗耐药及预后有重要关系。原癌基因c—myc被认为是具有激活和抑制双重作用的转录调节子，在细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥着重要作用。视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，RB）是起源于视网膜神经上皮层的一种儿童时期最常见的眼内恶性肿瘤，但survivin和c—myc蛋白与RB的关系文献报道较少。我们应用免疫组织化学方法研究survivin和c—myc蛋白在RB中的表达，旨在探讨两者在RB中的作用及其与瘤细胞凋亡的关系。     

硫化嵌合型LRP反义寡核苷酸逆转葡萄膜黑色素瘤多药耐药性

目的 :探讨体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞对不同化疗药物敏感性 ,并通过硫化嵌合型反义寡核苷酸 (AS -ODN)特异阻断肺耐药基因 (LRP)的表达逆转肿瘤多药耐药性。方法 :通过原代培养葡萄膜黑色素瘤细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)法测定肿瘤细胞对氟脲嘧啶 ,噻替哌 ,顺铂 ,阿霉素 ,长春新碱 ,氮烯咪氨 6种药物体外敏感性。检测不同浓度药物作用 96小时后对肿瘤细胞的杀伤情况。利用RT -PCR ,Westernblot法测定肿瘤细胞LRP的表达 ,并通过阳离子脂质体导入LRPAS -ODN ,阻断LRP的表达 ,测定该基因对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响。结果 :葡萄膜黑色素瘤对不同的化疗药物均有抗药性。LRPAS -ODN可下调该基因的表达 ,且与剂量呈正相关。LRPAS -ODN在 15 0nM以下对葡萄膜黑色素瘤的增殖活性无明显影响 ,但可逆转肿瘤的多药耐药性。结论 :临床常用化疗药物及化疗剂量对葡萄膜黑色素瘤细胞杀伤作用较小 ,LRP的高表达与肿瘤的多药耐药性密切相关。     

白藜芦醇对视网膜母细胞瘤细胞多药耐药性相关因子表达的影响

目的 观察白藜芦醇对视网膜母细胞瘤(RB)细胞多药耐药性(MDR)因子表达的影响.方法 体外培养RB细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为实验组及对照组进行.采用浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/L的白藜芦醇处理RB细胞,作用24、48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度组RB细胞的吸光度[A,旧称光密度(OD)]值,以此表示RB细胞活性.采用浓度为50.00 μmol/L的白藜芦醇处理RB细胞48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测MDR-1、环氧化酶(COX)-2、多药耐药相关蛋白(MRP)-1、谷胱苷肽转移酶(GST)-π的m RNA和蛋白表达.3种检测均以加入等体积0.5％二甲基亚砜细胞培养液为对照组.结果 MTT比色法检测结果显示,与对照组比较,6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L实验组A值呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=4.782,P＜0.05).50.00、100.00 μmol/L实验组A值间差异无统计学意义(F=6.351,P＞0.05).RT-PCR检测结果显示,实验组MDR-1、MRP1、COX-2、GST-π mRNA表达较对照组显著降低,差异均有统计学意义(t=9.170、5.758、4.152、4.638,P＜0.05).Western blot检测结果显示,实验组MDR-1、MRP1、COX-2、GST-π蛋白表达较对照组显著降低,差异均有统计学意义(t=3.848、5.955、4.541、3.514,P＜0.05).结论 白藜芦醇可降低RB细胞MDR因子的表达.     

人腺样囊性癌多药耐药细胞系的建立

目的:建立人腺样囊性癌耐药细胞系,为阐明腺样囊性癌的多药耐药机制及逆转尉药提供模型及研究依据.方法:以长春新碱(VCR)为诱导剂,通过浓度递增间断刺激法对人腺样囊性癌细胞系(ACC)进行体外诱导耐药,建立耐VCR的腺样囊性癌细胞系ACC/VCR.细胞计数法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞对化疗药物敏感性.结果:ACC经体外诱导后,ACC/VCR细胞对长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)和平阳霉素(PYM)的耐药性明显增强,具有交叉耐药,对环磷酰胺(CTX)、氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)耐药性无明显变化.耐药前后ACC细胞的生长曲线、群体倍增时间和光镜下的形态无明显改变.结论:VCR可诱导腺样囊性癌细胞产生多药耐药.     

CIZ1基因通过调控MEK-ERK1-2信号通路影响视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的实验研究

目的探讨锌指蛋白(CIZ)1基因影响视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖和凋亡的机制。 方法RB组织芯片购自西安艾丽娜生物科技有限公司，人神经母细胞瘤细胞系Y79购自美国ATCC公司。应用免疫组化方法检测CIZ1基因在RB肿瘤组织和正常视网膜组织中的表达情况；应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Western blot方法检测CIZ1基因在RB细胞中信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达水平。选取RB细胞系Y79细胞，采用数字表法随机分为对照组、干扰CIZ1基因组(shCIZ1)-1及shCIZ1-2等3组。采用不同的慢病毒分别感染阴性对照组和两组shCIZ1基因组细胞。应用荧光定量PCR及Western blot方法检测敲低效率；应用细胞增殖测量试剂盒(CCK8)方法检测细胞的生长、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3-7的活性和细胞凋亡相关蛋白表达的情况；通过Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)1-2信号通路相关蛋白的表达变化。CIZ1的基因表达量、蛋白表达水平、RB细胞的增殖倍数、Caspase3-7、MEK、p-MEK、ERK及p-ERK蛋白的表达水平，采用单样本K-S拟合优度法进行正态性检验，符合正态分布者以均数±标准差进行描述。多组样本间不同组间均数的比较采用重复测量资料的方差分析，采用LSD检验进行两两比较。 结果与正常视网膜组织相比，CIZ1基因在RB肿瘤组织中的表达水平显著上调；在RB细胞中，CIZ1基因mRNA水平及蛋白水平均显著高于正常人视网膜色素上皮细胞(ARPE)，Y79细胞、人神经母细胞瘤细胞系(WERI-Rb)-1细胞中mRNA相对表达量分别为(0.061±0.001)、(0.041±0.001)，与ARPE19细胞中mRNA相对表达量(0.025±0.001)相比，差异均具有统计学意义(t＝41.58，18.68；P<0.05)；慢病毒干扰CIZ1基因的表达可以显著降低CIZ1的mRNA与蛋白表达水平，shCIZ1-1组和shCIZ1-2 CIZ1组mRNA的相对表达量分别为(0.015±0.008)和(0.008±0.003)，与对照组mRNA的相对表达量(0.032±0.003)相比，差异均具有统计学意义(t＝3.72，5.357；P<0.05)；敲低CIZ1基因可以显著抑制RB细胞的增殖，也可以抑制增殖相关基因即细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白的表达，与对照组相比差异有统计学意义(t＝21.18，21.80；P<0.05)；同时还可以抑制增殖相关基因Cyclin E1蛋白的表达，与对照组相比差异有统计学意义(t＝17.26，16.41；P<0.05)。敲低CIZ1可以显著增强细胞凋亡相关蛋白Caspase3-7的活性，上调Caspase-3和Caspase-7蛋白的表达。Western blot检测敲低CIZ1基因对MEK-ERK1-2信号通路影响的结果显示，CIZ1下调可以显著抑制磷酸化的MEK的表达水平，与对照组相比差异具有统计学意义(t＝3.925，8.461；P<0.05)；CIZ1下调可抑制ERK1-2蛋白的磷酸化水平，与对照组相比差异具有统计学意义(t＝14.12，28.36；P<0.05)。 结论敲低CIZ1基因可以通过抑制MEK-ERK1-2信号通路抑制RB的生长。     

视网膜母细胞瘤抗原致敏的树突状细胞疫苗抗SO-RB50细胞系的实验研究

目的　研究视网膜母细胞瘤 (RB)抗原致敏的树突状细胞 (DC)疫苗体外特异性对RB细胞系SO RB50 杀伤作用 ,为进一步研究RB的治疗提供新的思路。方法　以RB细胞的蛋白抗原体外冲击致敏健康人 (正常对照组 )及RB患者 (患者组 )来源的成熟DC ,并将其与自体T细胞混合培养 ,诱导出抗SO RB50 的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) ,以Burkitt淋巴瘤Raji细胞作为对照靶细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)分别比较CTL对SO RB50 和Raji细胞的杀伤率及正常对照组与RB患者组来源特异性杀伤率的组间差异性。结果　对SO RB50 与Raji 2种靶细胞 ,正常对照组和RB患者组的CTL细胞毒作用均随着效靶比的增加而增加 ,对SO RB50 细胞的杀伤作用各效靶比均强于相应效靶比的Raji细胞(P <0 .0 1) ;各效靶比正常对照组CTL对SO RB50 细胞的特异性杀伤作用均显著强于RB患者组CTL(P <0 .0 1) ;而各效靶比正常对照组与RB患者组CTL对Raji细胞的非特异性杀伤作用则相近 ,两者比较 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　应用RB抗原负载DC可诱导出针对SO RB50 细胞抗原特异性的CTL ,这种方法对RB的治疗可能具有潜在的临床应用价值。     

玻璃体腔注药治疗视网膜母细胞瘤的研究进展

视网膜母细胞瘤(RB)常伴有玻璃体腔种植.由于玻璃体内缺乏血液供应,化疗药物难以在玻璃体内达到有效浓度.尽管全身化疗及眼动脉介入化疗明显提高了RB的眼球保留率,但对于玻璃体腔内子瘤的控制仍不理想.近年来,玻璃体腔注药(IViT)治疗RB引起了很大的关注.玻璃体腔注射马法兰等抗肿瘤药物对于RB伴玻璃体腔种植具有良好的疗效,且副作用较小.掌握安全剂量以及优化操作技术流程,可以进一步降低并发症的风险.对于伴有顽固性或复发性玻璃体腔种植的RB患者,IViT提供了一个相对安全有效的保留眼球的途径,有望成为临床上治疗RB的一种重要手段.目前IViT的批准有待于二期临床试验的结果.本文就IViT治疗伴玻璃体腔种植RB的疗效、副作用以及如何提高治疗安全性等方面的研究进展进行综述.     

【In Press】 Expression of multidrug resistance proteins in retinoblastoma

AIM: To elucidate the mechanism of multidrug resistance in retinoblastoma (RB), and to acquire more insights into in vivo drug resistance. METHODS: Three anticancer drug resistant Y79 human RBcells were generated against vincristine, etoposide or carboplatin, which are used for conventional chemotherapy in RB. Primary cultures from enucleated eyes after chemotherapy (PCNC) were also prepared. Their chemosensitivity to chemotherapeutic agents (vincristine, etoposide and carboplatin) were measured using MTT assay. Western blot analysis was performed to evaluate the expression of p53, Bcl-2 and various multidrug resistant proteins in RB cells. RESULTS: Following exposure to chemotherapeutic drugs, PCNC showed less sensitivity to drugs. No significant changes observed in the p53 expression, whereas Bcl-2 expression was found to be increased in the drug resistant cells as well as in PCNC. Increased expression of P-glycoprotein (P-gp) was observed in drug resistant Y79 cells; however there was no significant change in the expression of P-gp found between primary cultures of primarily enucleated eyes and PCNC. Multidrug resistance protein 1 (Mrp-1) expression was found to be elevated in the drug resistant Y79 cells as well as in PCNC. No significant change in the expression of lung resistance associated protein (Lrp) was observed in the drug resistant Y79 cells as well as in PCNC. CONCLUSION: Our results suggest that multidrug resistant proteins are intrinsically present in RB which causes treatment failure in managingRB with chemotherapy.     

经眼动脉介入化学疗法治疗视网膜母细胞瘤的研究进展

经眼动脉介入化学药物治疗（intra-arterial chemotherapy,IAC）是通过介入的方法从眼动脉向患眼注射化学治疗（化疗）药物,对视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）进行局部化疗的一种治疗方法。目前IAC治疗RB的常用药物有美法仑、拓扑替康和卡铂。经眼动脉注射化疗药物,可在局部形成高浓度药物作用,有效杀伤肿瘤细胞,同时可显著降低静脉化疗全身并发症的发生率。应用IAC治疗RB国际分期中B、C、D期及部分E期患者,可有效提高保眼率。IAC的主要并发症包括眼睑、结膜水肿,眼睑下垂,眼球运动障碍,玻璃体出血,视网膜、脉络膜缺血和一过性骨髓抑制等。目前,IAC技术已在国际上广泛开展,本文主要对其临床应用研究进行综述。     

Retinoblastoma: Achieving new standards with methods of chemotherapy

The management of retinoblastoma (RB) has dramatically changed over the past two decades from previous radiotherapy methods to current chemotherapy strategies. RB is a remarkably chemotherapy-sensitive tumor. Chemotherapy is currently used as a first-line approach for children with this malignancy and can be delivered by intravenous, intra-arterial, periocular, and intravitreal routes. The choice of route for chemotherapy administration depends upon the tumor laterality and tumor staging. Intravenous chemotherapy (IVC) is used most often in bilateral cases, orbital RB, and as an adjuvant treatment in high-risk RB. Intra-arterial chemotherapy (IAC) is used in cases with group C or D RB and selected cases of group E tumor. Periocular chemotherapy is used as an adjunct treatment in eyes with group D and E RB and those with persistent/recurrent vitreous seeds. Intravitreal chemotherapy is reserved for eyes with persistent/recurrent vitreous seeds. In this review, we describe the various forms of chemotherapy used in the management of RB. A database search was performed on PubMed, using the terms “RB,” and “treatment,” “chemotherapy,” “systemic chemotherapy,” “IVC,” “IAC,” “periocular chemotherapy,” or “intravitreal chemotherapy.” Relevant English language articles were extracted, reviewed, and referenced appropriately.     

马法兰在视网膜母细胞瘤治疗中的应用

马法兰（melphalan）是目前治疗视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）较有效的药物,主要给药方式是经眼动脉化疗和玻璃体腔注药治疗。经眼动脉化疗后70．0％的患者在2年内无不良事件发生,并且因其全身毒性小而得到广泛应用。在 RB 的治疗中,对出现玻璃体种植者的治疗具有挑战性。在玻璃体腔注射马法兰技术出现后,对有玻璃体种植的 RB 保留眼球率远远超过了既往的任何治疗手段。因此马法兰经眼动脉化疗和玻璃体腔注药治疗是治疗 RB 的有效手段之一。（国际眼科纵览,2016,40：187-191）     

Expression of multidrug resistance proteins in retinoblastoma

AIM: To elucidate the mechanism of multidrug resistance in retinoblastoma, and to acquire more insights into in vivo drug resistance. METHODS: Three anticancer drug resistant Y79 human RB cells were generated against vincristine, etoposide or carboplatin, which are used for conventional chemotherapy in RB. Primary cultures from enucleated eyes after chemotherapy (PCNC) were also prepared. Their chemosensitivity to chemotherapeutic agents (vincristine, etoposide and carboplatin) were measured using MTT assay. Western blot analysis was performed to evaluate the expression of p53, Bcl-2 and various multidrug resistant proteins in retinoblastoma cells. RESULTS: Following exposure to chemotherapeutic drugs, PCNC showed less sensitivity to drugs. No significant changes observed in the p53 expression, whereas Bcl-2 expression was found to be increased in the drug resistant cells as well as in PCNC. Increased expression of P-glycoprotein (P-gp) was observed in drug resistant Y79 cells; however there was no significant change in the expression of P-gp found between primary cultures of primarily enucleated eyes and PCNC. Multidrug resistance protein 1 (Mrp-1) expression was found to be elevated in the drug resistant Y79 cells as well as in PCNC. No significant change in the expression of lung resistance associated protein (Lrp) was observed in the drug resistant Y79 cells as well as in PCNC. CONCLUSION: Our results suggest that multidrug resistant proteins are intrinsically present in retinoblastoma which causes treatment failure in managing retinoblastoma with chemotherapy.     

儿童视网膜母细胞瘤的化学疗法

视网膜母细胞瘤是婴幼儿的一种先天性眼内恶性肿瘤,现阶段已有的治疗手段包括化疗（局部＋全身）、外照射、温热治疗、冷冻治疗、内放射敷贴术、光凝治疗、眼球摘除等。本文主要对视网膜母细胞瘤的化疗进展予以阐述。视网膜母细胞瘤化疗分为全身化疗和局部化疗两个阶段,全身化疗对于早期视母具有较好的疗效,但对晚期阶段效果欠佳,而合并局部化疗（眼内注射＋介入化疗）可有效帮助晚期视母患者获得更好的预后。     

视网膜母细胞瘤的治疗研究进展

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤,其发病与基因突变相关。为提高患儿生存率,降低眼球摘除率,治疗方法不断更新发展。目前主要治疗方法有化学治疗、放射治疗、手术治疗、物理治疗、光化学治疗、基因治疗等。本文就视网膜母细胞瘤的治疗进展进行综述。     

视网膜母细胞瘤治疗及研究进展

随着基础研究和临床实践的逐步深入,视网膜母细胞瘤（ RB）的治疗模式已发生改变。目前,RB的治疗方法包括局部治疗、化学治疗、放射治疗、手术治疗、基因治疗等,本文将就RB的治疗及研究进展进行综述。     

视网膜母细胞瘤相关基因研究进展

视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,严重危害患儿的视力、眼球,甚至生命.RB起源于视网膜胚胎发育阶段,其发生和发展与人类第1个分离克隆的抑癌基因RB1密切相关.RB12个等位基因的失活是RB发生和发展的基础.近年来,随着分子生物以及基因工程技术的迅猛发展,RB相关基因研究取得了一定进展.研究发现,RB的发生和发展除了存在RB1基因突变外,还存在许多染色体层面的改变,癌基因MYCN、鼠双微体4(MDM4,又称MDMX)、驱动蛋白家族成员14(KIF14)、DEK、E2F3,以及抑癌基因钙粘连素11(CDH11)等也在RB的发生和发展中发挥驱动作用.现就RB相关基因的研究进展进行综述,从DNA分子水平认识RB的发生和发展规律,为基因治疗RB以及临床医师制定治疗方案提供科学依据.     

视网膜母细胞瘤治疗中应注意的若干问题

个体化的综合治疗开创了视网膜母细胞瘤（RB）临床诊治的新纪元,国内数家眼科中心为此进行了有益的尝试,但从总体上对这一疾病的认识尚有待提高。本文就推广RB的国际分期、改变对RB认识上的误区、提高RB的早期诊断率、加强多中心协作,提高国内RB临床研究的质量、开展RB临床基础研究等五个方面做一简要述评。