基于UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定防风在大鼠体内的入血成分及代谢产物

目的 研究防风Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.水煎液在大鼠体内的入血成分及代谢产物。方法 应用超高效液相色谱串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术鉴定防风入血成分及代谢产物。采用Eclipse Plus C₁₈色谱柱（150mm×2.1mm,1.8μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈（B）,梯度洗脱,流速0.3 ml/min,进样量3 μl。结果 建立了大鼠给药后血浆样品的分析测定方法,并且与空白血浆、防风水煎液和对照品的保留时间及质谱碎片离子信息对比,共鉴定了大鼠血浆中21个来源于防风的化合物,包括10个入血原型成分和11个代谢产物。结论 防风主要成分在大鼠体内的代谢途径主要包括羟化、去甲基化、葡萄糖醛酸化等。所建立的方法简单可靠,为揭示防风的药效物质基础提供研究依据。     

基于UPLC-Orbitrap-HRMS技术鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠体内入血成分

目的 鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠ig后的入血原型成分和代谢产物。方法 基于超高效液相色谱-静电场轨道阱-高分辨率质谱技术（UPLC-Orbitrap-HRMS）,结合对照品图谱、自建数据库、相关文献信息及Compound Discoverer3.3、Xcalibur qual browser 4.3等软件对当归-川芎药对的化学成分进行分析鉴定;大鼠经ig给药后制得含药血清,通过比对含药血清与对照组血清,鉴定入血原型成分和代谢产物。结果 共在当归-川芎药对中鉴定出69个化学成分,主要包括苯酞类24个、有机酸类24个、氨基酸类8个、含氮类7个、香豆素类4个、木脂素类1个、黄酮类1个;在含药血清中共鉴定出30个入血原型成分,包括苯酞类15个、有机酚酸类13个、香豆素类2个;鉴定出45个代谢产物,包括32个苯酞类代谢产物,13个有机酚酸类代谢产物。结论 明确了当归-川芎药对的化学成分及入血原型成分和代谢产物。     

基于 UPLC-Orbitrap-HRMS技术鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠体内入血成分

目的 鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠ig后的入血原型成分和代谢产物。方法 基于超高效液相色谱-静电场轨道阱-高分辨率质谱技术（UPLC-Orbitrap-HRMS）,结合对照品图谱、自建数据库、相关文献信息及Compound Discoverer3.3、Xcalibur qual browser 4.3等软件对当归-川芎药对的化学成分进行分析鉴定;大鼠经ig给药后制得含药血清,通过比对含药血清与对照组血清,鉴定入血原型成分和代谢产物。结果 共在当归-川芎药对中鉴定出69个化学成分,主要包括苯酞类24个、有机酸类24个、氨基酸类8个、含氮类7个、香豆素类4个、木脂素类1个、黄酮类1个;在含药血清中共鉴定出30个入血原型成分,包括苯酞类15个、有机酚酸类13个、香豆素类2个;鉴定出45个代谢产物,包括32个苯酞类代谢产物,13个有机酚酸类代谢产物。结论 明确了当归-川芎药对的化学成分及入血原型成分和代谢产物。     

基于UPLC-Q/TOF-MS的甘草酸单铵和甘草酸二铵在大鼠体内移行成分表征

目的 采用超高效液相色谱-四极杆/飞行时间高分辨质谱技术(UPLC-Q/TOF-MS)对甘草酸单铵和甘草酸二铵在大鼠体内的代谢轮廓进行表征,探讨两者可能的代谢途径。方法 大鼠分别灌胃给予甘草酸单铵和甘草酸二铵后,收集不同时间点大鼠脑组织、血浆、尿液、粪样等生物样本。经沉淀蛋白后,采用UPLC-Q/TOF-MS技术,以含0.1%甲酸的水-乙腈为流动相进行梯度洗脱;在正离子模式下采集生物样本的质谱数据。采用质量残差亏损过滤技术并结合原型成分的质谱裂解规律,预测代谢物类型,对两者相关的体内代谢产物进行鉴定。结果 甘草酸单铵和甘草酸二铵在大鼠体内主要以代谢物形式存在,共鉴定得到20个代谢产物,两者主要通过肠道排泄,在体内原型化合物脱糖基形成的甘草次酸基础上发生一系列的Ⅰ相氧化还原反应是主要代谢类型;甘草次酸是在生物样本中主要暴露成分,提示了其可能是甘草酸单铵及甘草酸二铵在体内发挥药效的关键药效成分。结论 首次阐明了甘草酸单铵及甘草酸二铵在大鼠体内的代谢轮廓,为进一步对两者发挥功效作用的物质基础及药效作用机制揭示和开发利用提供参考。     

“桂枝与白芍”药对入血成分UPLC-Q/TOF-MS分析

目的 对"桂枝与白芍"药对中的入血成分进行定性分析与鉴定。方法 采用UPLC,选择C₁₈反相色谱柱,以乙腈-0.1%冰醋酸水为流动相,梯度洗脱进行分离;联用电喷雾飞行时间质谱（ESI-TOF-MS/MS）分别在正离子与负离子模式下获得入血各成分的精确分子量和分子式;通过各成分裂解碎片信息,结合文献对药对中的入血成分进行鉴定。结果 由MS和MS/MS结果鉴定出12个入血成分,主要包括没食子酸、原儿茶酸等4种有机酸,芍药苷、芍药内酯苷等6种芍药总苷单萜类化合物及香豆素类成分。结论 血中移行成分的分析为明确"桂枝与白芍"药对体内药效物质基础提供了科学依据。     

基于胃肠动力障碍模型大鼠的气滞胃痛颗粒血清药物化学初步研究

目的 利用血清药物化学研究胃肠动力障碍模型大鼠灌胃气滞胃痛颗粒后的入血成分.方法 采用超高效液相色谱-电喷雾-飞行时间质谱技术,确定胃肠动力障碍大鼠口服气滞胃痛颗粒提取物后血中移行成分及其代谢产物.结果 胃肠动力障碍模型大鼠灌胃给予气滞胃痛颗粒后血清中检测25个移行成分,4个原型入血成分及21个代谢成分,并对其中的18个成分进行了结构推测.结论 血中移行成分及代谢产物可能为气滞胃痛颗粒发挥促胃肠动力的体内直接作用物质,为明确气滞胃痛颗粒药效物质基础提供了科学依据.     

UPLC-Q/TOF-MS/MS法分析鉴定夏佛塔苷在小鼠体内的代谢产物

采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography coupled with quadrupole/time-of-flight tandem mass spectrometry, UPLC-Q/TOF-MS/MS)技术,对夏佛塔苷口服给药后在小鼠体内的原形成分及其代谢产物进行定性分析。动物福利和实验过程获得徐州医科大学伦理委员会的批准(批准号:XZMULL201612024)。通过分析各成分的精确分子质量、一级、二级质谱信息,并与相应的对照品及文献比对,从小鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中共鉴定出1个原形成分和29个代谢产物。这些成分在小鼠体内代谢的主要途径有去羟基化、羟基化、脱糖化、糖化、氢化、甲基化、乙酰化、硫酸化、葡糖醛酸化等。研究结果可为进一步阐明夏佛塔苷的药效物质基础提供有价值的依据。     

基于UHPLC/Q-TOF/MS分析羊耳菊有效组分的入血成分

目的应用UHPLC/Q-TOF/MS技术和血清药物化学研究手段,分析检测羊耳菊有效组分的入血成分。方法大鼠灌胃给予羊耳菊有效组分提取物后,腹主动脉抗凝采血,血浆经甲醇二次沉淀蛋白处理。采用Eclipse Plus C18RRHD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)做流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1。负离子检测模式,同时结合布鲁克道尔顿公司的Metabolite Tools软件,鉴定和表征其血中的移行成分。结果给药后,在大鼠血浆中共检测到16个代谢产物,包括9个原型成分和7个代谢物,代谢方式主要以咖啡酰基奎宁酸类化合物的异构化、甲基化及甲基葡萄糖醛酸化的复合反应为主。结论本研究较为全面地阐释了羊耳菊活性部位提取物在大鼠血中的入血成分,为进一步研究羊耳菊药材的体内过程和药效物质基础提供了一定的参考。     

UPLC-Triple TOF-MS/MS分析闽产太子参代谢物积累的动态变化

目的:分析不同生长期太子参代谢产物积累的动态变化。方法:采用UPLC-Triple TOF-MS/MS技术对闽产太子参21批样品进行测定,通过多级串联质谱分析,结合Mass数据、软件数据库及相关文献对总离子流图主要分子离子峰进行归属,数据处理用Marker View软件进行主成分分析。结果:共鉴定出12种化合物;主成分得分图显示,不同生长期太子参样本能得到明显区分;7月份和8月份样品相对距离较近,说明这2个期点的样品化学差异较小;且与6月份样品有较大差异。通过载荷图筛选出差异显著的13种标志物,且这13种标志物呈现出不同的变化规律。结论:为揭示不同生长期太子参中代谢物积累动态规律及确定其药材合理采收期提供基础资料。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的甘草大鼠体内入血成分分析

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)法分析灌胃给药后甘草提取液在大鼠体内的入血成分。方法:大鼠灌胃给予甘草提取液后,腹主动脉取血,分离血清。采用UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)分析,0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源,正、负离子模式下对甘草提取液、给药血清和空白血清进行数据采集。结果:根据色谱峰保留时间及质谱碎片裂解规律,结合文献相关信息,共鉴定出13个入血原型成分,依次为Tachiogroside B、夏佛托苷、7,4'-二羟基黄酮、6″-O-乙酰甘草苷、芒柄花苷、甘草查尔酮B、金圣草(黄)素、异甘草素、芒柄花黄素、皂皮酸、黄宝石羽扇豆素、甘草酸、半甘草异黄酮B,主要为黄酮类、有机酸类、苷类和香豆素类。结论:该研究通过UPLC-Q-TOF-MS/MS分析技术,明确了甘草提取物中含有的13种入血原型成分,为其药效物质基础的研究提供了科学依据。     

青钱柳叶UPLC-Q-TOF-MS成分分析及其对睾丸的修复作用

目的 研究青钱柳叶水提物的主要成分及其对糖尿病小鼠睾丸组织功能的影响。方法 基于高分辨分子量和质谱碎片信息,结合数据库匹配,通过超高效液相色谱-四极杆-飞行时间-质谱联用（ultra performance liquidchromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS）分析青钱柳叶水提物的组成成分,PNPG法测定α-葡萄糖苷酶抑制活性,并检测青钱柳叶水提物高（2 000 mg·kg^-1·d^-1）、中（1 000 mg·kg^-1·d^-1）、低（500 mg·kg^-1·d^-1）剂量对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的治疗作用。结果 从青钱柳叶水提物中鉴定出20个化合物,发现了3个新的α-葡萄糖苷酶抑制剂：桑色素[IC₅₀=（3.98±1.38）μg·mL^-1]、7-羟基香豆素[IC₅₀=（33.48±2.54）μg·mL^-1]和甲基丁香酚[IC₅₀=（34.63±4.66）μg·mL^-1]。青钱柳叶水提物高、中、低剂量组与模型组相比,体质量和血糖值均有显著性差异,且睾丸组织切片显示高剂量组比阳性组有更好的修复效果。结论 青钱柳叶水提取物中、高剂量有显著的降糖作用,对睾丸组织有较好的修复功能。     

青钱柳多糖提取分离纯化及生物活性的研究进展

目的 对青钱柳多糖（Cyclocarya paliurus polysaccharide,CPP）的提取分离纯化及生物活性研究进展作系统分析,为CPP的深度研发提供参考。方法 查阅国内外近10年有关CPP的提取分离纯化及生物活性研究的文献,对其分析,概括和总结。结果 目前用于CPP提取的方法有超声波辅助提取法、微波辅助提取法、回流提取法、热水浸提法、超声波-酶法及超高压萃取法;含量测定方法有苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法、紫外分光光度法、高效液相色谱法、DNS比色法;分离纯化方法有离子交换树脂法、凝胶过滤柱色谱法、亲和色谱法。结论 各提取、分离纯化方法均具优缺点,应根据研究的目的、条件对其合理选择;CPP的生物活性研究已取得一定成效,但仅局限于粗提物,而对于开发更多符合临床需求的药物制剂及相关产品有待进一步研究。     

UPLC-MS/MS同时测定青钱柳中6种黄酮类成分

目的 建立UPLC-MS/MS同时测定青钱柳中芦丁、金丝桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素6种黄酮类成分的分析方法。方法 超高效液相法采用色谱柱为Agilent ZORBAX RRHD SB-C₁₈（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1,柱温40℃,进样量为1 μL;质谱法采用三重四级杆质谱,电喷雾离子源、负离子模式（ESI^-）,通过多重反应监测同时对青钱柳中6种黄酮类成分进行定量分析。结果 测定青钱柳中6种黄酮类成分芦丁、金丝桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的线性范围分别为0.002~0.24 μg·mL^-1（R²=0.999 4）,0.049~4.91 μg·mL^-1（R²=0.999 5）,0.504~50.37 μg·mL^-1（R²=0.999 4）,0.051~5.12 μg·mL^-1（R²=0.999 4）,0.005~0.52 μg·mL^-1（R²=0.999 8）,0.052~5.17 μg·mL^-1（R²=0.999 9）,平均回收率分别为96.1%,98.4%,98.5%,97.3%,96.7%,96.5%,RSD分别为1.78%,1.22%,1.91%,1.08%,1.21%,1.29%; 16批青钱柳样品中6种黄酮的含量分别为0.019 8~0.253 7 ,0.923 5~15.568 0 ,12.987 8~130.510 9 ,0.122 9~12.101 1 ,0.007 4~0.573 9 ,0.387 7~12.456 7 mg·g^-1,其中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的含量最高,约占总量的78%。结论 所建立的分析方法简单、快速、灵敏度高、专属性好,可应用于青钱柳中黄酮类成分的含量测定及质量控制。     

HPLC法测定青钱柳中槲皮素和山柰素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定青钱柳中槲皮素和山柰素的含量测定方法.方法: Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40);检测波长:360 nm;柱温:30℃.结果: 槲皮素和山柰素的回收率分别为100.4%、99.5%;线性范围分别为0.0258～0.645 μg、0.0632～1.58 μg.结论:该法 结果准确,重复性好,可用于该产品的质量控制.     

异欧前胡素在大鼠体内代谢产物的UHPLC-HRMS鉴定分析

目的 分析鉴定异欧前胡素在正常大鼠体内的代谢产物。方法 大鼠灌胃给药后,收集正常组和给药组大鼠的血浆、尿液和粪便样本,并以固相萃取柱提纯生物样品。采用UHPLC-HRMS(Q-Exactive Orbitrap MS)高分辨质谱对生物样品进行分析,并对代谢产物筛选鉴定。结果 在正、负离子模式下,根据所获得的精确分子质量、色谱保留行为、质谱裂解规律、特征碎片离子、对照品比对以及文献报道,最终分析鉴定了32个代谢产物。其代谢途径主要包括呋喃环开环、内酯水解、氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化以及它们的复合反应。其中,葡萄糖醛酸化产物为首次发现。结论 本研究较为全面地阐明了异欧前胡素在正常大鼠体内的代谢转化情况,可为其进一步的药效学研究提供依据,并为呋喃香豆素类物质的代谢产物分析提供借鉴。     

炮制对天山假狼毒毒性及化学成分的影响

目的 研究天山假狼毒炮制前后的急性毒性变化及其体内外组分的改变.方法 将小鼠分为生药组1(60.6 g·kg-1)、生药组2(75.75 g·kg-1)、生药组3(90.9 g·kg-1)、生药组4(106.05 g·kg-1)、生药组5(121.1 g·kg-1)、炮制组1(58.6 g·kgq)、炮制组2(73.2...     

甘草内生菌代谢物的抗炎作用

目的 研究甘草内生菌代谢物的体内外抗炎作用。方法 96孔板中接种巨噬细胞RAW264.7培养,模型组加入1 mg·L^-1脂多糖（LPS）,各受试药物组分别加入10,20,40 mg·L^-1甘草水提液浸膏或内生菌发酵物,2 h后再加入LPS1 mg·L^-1培养,检测NO、IL-1β、PGE₂的含量。Wistar大鼠90只,随机分为9组,空白组、模型组、阳性对照组给予生理盐水0.01 mL·g^-1,甘草水煎液组给予甘草水煎液0.95 g·kg^-1,各内生菌代谢物组给予甘草内生菌发酵物0.95 g·kg^-1,每日1次,连续灌胃给药5 d。末次给药后1 h,除空白组外,各组大鼠尾静脉注射1 mg·kg^-1体质量LPS,制备急性肺炎模型,空白组注射等量生理盐水,阳性对照组按5 mg·kg^-1体质量腹腔注射地塞米松给药。6 h后大鼠股动脉取血,检测外周血白细胞计数及血清中TNF-α、IL-6、IL-10的含量。结果 与LPS模型组比较,40 mg·L^-1时,甘草浸膏组、5组内生菌代谢物组（JTZB006、JTZB018、JTZB059、JTZB060、JTZB063）巨噬细胞RAW264.7分泌的NO、PGE₂、IL-1β的含量显著降低（P<0.05或P<0.01）;与同一质量浓度（40 mg·L^-1）的甘草浸膏组比较,JTZB006、JTZB060组巨噬细胞RAW264.7分泌的PGE₂的含量显著降低（P<0.05）。与模型组比较,阳性对照组、甘草水煎液组、3组内生菌代谢物组（JTZB006、JTZB060、JTZB063）大鼠外周血中白细胞数量及血清中TNF-α、IL-6的含量均显著降低,IL-10的含量显著升高（P<0.05或P<0.01）;与甘草水煎液组比较,JTZB006、JTZB060、JTZB063组IL-10的含量显著升高（P<0.05或P<0.01）。结论 3株甘草内生菌代谢物（JTZB006、JTZB060、JTZB063）对LPS诱导的炎症模型具有体外及体内抗炎作用。     

基于代谢组学和网络药理学分析福建金线莲叶和台湾银线兰叶治疗肝纤维化作用差异

目的 初步分析福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)和台湾银线兰(Anoectochilus formosanus)的叶片在治疗肝纤维化疾病的作用机制差异,为分析两者的临床疗效差异及其资源的精准利用提供参考信息。方法 利用代谢组学技术分析福建金线莲叶(the leaves of A.roxburghii,Arl)和台湾银线兰叶(the leaves of A.formosanus,Afl)的差异代谢物;并结合网络药理学方法分析其差异代谢物治疗肝纤维化疾病的作用差异。结果 利用代谢组学的方法分析初步得到Arl和Afl的46个差异代谢物,主要为黄酮类、糖苷类和甘油磷脂类等,其中有23种差异化合物具有潜在药用活性。基于网络药理学的方法,预测了23种差异化合物的759个相关靶点,与肝纤维化疾病的相关靶点进行映射,得到交集靶点249个,其中AKT1、STAT3、VEGFA等48个关键靶点被预测为治疗肝纤维化的主要差异靶点;作用靶点较多的关键差异化合物为Arl相比Afl含量较高的化合物,预示Arl中富含更多可以用于治疗肝纤维化的有效化合物。GO富集功能和KEGG富集分析表明,福建金线莲与台湾银线兰的差异成分参与治疗肝纤维化疾病的信号通路有所不同,VEGF信号通路为Arl相比Afl含量较高的差异化合物的主要差异信号通路,磷脂酰肌酶3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路为Arl相比Afl含量较低的差异化合物治疗肝纤维化疾病的主要差异信号通路。分子对接结果表明各差异成分与其对应的关键靶点均有较好的结合活性。结论 本研究表明福建金线莲与台湾银线兰叶片中存在一些差异代谢物,预测了其治疗肝纤维化疾病作用机制差异,并初步验证了其作用靶点,为金线莲资源的精准利用具有指导性意义。