沉默EGFL6基因表达抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨表皮生长因子样结构域蛋白6(EGFL6)在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(Epithal-Mesenchymal Transition,EMT)的影响。方法:实验分为si-NC组和si-EGFL6组,将si-EGFL6使用Lipofectamine2000转染至卵巢癌SK-OV-3和OV-90细胞。使用在线工具GEPIA和KM-plotter分析EGFL6在卵巢癌中的表达水平及其与预后的关系。CCK-8实验检测SK-OV-3和OV-90细胞的增殖,划痕愈合实验和Transwell实验分别检测SK-OV-3和OV-90细胞的迁移和侵袭能力,q RT-PCR实验检测SK-OV-3和OV-90细胞中EGFL6的表达水平,Westernblot检测EGFL6及EMT相关基因E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的蛋白表达水平。结果:EGFL6在卵巢癌高表达,和卵巢癌的不良预后相关,具有临床诊断意义。沉默EGFL6表达后,SK-OV-3和OV-90卵巢癌细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.01),迁移和侵袭能力降低(P<0....     

氯喹激活上皮-间充质转化促进肝癌细胞侵袭

目的探讨氯喹对HepG2细胞EMT的影响及氯喹抑制肝癌侵袭作用。方法将HepG2细胞分为对照组、化疗组、氯喹组和联合组四组,分别加入氯喹与顺铂等药物,通过黏附实验、测定细胞的侵袭能力并检测EMT相关蛋白的表达。结果各给药组细胞的黏附率、划痕的愈合率、转移的HepC2细胞数均低于模型组(P<0.05);联合用药组转移的HepG2细胞数低于顺铂组(P<0.01);联合给药组HepG2细胞中Vimentin表达低于模型组,而E-cadherin表达高于模型组(P<0.05);联合用药HepG2细胞中Vimentin表达低于顺铂组,而E-cadherin表达高于顺铂组(P<0.01)。结论氯喹通过上调上皮标志蛋白E-cadherin的表达,下调间充质细胞标记物Vimentin的表达降低HlpC2细胞运动和侵袭性逆转其EMT进程。     

MTA3通过β-hCG调控上皮性卵巢癌侵袭转移的机制研究

目的探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)转移相关基因3(metastasis associated gene 3, MTA3)的表达及其与肿瘤 侵袭转移的关系。方法 收集晚期(FIGO Ⅲ-Ⅳ期)EOC术中冰冻标本(8例)及石蜡标本(21例),qRT-PCR和IHC检测卵巢部位肿瘤组织和转移瘤组织中MTA3的表达;Transwell细胞迁移实验观察下调MTA3、下调β-hCG、同时下调MTA3和β-hCG的EOC细胞株(SKOV3和ES-2)体外迁移力的变化。EOC细胞体外分别转染50、100、200nmol/L siRNA-MTA3,qRT-PCR检测分析MTA3和β-hCG的表达相关性;qRT-PCR及Western印迹法检测分析下调MTA3对β-hCG以及上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin表达的调控作用。结果 qRT-PCR、IHC示EOC转移瘤组织中MTA3的表达显著低于卵巢部位肿瘤组织(P<0.05);Transwell细胞迁移实验示下调MTA3显著增强了EOC细胞的迁移能力(P<0.001),下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(P<0.001),下调MTA3下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(P<0.001);qRT-PCR示MTA3与β-hCG的表达呈显著负相关(P<0.05);qRT-PCR、Western印迹法示MTA3下调时,β-hCG和N-cadherin的表达显著上调,而E-cadherin的表达则显著下调。结论 MTA3可能通过β-hCG干预EMT进程,进而调控上皮性卵巢癌侵袭转移。     

MicroRNA-219-5p靶向E-钙黏蛋白调控上皮间质转化抑制肝癌细胞侵袭转移

目的  研究MicroRNA-219-5p（miR-219-5p）靶向E-钙黏蛋白（E-Cadherin）调控上皮间质转化（EMT）抑制肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法  首先通过生物信息学方法,寻找与E-Cadherin结合特异性最好、稳定性强的miRNAs。在30例肝癌组织和20例癌旁肝组织中,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-Cadherin的表达水平;实时荧光定量PCR检测（qRT-PCR）miR-219-5p表达,分析两者之间的相关性。在高转移和低转移的肝癌细胞株中,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin表达。采用Lipofectamine 2000将miR-219-5p 模拟子（mimic）、抑制子（inhibitor）、阴性对照组（negative contral）转染到肝癌HepG2细胞系,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin的表达;Transwell方法检测miR-219-5p表达改变对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。结果  生物信息学发现miR-219-5p与E-Cadherin结合最稳定,且特异性最好。肝癌组织中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达,而癌旁组织中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达。高转移细胞株中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达而N-cadherin高表达,在低转移细胞株中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达而N-cadherin低表达（P <0.05）。miR-219-5p水平表达增高,引起E-Cadherin表达下调,N-cadherin高表达;miR-219-5p表达下调,可引起E-Cadherin表达上调,N-cadherin低表达（P <0.05）;HepG2-miR-219-5p 模拟子细胞株中侵袭细胞计数为（24±3）个/高倍镜视野,明显低于对照组细胞株（P <0.05）。结论  miRNA-219-5p可通过靶向结合E-Cadherin,调控EMT信号通路,抑制肝癌细胞的侵袭转移。

     

Galectin-9对卵巢癌细胞侵袭转移的影响

目的 探讨半乳糖凝集素-9(Galectin-9)对卵巢癌细胞侵袭转移的影响.方法 将不同浓度外源性Galectin-9[0(阴性对照)、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL]加入卵巢癌SKOV3细胞中,培养48 h,Western blot法检测细胞内Galectin-9的表达,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、上皮间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 与阴性对照比较,4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL外源性Galectin-9能显著提高卵巢癌SKOV3细胞中Galectin-9的表达(P<0.01);4μg/mL、8μg/ml、16μg/mL外源性Galectin-9能显著降低SKOV3细胞活力[(100.00±7.46)vs(77.92±8.03)、(60.62±6.42)、(47.63±5.41)](P<0.01),减少细胞迁移[(99.49±9.63)vs(78.36±8.90)、(65.42±7.32)、(50.31±6.78)]及侵袭数目[(99.13±10.30)vs(76.69±7.23)、(63.68±6.32)、(52.37±4.99)](P<0.01),并能显著下调MMP2、MMP9及Vimentin的表达(P<0.01),上调E-cadherin的表达(P<0.01).结论 上调卵巢癌细胞SKOV3中Galectin-9的表达能显著抑制细胞迁移侵袭等恶性生物学行为,可能与下调MMPs及调节EMT相关蛋白表达有关.     

Wnt5a促进黑素瘤的侵袭转移

Wnt蛋白家族是一系列高度保守的分泌性的糖蛋白,目前已发现了19种Wnt蛋白。不同的Wnt蛋白具有独特的分泌方式并在胚胎发育、肿瘤形成中发挥着不同的功能。Wnt蛋白可分为两类:经典Wnt蛋白(Wnt3a)和非经典Wnt蛋白(Wnt5a、Wnt11),他们分别激活经典Wnt信号途径和非经典的Wnt信号途径[1]。经典Wnt信号途径也称为Wnt/β-cate-nin信号途径,Wnt蛋白通过与受体结合,使得胞质中的β-catenin稳定累积并入核,调控靶基因的转录[2]。非经典Wnt     

上皮-间质转化在肿瘤侵袭转移中的作用研究进展

上皮-间质转化（EMT）是指上皮细胞获得间质细胞的生物学特性的过程,表现为细胞极性丧失、上皮细胞标志物（如细胞黏附分子）表达减少及间质细胞标志物（如波形蛋白）表达的增高.EMT在胚胎发育等生理过程及创伤修复等病理生理过程中起重要作用.近年来研究发现,EMT可促进肿瘤细胞侵袭转移,并与肿瘤干细胞生物学功能关系密切.EMT的发生与肿瘤微环境中多种信号通路、诱导因子、转录因子以及microRNA相关.     

RNAi沉默N-cadherin通过MEK-ERK信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化过程

目的 探讨沉默神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移与上皮-间质转化的影响及分子机制。方法 收集2021年3月～2021年12月我院卵巢癌患者手术切除的卵巢癌组织与邻近癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色检测N-cadherin蛋白表达。通过RNAi技术沉默卵巢癌细胞SKOV3细胞中N-cadherin的表达后分为空白对照组、空载体组、siRNA-N-cadherin组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性、克隆形成能力以及细胞周期分布,Transwell实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞中N-cadherin、上皮性钙粘附分子(E-cadherin)mRNA表达,免疫细胞化学染色检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达,Western blot检测各组细胞中MEK、ERK蛋白表达。结果 与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中N-cadherin呈高表达(P<0.05)。与空白对照组和空载体组比较,沉...     

Ezrin调控肝癌细胞侵袭性伪足的形成促进肝细胞癌侵袭转移

目的 探讨Ezrin在肝癌细胞侵袭性伪足形成过程中的作用.方法 利用GEPIA数据库分析肝癌组织中Ezrin mRNA与伪足标志物Cortactin mRNA的表达相关性.将收集的105例肝细胞癌患者的组织标本制作成组织芯片,采用免疫组化检测Ezrin蛋白和伪足标志物Cortactin蛋白在肝癌组织中的表达,并分析二者...     

上皮-间质转化在肿瘤侵袭转移中作用的研究进展

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指具有极性的上皮细胞转化成具有活动能力的间质细胞的过程,在胚胎发生与器官发育、肿瘤形成和转移以及组织纤维化等生理病理过程中均有表现。EMT的发生涉及多种信号转导通路,与诱导因子、转录因子及微环境等有关。研究表明,EMT参与肿瘤的发生与发展,在促进肿瘤侵袭转移中发挥了重要作用。文中综合目前研究进展,就EMT在肿瘤侵袭转移中的作用及其分子机制作一综述。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-126调控SKOV3卵巢癌细胞周期的实验研究

目的探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响,评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组）,观察转染miR-126后细胞形态变化,并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。结果转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多,片状伪足减少,这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%,而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%,可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P〉0.05）,而与其他两组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低,而停留在G1的细胞比例则较高,两期比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论经miR-126转染后SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,而G1期细胞明显增加,细胞伪足减少,提示转染miR-126的SKOV3卵巢癌细胞其增殖和侵袭能力降低。     

葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭及转移中的作佑

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在乳腺癌细胞(231)侵袭、转移过程所起的作用。方法构建GRP78真核反义表达载体,转染入231细胞,利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况;并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化。结果转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞;反义GRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用。结论GRP78是乳腺癌的一个促癌基因,下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。     

衰老的卵巢间质成纤维细胞对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的影响

目的探讨衰老的卵巢间质成纤维细胞对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。方法原代培养人卵巢正常成纤维细胞（NOF）,在体外持续传代诱导细胞衰老,用衰老相关的β半乳糖苷酶染色（SA-b-gal）试验检测细胞是否发生衰老。收集正常成纤维细胞的条件培养基（CMn）及衰老成纤维细胞的条件培养基（CMs）。用CMn和CMs分别处理SKOV3细胞,利用CCK8试剂盒、Transwell小室及三维培养试验检测细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果卵巢正常成纤维细胞在体外持续传代会导致细胞复制性衰老,在SA-b-gal试验中有明显的深蓝色沉淀产物。用CMs处理SKOV3细胞,CCK8试验显示细胞培养第5天的OD（2.067±0.058）高于CMn组（1.073±0.056）（t=21.19,P＜0.01),表明细胞的增殖能力增强。Transwell试验显示CMs组穿透Matrigel胶的细胞数（235.00±29.68）个,较CMn组的（129.30±15.52）个明显增多（t=5.47,P＜0.01）;三维培养中形成的克隆球CMs组较CMn组明显增大、数量明显增多（27.00±2.16vs11.67±2.50;t=8.04,P＜0.01),向外侵袭能力增强。结论衰老的卵巢间质成纤维细胞在体外培养中能促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力。     

基质金属蛋白酶-9与大肠癌浸润转移的相关性研究

目的:研究MMP-9的转录及表达与大肠癌的临床病理参数间的关系,探讨其在大肠癌浸润转移中的作用及机制。方法:采用定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学方法,检测41例大肠癌标本及远癌切端结肠组织中MMP-9基因的mRNA转录水平及蛋白表达水平。结果:大肠癌中MMP-9的转录及表达水平均显著高于远癌切端正常组织(P<0.01),与大肠癌的浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:MMP-9在大肠癌的浸润转移中发挥重要作用,有助于判断患者预后情况。     

PET-CT对卵巢癌复发及转移的监测价值

目的探讨PET-CT监测卵巢癌复发及转移的临床价值。方法选择26例卵巢癌患者的临床资料进行回顾性分析,患者术后行PET-CT全身及盆腔显像,并与同期ECT、B超结果进行比较,分析PET-CT监测卵巢癌复发及转移的临床价值。结果 15例患者PET-CT结果为阳性,其中14例CA-125升高,1例正常。共发现53处病灶,分别位于盆腔、手术切口、腹腔、肠系膜、腹膜、椎体。PET-CT结果显示FDG高摄取,存在异常高代谢。PETCT病灶数检出率显著高于B超和ECT检测结果（P〈0.01）。结论 PET-CT在肿瘤的卵巢癌的复发和转移监测方面具有明显的优势,其对病灶的检出率显著高于B超与ECT。     

上皮间质转化与肿瘤干细胞在肿瘤转移中的作用

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的主要特征是上皮表型的缺失及间质特性的获得。EMT在胚胎发育、创伤愈合及组织重建等生理过程中发挥重要作用,也参与组织纤维化及恶性肿瘤发生发展等病理过程。EMT在促使肿瘤细胞侵袭并转移至远端组织的同时,也使得转移的肿瘤细胞具有自我更新能力等干细胞样特性,有助于形成肿瘤宏观转移灶并产生多重耐药性。多种转录因子、信号转导通路、microRNAs及细胞微环境等参与并调控此过程。阐明EMT与肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在肿瘤转移中的作用机制,将为肿瘤转移与复发的靶向治疗提供新思路。