维A酸在细胞和基因水平调控黑素表达的研究

目的探讨维A酸治疗皮肤色斑的作用机制。方法应用不同浓度的维A酸作用于B16F10黑素瘤细胞及正常人黑素细胞,观察对酪氨酸酶mRNA的表达、酪氨酸酶活性、黑素含量及黑素细胞增殖率的影响。结果维A酸的作用浓度为100μmol／L时,黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达下调均值为30．13％;当浓度为500μmol／L以上时,可使酪氨酸酶活性降低82．79％,并随着浓度的增加作用越明显;而对黑素含量的降低则需要更高的浓度（1000μmol／L）;同时,还有促进黑素细胞增殖的作用。对照组氢醌对酪氨酸酶mRNA的表达无明显影响,对色素细胞有抑制和毒性作用。结论维A酸能够抑制黑素产生,是通过下调酪氨酸酶的表达和活性来完成。     

紫外线照射对体外培养人表皮黑素细胞雌激素受体的影响

目的:为了了解紫外线照射对对体外培养人正常黑素细胞雌激素受体的影响.方法:采用MTT法测定UVR照射后黑素细胞增殖情况,Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性,PSA免疫组织化学方法和半定量RT-PCR法检测UVR照射后黑素细胞雌激素受体基因mRNA表达.结果:UVA照射后黑素细胞数量在低照射剂量时升高,高剂量时无明显变化,酪氨酸酶活性在低照射剂量时升高,高剂量时随着剂量加大而逐浙下降;UVB照射后黑素细胞数量在低照射剂量时升高,在熙射剂量到达某个临界点后随着照射剂量的增加而迅速降低,酪氨酸酶活性在低剂量时增加,在高剂量照射时继续保持高度活性,不随照射剂量增加而变化;UVA和URB照射后黑素细胞ER免疫组化均可产生棕黄色颗粒,主要定位于细胞核;雌激素受体基因mRNA表达也明显高于对照组.结论:不同剂量和不同类型的紫外线照射对体外培养人正常黑素细胞雌激素受体表达均可产生正性作用.     

人源Dickkopf1原核表达产物对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的:观察人源Dickkopf1原核表达产物(DKK1蛋白)对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖情况;光学显微镜观察细胞形态学变化;氢氧化钠裂解法测定黑素合成;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:DKK1蛋白对黑素细胞的增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少(P<0.05);光学显微镜观察到DKK1蛋白作用的黑素细胞胞体较大,形态略呈多角形,树突较粗短;并能使黑素合成显著下降(P<0.05);使酪氨酸酶活性显著减弱(P<0.05)。结论:DKK1蛋白能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性,为DKK1蛋白应用于治疗色素增多性疾病奠定实验基础。     

川芎嗪对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的观察川芎嗪(TMP)对体外培养的黑素细胞的抑制作用.方法采用MTT法测定细胞增殖情况;NaOH裂解法测定黑素合成;Takahashi法测定酪氨酸酶含量;用透射电镜观察黑素小体的生成.结果川芎嗪对黑素细胞的增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少(P＜0.05),并能使黑素合成显著下降(P＜0.01),使酪氨酸酶活性逐渐减弱(P＜0.01);透射电镜观察显示,加川芎嗪后黑素小体明显减少.结论川芎嗪能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性,这可能是临床应用中药川芎治疗皮肤色素性疾病的机制.     

皮肤黑素细胞酪氨酸酶基因高表达模型的研究

目的细胞黑素的产生与色素基因表达量有关.本研究旨在建立体外黑素细胞色素基因高表达模型,为基因调控、基因治疗、化学治疗的效果和机理的研究提供实验依据.方法应用黑素细胞培养技术培养人皮肤黑素细胞,行Dopa染色和Fantana银染法.黑素细胞经紫外线和内皮素处理后,检测黑素细胞的黑素含量和酪氨酸酶mRNA表达状态.结果黑素细胞经紫外线照射后, 细胞黑素含量由(11±1.5)pg/cell上升至(54±2.3)pg/cell (P＜0.01), 而酪氨酸酶mRNA的表达相对值由(64±1.2)%上升至(142±2.8)% (P＜0.01);内皮素(ET-1)处理黑素细胞后, 黑素的含量也上升至(68±1.9)pg/cell (P＜0.01), 而酪氨酸酶mRNA的表达量上升至(187±3.4)%.结论紫外线和内皮素可以增加黑素细胞的黑素含量和增加酪氨酸酶mRNA的表达量.     

紫草素抑制紫外线辐射后黑素合成的研究

目的:研究紫草素对正常人表皮黑素细胞黑素合成的影响,及对紫外线辐射后黑素细胞黑素合成的影响。方法:用体外培养正常人表皮黑素细胞供给实验,黑素细胞经10m J/cm2紫外线辐射后,分别以选定的几个浓度(主要为0.25μg/L、0.5μg/L、1μg/L三种浓度)的紫草素培养72h,测定细胞增殖率、黑素含量及酪氨酸酶活性。结果:紫草素可减轻紫外线辐射对细胞增殖的抑制作用,并可抑制紫外线辐射后的表皮黑素细胞的黑素合成;较高浓度紫草素(大于0.5μg/L)对未经照射的表皮黑素细胞的增殖有抑制作用,但对黑素合成无明显影响。结论:紫草素可以明显抑制紫外线辐射后表皮黑素细胞的黑素合成,推测其对紫外线辐射的黑素细胞有光保护作用。     

芦荟苦素与熊果苷对体外培养的黑素细胞协同影响的实验研究

目的　研究芦荟苦素与熊果苷协同对体外培养的正常人表皮黑素细胞的效应。方法　在体外建立正常人表皮黑素细胞培养系 ,通过MTT法测定芦荟苦素与熊果苷的混合物对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,用图像信号采集与分析系统测定黑素含量 ,并与单纯芦荟苦素组及熊果苷组进行比较。结果　芦荟苦素与熊果苷的混合物对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性有明显抑制作用 ,可显著减少黑素生成量 ,与单一药物对照组相比 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,而对黑素细胞活力影响很小 ,与单一药物对照组相比 ,差异无显著性意义。结论　芦荟苦素与熊果苷的混合物对体外培养的黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显著抑制作用 ,并较单一药物作用增强 ,说明两者呈协同作用。     

含己烯雌酚血清对体外培养正常人黑素细胞的作用

目的:观察不同浓度含己烯雌酚(DES)血清对体外培养人黑素细胞的增殖和酪氨酸酶活性的影响。方法:采用MTT法测定黑素细胞增殖情况;参考Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性;NaOH溶解法测定黑素含量。结果:己烯雌酚血清不同剂量对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论:己烯雌酚能促进体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性,对相关皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。     

含己烯雌酚血清对体外培养正常人黑素细胞的作用

目的:观察不同浓度含己烯雌酚(DES)血清对体外培养人黑素细胞的增殖和酪氨酸酶活性的影响。方法:采用MTT法测定黑素细胞增殖情况;参考Nakajima M方法测定酪氨酸酶活性;NaOH溶解法测定黑素含量。结果:己烯雌酚血清不同剂量对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论:己烯雌酚能促进体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性,对相关皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。     

17味中药对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA表达水平与致色素作用的影响

目的:探讨17味中药对豚鼠皮肤中酪氨酸酶mRNA的调节与致色素作用。方法:以棕黄色豚鼠为实验模型,17味中药的75%乙醇提取液为实验组,8-甲氧补骨脂素(8-methoxypsoralan,8-MOP)为阳性对照组、75%乙醇为阴性对照组,均涂于豚鼠皮肤上,40d后取皮肤标本免疫组化染色,测平均灰度值与黑素细胞数目,比较其作用结果。结果:白芷、当归、甘草、枸杞、旱莲草、红花、女贞子、桑椹、沙参、沙苑子、首乌、菟丝子、黑芝麻、栀子等14味中药均可不同程度上调酪氨酸酶mRNA表达水平并促进黑素细胞增殖及黑素生成;合欢与益母草可促进黑素生成增加,但无明显上调酪氨酸酶mRNA表达水平的作用;黄芪则无明显上调酪氨酸酶mRNA表达水平、促进黑素细胞增殖及黑素生成的作用。结论:通过本研究表明部分中药可上调酪氨酸酶基因表达水平并促进黑素生成,为临床治疗白癜风优化组方提供实验依据。     

阿魏酸对UVB导致人角质形成细胞氧化损伤的保护作用研究

目的：探讨阿魏酸是否能对中波紫外线（UVB）诱导的人角质形成细胞（HaCaT细胞）氧化损伤和凋亡起保护作用以及其可能的作用机制。方法：将HaCaT细胞分成空白组、阿魏酸纽、UVB照射组、UVB照射＋阿魏酸纽。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度;检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量变化。结果：UVB照射组的SOD、CAT、GSH-Px明显下降,MDA相应上升。阿魏酸处理的细胞UVB照射后其活性以及上清液中的SOD、GSH-Px、CAT活性相对于未加药UVB照射纽明显增加,MI）A相应下降。结论：阿魏酸可以减少UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制可能与增强抗氧化成分活性和减少氧自由基有关。     

川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。     

莫诺苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:探讨莫诺苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响。方法:将黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)以1:2比例建立共培养模型,以不同浓度莫诺苷进行干预,通过MTT法测定细胞增殖率;NaOH裂解法测定黑素含量;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:与阴性对照组相比,10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L莫诺苷均对细胞增殖无影响(P>0.05),10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L莫诺苷均对共培养体系酪氨酸酶活性和黑素合成有极显著差异(P<0.01);与阳性对照药熊果苷组相比,10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L莫诺苷均对共培养体系酪氨酸酶活性和黑素合成有差异(P<0.05或P<0.01)。结论:莫诺苷可能通过抑制酪氨酸酶活性来抑制共培养模型的黑素合成。     

黄芪甲苷对紫外线诱导皮肤成纤维细胞表达TGFβ RⅡ与Smad7的影响

目的：探讨黄芪甲苷对紫外线诱导皮肤成纤维细胞TGFβRⅡ、Smad7mRNA以及蛋白质表达的影响。方法：培养原代人皮肤成纤维细胞,UVA及UVB分别照射人成纤维细胞,黄芪甲苷进行干预,MTT法检测细胞增殖活性,以ELISA法检测Smad7的生成量,半定量RT-PCR法检测TGFβRⅡ、Smad7的mRNA表达,Western blot法检测TGFβRⅡ的蛋白表达。结果：不同浓度的黄芪甲苷干预组与正常对照组相比,成纤维细胞增殖活性随浓度增加而增强,药物浓度为40μg/ml时最显著（P〈0.05）;UV辐射组与正常组相比,细胞上清液中Smad7蛋白含量明显增高,细胞内TGFβRⅡ的mRNA和蛋白表达均下降,Smad7mRNA表达增强;黄芪甲苷干预后,细胞上清液中Smad7蛋白含量下降,细胞内TGFβRⅡ的mRNA以及蛋白表达水平明显增高,Smad7mRNA表达下降（P〈0.05）。结论：黄芪甲苷可能通过提高成纤维细胞的增殖活性,上调TGFβRⅡmRNA、蛋白水平以及下调Smad7mRNA、蛋白水平的表达来对抗紫外线抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,缓解皮肤光老化进程。     

杏仁油对黑色素瘤细胞B16细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨杏仁油对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定杏仁油对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖的影响,L-dopa氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成。结果杏仁油浓度在0.1～100μg/mL时对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖无影响（P〉0.05）,对酪氨酸酶活性和黑素含量均呈浓度依赖性抑制,均具有显著性抑制作用（P〈0.05）。结论杏仁油对黑色素瘤细胞B16酪氨酸酶活性和黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

复方中药对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶与MITF mRNA表达的调节

目的：探讨复方中药＂白癜冲剂＂治疗白癜风的分子学作用机制。方法：采用定量逆转录-聚合酶链式反应（QRT-PCR）方法,检测＂白癜冲剂＂组（实验组）与无中药组（对照组）小鼠B16黑素瘤细胞株酪氨酸酶与MITFmRNA表达量。结果：实验组黑素瘤细胞酪氨酸酶与MITFmRNA表达量比对照组大（P〈0.05）。结论：复方中药＂白癜冲剂＂能上调黑素细胞酪氨酸酶与MITFmRNA表达水平,可能是其治疗白癜风的作用机制之一。     

miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖

目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。     

胶原三肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的：研究胶原三肽对B16黑素瘤细胞的影响,探讨其美白作用与机制。方法：本文以B16黑素瘤细胞作为受试细胞,以浓度为10μg/ml曲酸作为阳性对照,研究胶原三肽对其增殖、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果：胶原三肽浓度范围为50～400μg/ml时对B16黑素瘤细胞增殖无明显影响,但均能显著抑制黑色素合成。且400μg/ml胶原三肽抑制酪氨酸酶活性具有极显著性。结论：胶原三肽具有一定的美白功能。     

Livin靶向ASODN对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

目的：合成Livin靶向的反义核苷酸（ASODN）,观察其对前列腺癌PC3细胞凋亡和增殖等生物学特性的影响。方法：合成全硫代磷酸化修饰的LivinASODN并通过脂质体转染前列腺癌PC3细胞。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,采用RT—PCR检测转染后Livin基因mRNA的表达情况,采用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡效应,采用体内成瘤实验比较细胞在裸鼠体内成瘤性的变化,采用激酶法测定Caspase-3活性的变化。结果：LivinASODN转染PC3细胞后,与对照组相比,实验组细胞内LivinmRNA的表达水平下调（P〈O．01）;细胞的增殖受到显著抑制（P〈O．01）;细胞凋亡率明显增高（P〈O．01）;肿瘤细胞在荷瘤鼠体内的成瘤体积小于对照组（P〈O．05）;Caspase-3活性明显增加（P〈0．05）。结论：靶向Livin基因的ASODN干扰了前列腺癌PC3细胞中Livin基因的表达,抑制了细胞的增殖并诱导其凋亡,延缓了肿瘤细胞的生长。