消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药相关蛋白的调控作用

目的探讨消岩汤含药血清对耐顺铂人肺腺癌A545659/DDP细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)及其m RNA表达水平的影响,发现消岩汤对化疗耐药的作用靶点,为肺癌化疗耐药的临床治疗提供理论基础。方法 A549裸鼠皮下移植瘤模型ip给予等量生理盐水,2 mg/kg顺铂,消岩汤低、高剂量(20、40 g/kg)获得含药血清,选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,采用Western blotting免疫印迹法及RT-PCR技术,检测各组含药血清作用下A549/DDP细胞多药耐药基因MRP1、LRP及其产物MRP1、LRP蛋白的表达水平。结果与对照组相比,随着血清中药物浓度的增加,消岩汤低、高剂量组LRP与MRP1蛋白表达逐渐减弱(P0.05)。LRP及MRP1 m RNA水平也有所下降(P0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制越明显。结论不同浓度的消岩汤含药血清对MRP1、LRP及其m RNA表达均具有不同程度的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显,即与剂量呈正相关,揭示消岩汤逆转肺癌耐药可能与抑制MRP1和LRP蛋白功能有关。     

鸦胆子油乳联合siRNA-ERCC1对肺腺癌 A549/DDP细胞的耐药逆转作用

目的:探讨靶向切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)和鸦胆子油乳联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。方法:设计并合成针对ERCC1基因对应序列的siRNA,采用转染试剂Lipofectamine 2000转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP;将实验组细胞分为:空白对照组、鸦胆子油处理组、siRNA处理组及鸦胆子油联合siRNA处理组,利用RT-PCR检测ERCC1 mRNA和Western blot检测ERCC1蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞对顺铂的耐药逆转效果。结果:siRNA、鸦胆子油、鸦胆子油和siRNA联合应用均能降低ERCC1 mRNA和蛋白质的表达,对顺铂的敏感性明显恢复,耐药倍数分别降至9.72,8.89,7.59,6.83,鸦胆子油和siRNA联合应用效果明显提高(P<0.05)。结论:siRNA、鸦胆子油能有效地逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药,鸦胆子油和siRNA联合应用效果明显加强。     

参芪扶正注射液对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用研究

目的:探讨参芪扶正注射液对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用以及机制。方法:将A549/DDP细胞随机分组,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算顺铂对非小细胞肺癌细胞的IC_(50)以及参芪扶正注射液对A549/DDP的逆转倍数。采用流式细胞术测算细胞凋亡率,采用Western blot法检测A549/DDP细胞中LRP蛋白表达。结果:采用MTT法测算A549/DDP细胞增殖抑制率,顺铂+参芪扶正注射液组顺铂对A549/DDP的IC_(50)为(19.840±1.337)μmol/L,顺铂为(43.517±3.842)μmol/L,参芪扶正注射液的逆转耐药倍数为2.19,流式细胞术测得参芪扶正注射液联合顺铂组A549/DDP细胞细胞凋亡显著高于空白对照组及顺铂组(P0.05),参芪扶正注射液联合顺铂对LRP蛋白抑制程度显著高于空白对照组及顺铂组(P0.05)。结论:参芪扶正注射液可在一定程度上逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性,作用机制与加速A549/DDP细胞凋亡、下调LRP蛋白的表达有关。     

消岩汤对A549/DDP细胞自噬及耐药蛋白的影响研究

[目的]通过消岩汤对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药及自噬蛋白的影响,探究消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP的耐药逆转作用及探讨相关分子通路。[方法]建立稳定细胞耐药模型,连续灌胃不同浓度消岩汤10 d后,通过血清药理学的实验方法,提取药物血清,用含药血清作用于肺腺癌细胞耐药细胞A549/DDP,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QPT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Werstern Blot)检测A549/DDP耐药、自噬相关基因的表达及相关通路蛋白的变化。[结果]高剂量消岩汤,低剂量消岩汤和生理盐水作用于肺腺癌耐药细胞A549/DDP,检测A549/DDP细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺抗药性相关蛋白(LRP)及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1m RNA和蛋白表达变化,发现高剂量组消岩汤处理细胞株后P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1 m RNA和蛋白均发生降低(P0.05),进一步发现消岩汤可影响AKT1-m TOR相关基因,消岩汤明显降低AKT1,m TOR蛋白的表达。[结论]消岩汤通过影响AKT1-m TOR分子通路进而影响耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1基因的变化。     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤LRP蛋白表达的影响

目的通过观察补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤中LRP蛋白表达影响,探讨补中益气汤治疗肺腺癌的作用机制。方法体外培养A549/DDP及A549细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予低、中、高剂量补中益气汤治疗。实验共分为10组:即A组(A549/DDP荷瘤对照组)、B组(A549/DDP荷瘤+顺铂组)、C组(A549/DDP荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组)、D组(A549/DDP荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组)、E组(A549/DDP荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组)、a组(A549荷瘤对照组)、b组(A549荷瘤+顺铂组)、c组(A549荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组)、d组(A549荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组)、e组(A549荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组)。测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织LRP蛋白的表达。结果顺铂对A549/DDP移植瘤体积无显著影响(P0.05),而使A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05,P0.05),顺铂抑瘤率均增加(P0.05,P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小,顺铂抑瘤率逐渐增加;顺铂使A549/DDP移植瘤组织中LRP蛋白表达增加(P0.05),A549移植瘤组织中LRP蛋白表达减少(P0.05);补中益气汤使A549/DDP移植瘤组织中LRP蛋白表达减少(P0.05),以中剂量效果最为显著,补中益气汤使A549移植瘤组织中LRP蛋白表达也减少(P0.05),但低、中、高剂量之间效果无显著差异。结论在对顺铂敏感及顺铂耐药的肺腺癌移植瘤组织中,补中益气汤均可使移植瘤体积缩小,顺铂的抑瘤率增加,LRP蛋白的表达下调。     

益气活血解毒方对肺癌A549/DDP耐药细胞株JAK2-STAT3信号通路的干预作用研究

目的观察益气活血解毒方对A549/DDP耐药细胞JAK2-STAT3信号通路分子JAK2、STAT3表达的影响。方法培养A549细胞、A549/DDP细胞,分别用高、中、低剂量益气活血解毒方含药血清进行干预,MTT法筛选最佳浓度的含药血清,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot技术检测各组细胞中JAK2、STAT3蛋白表达变化,RT PCR技术检测各组细胞中JAK2、STAT3 mRNA表达变化。结果益气活血解毒方含药血清作用48h能明显抑制A549/DDP细胞增殖,且最佳浓度为中剂量;与对照血清组比较,益气活血解毒方最佳含药血清组A549/DDP细胞凋亡率明显提高(P0.05);与A549细胞组比较,A549/DDP细胞组JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05),与对照血清组比较,益气活血解毒方最佳含药血清组A549/DDP细胞JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05)。结论益气活血解毒方干预肺癌化疗耐药的作用可能是通过调节JAK2-STAT3信号通路,促进细胞凋亡实现的。     

泽漆乙酸乙酯提取物对SGC7901/DDP多药耐药性的逆转及机制

目的探索泽漆乙酸乙酯提取物(EAE)对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP是否具有逆转作用,并探索其机制。方法实验共分4组,胃癌细胞SGC7901作为阴性对照组;胃癌耐药细胞SGC7901/DDP为空白对照组;耐药细胞SGC-7901/DDP加入终质量浓度为10μg/mL的EAE为EAE低剂量组,耐药细胞SGC-7901/DDP加入终质量浓度为20μg/mL的EAE为EAE高剂量组。MTT法分别检测4组细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂的敏感性;PCR和Western blot分别检测4组细胞耐药相关基因MDR1和LRP基因与对应蛋白P-gp和LRP蛋白的表达情况。结果 SGC-7901/DDP对5-FU和顺铂(DDP)表现出耐药性,其中对顺铂(DDP)耐药更为明显;阴性对照组中检测到耐药基因MDR1和LRP及对应蛋白P-gp和LRP蛋白的极低表达量,空白对照组表达量最高,与空白对照组相比较,EAE低剂、高剂量组细胞中的MDR1和LRP的基因与对应蛋白P-gp和LRP蛋白的表达均下降,且EAE高剂量组下降更为明显。结论 EAE可以逆转人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP多药耐药,其机制可能与MDR1和LRP基因的下调有关。     

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明...     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠A549/DDP细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠肿瘤细胞A549/DDP顺铂耐药的影响,并确定最佳用药浓度。方法:36只BALB/C裸鼠随机分为空载组,模型组,顺铂组,补中益气汤低、中、高剂量(1.46,2.92,5.84 g·kg~(-1))组。空载组接种转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)空载慢病毒转染的A549/DDP细胞,余接种TGF-β_1稳定过表达的A549/DDP细胞。药物干预后处死裸鼠。称量小鼠瘤重,计算抑瘤率;镜下计数肿瘤肝、脾、肺转移情况;病理观察肺组织形态学改变;免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测移植瘤中肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP),多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related protein,MRP),P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达情况。结果:与模型组比较,补中益气汤组瘤重降低,肺转移结节数量减少,随着补中益气汤剂量增加,瘤重逐渐减小,抑瘤率上升,高剂量组效果最为明显(P0.05)。肝、脾未见明显转移结节。病理切片显示,模型组肺部结构紊乱,出现明显肺损伤,补中益气汤组肺泡、肺泡囊、肺间隔形态逐渐恢复,高剂量组效果最好。与空载组比较,模型组LRP,MRP,P-gp蛋白和mRNA表达均明显上调(P0.05);与模型组和顺铂组比较,补中益气汤中、高剂量组LRP,MRP,P-gp蛋白和mRNA表达明显下调(P0.05);高剂量组下调效果最为明显。结论:补中益气汤能抑制肺腺癌移植瘤生长及转移,减轻肺损伤,改善A549/DDP顺铂耐药,该作用有一定的量效关系,高剂量(5.84 g·kg~(-1))为最佳裸鼠体内用药浓度。     

温下方含药血清诱导A549/DDP细胞凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响。方法:制备温下方含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、大黄素和乌头碱。A549/DDP细胞分为DDP干预组,含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组。孵育24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测Bcl-2,Bax及p53蛋白表达。结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、大黄素及乌头碱。含药血清作用后,与DDP干预组比较,含药血清+DDP干预组细胞凋亡率增高至(21.82±3.27)%(P<0.05);细胞内Bcl-2蛋白表达降低至2.81±0.02(P<0.05);Bax蛋白表达增高至2.90±0.08(P<0.05);p53蛋白表达增高至3.58±0.09(P<0.05)。结论:温下方含药血清明显诱导A549/DDP细胞凋亡,显著降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax,p53蛋白表达,可能从诱导耐药细胞凋亡角度逆转耐药。     

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响.方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g·kg-1 ·d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15％各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol·L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达.结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P＜0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P＜0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P＜0.01),蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药.     

参芪扶正注射液对肺癌细胞A549/DDP顺铂耐药性的逆转作用研究

目的:探讨参芪扶正注射液对于顺铂的耐药性A549/DDP细胞的逆转作用。方法:应用细胞毒性检测(CCK-8)、实时荧光定量PCR及Western blot鉴定细胞A549/DDP对于顺铂的耐药性。进一步用不同浓度的参芪扶正注射液预处理A549/DDP,通过以上3种方法检测A549/DDP细胞对于顺铂耐药性的变化。最后通过裸鼠成瘤实验,检测参芪扶正注射液的逆转耐药性的作用。结果:A549/DDP对于顺铂有明显的耐药性,A549和A549/DDP对于顺铂的IC50分别为9.89μmol/L和176.2μmol/L。A549/DDP相比于A549,多药耐药基因(multidrug resistanct,MDR1)和肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)的蛋白表达有显著的升高(P0.05)。当用低浓度(0.1 m L/L)、中浓度(1 m L/L)、高浓度(10 m L/L)的参芪扶正注射液预处理A549/DDP后,该细胞对于顺铂的耐药性随其浓度提高而降低,其半抑制浓度(IC50)分别为11.6μmol/L、30.3μmol/L、104.7μmol/L,并且参芪扶正注射液的预处理抑制了耐药基因MDR1和LRP和蛋白的表达。用中浓度的参芪扶正注射液预处理细胞A549/DDP后,也显著抑制了该细胞在裸鼠体内的成瘤能力(P0.05)。结论:参芪扶正注射液能够逆转A549/DDP对于顺铂的耐药性。     

WWOX基因体外对肺癌细胞耐药的影响

目的通过体外实验观察WWOX对肺腺癌细胞耐药性影响,初步探讨WWOX逆转肺腺癌细胞耐药性及其作用机制。方法应用紫杉醇(TAXOL)诱导肺腺癌细胞株构建A549耐药细胞亚株(A549/T-)。采用腺病毒包装系统AdMax重组腺病毒Ad-WWOX-IRES-EGFP。感染Ad-WWOX-IRES-WWOX的A549/T细胞为A549/T+组,感染Ad-IRES-EGFP的A549/T细胞为A549/T-组,和非耐药A549细胞共3组。3组细胞分别经TAXOL、顺铂(DDP)作用12,24,48,72 h,检测3组细胞生长抑制率、药物的IC50值和细胞凋亡相关指标。结果在含3 g/L及30 g/L的TAXOL培养基中,0.25 g/L及2.5 g/L的顺铂(DDP)培养基中,A549/T+组24 h及48 h细胞生长抑制率与A549/T-组比较有显著性差异(P均<0.05);A549/T+组48 h细胞生长抑制率比较有显著性差异(P均<0.05)。A549/T+组24h及48 h细胞生长抑制率与A549组比较无显著性差异(P均>0.05)。A549/T+组细胞IC50较A549/T-组低,和A549组相比无显著性差异(P>0.05)。在3 g/L及30g/L TAXOL和0.25 g/L及2.5 g/L DDP培养基培养48 h后A549/T+细胞Bax相对值、Bax/Bcl-2比值均明显高于A549/T-组(P均<0.05);A549/T+细胞Bcl-2相对值比值均明显低于A549/T-(P<0.05);A549/T+细胞与A549细胞Bax相对值、Bcl-2相对值、Bax/Bcl-2比值比较无显著差异(P均>0.05)。结论WWOX显著诱导了肺腺癌A549/T+TAXOL耐药株的凋亡,提示WWOX有抑制肺癌细胞增殖和逆转肺癌细胞耐药的作用。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及其机制

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用及对多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响.方法 MTT法测定白花蛇舌草乙醇提取物对A549/DDP细胞耐药的逆转作用;半定量RT-PCR和WesternBlot分别检测肿瘤细胞MRP mRNA和蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物使A549/DDP细胞对DDP的耐药倍数由10.294下降至5.586;并显著降低A549/DDPMRPmRNA和蛋白的表达.结论 白花蛇舌草乙醇提取物可以部分逆转肺腺癌A549/DDP细胞对DDP的耐药;其逆转作用可能通过降低细胞MRP的表达来实现.     

姜黄素联合顺铂对肺癌A549细胞Bcl-2及Caspase-3表达的影响

目的探讨姜黄素联合顺铂对肺癌A549细胞Bcl-2及caspase-3表达的影响。方法选用肺癌A549细胞分为对照组、姜黄素组、顺铂组、联合用药组,分别采用相应药物进行处理。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA表达水平,Western blot法检测细胞Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平。结果 (1)与对照组比较,其余各组24 h、48 h、72 h肺癌A549细胞增殖抑制率较高,且联合用药组高于姜黄素组、顺铂组,差异有统计学意义(P0.05)。(2)与对照组比较,其余各组肺癌A549细胞凋亡率较高,且联合用药组高于姜黄素组、顺铂组(P0.05);姜黄素组存在G2/M期细胞阻滞,顺铂组及联合用药组存在S期细胞阻滞。(3)与对照组比较,其余各组肺癌A549细胞Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达水平较低,其中联合用药组顺铂组姜黄素组(P0.05)。(4)与对照组比较,其余各组肺癌A549细胞caspase-3 mRNA及caspase-3蛋白表达水平较高,其中联合用药组顺铂组姜黄素组(P0.05)。结论姜黄素联合顺铂能够抑制肺癌A549细胞Bcl-2表达、促进caspase-3表达,以抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡。     

十全大补汤含药血清对A549/DDP细胞株中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的干预作用

目的:探讨十全大补汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的干预作用。方法:以SD大鼠制备高、中、低剂量(65,32.5,16.25 g·kg-1,10 m L·kg-1)的十全大补汤含药血清和空白对照血清(生理盐水10 m L·kg-1)。培养细胞分为十全大补汤含药血清高、中、低剂量组和空白血清组,采用MTT法检测各组50%抑制浓度(IC50),采用蛋白质印迹法检测各组糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),p-GSK-3βser9,β-连环蛋白(β-catenin)及survivin蛋白表达。结果:随着十全大补汤含药血清浓度的升高,顺铂(DDP)对A549/DDP细胞的IC50逐渐降低,以中、高剂量组最显著(P0.01);十全大补汤含药血清对A549/DDP细胞浆GSK-3β蛋白的表达无影响,但可显著下调胞浆p-GSK-3βser9蛋白的表达及细胞总β-catenin和survivin蛋白的表达,以中、高剂量组最明显(P0.01)。结论:十全大补汤可通过降低A549/DDP细胞浆p-GSK-3βser9蛋白及细胞总β-catenin,survivin蛋白的表达而影响Wnt/β-catenin信号转导通路,进而发挥对顺铂耐药的增敏作用。     

补肾化瘀解毒复方含药血清对肺癌A549/DDP耐药细胞周期的影响

目的 探讨补肾化瘀解毒复方含药血清对肺癌耐药细胞周期的影响.方法 采用血清药理学及流式细胞法,分析补肾化瘀解毒复方含药血清分别与顺铂(DDP)和维拉帕米(VRP)合用后A549/DDP耐药细胞周期的变化.结果 补肾化瘀解毒复方含药血清均能明显增加A549/DDP耐药细胞G0/G1期细胞数,减少S期和G2/M期的细胞比例(P＜O.05).结论 补肾化瘀解毒复方含药血清能使A549/DDP耐药细胞阻滞于G0/G1期,协同增强DDP和VRP阻止A549/DDP耐药细胞DNA的合成,抑制肺癌耐药细胞的分裂增殖.     

白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P0.01),降低p62表达水平(P0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。