小鼠腹水肝癌细胞染色质的转录活性及对DNaseⅠ消化敏感性的研究

在E.Coli RNA聚合酶作用下,小鼠腹水肝癌细胞染色质的体外转录活性较正常小鼠肝细胞染色质明显增高。肝癌细胞染色质的非组蛋白和RNA含量也较正常肝增高;但组蛋白含量基本相同。肝细胞染色质对DNaseⅠ消化更加敏感,说明肝癌细胞染色质转录活性部分的结构与正常肝染色质不同。     

衰老人胚肺成纤维细胞核及染色质的体外转录活性

研究人胚肺成纤维细胞（简称2BS）核及染色质体外转录活性与代龄的关系。方法：用γ-~(32)PATP及~3H-UTP参入法测定衰老2BS细胞核及染色质的转录活性。结果：（1）衰老2BS细胞核的转录起始能力较年轻的下降44％（P＜0.01）；（2）衰老和年轻2BS细胞核内不与染色质结合的RNA聚合酶（RNP）转录活性无差异（P＞0．05），而与染色质结合的RNA聚合酶转录活性则随增龄明显下降（P＜0．01）；（3）衰老2BS染色质体外转录活性较年轻2BS下降58％（P＜0．01），对DNaseⅠ的敏感性也有所降低。结论：衰老2BS细胞核染色质结构的改变可能是转录活性下降的原因。     

抗衰延寿方对青,老年大鼠肝细胞核转录活性的影响

本文研究抗衰延寿方对青、老年大鼠肝细胞核转录活性、染色质DNaseI消化敏感性及染色质化学组分的影响。结果证明:青年大鼠肝细胞核染色质DNaseI消化敏感性和肝细胞核非组蛋白染色体蛋白含量均明显的高于老年大鼠(P<0.01)。青年大鼠转录活性高于老年大鼠9.7％。服用抗衰延寿方后,青、老年大鼠肝细胞核转录活性、肝细胞核染色质DNasI消化敏感性均明显提高,而非组蛋白染色体蛋白含量无改变。     

老年鼠六种组织细胞的细胞核与染色质DNaseⅠ的消化敏感性研究

为探讨衰老的机理,作者研究了老年鼠和断奶乳鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６ 种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮＡ 酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）的消化敏感性。结果显示：①老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮａｓｅⅠ的消化敏感性均较断奶乳鼠相应的组织低;②老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６ 种组织的消化敏感性各不相同,脑组织的消化敏感性最低（Ｐ＜ ０．０１）;③断奶乳鼠脑组织的消化敏感性也较其它５ 种组织低,但乳鼠中其它５ 种组织细胞核及染色质的消化敏感性差异不明显。作者认为,老年鼠各组织细胞核和染色质转录活性降低,可能与活性基因减少有关。     

大鼠再生肝与BERH-2肝癌细胞核转录调控的比较研究

我们以正常分裂增殖能力强并具有部分胚胎性质的再生肝细胞与BERH-2肝癌细胞进行基因表达转录水平调控的比较研究,结果显示,再生肝和肝癌细胞核转录活性,尤其RNA聚合酶A的转录活性明显高于正常。RNA聚合酶B在再生肝中转录活性升高,但在肝癌却无明显变化,随着保温时间延长,反而略有下降。 利用DNA酶I为探针,对再生肝和肝癌细胞核进行DNA消化动力学研究表明,再生肝染色质DNA酶I消化百分率与正常相同,说明转录活性部位的数量不变;而肝癌细胞核经短暂消化,其染色质对DNA酶I的敏感性增加,说明转录活性部位数量增加。 利用DNA饱和分析法,在完整细胞核中测定了RNA聚合酶相对含量和相对比活性,显示再生肝RNA聚合酶含量增加,但比活性无明显变化;而肝癌细胞RNA聚合酶含量和比活性都高于正常。     

人hsp90β基因的诱导表达与染色质活化的关系

目的 研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法 采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质。然后采用狭缝杂交技术比较热诱地前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果 发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加,并与内源性的ｈｓｐ９０β     

hsp90α基因在染色质模板上的热诱导转录

目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录.方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因的转录活性.结果优化了热休克处理的HeLa全细胞抽提物在基因转录活性研究中的实验条件:用体外重组表达的染色质组装相关因子与核心组蛋白在体外与hsp90α基因启动子质粒组装成染色质;证明染色质模板的hsp90α基因体外转录水平低于裸露DNA模板,而其热诱导效率显著高于对照组.结论在体外组装的染色质模板具有阻遏hsp90α基因转录的活性,但明显提高了该基因的热诱导表达效率.     

衰老人胚肺成纤维细胞核染色质的体外转录活性研究

为探讨衰老过程中转录活性水平下降的机理，用同位纱掺入法和脱氧核糖核酸酶Ⅰ作为检测基因活性的探针，对人胚肺成纤维细胞２ＢＳ在衰老过程中染色质转录活性的变化进行研究。衰老细胞核染色南体外转录活性较年轻细胞下降５８％，并对ＤＮａｓｅⅠ的敏感性也较年轻组有明显降低。     

入hsp90p基因的热诱导表达与染色质活化的关系

目的研究人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系.方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Jurkat细胞内的活性和非活性染色质,然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人hsp90β基因在活性和非活性染色质中的分布,并用Northern印迹杂交的方法研究热休克诱导下的hsp90β mRNA表达.结果发现热休克诱导使细胞内人hsp90β基因在活性染色质中的含量明显增加,并与内源性的hsp90βmRNA表达水平一致.结论首次证实人hsp90β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控,为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型.     

染色质多肽对DNA及细胞核转录的抑制

从大鼠肝制备了对DNA转录有抑制作用的染色质多肽物质,其中不含RNase和DNase活性。经嗜热菌蛋白酶处理后。抑制作用显著降低。对大鼠肝及肝癌细胞核体外转录有抑制作用。     

老年鼠六种组织细胞的细胞核与染色质DNaseⅠ的消化敏感？…

为探讨衰老的机理,作者研究了老年鼠和断奶乳鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮＡ酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）的消化敏感性。结果显示：①老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮａｓｅⅠ的消化敏感性均较断奶乳鼠相应的组织低;②老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织的消化敏感性各不相同,脑组织的消化敏感性最低（Ｐ〈０．０１）;③断奶乳鼠脑组织的消化敏感性也较     

survivin启动子的克隆及其在前列腺癌细胞系中的活性鉴定

目的克隆survivin启动子片段,并检测其在人前列腺癌细胞中的转录活性,为该启动子在前列腺癌靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法PCR方法扩增survivin基因启动子S1pro和S2pro,克隆入pGL3-Basic,分别构建重组质粒pGL3-S1pro和pGL3-S2pro,脂质体转染前列腺癌细胞和Changliver肝细胞,检测survivin启动子在细胞中的转录活性。结果survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性,其中S2pro活性明显高于S1pro,达到CMV启动子活性的三分之一。结论survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,有可能成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。     

类风湿关节炎患者血清及滑液中DNase I活性检测及与炎症的相关性

目的探讨脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNase Ⅰ）在类风湿关节炎中潜在的致病作用。方法辐射状酶扩散法测定83例类风湿关 节炎（RA）患者和60名健康对照者血清DNaseⅠ活性以及27例RA患者和38例其他炎症性关节炎患者滑液（SF）DNaseⅠ活性, PicoGreen试剂盒测定游离DNA（cfDNA）水平,并分析两者与RA患者临床指标的相关性。结果RA组血清DNaseⅠ活性显著 低于健康对照组［（0.3065±0.1436）U/mL vs（0.4289±0.1976）U/mL, P<0.001］;血清DNaseⅠ活性与ESR（r=-0.2862, P= 0.0122）、CRP（r=-0.2790, P=0.0184）和中性粒细胞计数（r=-0.287, P=0.011）呈负相关。SF DNaseⅠ活性在RA、强直性脊柱炎组 和痛风性关节炎组中几乎都是阴性的。RA组患者SF cfDNA 水平明显高于骨性关节炎组患者［（100.81±142.98）μg/mL vs （18.98±31.40）μg/mL, P=0.002］;与强直性脊柱炎组（45.85±47.67 μg/mL, P=0.428）和痛风性关节炎组（162.95±97.49 μg/mL, P=0.132）无显著性差异;炎症性关节炎患者SF cfDNA水平与ESR（r=0.4106, P=0.0116）和CRP（r=0.5747, P=0.0002）呈显著正 相关。结论DNase I活性受损可能是中性粒细胞胞外网状陷阱形成增强的原因并在RA发病机制中起作用。     

芳香烃羟化酶活性与苯并[a]芘中间代谢产物生成关系的研究

100mg香烟烟油,多氯联苯诱导大鼠肝S_9组分中芳香烃羟化酶代谢B[a]P为3-OH-B[a]P的活性分别升高约40,20倍,而代谢B[a] P生成6-OXY-B [a]P自由基产物却仅由多氯联苯诱导的S_9组分作用中才被观察到。     

血清蛋白电泳组分含量及其构成比在肝纤维化诊断中的应用

目的探讨血清蛋白电泳诊断乙型肝炎相关肝纤维化程度的价值。方法慢性乙型肝炎189例,其中病理诊断为S0、S1、S2、S3、S4的患者分别为14例、43例、56例、29例、47例。血清蛋白电泳各组分含量构成比采用法国Sebia公司生产的Hydrasys全自动电泳仪及其配套试剂检测,血清总蛋白采用Roche全自动生化分析仪检测;血清蛋白电泳各组分含量-血清总蛋白xSPE各组分含量构成比。统计分析采用SPSS13．0软件。结果血清白蛋白、a2-球蛋白、β-球蛋白含量及其构成比与肝组织病理学分期呈显著负相关（P〈0．05）,a1-球蛋白、γ-球蛋白含量及其构成比与肝组织病理学分期呈显著正相关（P〈0．05）。血清蛋白电泳各组分含量诊断显著肝纤维化（≥s2）、严重肝纤维化（≥S3）和肝硬化（=s4）的ROC曲线下面积相似于血清蛋白电泳各组分含量构成比诊断肝纤维化程度的ROC曲线下面积（P〉O．05）。血清白蛋白和γ-球蛋白含量构成比作为诊断肝纤维化程度的指标比较稳定,并且其诊断严重肝纤维化或肝硬化的价值能够达到中度水平（ROC曲线下面积0．7～0．9或0．1～0-3）,其诊断严重肝纤维化和肝硬化的ROC曲线下面积分别为0．303和0．725、0．212和0．838。结论血清蛋白电泳各组分含量诊断乙型肝炎相关肝纤维化程度的效能并不优于SPE各组分含量构成比,血清白蛋白和γ-球蛋白含量构成比是比较可靠的诊断乙型肝炎相关严重肝纤维化和肝硬化的无创指标。     

二维实时剪切波弹性成像诊断慢性肝病肝纤维化各分期的价值

目的 研究二维实时剪切波弹性成像诊断慢性肝病肝纤维化各分期的价值。 方法 选取87例慢性肝病肝纤维化患者作为病例组,以及同期86例健康体检者作为对照组,根据肝纤维化分期将病例组进行分组,2组均接受二维实时剪切波弹性成像检测,对比病例组各分期与对照组的肝脏硬度测定值（liver stiffness measurement,LSM）,并比较病例组各组血清学指标,分析二维实时剪切波弹性成像检测相关性与诊断效能。 结果 S1、S2、S3、S4期LSM值均显著高于对照组,S4期显著高于S0、S1、S2、S3期,S3期显著高于S0、S1、S2期,S2显著高于S0、S1期,S1期显著高于S0期（P＜0.05）;经检查得出,S4期Ⅳ型胶原（Ⅳ collagen,Ⅳ-C）、层黏蛋白（laminin,LN）、血清透明质酸（hyaluronic acid,HA）显著高于S0、S1、S2、S3期,S3期Ⅳ-C、LN、HA显著高于S0、S1、S2期,S2期Ⅳ-C、LN、HA显著高于S0、S1期,S1期Ⅳ-C、LN、HA显著高于S0期（P＜0.05）;经过相关性分析得出,二维实时剪切波弹性成像与肝纤维化分期、Ⅳ-C、LN和HA呈正相关;根据病理结果为金标准,各个病理分期AUC结果分别为0.800、0.792、0.773、0.812,S1阈值为80.59,S2阈值为88.37,S3阈值为90.75,S4阈值为94.57。 结论 二维实时剪切波弹性成像能够有效判断慢性肝病患者肝纤维化程度,并且LSM与肝纤维化程度分期呈正相关。     

肝X受体的激活对小鼠糖尿病肝脏脂肪酸合成酶表达的调节

目的 探讨肝X受体(LXR)对糖尿病肝脏脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响及机制.方法 将16周龄、雄性、C57BL/6背景下瘦素受体基因缺陷的db/db小鼠和对照的db/m小鼠,分别予以LXR激动剂TO901317(TO)(3 mg·kg-1·d-1)或DMSO灌胃处理7 d;TO(10 μmol/L)刺激人肝癌细胞系HepG2细胞24 h.此外,HepG2细胞转染小鼠FAS启动子报告基因表达质粒,同时转染pcDNA3.1表达载体或LXR或活化型固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)表达质粒12 h;采用免疫组织化学方法检测FAS蛋白在肝脏上的表达,实时荧光定量PCR和蛋白印迹方法分别在mRNA和蛋白水平检测FAS和SREBP-1的表达及TO对其表达的影响,荧光素酶报告基因方法检测LXR激动剂和SREBP-1c对小鼠FAS启动子活性的影响.结果 免疫组化结果显示FAS蛋白在肝脏广泛表达,主要位于肝细胞胞质内.TO可显著降低db/db小鼠空腹血糖水平[由(12.00±1.06)mmol/L下降到(7.73±0.69)mmool/L,P＜0.01]和糖化血红蛋白水平(由5.67%±0.10%下降到4.87%±0.08%,P＜0.01).db/db小鼠肝脏FAS mRNA水平明显高于db/m小鼠,约为5.5倍(P＜0.01);在蛋白水平,db/db小鼠肝脏上的FAS也明显高于db/m小鼠.TO处理可使db/m小鼠肝脏FAS mRNA表达升高约3.5倍(P＜0.05),可使db/db小鼠肝脏FAS mRNA升高约1.7倍(P＜0.05);TO处理可使db/m小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.4倍(P＜0.05),使db/db小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.1倍(P＜0.01).TO能够上调HepG2细胞FAS的mRNA表达水平,升高约1.9倍(P＜0.05);LXR的激活还能显著增加HepG2细胞中FAS基因启动子活性,约为对照组的1.5倍;过表达LXR或SREBP-1c也能增加HepG2细胞FAS基因启动子活性,分别为对照组的1.9倍和1.6倍(均P＜0.01).结论 LXR可能通过其本身的直接作用和SREBP-1C的间接作用上调肝脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肝脏的脂质生成过程.