铝对新生大鼠大脑皮层细胞内钙浓度的影响

目的 探讨铝对新生大鼠脑皮层神经元细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响.方法采用体外实验的方法,将分离的新生Wistar大鼠大脑皮层脑细胞分别与终浓度为0、10、100、1 000μmol/L的Al3^＋一起孵育,应用钙离子荧光指示剂Fura-2/AM测定不同孵育时间（15、30、45 min）细胞内[Ca^2＋]i.结果 皮层脑细胞内的[Ca^2＋]i随着Al3^＋浓度增加和孵育时间延长而增加,当Al3^＋浓度为1 000μmol/L时和孵育时间为45 min时,神经细胞内[Ca^2＋]i较其他组明显增高（P＜0.05）.结论 铝可通过增加新生大鼠大脑皮层神经细胞内[Ca^2＋]i而发挥神经毒性作用.     

微波预先辐照致γ射线对小鼠骨髓基质细胞毒性作用的改变

[目的]探讨微波预先辐照对γ射线致骨髓基质细胞凋亡、线粒体膜电位、胞内游离Ca^2＋浓度和Ca^2＋ Mg^2＋-ATP酶活性改变的影响。[方法]将原代培养的骨髓基质细胞随机分为正常对照组、单纯微波组、单纯γ射线组和联合组。12μW／cm。微波对单纯微波组和联合组连续辐照7d,每天1h,第8天对单纯丫射线组和联合组进行5Gy的γ射线照射。用钙离子依赖性磷脂结合蛋白．异硫氰酸荧光素及碘化丙啶（Annexin V-FITC及PI）双标记法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测线粒体膜电位和胞内游离Ca^2＋浓度,试剂盒检测Ca^2＋ Mg^2＋-ATP酶活性。[结果]与正常对照组相比,各处理组细胞的凋亡率和线粒体膜电位未见明显改变。γ射线照射后24h,单纯微波组、联合组和单纯γ射线组细胞内游离Ca^2＋浓度明显升高（P〈0．05）,Ca^2＋ Mg^2＋-ATP酶活性明显降低（P〈0．05）.与单纯γ射线组相比,联合组细胞内游离Ca^2＋浓度明显降低（P〈0．05）,Ca^2＋ Mg^2＋-ATP酶活性明显升高（尸〈0．05o[结论]本实验条件下,900MHz,12μW／cm。的微波辐射和5Gvl,射线均不能引起细胞凋亡率、线粒体膜电位的明显变化,但能导致胞内游离Ca^2＋浓度明显上升和Ca^2＋ ATP酶活性明显降低。预先微波辐照能够明显减弱γ射线引起的胞内游离Ca^2＋浓度和Ca^2＋ Mg^2＋-ATP酶活性改变。     

柴油车尾气颗粒物提取物对V79细胞内游离钙离子的影响

目的 探讨柴油车尾气颗粒物有机提取物（DEPE）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）胞内游离Ca^2＋[Ca^2＋]i的影响及其机制.方法 采用Ca^2＋指示剂Fura-2/AM荧光负载检测技术,研究DEPE对细胞内[Ca^2＋]i浓度的影响.结果 在一定剂量范围内,随着DEPE染毒剂量增加或时间延长,细胞内[Ca^2＋]i浓度升高,与胞内钙库释放和胞外Ca^2＋内流有关,并以胞外Ca^2＋内流为主.结论 DEPE能致细胞内[Ca^2＋]i升高,氧化损伤是导致细胞内[Ca^2＋]i升高的机制之一.     

双苯氟嗪对铅致海马神经元损伤的保护作用

目的 观察双苯氟嗪（Dipfluzine，Dip）对铅致原代培养海马神经元损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法 以原代培养的海马神经元作为研究对象，用醋酸铅造海马神经元损伤模型，通过测定细胞存活率，乳酸脱氢酶（LDH）泄漏率和胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i），观察Dip对铅致原代培养海马神经元损伤的保护作用。结果 Dip1．0和10μmol／L可显著提高铅损伤海马神经元存活率，降低LDH泄漏率，对铅诱导的海马神经元[Ca^2＋]i升高有明显的抑制作用（P〈0．01）；Dip0．1μmol／L亦可抑制铅诱导的海马神经元[Ca^2＋]i升高（P〈0．05）。结论 Dip对铅致原代培养海马神经元损伤具有保护作用，其机制可能与其抑制铅诱导的胞内钙超载有关。     

缺血性白质疏松症的血管内皮细胞损伤与羟苯磺酸钙的保护作用

目的 研究缺血性白质疏松症(LA)的血管内皮细胞(VECs)损伤与羟苯磺酸钙的保护作用.方法 选取40例缺血性LA患者作为缺血性LA组,与之基本匹配的体检健康者40例作为对照组.按随机数字表法将缺血性LA组分为常规治疗组和羟苯磺酸钙组(在常规治疗方法基础上加用羟苯磺酸钙),每组20例.用流式细胞仪测定CD31、CD146、CD45抗体标记的循环内皮细胞(CECs)数.结果 缺血性LA组CECs数[(14.9±3.5)个/m1]明显大于对照组[(7.6±2.4)个/ml],差异有统计学意义(P＜0.01).治疗前,羟苯磺酸钙组CECs数[(14.2±3.9)个/ml]与常规治疗组CECs数[(15.6±3.1)个/ml]比较差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后羟苯磺酸钙组CECs数[(1 0.4±2.7)个/ml]明显小于治疗前(P＜0.05),常规治疗组CECs数[(13.8±3.5)个/m1]与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后,羟苯磺酸钙组CECs数明显小于常规治疗组(P＜0.01).结论 缺血性LA存在VEC8受损.羟苯磺酸钙可以降低CECs数,可能具有保护VECs作用.     

低强度微波对盐酸阿霉素致人早幼粒白血病细胞损伤的影响

[目的]探讨低强度微波辐射对盐酸阿霉素（DOX）致人早幼粒白血病HL-60细胞损伤的影响。[方法]将HL-60细胞随机分为对照组、单纯微波组、单纯DOX组和联合组（微波＋DOX）。单纯微波组和联合组都给予12μW／cm。微波照射,1h／d,连续辐照3d,对照组和单纯DOX组置于同一环境,但不给予电磁辐射。第4天分别给予单纯DOX组和联合组以浓度为0．125mg／L的DOX。用钙离子依赖性磷脂结合蛋白一异硫氰酸荧光素／碘化丙啶（Annexin V—FITC／PI）检测细胞凋亡率,流式细胞仪检测线粒体膜电位和胞内游离Ca^2＋浓度。[结果]与对照组相比,单纯DOX组凋亡率明显增加（P〈0．05）;线粒体膜电位明显下降（P〈0．05）;胞内游离Ca^2＋浓度明显升高（P〈0．05）。与单纯DOX组相比,联合组凋亡率明显降低（P〈0．05）;线粒体膜电位明显升高（P〈0．05）;游离Ca^2＋浓度明显降低（P〈0．05）。[结论]预先900MHz、12μW／cm^2低强度微波照射能够明显减轻DOX引起的细胞损伤。     

Fe2O3纳米颗粒对人肝癌细胞游离钙的影响

[目的]探讨三氧化二铁（Fe2O3）纳米颗粒对人肝癌细胞（HepG2细胞）形态学和游离钙（[Ca^2＋]i）的影响,为研究Fe2O3纳米颗粒诱导细胞凋亡的机制提供依据。[方法]以不同浓度（0.173、0.347、0.694g／L）的Fe2O3纳米颗粒对HepG2细胞染毒1、12、24h,用激光扫描共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca^2＋]i荧光强度的变化。[结果]与对照组相比,染毒不同时间各染毒组细胞内[Ca^2＋]i含量差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒不同浓度时,Fe2O3纳米颗粒均能不同程度地引起HepG2细胞的形态学改变及其细胞内[Ca^2＋]i的升高。0.347、0.694g／L组染毒不同时间点的平均荧光强度分别为127.33±20.13、108.88±19.15、144.00±13.86和119.67±1.15、122.35±11.47、186.40±17.34,均明显高于对照组54.33±6.43,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]HepG2细胞凋亡可能与Fe2O3纳米颗粒引起的细胞[Ca^2＋]i升高有关。     

低强度微波对γ射线致人早幼粒白血病HL-60细胞损伤的影响

[目的]探讨低强度微波辐射对γ射线致人早幼粒白血病HL-60细胞的凋亡率、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential, MMP）和胞内游离Ca^2＋浓度改变的影响。[方法]将人早幼粒白血病HL-60细胞随机分为对照组、单纯微波组、单纯γ射线组和联合组（微波＋γ射线）。单纯微波组和联合组给予12gW／cm^2微波照射,每天1h,连续辐照3d;第4天给予单纯γ射线组和联合组8Gγγ射线照射。用钙离子依赖性磷脂结合蛋白-异硫氰酸荧光素／碘化丙啶（Annexin V—FITC／PI）双标记法检测细胞凋亡率,流式细胞仪检测线粒体膜电位和胞内游离Ca2＋浓度。[结果]与对照组相比,单纯γ射线组凋亡率明显增加（P〈0．05）;联合组凋亡率与单纯γ射线组相比显著降低（P〈O．05o与对照组相比,单纯γ射线组线粒体膜电位下降明显（P〈0．05）;联合组线粒体膜电位与单纯γ射线组相比显著升高（P〈0．05o与对照组相比,单纯γ射线组胞内游离Ca2＋浓度明显升高（P〈0．05）;与单纯γ射线组相比,联合组胞内游离Ca2＋浓度明显降低（P〈0．05）。[结论]本实验条件下,8Gyγ射线可以引起细胞凋亡率增加、线粒体膜电位下降和胞内游离Ca2＋浓度增高,导致细胞损伤。预先900MHz、12μW／cm^2低强度微波照射能够显著减轻γ射线引起的细胞损伤,表现为细胞凋亡率减少、线粒体膜电位升高和细胞内游离Ca^2＋浓度降低。     

细胞内游离钙在血管紧张素转换酶抑制剂逆转高血压病心脏重构中的作用

目的 探讨细胞内游离钙在血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）逆转高血压病心脏重构中的作用。方法 采用正常血压大鼠（WKY），自发性高血压大鼠（SHR）配对，服药前后对比及离体淋巴细胞药物干预研究。结果 （1）SHR与WKY比较有以下心脏重构现象；心脏重量指数增加，心肌细胞肌节长度延长，肌束及核周水肿，胶原区扩大，心肌细胞内线粒体增多，体密度增加；线粒体肿胀，比表面减少，线粒体脊溶解和空泡样变性；（2）SHR外周淋巴细胞[Ca^2 ]i，血浆血管紧张素Ⅱ浓度[ATⅡ]较WKY显增加；（3）ACEI治疗后SHR心脏重构现象得到逆转，血浆[ATⅡ]，淋巴细胞[Ca^2 ]i降低；（4）离体情况下，ATⅡ能使SHR，WKY淋巴细胞[Ca^2 ]i增加，ACEI能使淋巴细胞[Ca^2 ]i降低。结论 ACEI能有效逆转高血压心脏重构现象。其作用机制可能同有效纠正细胞游离钙超负荷及调节异常的细胞内游离钙代谢有关。     

缺氧及血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞内钙离子浓度及线粒体膜电位的影响

目的 观察缺氧及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)对血管内皮细胞(VEC)内钙离子浓度及线粒体膜电位的影响.方法 建立VEC缺氧损伤模型;实验设空白对照组、缺氧组、Ang-Ⅱ作用组、缺氧加Ang-Ⅱ作用组.细胞经过Fluo-3/AM负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC内钙离子浓度;细胞经过Rhodamine 123负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC线粒体膜电位.结果 VEC分别经过缺氧及Aug-Ⅱ损伤后,细胞内钙离子浓度(51.66±8.94)明显升高,线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);缺氧条件下Ang-Ⅱ可引起VEC钙离子浓度(51.66±8.94)进一步升高,线粒体膜电位的变化(16.02±6.09)较单纯缺氧或单纯Ang-Ⅱ作用(分别为24.72±8.31、21.77±7.19)进一步降低.结论 缺氧及Ang-Ⅱ可引起VEC内钙离子浓度明显升高,线粒体膜电位明显降低.     

血管紧张素-2对内皮细胞和线粒体膜电位影响

目的 观察血管紧张-2(Ang-2)对血管内皮细胞(VEC)内[Ca²⁺]i及线粒体膜电位水平的影响。方法 将VEC分为空白对照组和Ang-2处理组。用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的[Ca²⁺]i和线粒体膜电位。结果 空白对照组的细胞内[Ca²⁺]i为(24.781±1.350),Ang-2组的细胞内[Ca²⁺]i为(47.384±1.323),Ang-2组的细胞内[Ca²⁺]i,明显高于空白对照组(P<0.01)。空白对照组的线粒体膜电位水平为(36.578±1.1470),Ang-2组的线粒体膜电位水平为(9.016±1.124),Ang-2组的线粒体膜电位水平明显低于空白对照组(P<0.01)。结论 Ang-2可引起VEC内[Ca²⁺]i和线粒体膜电位水平的明显改变。     

除虫菊酯类农药对大鼠肝线粒体、微粒体~(45)Ca摄取的影响

为探讨除虫菊酯类农药对钙离子转运的影响，采用体外放射性同位素４５Ｃａ测定技术，观察了溴氰菊酯、氯氰菊酯对雄性ＳＤ大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的影响，以及对线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力的影响。结果表明：溴氰菊酯、氯氰菊酯均能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的能力，抑制肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力，与对照组相比，差异均有显著或非常显著意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），且随剂量增加，线粒体、微粒体４５Ｃａ摄取率及Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力有显著下降的趋势。提示：溴氰菊酯、氯氰菊酯对肝脏钙稳态影响的作用部位主要是线粒体和内质网钙隔离和调节系统，使其钙封闭作用失调、钙离子转运障碍、细胞正常生理生化功能紊乱。     

β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒24、48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量、时间点Aβ_(25~35)染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24、48 h和各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和15μmol/L Aβ_(25~35)染毒48 h及各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡。     

SERCA抑制剂抑制人结肠癌SW480细胞生长的作用机制研究

目的探讨SERCA抑制剂抑制结肠癌细胞株SW480生长的作用机制,为结肠癌治疗提供实验依据。方法（1）应用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2检测细胞内Ca^2＋的浓度。（2）MTT法检测细胞抑制率。结果毒胡萝卜素（Tg）可使SW480细胞内Ca^2＋水平由（133．26±5．17,197．46±4．62）明显升高到（436．63±5．21,766．41±3．12）,差异有统计学意义（P〈0．05）;毒胡萝卜素（Tg）对人结肠癌细胞株SW480的抑制率随浓度（10～50μmol／L）的提高而增高,由（10．67±5．28）％至（31．46±7．21）％,抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）;毒胡萝卜素（Tg）与W7合用时,这种效应则受到抑制。结论随着毒胡萝卜紊（Tg）浓度的增大,细胞内钙浓度同步上升;同时毒胡萝卜素（Tg）对该细胞株的抑制率增高。但其所诱导的细胞抑制具体钙信号途径还有待进一步研究。     

Hydroxylation increases the neurotoxic potential of BDE-47 to affect exocytosis and calcium homeostasis in PC12 cells

BACKGROUND: Oxidative metabolism, resulting in the formation of hydroxylated polybrominated diphenyl ether (PBDE) metabolites, may enhance the neurotoxic potential of brominated flame retardants. OBJECTIVE: Our objective was to investigate the effects of a hydroxylated metabolite of 2,2',4,4'-tetra-bromodiphenyl ether (BDE-47; 6-OH-BDE-47) on changes in the intracellular Ca2+ concentration ([Ca2+]i) and vesicular catecholamine release in PC12 cells. METHODS: We measured vesicular catecholamine release and [Ca2+]i using amperometry and imaging of the fluorescent Ca2+-sensitive dye Fura-2, respectively. RESULTS: Acute exposure of PC12 cells to 6-OH-BDE-47 (5 microM) induced vesicular catecholamine release. Catecholamine release coincided with a transient increase in [Ca2+]i, which was observed shortly after the onset of exposure to 6-OH-BDE-47 (120 microM). An additional late increase in [Ca2+]i was often observed at > or =1 microM 6-OH-BDE-47. The initial transient increase was absent in cells exposed to the parent compound BDE-47, whereas the late increase was observed only at 20 microM. Using the mitochondrial uncoupler carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) and thapsigargin to empty intracellular Ca2+ stores, we found that the initial increase originates from emptying of the endoplasmic reticulum and consequent influx of extracellular Ca2+, whereas the late increase originates primarily from mitochondria. CONCLUSION: The hydroxylated metabolite 6-OH-BDE-47 is more potent in disturbing Ca2+ homeostasis and neurotransmitter release than the parent compound BDE-47. The present findings indicate that bioactivation by oxidative metabolism adds considerably to the neurotoxic potential of PBDEs. Additionally, based on the observed mechanism of action, a cumulative neurotoxic effect of PBDEs and ortho-substituted polychlorinated biphenyls on [Ca2+]i cannot be ruled out.     

硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞超微结构的影响

目的通过观察硫酸镍(NiSO4)对体外培养大鼠睾丸间质细胞超微结构的改变,初步探讨镍致睾丸间质细胞损伤的特点。方法采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、纯化睾丸间质细胞,采用3β-HSD染色法鉴定其纯度;采用MTT法观察NiSO4(浓度为0.0、62.5、125.0、250.0、500.0和1000.0μmol/L)染毒3、6和12h后,对睾丸间质细胞生长抑制的影响;采用透射电镜观察染毒6h后大鼠睾丸间质细胞超微结构的变化。结果纯化的睾丸间质细胞采用3β-HSD染色后,镜下可见睾丸间质细胞被染成蓝黑色,细胞纯度可达到95%以上;与对照组比较,染毒6h,NiSO4浓度为125.0μmol/L及其以上浓度组对间质细胞生长具有明显的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);NiSO4可引起大鼠睾丸间质细胞线粒体和内质网超微结构改变,主要表现为线粒体肿胀,滑面内质网扩张及脱颗粒现象,溶酶体增多,尤其NiSO4浓度为500.0和1000.0μmol/L变化明显。结论 NiSO4可引起大鼠睾丸间质细胞超微结构改变。     

铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响。结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关。与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P<0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高。结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高。     

Intracellular ion channels: properties, function and experimental methodology

Ion channels selective for potassium or chloride ions are present in membranes of intracellular organelles such as mitochondria, sarcoplasmic (endoplasmic) reticulum, nucleus, synaptic vesicles, and chromaffin, and zymogen granules. They are probably important in cellular events such as compensation of electrical charges during intracellular transport of Ca2+ and H+ and regulation of organelle volume changes. This review describes the basic properties, and current hypotheses concerning the functional role, and some aspects of experimental methodology of intracellular ion channels studies.     

Adaptation of rat parenchymal hepatocyte to nutritional variation: Auantitation by stereology

The response of parenchymal hepatocytes to nutritional variation was quantitated using stereological analysis of electron and light micrographs. Young male rats (150 g) were acclimatized for four days with stock diet and then randomized by weight into three groups. After a 48-hour fast, rats were offered ad libitum access to a high carbohydrate/fat-free diet (Diet 1), a low carbohydrate/ protein-free diet (Diet 2), or stock diet. Rats were sacrificed after five days of feeding. Cellular volumes of C-3,4 hepatocytes (3rd and 4th cells from the central vein) were 4400, 6500 and 2600 μm³ for rats fed stock diet, Diet 1, or Diet 2, respectively. Nuclear volumes from these cells were 230, 370 and 250 μm³, respectively. Compared to control diet, Diet 1 significantly increased fractional volumes of cytoplasm occupied by mitochondria, glycogen and lipid and increased surface density of rough endoplasmic reticulum (RER). Diet 2, compared to Diet 1 and control diet, elevated volume fractions of glycogen, lipids and lysosomes and decreased cytoplasmic volume fractions of mitochondria Absolute volumes of various organelles, membrane areas for RER, smooth endoplasmic reticulum, and outer nuclear envelope, and number of mitochondria, peroxisomes and lysosomes were quantitated for C-3,4 hepatocytes under each nutritional influence.     

Importance of extracellular Ca2+ and intracellular Ca2+ release in ethanol-induced contraction of cerebral arterial smooth muscle.

The present study was designed to investigate the roles of extracellular Ca2+ ([Ca2+]0) influx and intracellular free Ca2+ ([Ca2+]i) release in ethanol-induced contractions of isolated canine cerebral arteries and primary cultured, cerebral vascular smooth muscle cells. Ethanol (20-200 mM) produced significant contractions in isolated canine basilar arterial rings in a concentration-dependent manner. Removal of [Ca2+]0 and pretreatment of canine basilar arterial rings with verapamil (an antagonist of voltage-gated Ca2+ channels), thapsigargin (a selective antagonist of the sarcoplasmic reticulum Ca2+ pump), caffeine plus ryanodine (a specific antagonist of ryanodine-sensitive Ca2+ release), or heparin (an inositol 1,4,5,-trisphosphate [InsP3]-mediated Ca2+ release antagonist) markedly attenuated (approximately 50%-80%) ethanol-induced contractions. The absence of [Ca2+]0 and preincubation of primary single smooth muscle cells obtained from canine basilar arteries with verapamil, thapsigargin, heparin, or caffeine plus ryanodine markedly attenuated (approximately 50%-80%) the transient and sustained elevations in [Ca2+]i induced by ethanol. Results of the present study suggest to us that both Ca2+ influx through voltage-gated Ca2+ channels and Ca2+ release from intracellular stores (both InsP3 sensitive and ryanodine sensitive) are required for ethanol-induced contractions of isolated canine basilar arteries.