结直肠癌中K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性研究

目的 分析K-ras基因突变、转化生长因子激酶1（TAK1）蛋白和MAP4K2蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系,并分析K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性。方法 应用DNA测序法检测76例结直肠癌样本中K-ras基因突变情况,应用免疫组化法检测样本中TAK1和MAP4K2蛋白表达情况。结果 76例结直肠癌中,K-ras基因突变率为32.89%（25例）,K-ras基因突变与肿瘤分化程度有关( P<0.05),与浸润深度、是否有淋巴结转移无关;TAK1阳性率为48.68%,MAP4K2阳性率为46.05%,TAK1蛋白表达和MAP4K2蛋白表达均与肿瘤分化程度、是否有淋巴结转移有关( P<0.05),与浸润深度无关。在76例结直肠癌中,K-ras基因突变与TAK1蛋白表达、MAP4K2蛋白表达均无相关性( P>0.05),TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间无相关性; 在25例K-ras基因突变的结直肠癌中,TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间呈正相关(r=0.402, P<0.028)。结论 K-ras基因突变、TAK1和MAP4K2蛋白表达均与结直肠癌的肿瘤分化程度有关,与浸润深度无关;在K-ras基因突变的结直肠癌中,TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间呈正相关。     

结直肠癌组织中Ang-2、Tie-2 mRNA的表达及K-ras基因突变的检测

目的:探讨结直肠癌组织中促血管生成素-2(Ang-2)及酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)mRNA的表达及K-ras基因突变的意义。方法:采用实时荧光定量PCR法分析40例结直肠癌组织和10例正常结肠黏膜组织中Ang-2及Tie-2的表达,应用PCR-SSCP方法检测40例结直肠癌组织中K-ras基因突变情况。结果:结直肠癌组织中Ang-2和Tie-2 mRNA的表达量高于正常组织(t=39.960、9.490,P<0.05)。K-ras基因突变率达42.5%(17/40),其中12密码子突变11例(64.7%),13密码子突变6例(35.3%)。浸润达肌层、有淋巴结转移和低未分化癌组织Ang-2mRNA高表达率较高(χ2=6.593、10.165、5.974,P均<0.05),Dukes分期C和D期、浸润达肌层、有淋巴结转移和低未分化癌组织Tie-2 mRNA高表达率也较高(χ2=4.365、8.864、8.087和9.086,P<0.05)。K-ras基因突变率在淋巴结转移的结直肠癌组织中高于无转移者(χ2=6.320,P<0.05),Dukes分期C、D期癌组织高于A、B期(χ2=13.961,P<0.05)。存在K-ras基因突变的癌组织中Ang-2和Tie-2 mRNA表达水平高于无突变者(t=4.056,7.518,P<0.05)。结论:Ang-2、Tie-2的表达与结直肠癌的血管生成以及早期转移有关。K-ras基因突变可作为评估结直肠癌转移和预后的分子生物学指标之一。     

人粪便K－Ras基因扩增检测对大肠癌诊断和术后随诊的可行性研究

[摘要] 目的 了解大肠癌组织及粪便中K-ras基因的突变状况, 了解粪便中脱落细胞基因检测的可行性及其临床意义。方法 采用PCR-RFLP银深色法检测30例大肠癌患者的手术标本和粪便脱落细胞的K-ras基因第12密码子的突变状况。结果 K-ras第12密码子突变检出敏感性癌组织为70%(21/30), 粪便为60%(18/30)。粪便与相应患者的癌组织检测符合率为90%(27/30)。结论 K-ras基因突变是大肠癌常见的分子事件, 粪便中基因突变检测结果较准确地反映了癌组织突变状况, 对其检测有望成为大肠癌诊断及筛查的无创分子途径。     

大肠癌组织中Ang-1、Ang-2及受体Tie-2的表达及意义

目的:旨在研究促血管生成素-1(Ang-1)、促血管生成素-2(Ang-2)和促血管生成素受体(Tie-2)在大肠癌中的表达,分析Ang-1、Ang-2和Tie-2的表达与大肠癌的组织学分化程度的关系,探讨三者在大肠癌进展中的作用,为大肠癌的临床治疗提供新的靶点。方法:应用免疫组化SP法检测64例大肠癌组织中的Ang-1、Ang-2和Tie-2的表达;RT-PCR检测Ang-1、Ang-2和Tie-2mRNA在大肠癌组织中的的表达。结果:Ang-1、Ang-2与Tie-2在癌组织高、中、低分化程度上的表达呈现为肿瘤的分化程度越低,蛋白与RNA表达越明显(P<0.05)。结论:Ang-1、Ang-2及Tie-2的表达程度与大肠癌的进展呈正相关。     

直接测序法检测结肠癌患者K-ras基因的灵敏度及其临床价值分析

目的 探讨结肠癌患者应用直接测序法测定K-ras 基因的灵敏度及其临床价值。方法 选取我院2016 年2 月~2017 年4 月收治的结肠癌患者80 例，随机分为研究组和对照组两组，研究组患者通过直接测序法、对照组患者通过sanger 测序法检测患者体内的K-ras 基因突变情况，分析K-ras 基因突变率与患者肿瘤大小、肿瘤部位、患者年龄等一般资料之间的相关性。结果 研究组患者测定K-ras 基因突变的灵敏度明显高于对照组（P<0.05），肿瘤直径在5 cm 以上患者的K-ras 基因突变率明显低于直径在5 cm 以下的患者（P<0.05）研究组检出率与患者肿瘤部位及分化程度、患者年龄等存在相关性。结论 应用直接测序法检测结肠癌患者K-ras 基因的突变情况具有较高的灵敏度，直接测序法的检出率与患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度以及患者的年龄等存在较强的相关性，对于临床上结肠癌等恶性肿瘤疾病的诊断具有较强的应用价值，值得临床上广泛推荐使用。     

nm23-H1基因突变及异常表达与大肠癌转移相关性的研究

目的：探讨nm23-H1基因突变及异常表达与大肠癌转移之间的关系。方法：（1）收集63例中国人大肠癌组织及癌旁组织，酚-氯仿-异戊醇法提取基因组DNA，同时收集整理患者的临床和病理资料；（2）应用PCR扩增nm23-H1基因全部编码序列第2-5位外显子后，经SSCP法初步筛查基因突变并对异常带型样本进行DNA测序分析；（3）应用流式细胞仪检测14例大鼠癌组织及癌旁组织nm23-H1蛋白的表达情况。结果：nm23-H1基因第2-4位外显子在63例大肠癌组织中（其中20例标本有淋巴结转移）未发现异常突变，仅有15例大肠癌组织nm23-H1基因第5外显子序列存在突变，其第360位碱基发生T-C置换（同义突变）；nm-23-H1基因蛋白在大肠粘膜组织中有表达，在部分大肠癌组织中的表达比其癌旁粘膜组织低，并与肿瘤转移有相关性，结论：nm23-H1基因突变的大肠癌组织中为小概率事件，大肠癌病类型，有无转移与nm23-H1基因突变无明显相关性；nm23-H1基因蛋白水平的表达下降与大肠癌的转移有相关性。     

直接测序法检测结肠癌患者K-ras基因的灵敏度及其临床价值

目的探讨结肠癌患者应用直接测序法测定K-ras基因的灵敏度及其临床价值。方法选取我院2016年2月～2017年4月收治的结肠癌患者80例,随机分为研究组和对照组两组,研究组患者通过直接测序法、对照组患者通过sanger测序法检测患者体内的K-ras基因突变情况,分析K-ras基因突变率与患者肿瘤大小、肿瘤部位、患者年龄等一般资料之间的相关性。结果研究组患者测定K-ras基因突变的灵敏度明显高于对照组(P0.05),肿瘤直径在5 cm以上患者的K-ras基因突变率明显低于直径在5 cm以下的患者(P0.05),研究组检出率与患者肿瘤部位及分化程度、患者年龄等存在相关性。结论应用直接测序法检测结肠癌患者K-ras基因的突变情况具有较高的灵敏度,直接测序法的检出率与患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度以及患者的年龄等存在较强的相关性,对于临床上结肠癌等恶性肿瘤疾病的诊断具有较强的应用价值,值得临床上广泛推荐使用。     

大肠癌患者粪便p53基因检测及其临床意义

目的: 研究大肠癌患者p53基因突变及蛋白表达之间关系,并探讨从粪便中检测p53基因突变在大肠癌早期诊断中的临床意义。方法: 采用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)法,检测大肠癌患者癌组织和粪便标本中p53基因第5~8外显子突变情况;同时运用免疫组化法分析癌组织中p53表达情况。结果: 34例大肠癌患者癌组织标本中,p53基因第5~8外显子突变及蛋白表达阳性率分别为52.9%和55.9%,正常黏膜未见p53表达(P<0.01)。p53表达与基因突变呈正相关关系(P<0.05)。p53表达阳性率与肿瘤组织大小有关,肿瘤≤ 5cm者阳性率高于>5 cm者(P<0.05),但与其它临床病理因素无关。12例癌组织中有p53基因突变的患者其粪便中基因突变阳性率为41.7%,正常人未检测出突变。结论: p53基因突变是参与和影响p53表达和生物学功能的主要因素;大肠癌患者粪便中可检测出p53基因突变,粪便中p53基因检测可成为一种新的肿瘤标志物用于大肠癌的诊断及高危人群的筛检普查。     

人粪便K-ras基因扩增检测对大肠癌诊断和术后随诊的意义探讨

目的 了解大肠癌组织及粪便中K-ras基因的突变状况,了解粪便中脱落细胞基因检测的可行性及其临床意义.方法 采用PCR-RFLP银染色法检测30例大肠癌患者的手术标本和粪便脱落细胞的K-ras基因第12密码子的突变状况.结果 K-ras第12密码子突变检出敏感性癌组织为70%(21/30),粪便为60%(18/30).粪便与相应患者的癌组织检测符合率为90%(27/30).结论 K-ras基因突变是大肠癌常见的分子事件,粪便中基因突变检测结果较准确地反映了癌组织突变状况,对其检测有望成为大肠癌诊断及筛查的无创分子途径.     

Ang-1和Ang-2在大肠癌中的表达和临床病理特征的关系

目的:研究血管生成素1,2(Ang-1,Ang-2)蛋白在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系。方法:应用免疫组化法检测50例大肠癌患者及正常人大肠黏膜组织中Ang-1、Ang-2蛋白表达水平。结果:大肠癌组织中Ang-2蛋白表达阳性率为78%(39/50),明显高于正常大肠黏膜组织的33.3%(5/15)(P<0.01),大肠癌组织Ang-1蛋白表达阳性率为46%(23/50),大肠黏膜正常组织Ang-1蛋白表达阳性率为66.7%(10/15)。Ang-1蛋白在正常组织和大肠癌组织中均有表达,两者差异无统计学意义(P>0.05),Ang-2蛋白表达水平与患者性别、年龄及癌的体积、癌分化程度、淋巴结转移无关(P>0.05),Dukes分期D期Ang-2蛋白表达水平明显高于A期(P<0.05)。有血道转移的比无血道转移的Ang-2表达水平高(P<0.05)。肠壁浸润越深,Ang-2蛋白表达水平越高(P<0.05)。结论:Ang-2蛋白表达水平与癌的肠壁浸润深度、临床分期及大肠癌血道转移有关,提示Ang-2蛋白高表达可能促进大肠癌的生长及转移;Ang-1蛋白表达与癌的发生无关。     

Ang-2、Tie-2及VEGFR-2在大肠癌中的表达及与预后的关系

目的检测Ang-2、Tie-2及VEGFR-2在大肠癌组织中的表达,分析其与大肠癌复发、转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测54例大肠癌组织、18例大肠癌旁组织中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2的表达,探讨其与大肠癌预后的关系。结果①Ang-2、Tie-2、VEGFR-2在大肠癌组织中的阳性表达率分别为77.78%、74.07%及59.26%,显著高于癌旁正常组织的阳性表达率的27.28%、16.67%及22.22%,差异均有统计学意义(P<0.05)。②Ang-2、Tie-2及VEGFR-2在根治术后5年内发生复发转移者的阳性表达率分别为87.50%、75.00%和75.00%,显著高于未复发转移组阳性表达率(分别为44.44%及22.22%、33.33%),差异均有统计学意义(P<0.05)。③Kaplan-Meier生存分析结果表明,Ang-2、Tie-2及VEGFR-2表达阴性者5年生存率均明显高于阳性表达者(P<0.05)。结论 Ang、Tie-2及VEGFR-2的表达与大肠癌复发转移及预后密切相关,可作为预测侵袭转移及评估预后的分子生物学标志物。     

应用ADx-ARMS法对大肠癌组织中K-ras基因突变的检测

目的探讨ADx—ARMS法对大肠癌组织中K—ras基因突变的检测情况。方法选择首都医科大学附属北京世纪坛医院2012年4～8月的大肠癌石蜡标本40例。应用ADx—ARMS法检测大肠癌石蜡标本中的K—ras基因7个热点突变,分析与年龄、性别、组织学分型以及病理分化程度的关系。结果40例大肠癌样本中共发现K—ras基因突变14例,突变率约为35．0％。K—ras基因突变与年龄及组织学分型无关（P〉0．05）,与患者性别（P〈0．05）及腺癌分化程度（P〈0．01）有关。结论ADx—ARMS法检测大肠癌组织中K—ras基因突变效果满意,值得临床应用。     

K-ras基因状态及ras蛋白表达在胃印戒细胞癌免疫表型分类中的意义

目的 探讨K-ras基因状态及ras蛋白表达在胃印戒细胞癌免疫表型分类中的意义.方法 应用组织芯片免疫组织化学技术检测180例胃印戒细胞癌组织中ras蛋白的表达;PCR扩增和DNA直接测序法检测癌组织中K-ras基因12、13密码子的突变情况.结果 ras蛋白阳性50例(27.8％),ras蛋白阳性表达率在肠型印戒细胞癌中显著高于胃型和混合型印戒细胞癌(P<0.05).在淋巴结转移阳性组织中,ras蛋白阳性表达率明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05);随着肿瘤侵袭、演进及临床分期的升高,ras蛋白阳性表达率明显增高(P<0.05).K-ras基因突变型22例(12.2％).所有突变位点均位于12密码子,突变类型包括:GGT→AGT 1例,GGT→TGT 1例,GGT→GCT 2例,GGT→GTT 8例,GGT→GAT 10例.13密码子未发现突变.肠型印戒细胞癌K-ras基因突变率显著高于胃型和混合型印戒细胞癌(P<0.05).K-ras基因突变型病例ras蛋白阳性表达率明显高于K-ras基因野生型病例(P<0.05).Spearman等级相关分析显示,ras蛋白表达与K-ras基因突变呈正相关(r=0.61,P<0.05).结论 ras蛋白的过表达可能与胃印戒细胞癌侵袭潜能、淋巴结转移相关,ras蛋白表达和K-ras基因突变与肿瘤的免疫表型变化存在相关性,它们在癌细胞表型转化过程中可能起到一定作用.     

DNA错配修复基因hMSH2在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨DNA错配修复基因hMSH2在宫颈癌发生、发展过程中的作用及临床病理联系。方法:应用免疫组织化学SP法对35例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变(CIN)和30例正常宫颈组织中hMSH2的表达进行检测。结果:浸润性宫颈癌、CIN、正常宫颈组织标本中hMSH2蛋白表达的阳性率分别为60.0%、70.0%和30.0%,差异有统计学意义(P<0.05);hMSH2蛋白表达与组织分化程度有关,在低分化癌中具有较高表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:hMSH2蛋白的过表达可能与宫颈肿瘤的发生、发展密切相关。hMSH2基因是一种极具潜力的研究基因组多态性、检测及定位突变的工具蛋白。     

结直肠腺瘤，单原发及多原发结直肠癌中P53及K-ras基因的突变分析

【摘要】 目的 探讨结直肠腺瘤、单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中P53及K-ras基因的突变。 方法 收集25例正常结直肠组织、38例结直肠腺瘤、78例单原发结直肠癌、19例(同时性多原发癌7例,异时性多原发癌12例)多原发结直肠癌组织标本及患者临床病理资料,提取标本组织中基因组DNA, 直接测序方法进行P53基因外显子5、6、7、8及K-ras基因密码子12、13序列分析,并对结直肠腺瘤及单原发结直肠癌的临床资料与其P53及K-ras基因突变进行多因素相关性分析。 结果 正常结直肠组织、结直肠腺瘤、单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中P53基因的突变概率分别是0%(0/25)、44.8%（17/38）、43.6%（34/78）、42.1%（8/19）,K-ras基因的突变概率分别为0%（0/25）、18.4%（7/38）、39.7%（31/78）、47.4%（9/19）,正常结直肠组织中P53和K-ras基因突变概率与结直肠腺瘤、单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中突变概率相比,差异均有统计学意义(P<0.05）,结直肠腺瘤中K-ras基因突变概率与单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中突变概率相比,差异均有统计学意义(P<0.05）,结直肠腺瘤中P53基因突变概率高于K-ras基因(P<0.05）。P53及K-ras基因在单原发结直肠癌的Ⅰ、Ⅱ期及高分化类型中的突变概率与其在Ⅲ、Ⅳ期及中低分化类型中差异无统计学意义。患者的年龄、性别、家族史、肿瘤位置与结直肠腺瘤及单原发结直肠癌中P53及K-ras基因突变无相关性,肿瘤分期及肿瘤的分化程度亦不是单原发结直肠癌中P53及K-ras基因发生突变的危险因素。 结论 本研究再次证实在结直肠肿瘤的发生和发展过程中,P53及K-ras基因的突变起着重要的作用,并且在结直肠的肿瘤发生发展过程中P53基因的突变可能早于K-ras基因。     

42例大肠癌患者血浆TPEF异常甲基化及K-ras基因突变检测结果分析

目的:测定大肠癌患者外周血血浆游离DNA中含表皮生长因子和卵泡抑素结构域的跨膜蛋白(TPEF)基因启动子区异常甲基化率及K-ras基因12密码子突变率,评估联合检测此二个分子标记非损伤性筛选和诊断大肠癌的可行性.方法:提取大肠癌患者外周血血浆DNA,采用突变富集PCR-RFLP法检测K-ras基因突变,甲基化特异性PCR法检测TPEF基因甲基化异常.结果:42例大肠癌患者血浆标本中,27例检测到TPEF甲基化异常,16例检测到K-ras基因12密码子突变,联合二个分子标记,大肠癌患者诊断符合率为76.2%.结论:联合检测K-ras、TPEF基因异常将可能是一种非损伤性筛选和诊断大肠癌的有效方法.     

结直肠癌MICA基因的表达与p53K-ras基因突变的关系研究

目的:分析结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变的关系.方法:回顾性分析我院2014年3月至2016年3月收治的66例结直肠癌患者的临床资料,应用半定量PCR-SSCP技术,对癌组织mdr1基因表达量与p53、K-ras进行检测,并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变间的相互关系.结果:经研究发现,MICA表达与结直肠癌患者肿瘤部位、年龄、性别无相关性(P>0.05).于66例患者中,22例淋巴结转移者的MICA平均表达量明显高于淋巴结未转移者,差异具有统计学意义(P<0.05).8例K-ras、p53基因联合突变者MICA基因平均表达量高于非联合突变者,差异具有显著统计学意义(P<0.05),12例K-ras基因突变者MICA平均表达量稍高于未突变者,但比较差异无统计学意义(P>0.05),16例p53基因突变者MICA平均表达量显著优于p53基因未突变者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:MICA基因高表达已成为了结直肠癌的关键检测指标,而p53、K-ras基因与其高表达具有相关性.     

结直肠肿瘤中血管生成素的表达及其与微血管密度的关系

目的:探讨结直肠肿瘤中血管生成素(ang iopo ietin,A ng)的表达及其与微血管密度(m icrovessel density,MVD)的关系。方法:采用免疫组化法,检测91例结直肠腺癌、20例结直肠腺瘤、24例正常结直肠组织中A ng-1和A ng-2的蛋白表达,以F-Ⅷ单克隆抗体标记血管内皮细胞,并计数MVD。结果:A ng-1在正常组织(7.07±2.00)的表达明显高于结直肠腺瘤(1.75±1.98)和腺癌(1.40±1.22),P<0.01;结直肠腺癌的A ng-2阳性表达率高于结直肠腺瘤、正常组织(P<0.01)。A ng-2的表达与结直肠腺癌的分化程度、有无脉管侵犯密切相关;在135例组织中,A ng-1表达与A ng-2表达(r=-0.338,P<0.01)、A ng-1表达与MVD(r=-0.388,P<0.01)、A ng-2表达与MVD(r=0.594,P<0.01)均有相关性。结论:A ng-2在结直肠腺癌中的过度表达对血管新生起重要作用,可能是评估结直肠腺癌恶性程度和预后的可靠指标。