十全大补汤兔血清对人传代表皮细胞生长影响的研究

目的:探索快速增殖表皮细胞的方法。方法:采用3T3滋养细胞培养法,将传代表皮细胞和3T3细胞共同接种于DF12十全大补汤兔血清培养系统中,对传代表皮细胞生长的情况进行研究。结果:在3T3成纤维细胞和兔血清共同存在时,即使低密度接种表皮细胞,表皮细胞也能以单个细胞为克隆,以单层形式生长,增殖迅速,融合成膜片时间缩短,细胞数量大,克隆形成效率高,与对照组比较均呈显著性差异(P<0.05)。结论:本将为表皮细胞培养和移植在整形外科临床中应用开拓前景。     

兔骨髓单个核细胞体外向内皮细胞诱导的实验研究

[目的]研究兔骨髓单个核细胞(marrowmononuclearcells,MNCs)向内皮方向诱导的简捷有效方法,进行科学的计量分析并观察体外传代培养条件下的主要生物学特点。[方法]梯度离心分离兔MNCs,直接诱导培养,以每106个MNCs收获第1、2代内皮细胞的数量计量内皮细胞的收获效率;传代培养,倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,免疫组化及内皮细胞功能鉴定。[结果]以1×106/cm2的密度接种MNCs,经7~8d培养可收获第1代内皮细胞;第1、2代内皮细胞的收获总量和MNCs的收获量呈显著的正相关,每106个MNCs平均可收获第1代内皮细胞约(7·086±0·75)×104个,平均收获第2代细胞(53·20±6·47)×104个。诱导的内皮细胞为铺路石样,呈单层生长,第2代细胞CD31、八因子相关抗原免疫组化均为阳性,摄取低密度脂蛋白和结合凝集素实验均阳性。[结论]以1×106/cm2的MNCs接种密度,收获第1、2代内皮细胞所需时间较短,收获效率高,在体外培养条件下生物学特性稳定,有望作为骨组织工程血管化的种子细胞。     

骨髓间充质干细胞与胶原三维培养系统的建立

目的建立骨髓间充质干细胞(MSCs)与胶原的三维培养系统。方法 采用贴壁法对(5.8±3.4)×105个原代大鼠骨髓MSCs进行分离培养,通过传代次数的增加对其进行纯化扩增,然后以鼠尾胶原为成份构建胶原膜,用扫描电镜和噻唑蓝(MTT)比色法观察MSCs在胶原膜上的增殖状况。结果MSCs在体外扩增16代后共可获得(4.0±3.3)×1012个细胞,扩增(6.8±1.0)×106倍。扫描电镜结果显示,大鼠MSCs与鼠尾I型胶原有良好的亲和性;MTT结果显示,接种胶原膜后MSCs增殖特性与接种前相比,差异无显著性(P>0.05)。增殖曲线显示MSCs最适接种密度为2×104/cm2。结论大鼠MSCs接种后在胶原膜上增殖状况良好,此三维培养系统适于植入皮肤受损动物模型。     

γ射线防治尿道狭窄与诱导成纤维细胞凋亡的关系

1998年 ,孙颖浩等[1] 采用尿道狭窄内切开或瘢痕电切术后尿道内γ射线放疗 (总剂量 10～ 15Gy)防治复发性尿道狭窄 ,疗效满意。为探讨γ射线在临床应用剂量范围内防治尿道狭窄的作用机制 ,我们研究了γ射线体外照射对尿道瘢痕成纤维细胞的杀伤效应。一、材料和方法1.成纤维细胞培养 :取手术切除的尿道增生性瘢痕组织 ,采用组织块贴壁法原代培养[2 ] 。细胞生长成片后传代培养。2 .实验分组 :取 8～ 10代指数生长期细胞进行实验。照射前 2 4h ,以红细胞计数法计数细胞 ,按 3× 10 6个 /瓶接种到 75ml培养瓶中。随机将各瓶细胞设置为未照射组…     

大鼠睾丸Leydig细胞体外增殖研究

目的:探讨通过优化细胞培养体系,实现Leydig细胞的体外增殖培养。方法:联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得3周龄雄性Wistar大鼠睾丸Leydig细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液及优化培养体系培养,MTT法、细胞计数法检测培养细胞的增殖能力;分别对原代培养2h、4d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞术分析,检测细胞成分,同时检测培养细胞睾酮在hCG刺激下分泌能力变化。结果:优化培养体系能够明显促进3周龄大鼠睾丸Leydig细胞大量增殖,群体倍增时间为(2.26±0.31)d,传统培养体系培养细胞群体倍增时间为(16.32±2.14)d,两者差异有显著性(P<0.05);原代细胞经流式细胞术鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为(54.3±7.1)%,培养4d后,增殖细胞3β-HSD阳性细胞率为(93.6±4.6)%。增殖细胞均有睾酮生成功能,在hCG刺激下睾酮分泌均明显上升(P<0.05)。结论:优化培养体系能够促进差速贴壁法获得的睾丸Leydig细胞大量增殖。     

抑制脂肪酸合成酶对乳腺癌细胞的影响及其机制

内源性脂肪酸由位于细胞胞浆中的脂肪酸合成酶 (ＦＡＳ)催化合成 ,有研究表明减少内源性脂肪酸合成可抑制乳腺癌细胞的增殖 ,但其机制尚未阐明[1] 。本研究旨在对其作用机制作进一步探讨。一、材料与方法1.细胞培养 :人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7购自中国科学院上海细胞研究所。常规培养于含 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 164 0培养液中 ,在 10 0 %湿度 ,5 %ＣＯ2 培养箱中3 7℃单层贴壁传代培养。2 .抑制ＦＡＳ对ＭＣＦ 7细胞周期的影响 :ＭＣＦ 7细胞以 1× 10 9个 /Ｌ浓度接种于 2 5ｃｍ2 培养瓶中 ,生长至 70 %融合 ,加入浅蓝霉素 (ｃｅｒｕｌｅｎ…     

胃液对BIU-87细胞系细胞凋亡的影响

为探讨胃代膀胱术抑制膀胱肿瘤复发的机制 ,我们采用体外实验方法 ,观察胃液对膀胱癌细胞系ＢＩＵ 87细胞凋亡的影响 ,报告如下。材料与方法　细胞培养及处理 :将ＢＩＵ 87细胞系置于 37℃、5 %ＣＯ2 、含10 %胎牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养基中培养 ,待细胞生长旺盛、进入指数增殖期时 ,收获培养瓶中的细胞 ,调配成 2 .5×10 5个 /ｍｌ细胞悬液 ,接种至预先置有玻片的 2 4孔培养板和Ｔ 75培养瓶 ,实验各组分别加入胃液 (终浓度 7.6 μｍｏｌ/ｍｌ)、稀盐酸 (终浓度 7.6 μｍｏｌ/ｍｌ)、阿霉素 (终浓度 2 μｇ/ｍｌ)和无药培养液 ,继续置于 …     

混合接种法构建组织工程皮肤

目的 探讨混合接种法体外构建复合皮的可行性.方法 在异种猪脱细胞真皮的真皮面接种人成纤维细胞7 d后,将其分两组进行实验.实验组:将表皮细胞按5×105/cm2与成纤维细胞0.2 ×105/cm2混合后接种于表皮面,培养液用K-SFM与成纤维细胞上清的1:1混合液.对照组:仅接种表皮细胞5×105/cm2,培养液用K-SFM.培养1、3周后取材观察其形态变化,并行免疫组化鉴定.结果 培养3周后,实验组可见表皮层连续,细胞层数3～4层,与真皮连接紧密,有表皮突形成;对照组表皮细胞层仅1～2层,且与真皮分离.实验组Laminin强阳性提示基底膜形成充分,并经透射电镜也可观察到完整的基底膜.结论 将表皮细胞与少量成纤维细胞混合接种,可促进表皮细胞在脱细胞真皮上黏附增殖,并有助于基底膜充分形成.     

皮肤成纤维细胞在生物反应器中的生长和扩增

目的　探讨皮肤成纤维细胞在生物反应器中批式和间歇换液培养过程的生长、扩增与代谢特性。方法　将幼儿包皮组织中分离皮肤成纤维细胞接种到含 5 mg/ ml微载体浓度的 1.5升 Celli Gen生物反应器中 ,测定在间歇换液培养和批式培养过程中细胞生长密度、葡萄糖消耗及乳酸生成 ,同时与方瓶和转瓶中间歇换液培养结果进行比较。　结果　在生物反应器间歇换液培养过程中 ,成纤维细胞生长的最终密度达到 2 .0 8× 10 6 / ml,扩增 2 9.7倍 ,是批式培养的 1.81倍。与间歇换液的方瓶和转瓶培养结果相比 ,由于消除了营养和贴壁表面的限制 ,细胞密度分别提高9.16倍和 1.4 3倍。　结论　利用生物反应器和微载体悬浮培养人皮肤成纤维细胞 ,是大量制备组织工程种子细胞的一种有效方法。     

钙浓度变化对体外培养人表皮角质细胞增殖的影响

目的:比较不同钙浓度培养的人表皮角质细胞(HEKs)增殖能力的差异,确定体外培养表皮角质细胞的最适钙浓度.方法:根据培养液中CaCl2浓度不同,将HEKs分为无钙培养组和0.1、0.3、0.5、1.0 mmol/L CaCl2培养组.细胞培养3 h后,加钙离子荧光染料Fluo-3-AM,显微镜观察细胞内的荧光强度,以反映细胞内钙离子浓度的变化;细胞培养2 d后加Hochest33258核染液,荧光显微镜下观察细胞生长形态;培养3 d时镜下观察细胞的生长情况,并分别用流式细胞术和MTT法分析细胞的增殖情况.结果:钙培养可使细胞内钙离子浓度增加,表现为细胞内Fluo-3-AM荧光强度增强,且随着CaCl2浓度的增加,荧光强度亦随之增加;在钙浓度为0.3mmol/L时,细胞的增殖指数最高,为(51.98±14.31)%,增殖活性最强;0.1mmol/L组次之;随着钙浓度的增加,细胞的增殖指数下降,增殖活性受到抑制,0.5～1.0mmol/L钙培养组的增殖指数和增殖活性均明显低于无钙培养组(P均<0.01).结论:不同钙浓度培养影响表皮角质细胞的增殖能力,钙浓度为0.3 mmol/L时细胞的增殖能力最强.     

蓝舌病毒湖北株对人前列腺癌PC-3细胞杀伤效应的研究

目的体外实验研究蓝舌病毒湖北株3（BTV-HbC3）对人前列腺癌PC-3细胞的杀伤效应并且初步探讨BTV-HbC3靶向性溶瘤的机制。方法观察PC-3细胞感染BTV-HbC3后所致的病变效应（CPE）变化;透射电镜观察细胞感染病毒后超微结构的变化;CCK-8法研究病毒致细胞病变效应的特征;DNA Ladder分析病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪检测病毒对PC-3细胞凋亡的影响。结果 BTV-HbC3感染PC-3细胞后可见到明显的细胞效应;透射电镜发现胞浆内有大量病毒颗粒和典型细胞凋亡的形态变化;CCK-8法检测到病毒明显抑制细胞生长;DNA Ladder分析见阶梯状条带;流式细胞仪检测到明显细胞凋亡的存在,可见明显的亚二倍体峰。结论 BTV-HbC3在体外可有效地杀伤PC-3细胞,并能诱导其凋亡。     

Three-dimensional bioprinting is not only about cell-laden structures

In this review, we focused on a few obstacles that hinder three-dimensional (3D) bioprinting process in tissue engineering. One of the obstacles is the bioinks used to deliver cells. Hydrogels are the most widely used bioink materials; however, they are mechanically weak in nature and cannot meet the requirements for supporting structures, especially when the tissues, such as cartilage, require extracellular matrix to be mechanically strong. Secondly and more importantly, tissue regeneration is not only about building all the components in a way that mimics the structures of living tissues, but also about how to make the constructs function normally in the long term. One of the key issues is sufficient nutrient and oxygen supply to the engineered living constructs. The other is to coordinate the interplays between cells, bioactive agents and extracellular matrix in a natural way. This article reviews the approaches to improve the mechanical strength of hydrogels and their suitability for 3D bioprinting; moreover, the key issues of multiple cell lines coprinting with multiple growth factors, vascularization within engineered living constructs etc. were also reviewed.     

Effects of fatty acids and eicosanoid synthesis inhibitors on the growth of two human prostate cancer cell lines

Dietary fatty acids (FAs) may be involved in the carcinogenic process within the prostate gland and progression to clinically manifest disease. We have shown that growth of the androgen-unresponsive PC-3 human prostate cancer cell line is stimulated in vitro by the presence of linoleic acid (LA), an omega-6 polyunsaturated FA. The response was positively related to the FA concentration over the entire range examined (5-750 ng/ml). Conversely, docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA), two omega-3 FAs present in fish oils, inhibited PC-3 cell growth in a dose-dependent manner; both were equally effective, with an approximately 65% reduction in growth occurring at a concentration of 2.0 micrograms/ml (P less than 0.001). The DU 145 human prostate cancer cell line, which is also androgen-unresponsive, showed no growth response to LA and was less susceptible to growth inhibition when cultured in the presence of omega-3 FAs. Growth experiments with indomethacin, esculetin, and piroxicam, pharmacological inhibitors of eicosanoid biosynthesis with differing sites of action, indicated that human prostate cancer cell growth requires intact metabolic pathways for both leukotriene and prostaglandin production.     

Effects of adipocytes on the proliferation and differentiation of prostate cancer cells in a 3‐D culture model

Objective: To investigate how the mechanism of adipocyte–prostate cancer cell interaction affects the proliferation and differentiation of prostate cancer cells. Methods: An androgen‐dependent cell line (LNCaP), two androgen‐independent cell lines (PC‐3, DU145), and mature adipocytes harvested from male Wistar rats were used. Cancer cells were co‐cultured with the isolated mature adipocytes in 3‐D collagen gel matrix culture. The morphology and proliferative ability of the prostate cancer cells were examined. With regard to the activation of the phosphatidylinositol 3‐kinase (PI3K) pathway, the expression of phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten (PTEN), Akt and Bad were determined by immunohistochemistry. Results: LNCaP cells co‐cultured with adipocytes formed larger clusters than those of the control. PC‐3 cells co‐cultured with adipocytes did not form larger clusters, but formed spherical and spindle‐shaped cells. The phosphorylation of Akt in PC‐3 cells was greater in the co‐cultured group compared with the controls, but there were no significant differences in the phosphorylation of Akt with regard to LNCaP and DU145 cells. Conclusions: Adipocytes could modulate the proliferation and differentiation of prostate cancer cell lines. Activation of the PI3K pathway might be involved in the prostate cancer cell–adipocyte interaction.     

前列腺癌中netrin-1/UNC5B的表达及临床意义

目的:通过比较不同侵袭能力的前列腺癌细胞netrin-1/UNC5B表达量的差异,为前列腺癌寻找新的生物标志物及治疗手段。方法:选取前列腺癌细胞系DU145、22RV1、PC3、PC3M、RWPE-1,通过RT-PCR、Western印迹检测netrin-1/UNC5B的表达及其差异,并通过免疫荧光检测配体netrin-1及其受体UNC5B在前列腺癌细胞中的定位。结果:netrin-1/UNC5B在前列腺癌细胞中均表达,侵袭能力强的前列腺癌细胞中netrin-1表达量明显增多(P<0.05),而UNC5B在RWPE-1(正常细胞)中表达量明显增多(P<0.05)。结论:netrin-1/UNC5B表达量与前列腺癌的浸润及进展程度紧密关联,有望作为一种潜在的生物标志物来预测前列腺癌的恶性程度。     

Reconstitution of T and NK cells after haploidentical hematopoietic cell transplantation using αβ T cell–depleted grafts and the clinical implication of γδ T cells

To investigate reconstitution of T and NK cells after αβ T lymphocyte–depleted haploidentical hematopoietic cell transplantation (HHCT) and the clinical implications of γδ T cells, we analyzed 50 pediatric patients who received 55 HHCTs using αβ T cell–depleted grafts. The number of CD3+ T cells and CD8+ T cells recovered rapidly and reached donor levels at days 180 and 60, respectively. Recovery of NK cells was rapid, and the median of NK cells at day 14 was comparable to the donor level. At day 14, median percentage of γδ T lymphocytes was 70.5%. After day 14, the percentage of γδ T cells gradually decreased, while the percentage of αβ T cells gradually increased. Patients with a low percentage (≤21%) of γδ T cells at day 30 had significantly higher incidence of cytomegalovirus (CMV) reactivation compared to patients with a high percentage (>70%) of γδ T cells (P < .01). In patients with acute leukemia, patients with high percentage of γδ T cells at day 30 showed significantly higher relapse‐free survival compared to those with low percentage of γδ T cells (P = .02). Data suggest that early recovery of γδ T cells decreases the risk of CMV reactivation and leukemia relapse.     

STAT3及其磷酸化在食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的 检测食管鳞癌组织中信号转导子和转录激活子3( STAT3)在mRNA、蛋白质和蛋白质磷酸化3种水平的表达,探讨其在食管鳞癌发生、发展、浸润、转移中的作用。方法 检测43例食管鳞癌组织中的STAT3 mRNA、STAT3和磷酸化STAT3( pSTAT3)的表达,并与相应癌旁正常食管组织作对照研究,分析STAT3 mRNA、STAT3和pSTAT3的表达与临床病理参数的关系。结果 43例实验样本中(1)食管鳞癌组织中STAT3 mRNA相对表达强度比值(1.43±0.59)较癌旁组织的比值(0.98±0.47)明显增高(P＜0.05);(2)食管鳞癌组织中STAT3、pSTAT3表达(2.16±0.39、1.40±0.15)也都显著高于癌旁组织(1.87±0.29、1.25±0.13,P＜0.05);(3)食管鳞癌组织中STAT3mRNA、STAT3和pSTAT3在肿瘤不同分化级别中表达差异有统计学意义,分化级别越低,表达水平越高(P＜0.05),并与肿瘤分化级别呈负相关(-1 ＜r＜-0.301,P＜0.05);它们在TNM分期中Ⅲ期组的表达均高于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.05),伴有淋巴结转移组表达也都高于无淋巴结转移组(P＜0.05),并与两者呈正相关(两者均为0.301 ＜r＜1,P＜0.05);但未发现它们在性别、年龄、家族史、吸烟史中差异有统计学意义(P＞0.05)。结论 食管鳞癌组织中STAT3磷酸化异常激活后,导致STAT3mRNA、STAT3和pSTAT3的高表达,与食管鳞癌的分化、浸润、转移相关。     

3D生物打印技术及其外科临床应用

<正>3D打印(three dimensional printing)是一种采用计算机辅助设计以数字模型文件为基础,运用粉末状金属或塑料等可粘合材料,通过逐层打印的方式来构造物体的技术[1]。其原理是使用喷头喷出黏结剂,选择性地将零件的截面"印刷"在材料粉末上面,最后层层将各个截面黏结起来[2]。目前应用较多的3D打印技术主要包括光固化立体印刷(stereolithography,SLA)、熔融沉积成型(fused deposi-     

Galectin-3对外周血内皮祖细胞源性血管内皮细胞增殖能力的影响

目的观察重组人半乳糖凝集素-3(Galectin-3)对外周血内皮祖细胞源性血管内皮细胞增殖能力的影响。方法提取人外周血内皮祖细胞,将其定向诱导为成熟血管内皮细胞,加入不同终浓度的Galectin-3进行培养,观察不同浓度Galectin-3对外周血内皮祖细胞源性内皮细胞增殖能力的影响。结果 0.1、1.0、2.5、5.0和10.0μg/ml浓度组外周血内皮祖细胞源性内皮细胞的增殖能力均高于0μg/ml组,其中0.1,1.0及2.5μg/ml浓度组与0μg/ml组比较差异无统计学意义(P>0.05),而5.0及10.0μg/ml组细胞增殖能力明显高于0、0.1、1.0及2.5μg/ml组,差异有统计学意义(P<0.05),10.0μg/ml浓度组细胞增殖能力又明显高于5.0μg/ml浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Galectin-3可促进体外培养的外周血内皮祖细胞源性血管内皮细胞的增殖能力。     

人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

目的探讨人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用。方法通过血清药理学的方法，制备人参胡核汤高、中、低剂量及空白组的血清。各组与PC-3细胞作用48h、72h后，光镜观察细胞形态学改变；MTT法观察细胞增殖的抑制率；RT-PCR技术检测前列腺特异性抗原（PSA）表达。结果人参胡核汤含药血清各组作用48h、72h后，表现出不同程度的细胞皱缩，边缘毛糙，细胞核固缩或碎裂，细胞体积缩小；各组均可抑制PC-3细胞增殖；降低PSA表达水平。上述指标中，以人参胡核汤含药血清高剂量组作用48h的效果最为明显。结论人参胡核汤含药血清可使PC-3细胞的形态发生改变、抑制PC-3细胞增殖、降低PSA的表达。