慢性再生障碍性贫血患者中医证型与T-bet/GATA-3相关信号通路、Th亚群的相关性

目的从Th细胞失衡、转录因子T-bet/GATA-3及相关信号通路水平分析其与慢性再生障碍性贫血(CAA)中医证型的关系。方法选择CAA患者,辨证分为脾肾阳虚组和脾肾阴虚组各20例,另选20例健康者做对照(正常组),采用实时荧光定量PCR检测CAA患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法检测CAA患者外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果脾肾阴虚组患者PBMNCT-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1、IFN-γ、IL-12均高于脾肾阳虚组(P<0.05),并且此2组患者亦高于正常组(P<0.05),而GATA-3、STAT6、IL-43组比较则无统计学差异(P>0.05)。结论与脾肾阳虚型患者相比,CAA脾肾阴虚型存在更严重的IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路异常活化和Th1偏移,脾肾阴虚型存在更明显的免疫异常状态。     

T-bet/GATA3与哮喘的相关性及川芎嗪治疗哮喘的研究进展

目的了解Th1/Th2中特异性转录因子T-bet/GATA3与哮喘的相关性及川芎嗪治疗哮喘的研究现状。方法应用现代信息技术,通过互联网等查阅近年来国内外相关资料并进行分析、整理、总结,对Th1/Th2中特异性转录因子T-bet/GATA3的生物学特征、转录因子T-bet/GATA3与哮喘发病机制的相关性、川芎嗪对哮喘的治疗及其与转录因子T-bet/GATA3关系进行综述。结果转录因子T-bet/GATA3在哮喘发病中起到复杂的生物调节作用,动物实验显示,川芎嗪治疗哮喘有效,川芎嗪能促进转录因子T-bet水平的表达,降低转录因子GATA3水平的表达。结论深入研究转录因子T-bet/GATA3、哮喘及川芎嗪之间的相关性,为哮喘的临床分级和治疗提供新的思路。     

STAT信号通路对支气管哮喘的影响及中医药干预作用研究进展

综述信号转导与转录活化因子(STAT)信号通路对支气管哮喘的影响及中医药干预作用研究进展。STAT1可活化细胞间黏附分子,加重气道炎症反应;活化后的STAT2与磷酸化的STAT1形成的二聚体,可影响辅助型T淋巴细胞2(Th2)细胞分化,诱导免疫球蛋白E(IgE)分泌和炎性细胞浸润,致使哮喘发生;STAT3可诱导白介素6(IL-6)的免疫反应,促进辅助型T淋巴细胞17(Th17)细胞分化,引起机体炎性反应;磷酸化后的STAT4可诱导调节性T细胞(Treg)相应转录因子表达,拮抗Th17细胞分化;活化后的STAT5可诱导嗜酸性粒细胞(EOS)分化、增殖,抑制EOS凋亡,导致哮喘发作时EOS生成增多;STAT6可通过影响Th2细胞的免疫反应,参与哮喘的发生与发展。中医药可通过调节Janus激酶/信号转导与转录活化因子(JAK/STAT)相关信号通路,缓解哮喘症状,减轻气道炎症及气道重塑。     

鼻敏感颗粒对变应性鼻炎小鼠炎症反应及相关蛋白表达的影响

目的观察鼻敏感颗粒对变应性鼻炎(AR)小鼠炎症反应的影响并探讨其机制。方法小鼠随机分成模型组、正常组、阳性对照组、鼻敏感颗粒低剂量组、鼻敏感颗粒中剂量组和鼻敏感颗粒高剂量组,除正常组外,其他各组小鼠制备AR模型,阳性对照组灌胃氯雷他定药液,鼻敏感颗粒低、中、高剂量组分别灌胃相应剂量鼻敏感颗粒药液。观察各组小鼠鼻部症状评分、鼻腔病理形态与病变评分,检测血清炎性因子含量,鼻黏膜GATA3、T-bet蛋白和mRNA相对表达量。结果给药7、14、28 d模型组小鼠症状评分较正常组显著升高,给药7、14、28 d阳性对照组、鼻敏感颗粒低、中、高剂量组小鼠症状评分较模型组显著降低,差异有统计学意义(P 0.05);和正常组相比,模型组小鼠鼻黏膜组织GATA3蛋白表达升高,T-bet蛋白表达降低;和模型组相比,阳性对照组、鼻敏感颗粒低、中、高剂量组小鼠鼻黏膜组织GATA3蛋白表达降低,T-bet蛋白表达升高,差异有统计学意义(P 0.05)。结论鼻敏感颗粒可显著缓解AR小鼠临床症状,降低血清炎性因子含量,其机制可能和改善Th1/Th2细胞失衡有关。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠T-bet/GATA3的影响＊

目的 观察甲炎康泰（JYKT）复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroiditis，AIT）大鼠Th1/Th2细胞转录因子T-bet/GATA3的影响。方法 50只Lewis大鼠，雌性，每组10只随机分为正常对照组、模型组、JYKT低、中、高剂量组。模型组与给药组大鼠皮下多点注射猪甲状腺球蛋白和弗化剂的方法建立自身免疫性甲状腺炎大鼠（AIT大鼠），大鼠造模6周后，正常、模型组大鼠每日予以0.9 mL/100 g双蒸水，中药组大鼠予以同体积药物混悬液连续8周。给药结束后RT-PCR检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3 mRNA的表达情况；Western Blot检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3的蛋白表达情况；免疫组化法测定大鼠甲状腺组织T-bet、GATA3蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白表达均显著上升（P < 0.01）；与模型组比较，甲炎康泰低、中、高剂量组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白均下降（P < 0.05，P < 0.01）。结论 T-bet/GATA3是影响Th1/Th2平衡的关键转录因子，甲炎康泰可调控T-bet/GATA3表达，从而影响了自身免疫性甲状腺炎的发生与发展。     

从TH1/TH2细胞平衡角度探讨清肺口服液对感染RSV小鼠内T-bet、GATA3水平的影响

目的:从TH1/TH2细胞平衡角度观察清肺口服液对感染RSV肺炎小鼠肺组织内T-bet、GATA3及IL-12的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将45只BABL/c小鼠随机分为5组,正常对照组,模型组,利巴韦林组,清肺(3.4 g/mL)组,清肺(10.2 g/mL)组。每组9只,用RSV(Long株)病毒予小鼠滴鼻造模,病毒激发24 h后,分给药72 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,及肺细胞中RT-PCR检测T-bet和GATA3蛋白表达水平,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞IL-4和INF-γ表达含量。结果:小鼠模型组与各给药组小鼠肺组织均有T-bet和IL-12(P<0.05,P<0.01)显著升高,GATA3显著降低。结论:清肺口服液具有调节TH1/TH2平衡,并对于感染rsv小鼠体内T-bet及IL-12细胞因子具有明显提升作用,而对GATA3则有明显抑制效果,从而进一步证明了清肺口服液治疗RSV病毒性肺炎有效性。     

基于STAT3信号通路调节Th17细胞增殖探讨温阳化浊通络方治疗系统性硬化病机制

目的:研究温阳化浊通络方对Th17细胞增殖的影响,探讨其对STAT3信号通路的调控作用,明确该方治疗系统性硬化病(SSc)的免疫调控机制。方法:收集SSc患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞,人Th17分选试剂盒分选Th17细胞,同时制备温阳化浊通络方含药血清。荧光染料CFSE标记Th17细胞后,流式细胞术检测含药血清对Th17细胞增殖的影响。采用RT-qPCR和细胞免疫荧光技术检测含药血清对Th17细胞中JAK2、STAT3/p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,各剂量含药血清组可剂量依赖性地抑制Th17细胞的增殖(P<0.01);阳性对照组对Th17细胞的增殖抑制作用介于含药血清低剂量和高剂量组之间(P<0.01,P<0.05);各含药血清组可剂量依赖性地降低JAK2和STAT3 mRNA和蛋白的表达,并可剂量依赖性地降低p-STAT3的表达(P<0.05,P<0.01);阳性对照组抑制JAK2和STAT3/p-STAT3表达的作用强于各含药血清组(P<0.01)。结论:温阳化浊通络方可抑制Th17细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。     

麻黄细辛附子汤干预Notch通路调控Treg细胞纠正Th2偏移的研究

目的 探究麻黄细辛附子汤对Th2偏移、Treg细胞功能及Notch信号通路的干预作用。方法 体外培养CD4+T细胞,流式细胞仪鉴定纯度,使用白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ抗体（Anti-IFN-γ）诱导建立Th2细胞分化模型,DAPT及麻黄细辛附子汤干预24 h后收集上清及细胞,ELISA检测白细胞介素-5(IL-5)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子β1(TGF-β1)含量,RT-PCR检测T细胞特异性转录因子（T-bet）、转录因子结合蛋白-3(GATA-3)、叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)、Notch1 mRNA表达,Western blotting检测T-bet、GATA-3、FOXP3、Notch1蛋白表达。结果 1）较之空白组,模型组IL-5含量升高,IFN-γ、TGF-β1含量降低（P <0.01）;较之模型组,各给药组IL-5含量降低,IFN-γ、TGF-β1含量升高（P <0.01）。2）较之空白组,模型组Tbet、FOXP3 mRNA表达降低,GATA-3、Notch1 m RNA表达升高（P <0.01）;较之模型组,各给药组...     

风湿宁胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响

目的:探讨风湿宁(FSN)胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响。方法:采用Real-time PCR和Western blot技术分别从基因和蛋白的角度来观察各组CIA-FLS细胞中P-JAK2、PSTAT3及其负反馈调节因子SOCS1和SOCS3的含量;采用Real-time PCR技术分别对各组CIA-FLS细胞中VEGF和RANKL的表达情况进行检测。结果:Tofacitinib含药血清+IL-6组、FSN含药血清+IL-6组CIAFLS细胞JAK2、STAT3的mRNA含量和蛋白表达都明显下降(P<0.05),该通路相关细胞因子VEGF和RANKLmRNA的含量也明显减少(P<0.05)。20%FSN含药血清+IL-6组CIA-FLS细胞SOCS3mRNA含量和蛋白表达上升(P<0.05),10%FSN含药血清+IL-6组中VEGF和RANKLmRNA的含量不同程度的减少(P<0.05)。结论:风湿宁胶囊含药血清可能通过对CIA-FLS细胞JAK2/STAT3信号通路的抑制作用进而影响了相关细胞因子VEGF和RANKL的表达,这也可能是风湿宁胶囊能够改善类风湿关节炎血管翳形成和骨破坏的机制之一。     

艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用

目的:观察艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用。方法:30只大鼠用弗氏佐剂进行造模,随机分成模型组、艾灸组,西药组三组,10只正常大鼠作为空白对照组,经处理后,观察T-bet和GATA-3的表达。结果:模型组大鼠的脾脏细胞中T-bet表达较正常组明显增高,差异存在着显著性意义(P0.01),艾灸组和西药组T-bet表达升高,但差异无显著性意义(P0.05);模型组大鼠的脾脏细胞中GATA-3表达较正常组降低,差异存在着显著性意义(P0.05);艾灸和西药组中脾脏细胞中GATA-3表达较正常组降低,但差异无显著性意义(P0.05)。结论:艾灸可能通过抑制RA大鼠T细胞向Th1细胞分化,降低T-bet转录,促进GATA3转录,调整Thl/Th2功能失衡达到治疗目的。     

从祛瘀化痰法探讨平喘方及拆方对哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的干预机制

目的研究平喘方及拆方干预哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的作用机制,并探究"化痰"与"祛瘀"两种治法干预气道炎症的疗效。方法对60只BALB/c雄性小鼠按随机数字表分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组、拆方1(祛瘀方)组、拆方2(化痰方)组共6组,每组10只,运用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型,末次激发后给药7 d并杀检取材,运用HE染色观察各组小鼠气道及肺组织病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素4(IL-4)、干扰素γ(INF-γ)、白介素17(IL-17)、白介素10(IL-10)表达,蛋白质印迹法法(Western Blot)检测肺组织中转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组病理染色显示炎症细胞侵润明显,管壁及肺组织结构受到破坏,周围组织伴有炎性物质渗出,IL-4、IL-17、GATA-3表达增高(P<0.05),INF-γ、IL-10、T-bet表达减低(P<0.05)。与模型组对比,平喘方及拆方组可显著减少病理染色中的气道炎症程度,减低IL-4、IL-17、GATA-3表达(P<0.05),升高INF-γ、IL-10、T-bet表达(P<0.05),拆方组间比较祛瘀方在改善气道病理优于化痰方,在降低IL-4、IL-17、GATA-3因子水平具有优于化痰方的统计学趋势。结论:平喘方及拆方可减少哮喘小鼠IL-4、IL-17、GATA-3表达,升高INF-γ、IL-10、T-bet表达,改善Th1/Th2免疫失衡,祛瘀与化痰两种治法相比较,祛瘀法在改善气道炎症方面疗效较优。     

“邵氏五针法”对慢性哮喘大鼠GATA-3/T-bet表达的影响

目的:探讨"邵氏五针法"对慢性哮喘大鼠Thl/Th2细胞失衡相关因子的影响。方法:SD大鼠40只按随机数字表法分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组,通过HE染色观察各组大鼠肺组织病理学变化,通过酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清白介素(IL)-5、γ干扰素(IFN-γ)含量,荧光定量PCR检测各组大鼠肺组织中GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)mRNA表达水平。结果:肺组织病理显示针刺组和艾灸组大鼠气道炎症较模型组明显减轻,针刺组和艾灸组大鼠血清中IL-5含量及肺组织中GATA-3mRNA表达明显低于模型组,血清IFN-γ含量及肺组织T-betmRNA表达明显高于模型组。结论:针刺和艾灸能降低哮喘大鼠气道炎症,抑制Th2特异性转录因子GATA-3的表达,促进Thl特异性转录因子T-bet的表达,可能通过纠正Th1/Th2失衡,调控哮喘大鼠免疫功能,从而降低哮喘大鼠的气道高反应性及慢性炎症,达到防治哮喘的作用。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

目的：研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法：60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^-1),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^-1),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-...     

基于miR-181c-3p/STAT3通路探讨增液润燥汤治疗干燥综合征作用机制

目的:基于miR-181c-3p/信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路探讨增液润燥汤对干燥综合征(SS)模型小鼠的作用机制。方法:免疫诱导法制备SS模型小鼠；将BALB/c小鼠随机分为模型组、对照组、白芍总苷组、增液润燥汤低剂量组、增液润燥汤高剂量组、增液润燥汤高剂量+STAT3通路激活剂(Colivelin)组、增液润燥汤高剂量+miR-181c-3p激动剂组，每组3只；测量小鼠日饮水量、唾液流率、颌下腺脏器指数、血沉；ELISA法检测血清免疫球蛋白G(IgG)水平；观察颌下腺组织病理学变化；实时荧光定量PCR检测颌下腺miR-181c-3p的表达；Western blot法检测颌下腺同源异形盒基因A1(HOXA1)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、白介素-17(IL-17)和叉头盒蛋白P3(Foxp3)的表达；流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)比例。结果:与模型组比较，其余各组小鼠日饮水量、HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17表达、Th17细胞比例、Th17/Treg明显下降，唾液流率、Foxp3、miR-...     

润燥灵方对干燥综合征模型小鼠血清Th1/Th2的影响

目的探讨润燥灵方治疗干燥综合征的可能作用机制。方法将90只C57bl/6j小鼠随机分为空白组、模型组、强的松组及润燥灵低、中、高剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组采用免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型。造模成功后润燥灵高、中、低剂量组分别给予润燥灵方水煎剂36、18、9 g/(kg·d),强的松组给予强的松0.2 g/(kg·d),空白组和模型组灌服0.2 ml生理盐水,每日1次。连续给药4周后,ELISA法检测血清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平,PCR法检测颌下腺T-bet和GATA-3转录因子的表达量,流式细胞仪检测血清Th1和Th2细胞的数量。结果模型组IFN-γ、IL-4、T-bet表达及T-bet/GATA-3、CD3+CD8-/IFN-γ、CD3+CD8-/IL-4及IFN-γ/IL-4明显高于空白组,润燥灵高、中剂量均能够降低IFN-γ、T-bet表达及CD3+CD8-/IFN-γ、CD3+CD8-/IL-4,以润燥灵高剂量组作用最明显(P0.05或P0.01)。结论润燥灵方能够下调干燥综合征模型小鼠血清Th1/Th2,可能是其治疗干燥综合征的作用机制之一。