慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中血管内皮生长因子和诱生型一氧化氮合酶的表达及吸烟的影响

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺组织中血管内皮生长因子（VEGF）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的表达情况及吸烟对二者表达的影响。方法取46例因肺癌行肺叶切除患者的癌旁组织，依据吸烟及肺功能情况分成：（1）吸烟伴COPD组19例；（2）吸烟不伴COPD组12例；（3）不吸烟不伴COPD组15例。用免疫组化法检测肺组织VEGF及iNOS的表达。结果吸烟不伴COPD组（1．50±0．39，1．45±0．41）与不吸烟不伴COPD组（1．18±0．33，1．09±0．41）比较，肺组织VEGF、iNOS表达增强；吸烟伴COPD组（2．19±0．51，2．39±0．45）与不吸烟不伴COPD组比较表达明显增强。肺组织VEGF表达与iNOS表达呈明显正相关（r=0．78，P〈0．01）。肺组织VEGF表达与FEV。呈明显负相关（r=-0．67，P〈0．01）。结论吸烟以及轻度COPD患者肺组织VEGF、iNOS表达上调，iNOS、VEGF的过度表达可能参与COPD患者气道与血管重建和气流受限的过程。     

慢性阻塞性肺疾病患者肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞的增殖与凋亡

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺动脉高压及肺血管重塑的机制。方法将患者分为非COPD非肺动脉高压组（A组）、COPD非肺动脉高压组（B组）和COPD并肺动脉高压组（C组），应用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原（PCNA），用原位缺口末端DNA碎片标记技术检测肺动脉平滑肌细胞凋亡。结果A组肺小动脉管壁较薄，管腔较大；B组管壁厚度增加，管腔变窄，其程度介于A组和C组之间；C组肺小动脉管壁明显增厚，管腔明显变窄，平滑肌细胞增生肥大，呈现明显的肺血管重塑现象；图像分析结果表明。B组及C组管壁厚度占外径的百分比（WT％）和血管壁横断面积占血管总面积的百分比（WA％）分别为（20±4）和（35±5）％、（28±5）和（50±6）％，明显高于A组的（16±3）和（25±3）％。C组与B组相比，WT％及WA％明显增高。3组肺小动脉壁平滑肌细胞均存在一定比例的增殖与凋亡，B组和C组肺小动脉平滑肌细胞增殖指数（PI）为（19±5）和（38±7）％，明显高于A组的（8±2）％；两组凋亡指数为（4．5±1．3）和（3．1±1．3）％，均明显低于A组的（6．9±1．9）％；B组肺动脉平滑肌细胞增殖指数低于C组，而凋亡指数高于C组。C组及B组氧分压与肺动脉平滑肌细胞增殖指数成负相关（r=-0．519，P=0．003），与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数成正相关（r=0．441，P=0．015）。结论肺动脉平滑肌细胞增殖增加和凋亡减少。由此引起增殖与凋亡失衡是COPD患者肺血管重塑及发生肺动脉高压的主要机制；缺氧是引起肺动脉平滑肌细胞增殖增加和凋亡减少的主要原因之一。     

骨形态发生蛋白4 mRNA在低氧大鼠肺血管中的表达

目的观察骨形态发生蛋白4（BMP4）mRNA在低氧性肺动脉高压大鼠肺血管中的表达及其与低氧性肺动脉高压形成的关系。方法将20只雄性SD大鼠随机分为对照组和低氧组,常压低氧3周建立大鼠肺动脉高压模型,以导管法测定平均肺动脉压（mPAP）,分离并分别称量大鼠右心室（RV）和左心室加室间隔（LV＋S）,计算出右心室肥厚指数RV/（LV＋S）。采用图像分析法测定和计算出肺小动脉管壁厚度指标即管壁厚度占外径的百分比（WT%）和管壁面积占总面积的百分比（WA%）,并采用原位杂交方法检测大鼠肺小动脉管壁BMP4 mRNA的表达水平。结果①对照组mPAP为（16.47±1.11）mm Hg,低氧组大鼠为（29.01±0.86）mm Hg,较对照组明显升高（P〈0.01）。低氧组RV/（LV＋S）为（31.13±2.57）%,对照组仅为（23.12±1.38）%（P〈0.01）。②对照组肺小动脉厚度指标为[WT%：（12.63±0.92）%;WA%：（45.24±1.98）%],而低氧组则明显升高,分别为[WT%：（26.06±1.86）%;WA%：（76.07±5.44）%]（P均〈0.01）。③对照组和低氧组大鼠肺小动脉BMP4 mRNA的染色强度分别为（0.16±0.01）、（0.27±0.03）,低氧组BMP4 mRNA表达明显增加（P〈0.01）。结论低氧大鼠肺血管BMP4 mRNA表达明显增加,BMP4可能在低氧性肺动脉高压的形成中具有重要作用。     

骨形成蛋白在低氧性肺动脉高压发病中的作用

目的观察低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中骨形成蛋白2（BMP-2）的变化及BMP在低氧诱导内皮细胞凋亡中的作用，探讨BMP在低氧性肺动脉高压发病中的作用。方法将20只雄性Wistar大鼠随机分为2组，低氧组经常压低氧处理3周，建立大鼠低氧性肺动脉高压模型，采用免疫组织化学染色法观察大鼠肺组织中BMP-2的表达。用图像分析技术检测大鼠肺小动脉形态改变及BMP-2表达强度的变化。建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）低氧培养模型，加入BMP阻断剂Noggin，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果低氧3周后，大鼠平均肺动脉压（mPAP）为（29．5±0．9）mmHg（1mmHg=0．133kPa），与对照组的（16．3±0．5）mmHg比较明显增加；低氧大鼠肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄，表现为管壁厚度占外径的百分比（WT％）和管壁面积占血管总面积的百分比（WA％）明显升高，分别为（27±7）％和（80±8）％，对照组分别为（16±5）％和（54±11）％，两组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；低氧组肺小动脉壁BMP-2积分吸光度值（M）为13463±5755，对照组为6124±1199，两组相比差异有统计学意义（P〈0．01），且与WT％和WA％呈明显正相关（r值分别为0．744和0．693，P〈0．01）。低氧诱导内皮细胞凋亡增加，低氧24h时的细胞凋亡率为（14．23±1．01）％，48h时为（25．21±8．58）％；低氧前预先加入Noggin，低氧24h时细胞凋亡率为（11．91±0．57）％，48h时为（15．01±0．15）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论慢性低氧时BMP-2表达增多；低氧诱导内皮细胞凋亡，BMP阻断剂可抑制低氧诱导的内皮细胞凋亡；BMP在低氧性肺动脉高压发病过程中起一定的作用。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管肺组织分泌性白细胞蛋白酶抑制物表达及转化生长因子β1的影响

目的探讨分泌性白细胞蛋白酶抑制物（SLPI）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠支气管肺组织中的表达及转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。方法采用熏香烟加气管内注射脂多糖复制大鼠COPD模型，并用TGF-β1单抗干预，测定大鼠的肺功能及病理变化结果，应用酶联免疫法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中SLPI水平，用免疫组织化学法观察支气管肺组织TGF—β1、Smad4、SLPI的表达，用逆转录聚合酶链法检测支气管肺组织中TGF—β1、Smad4和SLPI mRNA的表达。计量资料比较采用单因素方差分析，两样本均数的多重比较采用t检验，等级资料采用秩转换的非参数检验。结果模型组大鼠SLPI阳性系数（1．07）、SLPImRNA吸光度值（0、17±0.01）和BALF中SLPI浓度[（47±4）μg／L]比正常对照组大鼠[（3．86）、（0．84±0．10）和（82±7）μg／L]明显降低；TGF-β1阳性系数（3．91）、TGF-β1 mRNA吸光度值（0．71±0．09）比正常对照组大鼠[（1、12）、（0．15±0．01）]显著增高。经TGF-β1单抗干预后，干预组大鼠SLPI阳性系数（2.69）、SLPI mRNA吸光度值（0．59±0．05）和BALF中SLPI浓度[（69±6）μg／L]比模型组大鼠[（1．07）、（0．17±0．01）和（47±4）μg／L]有明显提高。呼气峰流量[（28±6）ml／s]、第0、3秒用力呼气容积[（4．4±1.3）m1]和第0．3秒用力呼气容秽用力肺活量[（80±10）％]比模型组大鼠[（23±5）ml／s、（3．3±1．4）ml和（62±9）％]有显著改善。结论COPD大鼠支气管肺组织中SLPI明显减少，可能是TGF-β1表达增加所致，其机制可能通过Smads信号转导通路介导。     

慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰基质金属蛋白酶及其抑制剂与气道炎症及气道重塑

目的检测慢性阻塞性肺疾病（COPD）、健康吸烟者诱导痰上清液MMPO、TIMP-1的浓度,分析MMPO、TIMP-1的变化与气道重塑的关系。方法采用双抗夹心酶联免疫吸附试验法检测COPD组46例、吸烟组42例和非吸烟组40例受试者诱导痰中上清液MMPO、TIMP-1的浓度。结果COPD组诱导痰MMP-9浓度高于782．2±328．4ng／ml吸烟组362．6±210．2ng／ml（P〈0．01）和非吸烟组126．4±110．2ng／ml（P〈0．01）;吸烟组高于非吸烟组（P〈0．01）。COPD组MMP-9／TIMP-1比值0．7±0．6低于吸烟组1．6±1．1（P〈0．05）和非吸烟组1．5±1．3（P〈0．05）,吸烟组和非吸烟组无统计学差异（P〉0．05）。COPD组MMPO浓度与COPD严重程度呈正相关,吸烟组MMPO浓度与吸烟年盒数呈正相关。结论在COPD发病中存在MMPO／TIMP—1失衡。MMPO／TIMP-1保持平衡或许可解释吸烟却不引起慢性气流受限。     

葛根素对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉压力及结构的影响

目的观察大鼠在低氧状态下出现的肺动脉高压和肺小动脉结构的重构，以及葛根素对这两个病理变化的干预效应。方法雄性SD大鼠24只，随机分为对照组、低氧组和葛根素干预组。低氧组和葛根素干预组在常压低氧舱内建立肺动脉高压模型，葛根素干预组大鼠每天腹腔注射葛根素500mg／kg，测定各组平均肺动脉压，并取大鼠左肺沿肺门横断取材，石蜡包埋切片，进行苏木素伊红（HE）染色，观察肺小动脉形态学变化。结果①对照组和葛根素干预组大鼠平均肺动脉压均明显低于低氧组[（15．01±1．47）mmHg、（20．43±2．86）mmHg、（29．74±2．32）mmHg，P〈0．01]。②对照组大鼠肺小血管管壁较薄、管腔较大，低氧组大鼠肺小动脉普遍增厚，管腔狭窄，葛根素干预组的肺小动脉管壁及血管管腔狭窄程度较低氧组显著减轻。结论慢性缺氧可导致肺动脉壁增厚、管腔狭窄等血管重构病理改变；葛根素能在一定程度上抑制低氧肺动脉高压的形成和发展及肺血管结构的重构。     

血管内皮生长因子与慢性支气管炎合并肺气肿大鼠早期肺动脉重构关系的研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在慢性支气管炎合并肺气肿早期（非低氧血症期）肺动脉重构中的作用及N-乙酰半胱氨酸（NAC）的抗氧化作用对其的影响。方法24只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组6只：假吸烟组（A组）、慢性支气管炎合并肺气肿组（B组）、NAC预防组（C组）、NAC治疗组（D组）,B、C及D组采用两次气管内注入脂多糖（LPS）及烟熏4周法制备慢性支气管炎合并肺气肿大鼠模型,C组在烟熏及气管内注入LPS前每天给予NAC（50mg／只）灌胃,D组在第15～28天烟熏前每天给子NAC（50mg／只）灌胃。各组作血气分析、对肺组织进行苏木精-伊红染色、维多利亚蓝＋VG（Van—Gieson）染色观察气道炎症、肺泡面积改变、肺血管改变及采用免疫组化法观察VEGF的表达情况。结果与A组比较,B组各大鼠小气道出现组织细胞损伤、管壁炎症细胞浸润及平均肺泡面积增大（P〈0.05）,符合慢性支气管炎合并肺气肿的病理改变;B组动脉氧分压、氧饱和度及二氧化碳均在正常范围。与A组比较,B组肺血管管壁增厚、管腔缩小（P〈0．01）,且肌化动脉、部分肌化动脉比率增加（P〈0．01）,VEGF在肺动脉周围表达增多（P〈0.01）。而C组及D组经NAC抗氧化干预后肺血管管壁增厚及管腔缩小减轻（P〈0．05）,并且肌化动脉、部分肌化动脉比率减少（P〈0．01）,肺动脉周围VEGF表达比B组减少（P〈0．01）。结论由吸烟及LPS诱导的大鼠慢性支气管炎合并肺气肿早期（非低氧皿症期）VEGF表达增多参与了肺动脉重构,NAC可抑制肺动脉重构与其通过抗氧化作用降低VEGF表达有关。     

慢性阻塞性肺疾病患者呼出气冷凝液中检测一氧化氮、8-异前列腺素的临床意义

目的观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者呼出气冷凝液（EBC）中一氧化氮（NO）、8-异前列腺素（8-isoPG）的变化及其临床意义。方法收集COPD急性发作期（AECOPD）、缓解期患者和正常对照组的EBC,用硝酸还原法检测NO的浓度,酶免疫法检测8-isoPG的浓度。结果①AECOPD组（19例）患者EBC中NO和8-isoPG的浓度显著高于正常对照组（12例）,NO测定值分别为（80．83±40．15）μmol／L和（36．95±22．47）μmol／L,8-isoPG测定值分别为（13．56±11．11）ng／L和（5．87±3．39）ng／L,P〈0．05;②10例COPD急性发作期患者EBC中NO和8-isoPG的浓度显著高于缓解期,NO测定值分别为（91．09±34．30）μmol／L和（29．65±11．76）μmol／L,8-isoPG测定值分别为（17．60±12．44）ng／L和（5．23±6．20）ng／L,P〈0．05;③AECOPD组NO测定值与FEV1呈负相关（r=0．565,P〈0．05）,与血白细胞计数呈正相关（r=0．746,P〈0．01）。结论COPD患者急性发作期气道炎症反应和氧化应激增强。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能的影响

目的探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（rhTNFR：Fc）对大鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型肺功能的影响。方法48只大鼠随机分为正常对照组、COPD组、rhTNFR：Fc干预组（简称干预组）及假干预组。单纯吸烟法建立COPD模型，干预组皮下注射rhTNFR：Fc进行干预，假干预组皮下注射空白模拟制剂。酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的肿瘤坏死因子α（TNF—α）浓度。肺组织切片行苏木精一伊红染色观察形态学改变，定量测定肺平均内衬间隔和平均肺泡数，用小动物肺功能仪测定系统测定肺功能。结果COPD组0．3秒用力呼气容积占用力肺活量比值（FEV。／FVC）和呼气峰流速（PEF）[（65．1±8．4）％和（18．801．6）ml／s]显著低于正常对照组[（85．6±5．9）％和（47．2±7．3）mt／s]和干预组[（77．7±2．7）％和（38．2±3．3）mL／s]，假干预组FEV。／FVC和PEF[（65．4±9．8）％和（19．0-1-1．9）mL／s]显著低于干预组。COPD组血清中TNF-α浓度[（118±34）ng／L]显著高于正常组[（74±16）ng／L]和干预组[（79±14）ng／L]，假干预组血清中TNF—α浓度[（120±39）ng／L]显著高于干预组；COPD组BALF中TNF—α浓度[（155±28）ng／L]显著高于正常对照组[（79±28）ng／L]。COPD组肺平均内衬间隔[（77±29）×10^-6m／个]显著高于正常对照组[（44±7）×10^-6m／个]，其平均肺泡数[（232±97）×10^6个／m^2]显著低于正常对照组[（393±24）×10^6个／m^2]和干预组[（379±33）×10^6个／m^2]。假干预组平均肺泡数[（213±99）×10^6个／m^2]显著低于干预组[（379±33）×10^6个／m^2]。COPD组＋假干预组血清和BALF中TNF—α浓度与PEF和FEV。／FVC均呈显著负相关。结论TNF—α与吸烟大鼠的COPD形成有关，并影响其肺功能；rhTNFR：Fc对延缓肺功能损害具有一定的作用。     

结缔组织生长因子在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的作用

目的 研究烟雾暴露大鼠在体应用结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASON)对肺血管重塑的影响,探讨CTGF在烟雾暴露致肺血管重塑中的作用.方法 35只大鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、烟雾暴露1个月组(B组)、烟雾暴露+大剂量CTGF ASON 1个月组(C组)、烟雾暴露+小剂量CTGF ASON 1个月组(D组)、烟雾暴露2个月组(E组)、烟雾暴露+大剂量CTGF ASON 2个月组(F组)、烟雾暴露+小剂量CTGF ASON 2个月组(G组),每组5只.用苏木精-伊红(HE)染色观察肺血管重塑;用免疫组化法观察CTGF在肺动脉中的表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺动脉CTGF mRNA表达.采用SPSS 12.0软件,数据以-x±s表示,组间差异显著性检验采用方差分析,两两比较采用q检验,相关分析采用直线回归法,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 (1)A组肺动脉管壁面积/管总面积(WA%)为(28.6±1.2)%、B组为(42.5±2.3)%、C组为(33.7±1.8)%、D组为(42.1±2.4)%、E组为(49.6±2.1)%、F组为(34.3±1.9)%、G组为(38.4±2.0)%.C组与B组比较差异有统计学意义(q=5.09,P＜0.01),F、G组与E组比较差异均有统计学意义(q值分别为8.15、3.75,P均＜0.05);(2)A组肺动脉平滑肌CTGF蛋白表达吸光度(A)值为0.098±0.015、B组为0.159±0.023、C组为0.118±0.017、D组为0.153±0.022、E组为0.406±0.036、F组为0.109±0.012、G组为0.146±0.024.C组与B组比较差异有统计学意义(q=3.26,P＜0.05),F、G组与E组比较差异均有统计学意义(q值分别为67.08、18.09,P均＜0.01);(3)A组肺动脉CTGF mRNA表达为0.051±0.010、B组为0.823±0.096、C组为0.216±0.056、D组为0.810±0.085、E组为2.452±0.267、F组为0.207±0.062、G组为0.509±0.067.C组与B组比较差异有统计学意义(q=53.50,P＜0.01),F、G组与E组比较差异均有统计学意义(q值分别为132.22、93.70,P均＜0.01).结论 应用CTGF ASON可显著降低烟雾暴露诱导的大鼠肺血管重塑,CTGF可能在肺动脉高压的发生、发展中起重要作用.     

结缔组织生长因子和周期蛋白D1在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的表达变化

目的 探讨烟雾暴露致大鼠肺血管重塑中结缔组织生长因子(CTGF)和周期蛋白D1的表达变化及其意义.方法 健康雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为对照组,烟雾暴露2周、4周和8周组检测PaO2,HE染色和平滑肌细胞α肌动蛋白染色观察肺血管重塑情况,行免疫组织化学染色观察CTGF和周期蛋白D1在肺动脉平滑肌中的表达,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺动脉CTGF mRNA和周期蛋白D1 mRNA表达,Western blot法检测CTGF和周期蛋白D1的蛋白表达量.结果 各组大鼠PaO2分别为(91±4),(92±5),(91±4),(93±4)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),差异均无统计学意义(F=0.15,P＞0.05).随烟雾暴露时间的延长,肌化血管比例、肺血管壁厚度和血管直径比值(W/T)、CTGF和周期蛋白D1的mRNA和蛋白表达均呈时间依赖性增加,各组间比较差异均有统计学意义(F=51.06～590.20,P＜0.05).CTGF与周期蛋白D1表达与肺W/T呈显著正相关(r=0.097～0.918,P＜0.01),二者的表达之间也呈显著正相关.结论 烟雾暴露大鼠的CTGF和cyclinD1表达量均随暴露时间延长而显著升高,二者可能与烟雾暴露致肺动脉平滑肌细胞异常增殖有关.     

Sodium hydrosulfide alleviates pulmonary artery collagen remodeling in rats with high pulmonary blood flow

This study aimed to explore the effect of sodium hydrosulfide (NaHS) on pulmonary artery collagen remodeling in rats with high pulmonary blood flow. Thirty-two Sprague-Dawley rats were randomly divided into a sham group, shunt group, sham + NaHS (an H₂S donor) group, and shunt + NaHS group. After 11 weeks of shunting, mean pulmonary artery pressure (MPAP), relative median area (RMA) of pulmonary arteries, H₂S concentration in lung tissues, plasma endothelin-1 (ET-1) levels, and ET-1 mRNA in lung tissues were investigated. Collagen I and collagen III were evaluated by immunohistochemistry. Hydroxyproline assay and Sirius-red staining were performed. Matrix metalloproteinase-13 (MMP-13), tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1), and connective tissue growth factor (CTGF) were evaluated by immunohistochemistry. After 11 weeks of shunting, rats showed a significant pulmonary hypertension and pulmonary artery collagen remodeling in association with a decrease in lung tissue H₂S content. After NaHS treatment for 11 weeks, lung tissue H₂S content was increased, whereas MPAP was attenuated and RMA was reduced. Meanwhile, pulmonary artery collagen I and collagen III protein expressions of intra-acinar pulmonary arteries were inhibited, but MMP-13/TIMP-1 ratio was augmented with a decreased plasma ET-1 content and lung tissue ET-1mRNA and CTGF expressions. The downregulation of H₂S is involved in the development of pulmonary artery collagen remodeling induced by high pulmonary blood flow.     

慢性阻塞性肺疾病患者肺小血管低氧诱导因子-α的表达

目的通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺小动脉内低氧诱导因子(HIF)-α的表达,探讨其在肺血管重塑中的可能作用。方法选因肺肿瘤行肺叶切除者,诊断符合COPD者入选COPD组(12例),不符合者入选对照组(10例)。取2组患者的肺组织,原位杂交和免疫组化检测HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α的mRNA及蛋白表达水平。光学显微镜观察并计算肺小动脉管壁厚度与外径的比值(WT%)及肺小动脉管壁面积与血管总面积的比值(WA%)。结果(1)COPD组WT%、WA%均较对照组高(P值均小于0·01)。(2)HIF-1αmRNA和蛋白表达在COPD组增强,吸光度(A)值分别为0·172±0·011、0·089±0·013,与对照组(0·103±0·010、0·042±0·010)比较差异有统计学意义(P值均小于0·01)。HIF-2αmRNA及蛋白表达在COPD组呈弱阳性,A值分别为0·038±0·010、0·077±0·010,与对照组(0·133±0·017、0·169±0·010)比较差异有统计学意义(P值均小于0·01)。HIF-3α仅mRNA表达在COPD组呈弱阳性,A值为0·077±0·010,与对照组(0·088±0·010)比较差异有统计学意义(P<0·05)。(3)相关分析HIF-1αmRNA及蛋白表达与WT%和WA%分别呈正相关,而HIF-2αmRNA及蛋白表达与WT%和WA%分别呈负相关,HIF-3αmRNA及蛋白表达与WT%和WA%均无相关性。结论COPD患者HIF-α基因表达有差异,此差异可能参与了COPD的肺血管重塑。     

慢性栓塞性肺动脉高压大鼠肺动脉重塑与尾加压素Ⅱ及其受体的表达

目的 研究尾加压素Ⅱ(U Ⅱ)蛋白和mRNA及U Ⅱ受体(UT)mRNA在慢性栓塞性肺动脉高压大鼠肺动脉的表达,探讨其在病程中的作用.方法 雄性Wistar大鼠,麻醉后经颈静脉注入体外制备的血栓栓子,2周后同法进行2次栓塞,造模成功大鼠分为2周组、4周组、8周组、12周组,全程腹腔注射抗纤维溶解剂氨甲环酸,达到目标日期后行以下检查:(1)测量平均肺动脉压(mPAP);(2)用免疫学检验和原位杂交的方法检测不同节段肺动脉U Ⅱ蛋白和mRNA表达及UT mRNA表达;(3)在光镜下观察肺动脉显微结构的变化,测定肺动脉相对中膜厚度(PAMT)和管壁面积/管总面积(WA/TA).采用SPSS 13.0软件,所有数据以-x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,组间差异采用LSD方差分析.结果 (1)栓塞后4、8及12周组的大鼠mPAP值分别为(19.9±6.2)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、(23.8±4.1)mm Hg、(27.4±5.4)mm Hg,较对照组明显升高(F值为13.75,P＜0.01),PAMT百分比分别为42.6±11.16、47.82±10.02、53.79±10.41,WA/TA百分比分别为22.75±6.79、25.32±4.90、27.05±7.71,较对照组均明显增大(F值分别为5.52和6.61,P均＜0.01);(2)栓塞后肺动脉U Ⅱ蛋白和U Ⅱ mRNA以及UT mRNA表达上调,细小动脉较中型动脉变化更为明显,4、8及12周组肺细小动脉U Ⅱ mRNA和UT mRNA及U Ⅱ蛋白平均吸光度值分别为0.138±0.019、0.144±0.022、0.173±0.021和0.126±0.028、0.146±0.029、0.157±0.025,与对照组相比明显升高(F值分别为30.39、30.78和14.49,P均＜0.01),随着栓塞时间的延长,表达呈明显增加的趋势;(3)肺细小动脉U Ⅱ蛋白和mRNA及UT mRNA的平均吸光度值均与mPAP、PAMT呈正相关关系(r值分别为0.822、0.866、0.846;0.675、0.712、0.756,P均＜0.01).结论 慢性栓塞性肺动脉高压大鼠出现明显肺动脉重构,尾加压素Ⅱ蛋白和mRNA及其UT mRNA在肺动脉表达明显上调,其动态变化与肺动脉高压、肺血管重构的病理过程明显相关.     

吸烟慢性阻塞性肺疾病患者肺动脉白细胞介素-16和CXC趋化因子受体3表达的意义

目的 探讨IL-16、CXC趋化因子受体3(CXCR3)在正常吸烟者和吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺动脉表达的意义.方法 将周围型肺癌Ⅰ期～Ⅲa期需要手术治疗的患者分为不吸烟肺功能正常组(10例)、吸烟肺功能正常组(13例)、吸烟COPD稳定期组(10例),取3组患者的肺组织,观察肺腺泡肌型动脉(MA)的病理改变,ELISA检测肺组织匀浆IL-16水平;免疫组化法检测IL-16和CD_3~+T细胞、CD_4~+T细胞、CD_8~+T细胞以及CXCR3在MA表达水平;相关分析MA IL-16、CXCR3表达水平与临床和肺功能主要指标的相关性.结果 (1)吸烟COPD稳定期组肺组织匀浆IL-16水平较不吸烟肺功能正常组、吸烟肺功能正常组显著升高,吸烟肺功能正常组较不吸烟肺功能正常组升高;(2)吸烟肺功能正常组、吸烟COPD稳定期组较不吸烟肺功能正常组IL-16、CXCR3在MA表达范围和程度均增高,且吸烟COPD稳定期组与吸烟肺功能正常组比较,差异有统计学意义(P<0.01);(3)相关分析:吸烟COPD稳定期组MA IL-16表达水平与CD_3~+T细胞计数、CD_8~+T细胞计数、CXCR3表达水平呈正相关(r分别为0.639、0.803、0.696,P<0.05或P<0.01),与吸烟指数、BODE指数呈正相关(r分别为0.737、0.704,P值均小于0.05),与第1秒钟用力呼气容积(FEV_1)占预计值的百分比、6 min步行距离(6MWD)呈负相关(r分别为-0.803、-0.787,P值均小于0.01);吸烟COPD稳定期组MA CXCR3表达水平与吸烟指数、BODE指数呈正相关(r分别为0.650、0.767;P值均小于0.05),与FEV_1、6MWD呈负相关(r分别为-0.778、-0.774;P值均小于0.01).结论 (1)吸烟肺功能正常组和吸烟COPD稳定期组MA IL-16、CXCR3主要在淋巴细胞内表达,其表达水平与CD_+~8T细胞密切相关.提示IL-16通过CXCR3趋化CD_+~8T细胞,参与对COPD肺动脉炎症的调节;(2)肺动脉IL-16、CXCR3的表达与临床及肺功能的主要指标密切相关,提示肺动脉炎症是影响COPD进程的一个重要因素,抑制肺动脉炎症应成为COPD综合防治的一个重要方面.     

新型内源性气体信号分子硫化氢对低氧性肺血管胶原重塑的影响

目的研究大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢(H2S)对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白在肺血管壁异常堆积的调节作用,进一步探讨H2S缓解低氧性肺血管重塑的作用机制。方法19只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低氧组、低氧+硫氢化钠(NaHS)组。低氧组和低氧+NaHS组大鼠共低氧21d,低氧+NaHS组大鼠每天低氧前腹腔注射H2S供体NaHS。低氧结束后,测定肺动脉平均压(mPAP),称重右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+SP),计算RV/(LV+SP)。亚甲蓝分光光度法测定血浆中H2S含量。免疫组化染色检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,原位杂交检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA在肺血管壁表达。结果(1)与对照组相比,低氧组大鼠mPAP升高46%,RV/(LV+SP)增加41%,血浆H2S含量下降36%(P均<0·01);与低氧组相比,低氧+NaHS组大鼠的mPAP降低31%,RV/(LV+SP)减少24%,血浆H2S含量升高65%(P均<0·01)。(2)各组大鼠肺小型、中型肌性动脉中Ⅰ型胶原蛋白表达的比较:低氧组较对照组分别增加81%、62%(P<0·01);低氧+NaHS组较低氧组分别减少了32%、18%(P<0·01)。(3)各组大鼠肺小型、中型肌性动脉中Ⅰ型前胶原mRNA表达的比较:低氧组较对照组分别增加49%、68%(P<0·01);低氧+NaHS组较低氧组分别减少了31%、33%(P<0·01)。(4)各组大鼠肺小型肌性动脉中Ⅲ型胶原蛋白表达的比较:低氧组较对照组增加84%(P<0·01);低氧+NaHS组较低氧组减少了37%(P<0·01)。低氧组大鼠的肺中型肌性动脉中Ⅲ型胶原蛋白表达较对照组增加38%(P<0·01);但是与低氧+NaHS组相比无明显变化(P>0·05)。(5)各组大鼠肺小型、中型肌性动脉中Ⅲ型前胶原mRNA表达的比较:低氧组较对照组分别增加53%、17%(P<0·01);低氧+NaHS组较低氧组分别减少了45%、33%(P<0·01)。结论在大鼠低氧性肺血管胶原重塑时,H2S能够抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA在肺血管壁的表达,此作用可能是其缓解低氧性肺血管重塑的作用机制之一。     

肾上腺髓质素及受体在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达与作用研究

目的　探讨肾上腺髓质素 (ADM)及其受体 (ADMR)在慢性阻塞性肺疾病 (COPD)的表达水平 ,并研究其在COPD中可能的作用与机制。方法　本组研究调查了两批患者 ,第一批患者均为肺叶切除患者 ,共 16例 ,分为COPD组 (Ⅰ组 ) 9例和对照组 (Ⅱ组 ) 7例 ,对这两组患者用形态计量学方法检测了肺血管形态 ,用组织原位杂交测定ADM与ADMRmRNA的表达 ;第二批患者均为未做切除术的COPD患者 2 2例 ,根据平均肺动脉压 (mPAP)的不同分为COPD不伴肺动脉高压组 (A组 )10例和COPD伴肺动脉高压组 (B组 ) 12例 ,用右心漂浮导管法检测A、B两组血流动力学、放射免疫法测定肺动脉血ADM水平 ,同时检测动脉血气。结果　 (1)肺叶切除的患者 :①Ⅰ组肺小动脉管壁厚度与血管外径比值及管壁面积与血管面积比值显著高于Ⅱ组 (P <0 0 1) ,②原位杂交发现Ⅰ、Ⅱ组肺小动脉壁ADMmRNA与ADMRmRNA表达比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;(2 )未作切除术的患者 :A、B两组COPD患者肺动脉血ADM水平比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;并与mPAP、肺血管阻力(PVR)呈正相关 (r分别 =- 0 4 1、0 5 2 ,P均 <0 0 5 ) ,与动脉血氧分压 (PaO2 )呈负相关 (r =0 4 1,P <0 0 5 )。结论　ADM可能作为局部自分泌 /旁分泌因子在COPD的发展与肺动脉高压形成中发挥     

慢性阻塞性肺疾病患者肺部丝裂原活化蛋白激酶、蛋白激酶B和缺氧诱导因子1α的表达

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、缺氧诱导因子1α(HIF1α)的表达变化在缺氧性肺动脉高压(HPH)中的作用和意义。方法通过苏木精伊红(HE)染色检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者和对照组患者肺小动脉形态学改变,应用免疫组化检测肺小动脉壁内磷酸化蛋白激酶B(p PKB)、磷酸化胞外信号调控激酶(p ERK)、磷酸化c Jun氨基端蛋白激酶(p JNK)、磷酸化p38(p P38)表达水平,应用原位杂交和免疫组化检测肺小动脉壁内HIF1α的表达水平。结果COPD患者管腔面积与管总面积比值(LA%,18±3)及肺小动脉中膜厚度[PAMT,(31±3)μm]均较对照组[30±5、(40±4)μm]显著增高(t=7.58、6.57,P均<0.01)。COPD患者肺小动脉壁p ERK蛋白、p PKB蛋白、HIF1α蛋白和HIF1αmRNA表达[均以吸光度(A)值表示]水平(0.164±0.012、0.113±0.009、0.232±0.008、0.154±0.013)较对照组(0.062±0.010、0.031±0.011、0.058±0.006、0.052±0.008)显著增强(t=23.18、21.03、62.14、2.44,P均<0.01),而p JNK、p P38蛋白表达(0.041±0.012、0.031±0.010)与对照组(0.048±0.013、0.028±0.007)比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。相关分析表明HIF1α蛋白、HIF1αmRNA、p ERK蛋白和p PKB蛋白表达与COPD组LA%呈显著负相关(r=-0.920～-0.892,P均<0.05),与PAMT呈显著正相关(r=0.895～0.934,P均<0.05)。结论MAPK信号通路和PI3K信号通路以及HIF1α可能参与了COPD患者HPH的发生。