毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置的研制及应用

目的　自行组建高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置。方法　以波长 5 4 3.5 nm He- Ne激光为激发光源 ,滤色片 -单色仪分光 ,光电倍增管检测 ,用计算机采集和处理电泳图谱。结果　优化了毛细管电泳 -激光诱导荧光检测装置的设计和分析参数 ,用该装置获得了高信噪比毛细管电泳谱。对罗丹明类荧光试剂 (Sulforhdam ineB)溶液的检出限为 10 - 9m ol/ L,线性范围为 1× 10 - 6～ 1× 10 - 9mol/ L。采用该装置检测了分枝杆菌 DNA的 PCR扩增产物、酶切产物以及人血清白蛋白。结论　所组建的高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置结构合理 ,灵敏度高 ,成本低、光路校准方便 ,分离效能明显高于常规琼脂糖电泳 ,能作为研究生物样品中 DNA片段和蛋白质含量的有效检测手段。     

毛细管电泳-发光二极管诱导荧光分析尿液蛋白

目的：建立人体尿液蛋白质毛细管电泳分析方法,检测正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质成分的差异性。方法：对正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质用异硫氰酸荧光素进行荧光标记,进行毛细管电泳-发光二极管诱导荧光法分析,获得人尿液蛋白质电泳图,比较两种电泳图的差异。结果：建立了人体尿液蛋白质毛细管电泳分析方法,成功将正常人与膀胱癌患者尿液中的多种蛋白质分离并得到相应电泳图谱,正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质电泳图谱存在差异。结论：毛细管电泳-发光二极管诱导荧光法能检测到正常人与膀胱癌患者尿液蛋白质的差异。     

毛细管电泳-激光诱导荧光用于中药制剂中氨基酸成分的分析

目的:探讨毛细管电泳-激光诱导荧光在对中药制剂中的氨基酸成分进行分析过程中的实际效果。方法:收集经异硫氰酸荧光素衍生出的5种氨基酸试剂,分为观察组和对照组,每组检测需要进行50次。对照组使用常规的柱前衍生紫外检测的方法进行检测,观察组使用毛细管电泳-激光诱导荧光检测的检测方法进行检测,在检测完成后比较两种检测方法的分离效果以及分离时间。结果:两组检测方法均能够对于中药制剂中的氨基酸成分进行相应的检测以及分析,但观察组检测方式在检测时间以及分离效果方面均明显优于对照组的检测方式,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在中药制剂中的氨基酸成分进行检测的过程中,通过使用毛细管电泳-激光诱导荧光的检测方式能够显著提升检测效果并减少检测时间。     

尿中多胺的毛细管电泳激光诱导荧光测定法

目的：建立高效毛细管区带电泳(CZE)激光诱导荧光(LIF)测定人尿中多胺(POL)的新方法。方法：样品用5mmoL／L的HClO4分离蛋白，样品中多胺与异硫氰酸荧光素(FITC)完成衍生反应后，用四甲基乙二胺(TEMED)作内标，在15mmol／L的硼酸盐缓冲液(pH8．5)中，运用毛细管区带电泳进行色谱分离，以激光诱导荧光测定法测定多胺。结果：多胺测定在10-200μg／L范围内具有良好的线性关系(r=0．996)，最低检测限为16μg/L，日内变异系数(CV)3.51％-4．61％，日间变异系数(CV)3．74％-4．83％，方法平均回收率为96.00％-99．33％．结论：本方法简便、快速、定量可靠，可用于临床实验室测定人尿中多胺水平。     

尿中多胺的毛细管电泳激光诱导荧光测定法

目的 :建立高效毛细管区带电泳 (CZE)激光诱导荧光 (LIF)测定人尿中多胺 (POL)的新方法。方法 :样品用 5mmol/L的HClO4分离蛋白 ,样品中多胺与异硫氰酸荧光素 (FITC)完成衍生反应后 ,用四甲基乙二胺(TEMED)作内标 ,在 15mmol/L的硼酸盐缓冲液 (pH 8.5 )中 ,运用毛细管区带电泳进行色谱分离 ,以激光诱导荧光测定法测定多胺。结果 :多胺测定在 10～ 2 0 0 μg/L范围内具有良好的线性关系 (r =0 .996 ) ,最低检测限为 16μg/L ,日内变异系数 (CV) 3.5 1%～ 4 .6 1% ,日间变异系数 (CV) 3.74 %～ 4 .83% ,方法平均回收率为 96 .0 0 %～ 99.33%。结论 :本方法简便、快速、定量可靠 ,可用于临床实验室测定人尿中多胺水平     

6-羟基多巴胺诱导帕金森病大鼠相关蛋白及mRNA的表达

目的:研究双点法注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备的帕金森病(PD)大鼠相关分子的改变.方法:采用脑立体定位仪6-OHDA微量注射建立大鼠PD模型,2周后注射阿朴吗啡(APO),观察其行为学改变,并利用高效液相-电化学法测定正常大鼠(n=10)及PD大鼠(n=23)黑质组织中多巴胺(DA)及其代谢物3,4-二羟基苯...     

毛细管电泳与微流控芯片电泳快速检测粪便中腺病毒的方法建立

目的 建立粪便中腺病毒的PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光和PCR-微流控芯片电泳-激光诱导荧光快速检测方法。方法 采用试剂盒法提取粪便中腺病毒DNA,选择腺病毒六邻体基因保守区域进行PCR扩增反应。PCR产物分别用高灵敏度的SYBR Gold和SYBR Orange核酸荧光染料进行标记,在优化的毛细管电泳和微流控芯片电泳条件下分离,采用激光诱导荧光检测特异性PCR扩增产物。结果 腺病毒扩增产物在优化的毛细管电泳和微流控芯片电泳条件下可分别于9 min和6 min内完成检测。将PCR扩增产物测序,并与NCBI基因库中核酸序列比对,结果表明所选用的扩增序列特异性良好。商品化DNA Marker毛细管电泳和微流控芯片电泳对目标DNA片段bp值求得的日内精密度分别为1.14%～1.34%和1.18%～1.48%,日间精密度分别为1.27%～2.76%和2.85%～4.06%。毛细管电泳-激光诱导荧光法和微流控芯片电泳-激光诱导荧光法检测腺病毒的灵敏度分别为2.33×10² copies/mL和2.33×10³ copies/mL。两种方法用于实际粪便样品测定,准确度高。结论 本研究建立的PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光和PCR-微流控芯片电泳-激光诱导荧光检测方法能够快速、灵敏、准确地检测出粪便中的腺病毒。     

高效毛细管电泳-电导法测定注射用更昔洛韦的含量

考察不同实验条件下更昔洛韦的毛细管电泳行为。用25 mmol／L硼酸--0．25 mmol／L Tris溶液(pH 7．12)为缓冲液．恒压20 kV分离，测定注射用更昔洛韦的含量。更昔洛韦在25～300μg／mL浓度范围内呈良好线性(r=0．9993)。回收率为96．5％．RSD为1．49％。本法简便、准确，能有效地控制该制剂的质量。     

毛细管电泳-安培检测测定金银花中的绿原酸和木犀草素

目的测定金银花中的绿原酸和木犀草素。方法采用毛细管电泳-安培检测，以微碳圆盘电极为检测电极，检测电位0．95V、pH8的50mmol／LNa2B4O7-100mmol／L NaH2PO4缓冲液为运行液，使用长70cm、内径25μm的熔融石英毛细管分离。结果当分离电压为21kV时，绿原酸和木犀草素在26min内完全分离。绿原酸和木犀草素的线性范围为0．35～21．0μg/ml和0．20～12．0μg/ml，检出限为0．08μg/ml和0．01μg/ml。结论毛细管电泳-安培检测法可用于金银花中绿原酸和木犀草素含量的测定。     

药物干预对6-羟基多巴胺处理后大鼠多巴胺神经元、多巴胺及其代谢产物的影响

目的:研究古拉定、川芎嗪、丹参对6-羟基多巴胺(OHDA)处理后大鼠的黑质多巴胺(DA)神经元及纹状体细胞外液DA的影响。方法;将6-OHDA注射入大鼠黑质,饲养2周后用阿朴吗啡(APO)诱发其旋转行为并计数,饲养2个月时利用微透析法采集大鼠纹状体细胞外液,然后大鼠灌注取脑,酪氨酸羟化酶(TH)单抗染色,观察正常对照组、单纯手术组、古拉定治疗组(古拉定12mg/kg腹腔注射每天1次,共14天)、川芎嗪治疗组(川芎嗪50mg/kg腹腔注射每天1次,共14天)、丹参治疗组(丹参2.5ml/kg腹腔注射每天1次,共14天)的黑质DA神经元的变化,用高效液相色谱电化学法检测细胞外液的DA及代谢产物的含量变化。结果:TH单抗免疫组化染色可见4个手术组的黑质DA神经元计数明显低于正常对照组,差异有极显著性(P<0.001),而4组组间无统计差异;4个手术组纹状体DA的含量低于对照组,差异有显著性(P<0.001),4组的二羟苯乙酸(DOPAC)/DA低于对照组(P<0.001),4组组间均无差异。结论:古拉定、川芎嗪、丹参不能阻止6-OHDA对黑质DA神经元的毒性作用,亦不能增加损伤侧纹状体的DA含量。     

毛细管电泳PCR-SSCP分析p16基因突变

Lung cancer is one of the most common cancers in the world. Some genetic alterations such as p53 gene and ras gene mutations, have been identified in this disease. Recently, a putative tumor suppressor gene, the p16/CDKN2/MTS1 gene containing 3 extrons and 2 introns, located in the chromosome p21 region, was cloned independently by three research groups. Traditionally, gene mutation analysis was performed by slab polyacrylamide gel electrophoresis. However, this method is laborious, time-consuming, low sensitivity and harmful to human health. Capillary electrophoresis (CE) with the characteristics of rapidity and high performance has numerous advantages over conventional slab polyacrylamide gel electrophoresis. An important advantage of CE is that the commercially available system is automation.     

高效毛细管区带电泳测定内毒素

目的 :应用高效毛细管区带电泳 (CZE)测定脆弱类杆菌中的内毒素 (LPS) ,且对制备流程进行监控和对产品 (LPS)纯度进行检测 ,以便快速、高质量地提供科研用的内毒素。方法 :在样品中加入茶碱作内标 ,运用CZE在 30mmol·L-1的硼酸盐缓冲液 (pH 8.0 )里分离测定LPS。毛细管柱内径 75 μm ,长 5 7cm。电压 2 5kV ,电流 16 2 μA ,检测波长 2 30nm。结果 :首次在国内运用CZE分离和测定了从细菌中提取的内毒素 ,LPS浓度在 1～ 5 0mg·L-1范围内具有良好的线性关系 (r =0 .996 ) ,方法平均回收率为 99 0 7%～ 10 1 0 0 % ,日内及日间变动系数 (CV)均小于 5 % ,最低检测限为 1 0mg·L-1。结论 :与鲎试剂法或凝胶电泳法相比 ,本法不受热源干扰 ,方法简便、快速、定量可靠 ,能即时监控纯化流程 ,是目前最先进的检测LPS的方法     

毛细管电泳法测定栀子金花丸中黄芩苷的含量

目的建立栀子金花丸中黄芩苷的含量测定方法。方法采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱（60cm×75μm,有效长度52 cm）,以40 mmol.L^-1硼砂溶液（pH9.0）为运行缓冲液;分离电压为12 kV;重力进样10 s（高度15 cm）;检测波长为280 nm;以对硝基苯甲酸为内标。结果黄芩苷质量浓度在7.5～52.5μg.mL^-1范围内具有良好的线性关系（r=0.999 6）,黄芩苷平均回收率为96.7%,RSD值为1.62%（n=6）。结论该方法专属性强,结果准确可靠、重现性好,可用于栀子金花丸的质量控制。     

毛细管区带电泳法测定枸橼酸昔多芬的含量

目的 :建立适合测定治疗男性性功能障碍新药枸橼酸昔多芬 (商品名伟哥 )的毛细管区带电泳分析法 (CZE)。方法 :采用 40 cm× 75μm (i.d)毛细管柱来分离测定样品 ,以粉防己碱为内标 (IS) ,2 5 mm ol/ L硼砂 (p H=7.89)为缓冲溶液 ,电压 14k V、虹吸进样 1s,紫外检测器检测波长 2 14nm。 结果 :在 4m in内可完成枸橼酸昔多芬与内标物的分离和测定 ,该法最低检测浓度为 5 μg/ ml;在 2 4～ 480 μg/ ml范围内线性关系良好 (r=0 .9998,n=5 ) ;日内 RSD<1.5 8%、日间 RSD<2 .46 % ,回收率为 95 %～ 10 5 %。 结论 :CZE法用于枸橼酸昔多芬含量的监测 ,方法准确、可靠、简便、易行。     

中药通光藤中通光藤苷J的高效毛细管电泳分析

目的:建立中药通光藤中通光藤苷J的高效毛细管电泳(CZE)分析方法。方法:使用空心熔融石英毛细管(75μm×47 cm),用苯甲酸为内标,背景电解质为含20％乙腈的50 mmol/L硼砂缓冲液(pH 9.28),运行电压20 kV,温度25 C,重力进样,时间5 s,紫外检测波长214 nm,两次进样间用0.1 mol/L氢氧化钠溶液冲柱1 min,以水冲柱1min,再用电解液冲柱1min。结果:在15 min内可实现通光藤苷J的分离和测定,在43.43～1732.06 μg/ml范围内线性关系良好(r=0.998 5,n=6);加样回收率98.1％～104.7％,平均102.4％;日内RSD≤2.50％和日间 RSD≤5.16％;不同产地(云南昆明 X_1～X_4、贵州贞丰X_5)、不同化学部位(乙醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、50％乙醇部位、95％乙醇部位)和不同制剂(片剂、糖浆、注射液)中通光藤苷J的含量均有显著不同。结论:本法简便、快速、准确,为科学评价通光藤药材质量提供了有效手段。     

HPCE法测定地塞米松磷酸钠注射剂的含量

目的:探讨毛细管区带电泳法(CZE)测定地塞米松磷酸钠注射液中地塞米松磷酸钠含量的方法.方法:以20 mmol/L硼砂缓冲液(pH 9.2)为背景电解质,35 cm×75 μm(i.d)未涂层毛细管为分离通道,于254 nm波长检测,分离电压20 kV,采用峰面积外标法定量.结果:本法的检出限为0.28 mg/L(S/N=3),地塞米松磷酸钠的浓度在20～1000 mg/L之间线性关系良好(r=0.999 6),日内和日间峰迁移时间的RSD分别为0.43%、1.44%,峰面积的RSD分别为3.34%、4.00%,低、中、高3种浓度水平的加标回收率分别为99.5%、101.9%、101.7%.结论:本法试剂用量少、简便、快速、准确,可用于地塞米松磷酸钠注射剂质量的日常检测.     

中性环糊精毛细管电泳法手性拆分氧氟沙星对映体的对比

目的:比较在毛细管电泳中不同中性环糊精(CD)及其衍生物对氧氟沙星对映体的手性拆分能力,并提出可能的手性识别机制. 方法:分别以α-CD,β-CD,γ-CD,HP-β-CD和DM-β-CD为手性选择剂,采用毛细管电泳法研究CD种类及其浓度、分离电压、温度对氧氟沙星对映体分离的影响. 结果:在50 mmol/L磷酸缓冲液(pH 3.0),15 kV分离电压、柱温25℃的基本优化条件下,分别以25 mmol/L DM-β-CD或50 mmol/L HP-β-CD 25 mmol/L γ-CD为手性选择剂,氧氟沙星对映体得到基线分离,分离度(Rs)分别达2.0和1.7. 结论:CD空腔大小和空腔边缘作用对于手性识别有重要选择性,该毛细管电泳法操作简单方便,手性分离效果良好,可用于氧氟沙星对映体药物的分离.     

高效毛细管电泳法测定大鼠多索茶碱血药浓度

目的:建立测定大鼠血浆多索茶碱血药浓度的高效毛细管电泳法.方法:样品用体积分数30%三氯醋酸沉淀蛋白,电解缓冲液为25 mmol/L磷酸盐缓冲液-50 mmol/L SDS(体积比为20:80,pH=7.0),分离通道为50cm×50 μm未涂层毛细管,紫外检测波长为273 nm,分离电压12 kV,采用峰面积内标法定量.结果:采用本法时,多索茶碱血浆浓度在2.5～80.0 mg/L范围内线性关系良好,标准曲线回归方程为y=-8.40×10-3 0.13X(r=0.998 1,P＜0.05),方法回收率在允许范围内,日内和日间变异分别小于3.4%和7.5%.结论:本法稳定可靠、操作简单、分析速度快、分离效果好.     

HPCE法测定冬凌草片中冬凌草甲素的含量

目的:探讨高效毛细管电泳法测定冬凌草片中冬凌草甲素的方法.方法:样品用乙醚超声提取,缓冲液为20 mmol/L磷酸盐缓冲液,pH=7.0,紫外检测波长238 nm.结果和结论:线性范围为50～450 mg/L,回收率为96.97%,RSD为1.03%,该方法简便、快速且消耗试剂少,适于冬凌草片剂的质量控制.