原发性肝癌中 HBV X、S、Pre-S、C 基因片段整合与 ras、myc 癌基因表达的关系

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶＸ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶＸ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、６２．５％（２０／３２）和２５．０％（８／３２）。ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ在ＨＣＣ中的表达率分别为５０．０％（２０／４０）、８１．２％（２６／３２）。通过对ＨＣＣ中４种ＨＢＶ基因片段整合与ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ表达之间关系的研究，显示ｐ６２ｍｙｃ的表达与ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－Ｓ基因整合关系密切，ｐ２１ｒａｓ的表达则主要与ＨＢＶＸ基因整合有关（Ｐ＜０．０５）。提示ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－ＳＤＮＡ片段在宿主细胞染色体上的整合可能直接或通过其蛋白启动ｍｙｃ和（或）ｒａｓ癌基因的表达。     

肝癌细胞中 HBV-DNA 片段整合及 N-ras、p~(53) 表达的研究

肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）与ＨＢＶ整合密切相关，为研究ＨＢＶ－ＤＮＡ各片段在ＨＣＣ发生中的作用，用ＨＢＶ全长基因探针通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交分析了１７例ＨＣＣ标本中ＨＢＶ－ＤＮＡ的存在状态，并用ＨＢＶ片段基因探针和Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３探针检测了其相应ｍＲＮＡ的转录情况。结果发现，５２．９％ＨＣＣ标本为纯整合型，４７．１％的标本为混合型。１７例ＨＣＣ中，Ｐｒｅｓ、ＨＢｓ、ＨＢｘ、ＨＢｃ转录率分别为４７．１％、５８．８％、７０．５％和４１．２％。９例纯整合型ＨＣＣ中，上述基因转录率分别为１１．１％、４４．４％、５５．６％和１１．１％，其中ＨＢｘ较ＨＢｃ、Ｐｒｅｓ差异有显著性（Ｐ＜０．０５），ＨＣＣ标本Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３总转录率分别为８２．３％、６４．７％。提示ＨＢＶ－ＤＮＡ在ＨＣＣ细胞内主要以整合于染色体上的方式存在，而且整合片段可作为转录的模板，其蛋白产物可能通过影响Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３在细胞调控中的功能促进肿瘤的形成。     

乙型肝炎病毒基因多重PCR的临床观测

为探讨多重多聚酶链反应（ＰＣＲ）在慢性乙型肝炎检测中的应用价值，选用ＨＢＶＤＮＡ的Ｓ区、Ｃ区及Ｘ区的３对引物Ｓ１／Ｓ２，Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２，同时扩增ＤＮＡ。结果发现，３个基因区的表达情况不同。７７例慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别是Ｓ区６１０％，Ｃ区４５５％，Ｘ区３９０％；且三区联合检出率为７５３％，与单独Ｃ区检出有明显差异（Ｐ＜００５）。提示多重ＰＣＲ能对ＨＢＶＤＮＡ同一模板的各基因区同时扩增，从而可以得到Ｃ区以外的其它保守基因区特异性的扩增片段，提高了对乙型肝炎病毒患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

乙肝病毒Pre—S2与e系统和HBVDNA关系的研究

对１３８例各型乙型肝炎患者血不表进行Ｐｒｅ－Ｓ２，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ和ＨＢＶＤＮＡ的检测，结果发现ＨＢｅＡｇ（＋）组的Ｐｒｅ－Ｓ２检出率为８１．２５％，阴性组为４５．３１％，两者比较有非常显著差异（Ｐ〈０．０１）。在Ｐｒｅ－Ｓ２阳性的病人中ＨＢＶＤＮＡ的检出率为８６．８４％，阴性组则为３５．４８％，两者比较也有非常显著性差异（Ｐ〈０．０１），提示Ｐｒｅ－Ｓ２与ｅ系统和ＨＢＶＤＮＡ密切相关，可作     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

同步检测183例血清乙肝病毒标志物,Pre—S2,pHSA—R,HBsAg—Ig …

为探讨乙肝病毒标志物、Ｐｒｅ－Ｓ２、ＰＨＳＡ－Ｒ、ＨＢｓＡｇ－ＩｇＭ及ＨＢＶ－ＤＮＡ之间的关系,对１８３例既往乙肝病毒标志物阳性的ＨＢＶ感染者,同步采用放免方法定量检测乙肝病毒标志物、Ｐｒｅ－Ｓ２、ＰＨＳａ－Ｒ、ＨＢｓＡｇ－ｉｇＭ,用ＰＣＲ方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果显示,ＨＢＶ－ＤＮＡ、Ｐｒｅ－Ｓ２、ＰＨＳＡ－Ｒ、ＨＢｓＡｇ０ＩｇＭ在“大三阳”中检出率分别为８６．３６％、９６．９７％、９３．９４     

应用聚合酶链反应进一步探讨原发性肝癌与HBV,HCV感染的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测原发性肝癌（ＰＨＣ）及肝硬化（ＬＣ）患者血中ＨＢＶ－ＤＮＡ及ＨＣＶ－ＲＮＡ，同时检测血中乙肝５项标志及抗－ＨＣＶ。结果５６例ＰＨＣ中，ＨＢＶ５项标志阳性者４３例（７６．７８％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者４２例（７５．００％），两种方法联合应用阳性率为４９例（８７．５％）；其中３４例检测ＨＣＡ－ＲＮＡ阳性者８例（２３．５３％）。６２例ＬＣ中，ＨＢＶ５项标志阳性者３５例（５６．４５％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者３８例（６１．２９％），二者联合应用阳性数为４５例（７２．５８％），其中３４例检测ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性数为９例（２３．６８％）。ＰＨＣ组ＨＢＶ感染率显著高于ＬＣ组（Ｐ＜０．０５），ＨＣＶ感染率两组差异无显著性（Ｐ＜０．０５）。并对ＨＢＶ、ＨＣＶ感染与ＬＣ、ＰＨＣ的发生发展作进一步讨论。     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌（ＨＣＣ），分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达。结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬化或／和慢活肝病变，且ＨＢｓＡｇ表达率９６．３％。３２例ＨＣＣ中检出８例Ｐ５３蛋白阳性（２５％），这种改变与ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达无明显关系，而与ＨＣＣ发生年龄有关；３２例ＨＣＣ组织中有２例ｐ５３基因第２４９号编码子突变（６．２５％），明显低于ＡＦＢ１高含量区ＨＣＣ，而与台湾、日本等ＡＦＢ１低含量区报道一致，提示：成都地区ＨＣＣ与ＨＢＶ感染确有密切关系；ｐ５３改变在ＨＣＣ发生上有一定作用，但是多数ＨＣＣ并无ｐ５３基因突变又提示ＨＣＣ发生尚涉及其它复杂机制；ＨＢＶ在ＨＣＣｐ５３基因改变中的作用机制值得进一步探索。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

乙肝前S＿2（Pre－S＿2）抗原在HBsAg阳性者中的分布情况及探讨

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）属嗜肝ＤＮＡ病毒族，具有不寻常的独特基因结构。我们于１９８８年４月至１１月对汉、藏、蒙古、土、撒拉族ＨＢｓＡｇ阳性的２２４例血清进行了Ｐｒｅ－Ｓ＿２检测，其中汉族７０例，藏族７０例，蒙古族３０例，土族２８例，撒拉２６例，阳性者８２例，阳性率为３６．６１％（８２／２２４），汉族检出最高，阳性率为５７．１４％（４０／７０），Ｐ＜０．００５，其次为土、藏、蒙古、撒拉族。分别为３１．１４％（９／２８）、２８．５７％（２０／７０）、２３．３５％（３／３０）、２３．０７％（６／２６），在８２例Ｐｒｅ－Ｓ＿２：阳性中，其中男性占４０．３１％（５２／１２９），女性占３１．５８％（３ｏ／９５）’Ｐ＞０．０５。     

海南省HB VPre-C区变异研究

本文应用快速检测ＨＢＶＰｒｅ－Ｃ基因突变方法对１１２例乙肝病人及无症状ＨＢＶ携带者（男６１例，女５１例）进行了研究。结果显示９３例ＨＢＶＤＮＡ阳性患者中有１３例有突变感染或与野生株合并感染（１４．０％），总的突变率偏低。突变感染率中，女性高于男性（Ｐ＜０．０５）。年龄较大者突变检出率有增高趋势。突变率与血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）水平无关。乙肝病人及ＨＢＶ携带者的突变检出率分别是１８．５％（５／２７）及１２．１％（８／６６）。     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

肝病患者血清中AFP,HBV—DNA,抗—HcV存在状况的研究

本检测２０３例肝病患血清中ＡＦＰ，ＨＢＶ－ＤＮＡ和抗－ＨＣＶ，其阳性结果为：ＡＦＰ４２．４％，ＨＢＶ－ＤＮＡ６７．９％，抗－ＨＣＶ２３．６％，在８７例ＡＦＰ阳性血清中，ＨＢＶ－ＤＮＡ和抗－ＨＣＶ阳性率分别为７２．４％和３５．８％，其中：ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性抗－ＨＣＶ阳性率４５．８％，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性抗－ＨＣＶ阳性率３１．７％，结果表明，ＨＢＶ与ＨＣＶ感染与原发性肝癌（ＰＨＣ）的发生，关系十     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌，分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶ ＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达，结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶ ＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬     

α—IFN,Ribavirin联合抗HBV对血清复制指标影响的研究

采用α－干扰素（α－ＩＦＮ），病毒唑联合治疗慢性ＨＢＶ感染病人６３例，以α－ＩＦＮ治疗慢性乙肝病人５８例，对比观察联合用药对病人血清ＨＢｅＡｇ，Ｐｒｅ－Ｓ２，ＰＨＳＡ－Ｒ及ＤＮＡ－Ｐ复制指标的抑制效应。３个月疗程结束后，抑制效应两组分别为ＨＢｅＡｇ４９．２％和３４．５％，Ｐｒｅ－Ｓ２，５２．７％和３８．８％，ＰＨＳＡ－Ｒ４４．２％和３７．７％，ＤＮＡ－Ｐ５７．９％和４１．９％，高复制型５２．６％和     

乙型肝炎病毒ＢＣＰ、ＰｒｅＣ和Ｃ区基因突变与母婴传播免疫失败的相关性

【目的】 探讨ＢＣＰ、ＰｒｅＣ和Ｃ区基因突变率及突变热点与ＨＢＶ母婴传播免疫失败的关系。【方法】 选取血清ＨＢｓＡｇ阳性且ＨＢＶ ＤＮＡ定量＞１０００Ｕ／ｍＬ的孕妇,以所分娩的新生儿是否发生免疫失败和孕妇血清ＨＢＶ ＤＮＡ定量水平将孕妇分为免疫失败组（１９例）和对照１组（免疫成功且ＨＢＶ－ＤＮＡ定量≥１．０ × １０７ Ｕ／ｍＬ,４８例）、对照２组（免疫成功且ＨＢＶ－ＤＮＡ定量＜１．０ × １０７ Ｕ／ｍＬ,３８例）。对３组孕妇血中ＨＢＶ进行ＢＣＰ／ＰｒｅＣ／Ｃ区基因ＰＣＲ扩增和测序,比较３组的突变率和突变位点的不同。【结果】免疫失败组与对照１组间ＨＢＶＤＮＡ定量相比,差异无统计学意义（Ｐ ＞ ０．０５）,但均大于对照２组（Ｐ ＜ ０．０５）;ＢＣＰ、ＰｒｅＣ、Ｃ区基因突变率,免疫失败组与对照１组间相比,差异无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）,但均低于对照２组（Ｐ ＜ ０．０５）。突变热点ｎｔＡ１７６２Ｔ、ｎｔＧ１７６４Ａ、ｎｔＧ１８９６Ａ在３组中的发生率差异无统计学意义（Ｐ ＞ ０．０５）。【结论】ＢＣＰ／ＰｒｅＣ／Ｃ区基因突变率与ＨＢＶ ＤＮＡ定量有关,但未见其与ＨＢＶ母婴传播免疫失败有明显相关性;也未见ｔＡ１７６２Ｔ、ｎｔＧ１７６４Ａ、ｎｔＧ１８９６Ａ等突变热点与免疫失败的相关性。     

原发性肝癌与乙型、丙型肝炎病毒感染关系的探讨

采用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）法对７７例原发性肝癌患者进行抗－ＨＣＶ及ＨＢＶ标志检测，抗－ＨＣＶ阳性率为３９％，ＨＢＶＭ阳性率为８３．１％，其中，单独ＨＢＶ和ＨＣＶ感染分别为５０．６％和６．５％；ＨＢＶ和ＨＣＶ混合感染为３２．５％；１３例ＨＢＶＭ阴性的肝癌患者抗－ＨＣＶ阳性５例（３８．５％）。结果提示ＨＢＶ感染仍是肝癌的主要病因，ＨＣＶ感染亦较高，ＨＢＶ和ＨＣＶ混合感染较为常见，在与ＨＢＶ感染无关的肝癌患者中，ＨＣＶ感染率较高，应引起人们的重视。     

乙肝病毒X基因与人肝细胞癌关系的研究

目的 探讨乙肝病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因与肝癌发病的关系，为从分子水平上研究肝癌病因提供有关信息。方法 采用ＰＣＲ技术对ＨＢＶ不同状态的１０２例原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）、３６例肝硬化（ＬＣ）及２８例慢性肝炎（ＣＨ）血清中ＨＢＶＸ基因进行了检测。结果 在ＨＢＶ５项标志均阴性的５３例ＰＨＣ检出Ｘ基因２０例（３７．７％），３１例ＬＣ中检出５例（１６．１％），１１例ＣＨ中检出２例（１８．２％）。所有ＨＢＶ Ｘ基     

妊娠早期妇女巨细胞病毒感染状况的研究

目的：检查孕妇绒毛巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染，了解孕妇ＣＭＶ的早期感染状况。方法：采用ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ、病毒分离方法检测３２例早孕妇女血清ＣＭＶ－ＩｇＭ、宫颈和绒毛ＣＭＶ－ＤＮＡ。结果：孕妇血清ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率９．３８％（３／３２）；宫颈ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为１２．５％（４／３２）；绒毛ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性１例，分离阳性１例，阳性率为６．２５％（２／３２）；２例绒毛ＣＭＶ感染，但血清及宫颈检查正常。结论：妊娠早期绒毛的ＣＭＶ感染率为６．２５％，母亲血清和宫颈检查正常并不能排除胎儿先天感染的可能。     

细胞因子对HCV基因疫苗诱生免疫反应的增强作用

目的 探讨细胞因子对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因疫苗诱生免疫应答强度的增强作用。方法 将包含ＨＣＶ－Ｃ蛋白的基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,构建重组质料ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ,将此重组质粒单独或与包含鼠ＩＬ－２或ＩＬ－１２基因的表达质粒共免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,ＥＬＩＳＡ法检测ＨＣＶ Ｃ特异性抗体产生情况,以ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ转梁小鼠ＳＰ２／０细胞,表达ＨＣＶ Ｃ抗原为靶细胞,进行