转化生长因子β1对新鲜同种异体神经移植后神经再生的影响

背景：周围神经缺损多采用自体神经移植。但存在一些问题，许多学者尝试异体神经移植，但存在许多问题，免疫排斥反应就是其中之一。 目的：观察局部应用转化生长因子β1对新鲜同种异体神经移植后神经再生的影响。 设计：随机对照的实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科。材料：实验于2001-08／2002-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成。选择健康成年不同窝的Wistar大鼠60只，随机分为实验组、空白组、对照组3组，每组20只。 方法：制备转化生长因子β1质粒待用。制备动物模型，将两组大鼠的坐骨神经在梨状肌孔下0．5cm处，用消毒的剃须刀片整齐切断并切除2．0cm，切除的神经段互换移植修复神经缺损，实验组局部肌肉及神经两断端注射转化生长因子β1质粒，空白组、对照组注射等量的生理盐水，实验组、空白组不使用任何药物，对照组给予环孢霉素A（15mg／kg）喂养。分别于6周和12周各取10只取材、切片、染色染色：①Gleesluxot fast blue法染色。②髓鞘坚牢蓝染色法。轴索计数：术后12周的移植体中段染色标本，随机取视野，在光镜400倍下计算1．0mm^2内轴索数。组间比较采用t检验。 主要观察指标：各组移植区形态学观察和轴突计数。 结果：实验动物数量分析：60只动物在实验过程中无死亡，全部进入结果分析。①空白组可见移植物的不同地方出现广泛的单核细胞浸润，髓鞘脱水，可见大量的空泡变性，以6周时最为明显，整个移植物均被单核细胞浸润，排异反应严重，在移植段中，有极少量的轴突再生。12周时，移植体变细，大量瘢痕组织增生，水肿明显，可见极少量的许旺氏细胞和再生轴突，绝大多数再生的轴突未通过整个移至段。实验组、对照组有少量的单核细胞浸润，水肿较明显，但可见新生的血管在移植神经中形成，再生的轴突通过移植体。6周时，可见较多的许旺氏细胞增生。12周时，再生轴突已通过移植体，有一定量的髓鞘形成，许旺氏细胞增生明显，轴索间水肿减轻。各组移植段中外周的神经再生的轴突数量和髓鞘再生的数量较中心的多，且实验组中外周的轴索间水肿较中心的明显减轻。②术后12周，每组各取5只大鼠，在神经移植体中段随机取视野，400倍显微镜下观察计算1．0mm^2内轴突数，实验组、对照组轴突数显著高于空白组，组间差异有极显著性[（78．3&;#177;4．6），（76．1&;#177;4．2），（15．0&;#177;3．5），t=3．056，t=2．948，P〈0．01]。实验组和对照组接近，差异无显著性[（78．3&;#177;4．6），（76．1&;#177;4．2），t=1．982P〉0．05]。 结论：局部使用转化生长因子β1质粒，可在局部发挥免疫抑制作用，降低宿主的免疫排斥反应。并使移植体轴突数增多，促进神经生长。     

同种异体肾移植尿TGF-β对远期肾功能影响的研究

【目的】探讨肾移植受者尿转化生长因子 β1(TGF β1)与移植肾远期功能的关系。【方法】1999年 8月至 2 0 0 1年 5月期间对肾移植术后满 1年、肾功能正常的患者检测血、尿TGF β1浓度 ,并对上述患者进行 3年以上的前瞻性观察 ,对观察期内肾功能不全的患者明确是否为慢性移植肾肾病 (CAN)。 3年后共有 12 8例完成了全程随访 ,根据术后 1年时尿TGF β1不同的浓度 ,比较其在 3年观察期内肌酐清除率 (CCr)损失量有无差异。其中有 15例诊断为CAN ,比较其在肾移植 1年时的血、尿TGF β1等与其他非CAN患者有无差异。【结果】上述 12 8例患者术后 1年时尿TGF β1浓度为 :( 136 .8～ 4 4 2 .3) pg/(mg·Cr) ;尿TGF β1浓度高的患者在 3年观察期内CCr损失量明显大于尿TGF β1浓度低的患者 ;非CAN与CAN患者在肾移植 1年时 ,尿TGF β1相对浓度分别为 ( 183.1± 4 0 .1)和 ( 397± 32 .9)pg/(mg·Cr) ,两者比较有显著性差异 ( P <0 .0 1) ,血TGF β1浓度分别为 [( 32 .2± 4 .6 )和 ( 31.8± 5 .0 )ng/ml],两者比较没有差异 ( P >0 .0 5 )。【结论】TGF β1可能在CAN的发生过程中起着重要的作用 ,CAN患者在肾功能异常前尿TGF β1已显著升高 ,肾移植后早期检测尿TGF β1对远期肾功能具有预测作用     

碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜与受体动物血浆浸泡对同种异体移植神经再生的影响

目的:以碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜和受体动物血浆浸泡处理同种异体移植神经,观察两者对神经再生的影响。方法:实验于2002-11/2005-10在沈阳医学院奉天医院动物实验室完成。①实验材料:清洁级体质量2.5～3.0kg健康大耳白兔30只,左、右肢正中神经60条。碱性成纤维细胞生长因子购于珠海生物制品有限公司,复合降解膜由沈阳药科大学协制。②实验分组:根据处理方法,实验分为血浆 神经 复合膜组、血浆 神经组、神经 复合膜组和神经组,每组各15条神经。③实验干预:切除兔正中神经2.5cm,进行异体缝接。血浆 神经 复合膜组与血浆 神经组均用经受体动物血浆浸泡冷冻处理的异体神经移植,血浆 神经 复合膜组移植处置入碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜,血浆 神经组不置入膜。神经 复合膜组与神经组只经冷冻处理神经缝接,神经 复合膜组缝接神经处置入碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜,神经组不置入膜。④实验评估:术后56,90和180d,分别切取异体神经移植部位进行光镜苏木精-伊红、Mallory、髓鞘染色切片、血-神经屏障切片及透射电镜切片,图像分析仪测定,神经外周粘连定量测定和电生理指标检测。结果:①4组神经移植段大体观察和镜下观察:血浆 神经 复合膜组和神经 复合膜组的神经移植段表面多较血浆 神经组和神经组光滑。血浆 神经 复合膜组神经远、近端缝合段的结缔组织增生明显少于其他各组。②4组血-神经屏障功能恢复情况:血浆 神经 复合膜组明显优于血浆 神经组。③4组Luzex-F图像分析仪测定结果:血浆 神经 复合膜组和神经 复合膜组的再生有髓神经纤维数量优于不包膜的血浆 神经组与神经组(t=-4.7143～-6.4534,P≤0.01),血浆 神经组优于神经组。④4组神经外周组织粘连定量测定结果:血浆 神经 复合膜组粘连程度较血浆 神经组明显轻(P<0.05)。⑤4组屈腕肌电生理指标测定结果:血浆 神经组潜伏期较血浆 神经 复合膜组延长(t=5.4675,P<0.001),波幅较血浆 神经 复合膜组低(t=4.3350,P<0.05)。结论:①经碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜和经受体血浆处理的异体神经,均有提高神经再生作用。②经受体动物血浆浸泡并冷冻前处理的异体神经移植处,置入碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜,其神经再生效果更好。     

异体双手移植后的神经再生问题:1例探讨

背景同种异体双手移植世界上开展不多,该病例为世界第4例异体双手移植.目的探讨异体手移植免疫抑制状态下的神经再生特点.设计病例分析.地点和对象手术在哈尔滨医科大学附属第一医院完成.2001-01收治的1例双手腕上4 cm截肢患者,男,18岁.干预1例双手缺失患者行异体手移植,手术过程基本同自体断腕再植,术中吻合正中神经、尺神经、尺神经腕背支和桡神经浅支.术后联合应用普乐可复(FK506)等免疫抑制剂抗免疫排斥反应.主要观察指标通过Tinnel征观察神经恢复情况.结果术后患者移植手存活良好,无免疫排斥反应发生.术后1个月Tinnel征示神经生长＞50 mm,2个月＞100 mm,3个月达200 mm左右,神经再生速度均＞2 mm/d.4个月痛、温觉、触觉拇指已恢复至指腹,其他4指至近指间关节水平,手主动运动可抓持物品、纸张;与Tinel氏征检查相符.结论异体手移植免疫抑制状态下神经再生迅速,在较短时间内恢复手部感觉与手内在肌神经再支配,快于同平面的自体断肢再植,值得进一步探讨.     

转化生长因子β1质粒对静脉移植的影响

背景:大量实验表明,转化生长因子β1质粒在神经移植过程中可抑制或减弱移植排斥反应,而对静脉移植的影响却很少有行报道.目的:探讨大鼠局部注射转化生长因子β1质粒诱导同种异体异基因股静脉移植免疫耐受的作用途径.设计、时间及地点:随机分组,动物实验观察,于2007-03/2008-04在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:供体Wistar大鼠18只,受体SD大鼠48只随机分为自体移植组,异体移植组,免瘦抑制剂组,转化生长因子β1质粒组,每组12只.方法:免疫抑制剂组在移植前3 d开始腹腔内注射环孢霉素A(10 mg/kg),1次,d,直到处死.转化生长因子β1质粒组大鼠于局部股静脉两断端内注射40 μg/只的转化生长因子β1质粒.自体移植和异体移植组仅进行静脉移植.主要观察指标:于2周后进行影像学、组织学、免疫学检测.结果:自体移植组:内皮细胞扁平,核膜增厚.异体移植组;脱落内皮细胞及碎片,可见内膜下层.免疫抑制剂组:血管内皮细胞核膜增厚,广泛粗面内质网扩张.转化生长因子β1质粒组:血管内皮细胞可见粗面内质网扩张,线粒体空泡变.相邻细胞间可见紧密连接.转化生长因子β1质粒组优于免疫抑制剂组和异体移植组.4组混合淋巴细胞培养A值分别为1.07±0.14、4.15±0.67、1.77±0.23和1.38±0.23.转化生长因子β1质粒组与异体血管移植组和免疫抑制剂组比较,有显著差异(P<0.05).异体血管移植组对供体大鼠淋巴细胞的刺激呈正常反应,转化生长因子β1质粒组对供体鼠淋巴细胞的刺激反应性减弱,与免疫抑制剂组比较,差异有显著性意义(P<0.05).结论:局部注射转化生长因子β1质粒可以协同减轻移植后产生的免疫排斥反应.     

转化生长因子β_1对坐骨神经移植后免疫耐受的影响

背景:转化生长因子β_1是一种强效细胞生长增殖调节蛋白,在移植免疫的抗排斥反应、移植物血管病发展中扮演重要角色.目的:观察经冷冻处理异体神经移植后,局部注射转化生长因子β_1对移植免疫排斥反应的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-06在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:受体为清洁级SD大鼠60只,分为3组:自体神经移植组、异体神经移植组、转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组,每组20只.供体为40只Wistar雄性大鼠.pAdTrack-CMV-TGF-β_1质粒、pAdEasy-1-Bj51833细胞由哈尔滨医科大学附属四院骨科实验室惠赠.方法:取供体大鼠40只作双侧股后外侧纵切口,分离显露坐骨神经,切取双侧整段坐骨神经,置于无菌冷冻管中保存1周,备用.手术显微镜下将受体鼠自骨二头肌与半腱肌和半膜肌间隙剪开结缔组织,显露坐骨神经,从犁状肌孔下0.5 cm处整齐剪下长约1 cm的坐骨神经.自体神经移植组、异体神经移植组选择粗细相等、已预制冷冻的自体及异体神经移植;转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组异体神经移植后于大鼠局部肌肉及神经两断端内注射pAdTrack-CMV-TGF-β_1质粒40 μg/只.主要观察指标:术后3,6,9周各组大鼠运动神经传导速度、病理学和轴突计数检查.结果:转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组运动神经传导速度高于新鲜异体神经移植组(P < 0.01),与自体神经移植组比较差异无显著性意义.自体神经移植组、转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组术后9周轴突计数较新鲜异体神经移植组高(P < 0.01).转化生长因子β_1质粒+异体神经移植组光镜及电镜可见神经纤维走行正常,排列完好,神经纤维可见血管增生,髓鞘结构较好,神经纤维内见有大量再生髓鞘,许旺细胞明显增多,胞质较发达,大量粗面内质网,线粒体结构清晰,再生的轴突内微丝密集排列,与自体神经移植组接近.异体神经移植组光镜及电镜可见神经纤维数量少、排列紊乱,髓鞘轴突变性明显,大部分神经纤维脱髓鞘崩解,轴突消失,未见再生的神经纤维.结论:局部注射转化生长因子β_1质粒联合冷冻处理的冷藏异体神经移植可以协同减轻移植后产生的免疫排斥反应.     

深低温冻存同种异体皮肤移植中转化生长因子β的表达

背景：皮肤移植和创面覆盖是创伤、烧伤治疗的重要措施。目前,同种异体皮仍然是可利用的最佳创面覆盖物。目的：通过检测转化生长因子β在深低温冻存后的大鼠同种异体皮肤移植后的表达,评估深低温贮存同种异体皮在创面上的应用。方法：取大鼠皮肤保存于低温-20℃（低温保存组）及80℃深低温（深低温保存组）,冻存1周、1,2个月后,皮片分组移植于同种大鼠背部进行实验,并以自体移植大鼠作为对照组。结果与结论：同低温保存组相比,深低温保存组转化生长因子β的表达被抑制,移植皮肤排斥反应出现时间延迟及存活时间延长,排斥反应评分也较低。同低温冻存相比,深低温冷冻保存能使同种异体移植物的转化生长因子β抗原表达降低。提示深低温冻存的异体皮作为一种创面临时覆盖物,在存在皮肤组织缺失或皮源不足的情况下具有广阔的应用前景。     

雷公藤多甙对同种异体神经移植免疫抑制作用的实验研究

背景用于异体神经移植中的免疫抑制剂-环胞素A价格昂贵;而相关文献报道,中药雷公藤制剂具有免疫抑制作用.目的探讨同种异体神经移植雷公藤多甙替代环孢素A(cyclosporin A,CSA)进行免疫抑制可行性.设计随机分组双盲设计.地点和对象实验在武汉大学人民医院完成,对象为健康雄性SD大鼠48只,Wistar大鼠18只,SPF级,体质量180～210 g,购自武汉大学医学动物实验中心.干预方法取Wistar大鼠坐骨神经为供体,于SD大鼠上制备坐骨神经移植模型,随机分为4组,即自体移植组,行自体神经原位移植;CSA组,异体神经移植应用CSA 5 mg/(kg·d)5周;雷公藤组,异体神经移植应用雷公藤多甙5 mg/(kg·d)5周;对照组,单纯异体神经移植而无免疫抑制剂.主要观察指标移植术后12周移植段神经形态学观察,神经运动诱发电位潜伏期、神经运动诱发电位峰值、神经传导速度和振幅积分,腓肠肌称重及再生轴突计数.结果12周时,自体移植、CSA、雷公藤组的潜伏期峰值、诱发电位、传导速度、振幅积分、肌肉湿质量、肌肉湿质量恢复度、轴突数目各项检测指标明显优于对照组(q=3.95～8.32,P＜0.01),再生神经形态与功能恢复良好.结论同种异体神经移植时,雷公藤多甙可以替代CSA发挥有效的免疫抑制作用.     

同种异体肝脏移植的术后护理

肝移植是目前治疗肝病终末期的有效方法。 2 0 0 0年 4月 18日 ,我院成功地为一名患者实施了肝移植术 ,目前患者情况良好 ,现将护理体会报告如下。1　病例介绍患者男 ,30岁 ,工人。于 2 0 0 0年 1月 13日入院 ,诊断为肝癌合并肝硬化。 2 0 0 0年 4月 18日在气管内全麻下进行同种异体肝移植术 ,切除患者部分肝脏 ,与供肝相应部位吻合 ,成功地完成了将异体供肝植入患者的腹腔内 ,手术历时 480ｍｉｎ ,出血 40 0 0ｍｌ。术后患者进入中心ＩＣＵ监护治疗 ,用呼吸机辅助呼吸 ,接上各种引流管及多功能心电监护仪器 ,进行生命体征和液体出入量的监…     

4例同种异体手移植患者移植手的功能锻炼

报告了4例(6只)手缺失患者行同种异体手(或前臂)移植术的功能锻炼。术前主要进行运动意念和残肢训练相结合的训练,并给予肩、肘关节被动运动,促使残肢恢复一定肌力。术后24h即开始做指关节轻微被动活动,并给予按摩、理疗、使用支具、作业治疗和CPM机锻炼。术后6～8个月实施钢板取出术后改为以主动锻炼为主、被动锻炼为辅的训练原则。在患者出院时制定长期锻炼方案,通过电话、视频、传真等方式了解锻炼效果并进行指导。本组获随访1年8个月至4年,移植手功能恢复良好,生活基本自理。     

电针对面神经损伤后再生室中神经生长因子的影响

背景:通过动物实验和临床研究,已获得了电针能促进周围神经再生的证据,但其机制尚没有明确的结论。神经营养因子可以维持损伤神经的神经元存活和促进轴突的再生,观察神经生长因子在电针刺激前后的变化,可能为揭示电针治疗周围神经病变提供新思路。目的:观察电针对面神经损伤后再生微环境中神经生长因子的影响。设计:完全随机分组设计,对照动物实验。单位:四川大学华西医院针灸科。材料:实验于2001-09/12在四川大学华西医院动物实验中心的实验室完成。选用成年健康的新西兰兔50只,随机分为2组:针刺组和对照组,每组25只。方法:①实验动物静脉麻醉后,分离暴露面神经上颊支,在手术放大镜下切断神经,用硅胶管将两断端嵌入并缝合固定,形成再生室。针刺组于术后当天麻醉完全醒后开始接受电针治疗,取穴:翳风,地仓,颊车,合谷。刺灸方法:翳风,直刺1cm,地仓透颊车1.5cm,合谷0.5cm。电针两极分别置于翳风和地仓,选用疏密波,频率18～20Hz,电压1.5V,留针30min,1次/d,干预14d;对照组不作任何处理。②术后3,5,7,10,14d分别处死10只动物,实验组与对照组各5只。抽取再生室内液体,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定再生室内神经生长因子水平。③计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:术后3,5,7,10,14d两组再生室内神经生长因子水平比较。结果:兔50只均进入结果分析。在术后3～7d,实验组和对照组再生室内神经生长因子水平差异不明显(P>0.05),术后10和14d,实验组再生室内神经生长因子水平明显高于对照组犤术后10d:(2793.0±163.1),(2571.1±91.6)ng/L;术后14d:(2696.1±147.5),(2243.7±271.2)ng/L,t=4.45,3.44,P<0.01犦。术后第7天,实验组和对照组再生室内神经生长因子水平均达到峰值,但对照组在术后14d开始降低,实验组仍保持在较高的水平。结论:电针对面神经损伤后再生微环境中神经生长因子水平有提高其水平和维持平稳水平不下降的作用,这可能是电针刺激促进周围神经再生机制的一方面。     

电针对面神经损伤后再生室中神经生长因子的影响

背景：通过动物实验和临床研究，已获得了电针能促进周围神经再生的证据，但其机制尚没有明确的结论。神经营养因子可以维持损伤神经的神经元存活和促进轴突的再生，观察神经生长因子在电针刺激前后的变化．可能为揭示电针治疗周围神经病变提供新思略。目的：观察电针对面神经损伤后再生微环境中神经生长因子的影响。设计：完全随机分组设计。对照动物实验。单位：四川大学华西医院针灸科。材料：实验于2001—09／12在四川大学华西医院动物实验中心的实验室完成。选用成年健康的新西兰兔50只，随机分为2组：针刺组和对照组，每组25只。方法：①实验动物静脉麻醉后。分离暴露面神经上颊支，在手术放大镜下切断神经．用硅胶管将两断端嵌入并缝合固定，形成再生室。针刺组于术后当天麻醉完全醒后开始接受电针治疗，取穴：翳风，地仓，颊车，合谷。刺灸方法：翳风，直刺1cm。地仓透颊车1．5cm，合谷0．5cm。电针两极分别置于翳风和地仓．选用疏密波，频率18-20Hz，电压1．5V，留针30min，1次／d，干预14d；对照组不作任何处理。②术后3,5，7，10，14d分别处死10只动物，实验组与对照组各5只。抽取再生室内液体．采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定再生室内神经生长因子水平。③计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标：术后3，5，7，10，14d两组再生室内神经生长因子水平比较。结果：兔50只均进入结果分析。在术后3-7d，实验组和对照组再生室内神经生长因子水平差异不明显（P〉0．05），术后10和14d。实验组再生室内神经生长因子水平明显高于对照组『术后10d：（2793．0&;#177;163．1），（2571．1&;#177;91．6）ng／L；术后14d：（2696．1&;#177;147．5），（2243．7&;#177;271．2）ng／L，t=4．45，3．44，P〈0．011。术后第7天，实验组和对照组再生室内神经生长因子水平均达到峰值，但对照组在术后14d开始降低，实验组仍保持在较高的水平。结论：电针对面神经损伤后再生微环境中神经生长因子水平有提高其水平和维持平稳水平不下降的作用，这可能是电针刺激促进周围神经再生机制的一方面。     

肌腱愈合过程中转化生长因子β1基因表达的变化

背景：近年来，生长因子在肌腱愈合与粘连形成中的作用受到关注，其中转化生长因子与组织粘连与瘢痕形成的关系更倍受重视。 目的：观察兔屈趾肌腱Ⅱ区伤口愈合过程中转化生长因子β1基因表达的变化。 设计：随机对照动物实验。 单位：青岛大学医学院附属医院骨科。 材料：选用清洁级成年新西兰大白兔60只，体质量4．0～4．5kg，雌雄不拘，由青岛市实验动物中心提供。所有动物的左前肢作为实验侧，同一动物右前肢作为对照侧。按术后1，7，14，21，28和56d6个时间点进行观察，每个时间点10只。其中6只进行原位杂交实验，4只进行免疫组织化学染色。实验过程中对动物的处置均符合动物伦理学标准。 方法：实验于2005—09/2006—07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成。麻醉后将所有动物左前中趾Ⅱ区屈趾深肌腱切断并用使用标准Kessler缝合法修复，对照侧不进行干预。分别于术后1，7，14，21，28和56d麻醉后处死动物，实验侧沿原切口切开皮肤，切取肌腱与腱鞘。对照侧采取相同措施。 主要观察指标：将肌腱与腱鞘组织进行原位杂交和免疫组织化学染色，观察转化生长因子β1的表达情况。 结果：纳入的60只动物全部进入结果分析。①原位杂交结果：实验侧肌腱损伤后1d，转化生长因子β1 mRNA的表达明显升高，在肌腱损伤后的14～21d，转化生长因子β1 mRNA的表达持续升高达到最高峰，28d开始下降，56d时仍保持较高水平。修复部位周围的腱鞘组织转化生长因子β1 mRNA的表达水平更高，在相同时间点，腱鞘细胞内的转化生长因子β1 mRNA的表达均高于肌腱组织。对照侧肌腱组织和腱鞘内均存在着转化生长因子β1 mRNA的表达，但是水平较低。实验侧各时间点腱鞘与肌腱细胞转化生长因子β1 mRNA的表达明显高于对照组，差异有显?     

肌腱愈合过程中转化生长因子β1基因表达的变化

背景:近年来,生长因子在肌腱愈合与粘连形成中的作用受到关注,其中转化生长因子与组织粘连与瘢痕形成的关系更倍受重视.目的:观察兔屈趾肌腱Ⅱ区伤口愈合过程中转化生长因子β1基因表达的变化.设计:随机对照动物实验.单位:青岛大学医学院附属医院骨科.材料:选用清洁级成年新西兰大白兔60只,体质量4.0～4.5 kg,雌雄不拘,由青岛市实验动物中心提供.所有动物的左前肢作为实验侧,同一动物右前肢作为对照侧.按术后1,7,14,21,28和56 d 6个时间点进行观察,每个时间点10只.其中6只进行原位杂交实验,4只进行免疫组织化学染色.实验过程中对动物的处置均符合动物伦理学标准.方法:实验于2005-09/2006-07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成.麻醉后将所有动物左前中趾Ⅱ区屈趾深肌腱切断并用使用标准Kessler缝合法修复,对照侧不进行干预.分别于术后1,7,14,21,28和56 d麻醉后处死动物,实验侧沿原切口切开皮肤,切取肌腱与腱鞘.对照侧采取相同措施.主要观察指标:将肌腱与腱鞘组织进行原位杂交和免疫组织化学染色,观察转化生长因子β1的表达情况.结果:纳入的60只动物全部进入结果分析.①原位杂交结果:实验侧肌腱损伤后1 d,转化生长因子β1 Mrna的表达明显升高,在肌腱损伤后的14～21 d,转化生长因子β1 Mrna的表达持续升高达到最高峰,28 d开始下降,56d时仍保持较高水平.修复部位周围的腱鞘组织转化生长因子β1 Mrna的表达水平更高,在相同时间点,腱鞘细胞内的转化生长因子β1 Mrna的表达均高于肌腱组织.对照侧肌腱组织和腱鞘内均存在着转化生长因子β1 Mrna的表达,但是水平较低.实验侧各时间点腱鞘与肌腱细胞转化生长因子β1 Mrna的表达明显高于对照组,差异有显著性意义(P ＜ 0.05).②免疫组织化学染色结果:实验侧动物转化生长因子β1蛋白信号的表达术后第1 天开始增加,14～21 d达到高峰,56 d仍保持较高的水平.对照侧动物存在转化生长因子β1蛋白信号的表达,但表达水平较低.结论:正常无损伤的肌腱和腱鞘细胞能产生转化生长因子β1,当肌腱损伤后,细胞因子被激活,增加的细胞因子主要由肌腱细胞与腱鞘细胞产生,与肌腱的内、外源性愈合机制是一致的.     

外源性转化生长因子β1抗体对胶原瘢痕及神经再生的修复作用

目的：通过神经吻合口局部应用外源性转化生长因子β1的特异性抗体，阻断其诱导局部炎症反应和细胞外基质沉积的作用，以期达到预防或减少神经瘢痕的产生，提高神经修复。方法：实验于2003—04／2005—04在山西医科大学外科实验室完成。选用SD大鼠48只，随机分为转化生长因子β1抗体组和生理盐水对照组，各24只。两组大鼠坐骨神经切断后行神经外膜小间隙缝合，转化生长因子β1抗体组采用微量加样器于神经吻合口间隙内注射质量浓度为50mg／L的Anti-外源性转化生长因子β1溶液0．1mL；生理盐水对照组注射等量生理盐水，逐层缝合伤口。分别于术后4，12周取材，按照Petersen分级标准对皮肤、肌肉、筋膜和神经组织与周围组织粘连的程度进行评估。结果：实验纳入大鼠48只，全部进入结果分析。瘢痕成分的评估：①两组术后大体观察：术后两组大鼠皮肤及肌肉、筋膜愈合良好，均未发生伤口进开、进裂、感染现象。转化生长因子β1抗体组术后12周神经吻合口与周围组织粘连明显减轻，优于生理盐水对照组。②两组术后12周神经组织切片Masson染色结果：转化生长因子B1抗体组神经吻合口远端神经轴索增生活跃．胶原纤维形成较少．以神经外膜为主；生理盐水对照组神经吻合口远端神经纤维生长排列紊乱，连续性差，被胶原纤维包裹，胶原沉积较多，神经外膜肥厚。④术后12周两组Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量灰度值测量结果比较：转化生长因子β1抗体组Ⅰ型胶原纤维含量明显低于生理盐水对照组[（41．112&;#177;11．065），（49．561&;#177;8．097），P〈0．05]，而Ⅲ型胶原纤维含量基本相似[（34．223&;#177;7．130）．（32．284&;#177;5．497），P〉0．05]。神经再生功能的评估：①术后12周两组坐骨神经功能指数比较：转化生长因子β1抗体组明显高于生理盐水对照组[（-19．090&;#177;22．493），（-28．660&;#177;22．649），P〈0．05]。②两组术后12周电生理学检查结果：转化生长因子β1抗体组神经传导速度明显优于生理盐水对照组[（29．603&;#177;3．972），（16．215&;#177;4．619）m／s，P〈0．05]。③两组术后周围神经纤维的镀银染色及周围神经髓鞘染色结果：转化生长因子β1抗体组髓鞘厚度和再生神经纤维的直径均优于生理盐水对照组[（1．36&;#177;0．23），（0．93&;#177;0．48）；（9．40&;#177;0．86），（7．99&;#177;0．36）μm；P均〈0．05]。结论：周围神经损伤后神经端或对端的吻合治疗中，局部应用外源性转化生长因子β1抗体，能够抑制或减少局部神经胶原瘢痕的产生，从而有效促进大鼠周围神经功能的恢复。     

外源性转化生长因子β1抗体对胶原瘢痕及神经再生的修复作用

目的:通过神经吻合口局部应用外源性转化生长因子β1的特异性抗体,阻断其诱导局部炎症反应和细胞外基质沉积的作用,以期达到预防或减少神经瘢痕的产生,提高神经修复。方法:实验于2003-04/2005-04在山西医科大学外科实验室完成。选用SD大鼠48只,随机分为转化生长因子β1抗体组和生理盐水对照组,各24只。两组大鼠坐骨神经切断后行神经外膜小间隙缝合,转化生长因子β1抗体组采用微量加样器于神经吻合口间隙内注射质量浓度为50mg/L的Anti-外源性转化生长因子β1溶液0.1mL;生理盐水对照组注射等量生理盐水,逐层缝合伤口。分别于术后4,12周取材,按照Petersen分级标准对皮肤、肌肉、筋膜和神经组织与周围组织粘连的程度进行评估。结果:实验纳入大鼠48只,全部进入结果分析。瘢痕成分的评估:①两组术后大体观察:术后两组大鼠皮肤及肌肉、筋膜愈合良好,均未发生伤口迸开、迸裂、感染现象。转化生长因子β1抗体组术后12周神经吻合口与周围组织粘连明显减轻,优于生理盐水对照组。②两组术后12周神经组织切片Masson染色结果:转化生长因子β1抗体组神经吻合口远端神经轴索增生活跃,胶原纤维形成较少,以神经外膜为主;生理盐水对照组神经吻合口远端神经纤维生长排列紊乱,连续性差,被胶原纤维包裹,胶原沉积较多,神经外膜肥厚。③术后12周两组Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量灰度值测量结果比较:转化生长因子β1抗体组Ⅰ型胶原纤维含量明显低于生理盐水对照组[(41.112±11.065),(49.561±8.097),P<0.05],而Ⅲ型胶原纤维含量基本相似[(34.223±7.130),(32.284±5.497),P>0.05]。神经再生功能的评估:①术后12周两组坐骨神经功能指数比较:转化生长因子β1抗体组明显高于生理盐水对照组[(-19.090±22.493),(-28.660±22.649),P<0.05]。②两组术后12周电生理学检查结果:转化生长因子β1抗体组神经传导速度明显优于生理盐水对照组[(29.603±3.972),(16.215±4.619)m/s,P<0.05]。③两组术后周围神经纤维的镀银染色及周围神经髓鞘染色结果:转化生长因子β1抗体组髓鞘厚度和再生神经纤维的直径均优于生理盐水对照组[(1.36±0.23),(0.93±0.48);(9.40±0.86),(7.99±0.36)μm;P均<0.05]。结论:周围神经损伤后神经端或对端的吻合治疗中,局部应用外源性转化生长因子β1抗体,能够抑制或减少局部神经胶原瘢痕的产生,从而有效促进大鼠周围神经功能的恢复。     

血管内皮细胞生长因子对免异体重建后交叉韧带血管再生的影响

背景:膝关节后交叉韧带重建的研究目前大多集中在手术技巧和移植物材料的选择上,而对重建后移植物血管再生情况的相关报道不多,尤其对异体移植物血管再生情况的相关研究更少.目的:拟观察应用血管内皮细胞生长因子对兔异体重建后交叉韧带血管再生的影响.设计、时间及地点:析因设计,于2006-03/2007-09在潍坊医学院第三附属医院骨科实验室完成.材料:68只成年雌性日本大白兔,体质量(3.3±0.1)kg,其中23只用于切取股骨-前交叉韧带-胫骨复合体以建立兔后交叉韧带异体重建动物模型.方法:45只兔随机分为3组,每组15只.对照组不作任何处理:磷酸盐缓冲液组向患膝关节腔内注入0.2 mL磷酸盐缓冲液;血管内皮细胞生长因子组向患膝关节腔内注入30μg血管内皮细胞生长因子(溶于0.2 mL磷酸盐缓冲液).主要观察指标:①重建后移植物的免疫排斥情况.②第3,6,12周每组各随机选5只兔取标本作免疫组织化学染色,Chalkley计数法对移植物韧带部分的中1/3处微血管密度计数.结果:45只兔均进入结果分析.每只兔切开关节后未见积液及软骨破坏,移植物大体形态接近正常后交叉韧带,无变性坏死及融解脱落等免疫排斥表现.血管内皮细胞生长因子组实验兔关节内可见大块血运丰富的组织,而对照组和磷酸盐缓冲液组没有.3组各时间点移植物微血管密度相比,血管内皮细胞生长因子组高于对照组和磷酸盐缓冲液组(P<0.01);第6周高于第3周和第12周(P<0.01),第12周低于第3周(P<0.05);微血管密度计数中组别与时间无交互效应.结论:局部应用血管内皮细胞生长因子对兔异体移植重建后交叉韧带移植物血管再生具有明显促进作用.