重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗胃溃疡

哈药集团技术中心 1 前言 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(英文名称:Recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,简称rhGM-CSF)作为九十年代以来高新技术生物工程产品,具有促进骨髓粒系造血的恢复,升高外周血白细胞数的作用,现已广泛应用于白血病及肿瘤病人的大剂量放化疗,严重感染等白细胞减少性疾病的治疗.     

重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的临床研究进展

本文着重从骨髓发育异常综合症，骨髓移植，外周血造血干细胞移植，恶性肿瘤放疗和化疗引起的白细胞减少症和白血病等方面介绍了重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）近些年的临床研究进展情况。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液中相关蛋白的定性分析

目的 分析鉴定国产重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液中的相关蛋白。方法 采用液质联用技术,对产品的相关蛋白进行相对分子量测定及肽图分析,分别从分子量及肽段水平进行鉴定。结果 对两家生产企业的原液进行检测,相对分子量测定结果显示：样品中存在的相关蛋白有氧化形式、乙酰化形式。肽图分析结果显示：在第1位、第79位或第80位甲硫氨酸上发生了氧化修饰,在第64位或/和第73位赖氨酸上发生了乙酰化修饰。结论 为重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量研究提供了依据。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗早期糖尿病足溃疡疗效观察

目的:观察局部皮下注射重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)治疗糖尿病足溃疡患者的疗效。方法:36例糖尿病足溃疡1～3级患者均用胰岛素强化控制血糖在理想范围内,溃疡面先用强力碘清洁消毒处理,再用生理盐水冲洗,清除坏死组织,第2次用生理盐水冲洗,然后随机分为2组。治疗组:直接将rhGM-CSF注射剂按5μg.kg-1.d-1沿创面周围皮下注射,每日1次;对照组:常规消毒清洁创面后,用无菌凡士林纱布覆盖溃疡面,每天换药1次,2组均治疗30d。结果:治疗组与对照组的总有效率分别为100.0%、83.3%(P<0.05);平均住院时间分别为21、32d(P<0.05)。结论:rhGM-CSF局部皮下注射较常规换药可提高糖尿病足溃疡1～3级患者的总有效率,促进糖尿病足慢性创面的愈合。     

大肠杆菌表达重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的中试纯化

重组人粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (rHuGM -CSF)表达产物在大肠杆菌中以包涵体的形式存在。方法　包涵体高压匀浆破菌抽提后 ,经凝胶过滤层析、复性、离子交换层析及凝胶过滤层析等纯化步骤。结果终产物纯度达 97% ,比活性达 1 2× 10 7U/mg蛋白 ,测定N端 2 0个氨基酸系列与其DNA系列推导的氨基酸系列完全一致。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子比色测定中最适波长的研究

目的：研究重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子比色测定中的最适波长。方法：采用UV－2001紫外分光光度计在0－700nm波长处测定其吸收度，绘制标准曲线。结果：该法测定样品在595nm处有最大吸收度，在695处无吸收。结论：重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子比色测定中的最适波长为595nm。     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的临床应用及…

本文阐述了作用于各种骨髓细胞增殖和成熟的粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的临床应用情况及其副作用。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子溶液中的稳定性初探

在大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）纯化的基础上,我们研究了其在溶液中的稳定性,发现它在pH6.8的PBS缓冲液中稳定性很好,但在pH8.3的Tris·HCl冲浪中时隔2 wk以上即发生降解,SDS-BAGE分析,相应位置变成两条带,将SDS-PAGE胶电转移至PVDF膜,将膜上出现的两条蛋白染色带剪下,进行N端氨基酸序列分伍,两蛋白均有固定的降解位点.降解的蛋白与未降解的相比,生物活性仅有较激下降。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子工程菌诱导条件的优化研究

目的：本实验用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)进行培养,探讨目的蛋白最高表达量的诱导条件。方法：通过实验条件的优化确定了适合GM-CSF表达的诱导温度、诱导时间和培养基等。结论：带有GM-CSF的基因工程菌在30℃生长最合适,培养5小时后42℃升温诱导5小时目的蛋白表达量最高。     

比较粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子与粒细胞集落刺激因子对骨髓抑制的疗效

目的：比较粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）与粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）治疗因化学治疗（化疗）致骨髓抑制的疗效。方法：３９例恶性肿瘤病人随机分ＧＭ－ＣＳＦ组１８例（男性１２例，女性６例，中位年龄４２ａ）与Ｇ－ＣＳＦ组２１例（男性１３例，女性８例，中位年龄５３ａ）。因化疗后引起骨髓抑制，分别应用ＧＭ－ＣＳＦ１５０μｇ／ｄ与Ｇ－ＣＳＦ１００μｇ／ｄ，ｓｃ，ｑｄ×（２￣６）ｄ。结果：２组     

重组人粒细胞集落刺激因子肽谱分析方法初探

建立检测重组人粒细胞集落刺激因子肽谱的方法。方法：采用ＲＰ－ＨＰＬＣ法及ＣＺＥ法。结果：检测ｒｈＧ－ＣＳＦ经胰蛋白酶解后的肽段,发现九源公司生产的各批产品的一级结构具有一致性。结论本法适用于基因工程药物的肽谱分析。     

重组人粒细胞集落刺激因子注射液的稳定性研究

采用毛细管电泳、反相HPLC、凝胶排阻HPLC、SDS-PAGE非还原电泳、pH值、生物学活性等检测方法对重组人粒细胞集落刺激因子注射液的稳定性进行系统研究,在加速试验、室温留样、贮藏温度留样条件下检测了稳定性。结果样品于2～10°C保存下,外观、pH值、含量、纯度及生物学活性均相当稳定,有效期可暂定为两年。     

重组人粒细胞刺激因子的纯化方法

目的:建立G-CsF的纯化方法.方法:对包涵体进行有效洗涤,采用疏水层析进行纯化.结果:包涵体纯度大于70%,产品反向纯度大于95%,电泳纯度大T98%.结论:所建立的G-CSF的纯化方法简便可行,适用于工业化生产.     

Evaluation of Genetic Stability of Recombinant Human Factor VIII by Peptide Mapping and On-line Mass Spectrometric Analysis

Purpose. The genetic stability of a recombinant human factor VIII (rhFVIII) product expressed in Chinese hamster ovary cells (Recombinate) has been evaluated through comparisons of the protein produced at the beginning, middle and end of a typical production campaign. Methods. Recombinant human factor VIII was incubated with thrombin, the resulting four polypeptides were isolated by RP-HPLC, subjected to proteolysis with trypsin, and the peptide mixtures were resolved by RP-HPLC. Tryptic peptide mixtures were subjected to online mass spectrometric analysis using an electrospray ionization source interfaced to a quadrupole mass analyzer scanning from 1950–200 amu, and the peptide ion data were compared for three lots produced from the beginning, middle and end of a production campaign. Results. The UV elution profiles for each of the rhFVIIIa polypeptides were highly similar for factor VIII isolated from the beginning, middle and end of production. Total ion data from the peptide maps derived from three lots of rhFVIII were compared by MH¹⁺ values as a function of scan range. A total of 918 ions were analyzed for the four polypeptides of rhFVIII produced at the beginning, middle and end of a production campaign. The ions were detected at the same relative retention times, as indicated by the similar scan numbers for the three lots. Conclusions. These observations support that rhFVIII preparations produced from the beginning, middle and end of a production campaign were highly similar, and demonstrate genetic stability in the manufacturing process of Recombinate.     

重组人粒细胞集落刺激因子预防放射性口腔黏膜炎的临床观察

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)预防放射性口腔黏膜炎的临床疗效。方法:将86例接受放射治疗的头颈部恶性肿瘤患者随机分为治疗组和对照组。治疗组44例,采用复方氯己定含漱液清洗口腔后,rhG-CSF漱口液含漱;对照组42例,单纯采用复方氯己定含漱液清洗口腔。结果:治疗组Ⅲ、Ⅳ级放射性口腔黏膜炎的发生率明显低于对照组,分别为38.6%和71.4%,2组比较有显著性差异(P<0.05)。治疗组发生放射性口腔黏膜炎的时间较晚,放射治疗20Gy时,治疗组口腔黏膜炎的发生率为68.2%,对照组为92.9%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rhG-CSF局部预防用药能推迟放射性口腔黏膜炎的发生,并可降低Ⅲ、Ⅳ级放射性口腔黏膜炎的发生率。     

重组人粒细胞集落刺激因子rhG-CSF稳定性研究

粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factor G-CFS)主要来源于巨嗜细胞,内皮细胞及纤维母细胞。能高度特异性的刺激中性白细胞系的功能活化因子。为了探索重组人粒细胞集落刺激因子rhG-CSF稳定性,我们在4摄氏度的条件下,不同PH值,不同添加剂的条件下,对其活性的影响。     

人粒细胞集落刺激因子包涵体的提取及其复性研究

研究人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）包涵体的复性方法。方法：采用我室发明的包涵体提纯新方法。结果：复性回收率可达９０％以上,生物活性达天然比活的８０％以上。结论：对ｒｈＧ－ＣＳ Ｆ包涵体提纯和复性的研究,建立了ｒｈＧ－ＣＳＦ的复性新方法。     

重组人粒细胞集落刺激因子rhG—CSF的纯化工艺探讨

粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor G-CSF)主要来源于巨嗜细胞,内皮细胞及纤维母细胞。能高度特异性的刺激中性白细胞系的功能活化因子。在这里我们对rhG-CSF的纯化工艺进行探讨。通常对rhG-CSF的纯化采用S-200和DE柱进行纯化,在这里我们采用另外一种方法,即采用Q柱和CM柱进行纯化。并对其比较讨论。     

重组人纽表位肽12的胃蛋白酶切肽图分析方法的研究

采用反相高效液相色谱法建立重组人纽表位肽12的标准肽图分析法，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A液：0.1％TFA的水溶液，流动相B液：0.1％TFA的乙腈溶液；梯度洗脱程序：0～70min内B％由0％增至70％。结果3批重组人纽表位肽12样品的反相高效液相色谱图完全一致，与重组人纽表位肽12理化对照品的肽图比较，完全吻合，同时胃蛋白酶并不干扰肽图的测定，该法准确度高、重现性好，可用于重组人纽表位肽12的质量控制。     

重组人胰岛素V8酶肽图谱的毛细管区带电泳分析

目的：建立重组人胰岛素Ｖ８酶肽图谱的毛细管电泳分析方法。方法：利用毛细管区带电泳分离模式,采用熔凝石英毛细管柱,检测了重组人胰岛素经Ｖ８蛋白酶解所产生的５个肽片段;比较了重组与天然人胰岛素的Ｖ８蛋白酶肽图谱;鉴定了毛细管区带电泳和反相高效液相色谱的肽图谱中各峰的对应关系。结果：重组人胰岛素与天然人胰岛素的分子结构具有同一性;毛细管区带电泳和反相高效液叮色谱２种方法具有不同的分离机理。结论：毛细管区