微阵列技术及其应用

微阵列技术是在一小片固相基质上储存大量生物信息的新技术。应用微阵列可在基因组水平研究基因表达 ,进行基因的功能分析 ,基因制图和基因测序 ,检测基因突变及多态性 ,真正实现了基因分析的大规模、平行、小型和自动化     

155例脑脊液分离细菌的构成和耐药性分析

目的 了解秦皇岛市第一医院从临床脑脊液标本中分离细菌的构成及其对抗生素的耐药性.方法 对临床送检的脑脊液标本按常规操作进行病原菌的分离,采用Vitek2-Compact系统进行细菌的鉴定和药敏试验,按CLSI2012版标准对结果进行判断.结果 821例脑脊液标本分离出155株细菌(剔除同一病人的重复菌株),阳性率为18.76%,其中革兰氏阳性菌85株,占54.84%,革兰氏阴性菌68株,占43.87%,真菌2株,占1.29%.脑脊液中主要的细菌分别是凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)53(34.19%)株、鲍曼不动杆菌34(21.93%)株、肺炎克雷伯菌6(3.88%)株、肺炎链球菌6(3.88%)株、草绿链球菌4(2.58%)、新型隐球菌2(1.29%)株.药敏结果显示革兰氏阳性球菌对万古霉素、利奈唑胺比较敏感,未发现耐药株.革兰氏阴性杆菌中鲍曼不动杆菌耐药常严非重.结论 我院2011-2015年脑脊液分离病原菌以革兰氏阳性菌为主,尤其是凝固酶阴性的葡萄球菌.应重点防范泛耐药鲍曼不动杆菌感染给临床治疗带来的困难.     

PNB/TCH生长试验和DNA微阵列基因芯片鉴定非结核分枝杆菌的价值比较

目的 比较对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼生长（PNB/TCH）和DNA微阵列基因芯片鉴定非结核分枝杆菌（NTM）临床分离株菌种的价值。方法 收集2013年1月~2018年6月我院住院患者的痰分枝杆菌培阳分离菌2175株,分别采用PNB/TCH生长试验和DNA微阵列基因芯片鉴别NTM,比较两种方法的鉴定结果。结果 PNB/TCH生长试验初步鉴定NTM 93株,占4.28%,DNA微阵列基因芯片鉴定NTM 79株,占3.63%,PNB/TCH生长试验初步鉴定的93株NTM中,有14例为假NTM（15.05%）;PNB/TCH生长试验鉴定NTM的阳性检出率低于DNA微阵列基因芯片;79株NTM中,占比前3位的依次为胞内分枝杆菌株（37.97%）、堪萨斯分枝杆菌（21.52%）、鸟分枝杆菌（16.46%）。结论 传统对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼生长试验鉴定NTM特异性较低,采用DNA微阵列基因芯片技术鉴定NTM准确,临床参考价值较大。     

检测HSV等5种病原体抗体的微阵列技术

目的 建立抗原微阵列技术检测多种病原体抗体。方法 将病原体的基因工程抗原，以电脑操纵的机械手将其点在赖氨酸修饰的玻片上．制备抗原微阵列，与血清反应后随之与Cy3标记的二抗反应，用激光共聚焦扫描仪扫描玻片，检测血清中相应病原体的IgG，并进行了灵敏度和重复性的检测。结果 5种抗原的最低检测限度为HSV1-gG 1．56μg／ml，HSV2-gG 3．125μg／ml，CMV-p150 1．56μg／ml，RV-E1E2 3．125μg/ml，MT-EAM 31．26μg／ml；抗原微阵列与ELISA检测的结果相比有较高的符合率；检测IgG和IgM的灵敏度分别为50pg、10pg；不同批次2张玻片间总体变异系数为IgG 6．52，IgM 18．89。结论 抗原微阵列可用于平行检测血液中病原体特异性抗体。     

MALDI- TOF MS快速鉴定腹泻病原菌的评价

目的 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)是近年发展迅速的鉴定病原菌的新技术，具有快速、准确、高通量、方便、低成本的优越性，本研究评价MALDI Microflex鉴定腹泻病原菌的效果。方法 收集3家医院临床分离的腹泻病原菌379株，采用提取法对其进行鉴定，评价质谱的鉴定效果；选择其中200株病原菌进行直接涂抹法和提取法前处理，对比鉴定效果。结果 腹泻病原菌包括沙门菌属、气单胞菌属、志贺菌属、大肠埃希菌属、弧菌属、艰难梭菌属、邻单胞菌属、耶尔森菌属等8个菌属，28个菌种，MALDI-TOF MS技术鉴定腹泻病原菌整体在属水平鉴定正确率为87.07%,种水平鉴定正确率59.37%;不同菌属及不同种的鉴定正确率有差别，气单胞菌和沙门菌较好；提取法鉴定沙门菌和气单胞菌的正确率明显高于直接涂抹法(P<0.05)。结论 MALDI-TOF MS技术鉴定腹泻病原菌具有简单、快速、部分准确的优越性，需要扩充菌种库并结合生化及血清学鉴定。     

MALDI-TOF技术在重症肺炎痰液样本病原菌检测和鉴定中的应用

目的:观察基质辅助激光解吸电离飞行时间(Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight,MALDI-TOF)技术在重症肺炎痰液样本病原菌检测和鉴定中的应用效果.方法:选取我院2021年7月至2021年12月收治的214例重症肺炎患者为研究对象,分别采用MALDI-TOF技术、VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统(VITEK 2 Compact automatic microbial analyze,VITEK-2)和基因测序法对患者痰液样本进行病原菌检测和鉴定,以基因测序法为金标准,比较两种检测方法对病原菌的鉴定结果,对比其他两种检测技术对病原菌的鉴定率以及鉴定结果差异.结果:214例重症肺炎痰液样本中,包括金黄葡萄球菌46例、表皮葡萄球菌33例、头部葡萄球菌7例、孔氏葡萄球菌6例、粪肠球菌4例、铜绿假单胞杆菌38例、肺炎克雷伯杆菌14例、不动杆菌12例、大肠埃希菌37例、阴沟肠杆菌7例、嗜麦芽杆菌3例、其他类型病菌7例.MALDI-TOF技术对重症肺炎痰液样本病原菌鉴定准确率明显高于VITEK-2技术(P<0.05).两组检测技术漏诊率比较差异无统计学意义(P>0.05),MALDI-TOF技术对重症肺炎痰液样本病原菌误诊率明显低于VITEK-2技术(P<0.05).结论:MALDI-TOF技术在重症肺炎痰液样本病原菌检测和鉴定中,能快速且准确鉴定出病原菌信息,为临床诊治提供可靠依据.     

儿科感染120株致病菌分类及耐药性分析

目的：研究儿科感染的病原菌及其对抗生素的耐药性，以指导用药，方法：采用Vitek-AmsSystem鉴定菌种和K-B法检测16种抗菌药对致病菌的耐药性。结果：其中G-杆菌在株（75.8%)，G 球菌21株（7.5%)，其他致病菌8株（0.6%)。泰环丙沙星、多粘菌素E对大多数革兰氏阴性杆菌敏感。结论：细菌耐药性鉴定对儿科感染的治疗有重要指导作用。     

抗体微阵列构建过程中抗体定位固定技术研究进展

抗体微阵列是蛋白组学研究的一个重要技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。抗体微阵列制备技术中存在许多关键问题,其中,将抗体高通量、牢固地固定在微阵列基质上,且保证抗体不失去活性,成为问题的关键。在DNA微阵列基础上,根据抗体结构的特点,研究人员设计了多种抗体固定化方法。本文中介绍了近年来抗体微阵列制备技术中抗体定位固定(site-specific immobilization)技术的研究发展情况。     

DNA微阵列技术在胃癌研究中的应用

多年来作为全球第二大恶性肿瘤,胃癌的研究急需一种更为整体性的研究方法。DNA微阵列技术以其高通量、自动化、平行化、快速化的优势,成为后基因组时代在转录组水平进行肿瘤基因表达谱分析的最强有力工具。本文介绍了DNA微阵列技术的应用原理和实验方法,着重回顾了这项技术在胃癌研究中的应用进展情况,并对现存的问题和应用前景进行了评价。     

重症监护室6400例血培养病原菌分布及药敏分析

目的对重症监护室6400例血培养的病原菌进行分离,并对菌株的分布及药敏进行分析。方法回顾调查2011年1月至2013年6月高州市人民医院ICU病房6400例患者的血样标本,并对其病原菌种类进行分离。采用BDBACTECTM9120全自动血培养仪对血液进行培养,BD—Phoenix-100全自动细菌鉴定仪对细菌的种类进行鉴定并对细菌的药敏性进行检测。结果6400例血样中共检出细菌971株,阳性率为15．17％。其中革兰阴性菌检出515株,占53．04％;革兰阳性菌425株,占43．77％;真菌31株,占3．19％。检出病原菌主要为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌以及肠球菌等。其中,葡萄球菌对于甲氧西林和青霉素的耐药性最大,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌以及铜绿假单胞菌对亚胺培南都有很好的受药性。结论阴性葡萄球菌、鲍曼不动杆菌等在重症监护室中属于多发常见的病原菌,该种菌的耐药性以及多重耐药性都非常普遍,临床上应根据药敏检测结果进行用药。     

2001年徐州地区暴发性病毒性脑膜炎病原的研究

目的 确定引起2001年江苏省徐州地区无菌性脑膜炎流行的病原体。方法 组织培养法从患者脑脊液分离病毒，标准血清中和试验鉴定分离毒株；中和试验检测双份血清中和抗体效价；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肠道病毒特异性基因片段。结果 22份脑脊液中分离出4株柯萨奇B5型、2株柯萨奇B3型、1株艾可7型肠道病毒，分离阳性率31．8％。RT-PCR检测脑脊液21份，肠道病毒阳性11份。阳性率52．4％。19例双份血清中11例中和效价呈4倍以上增长或转阳，阳性率57．9％。结论 此次江苏省徐州地区无菌性脑膜炎流行的病原体是以柯萨奇B5为主要血清型的肠道病毒。     

TRAIL受体微阵列生物传感器检测系统的初步应用

目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related Apoptosis-induced Ligand，TRAIL）受体微阵列生物传感器检测系统为离子敏场效应型（Ion sensitive field effect transistor，ISFET）免疫生物传感器，利用此检测系统检测细胞表面的TRAIL受体。方法：将1：10稀释的4种TRAIL受体的抗体吸附在此型免疫生物传感器上，对正常血管内皮细胞株EVC9611、肺癌细胞株AS49-DDP、舌癌细胞株Tca8113以及白血病人来源的白细胞进行检测。结果：这种微阵列传感器检测系统可以同时检测细胞表面的4种TRAIL受体，并发现正常血管内皮细胞株EVC9611和舌癌细胞株Tca8113的细胞表面没有4种TRAIL受体的表达，而肺癌细胞株AS49-DDP细胞表面的TRAILR2表达较多，白血病人来源的白细胞4种受体都有表达。结论：研制的TRAIL受体微阵列生物传感器检测系统可以有效地同时检测各种细胞表面的4种TRAIL受体，为进一步使用TRAIL治疗肿瘤提供基础资料。     

应用DNA微阵列技术检测缺失型DMD/BMD患者的研究

目的研究Duchenne型肌营养不良（DMD）/Becker型肌营养不良（BMD）患者基因缺失检测的可行技术。方法应用分子克隆的方法扩增DMD基因18个常见易缺失外显予片段，以此作为探针制备出简易DNA微阵列，对30例DMD/BMD患者和5例健康对照的基因进行检测分析。部分结果与PCR方法比较结果一致性。结果应用简易DNA微阵列检测出21例DMD/BMD患者具有不同程度的外显予缺失，10例经PCR检测得到了完全验证。结论DNA微阵列技术检测缺失型DMD/BMD患者简便、准确、灵敏，具有临床应用价值。     

DNA微阵列技术及其在生物医学中的应用

DNA微阵列技术是一种新型的有力工具，它可以同步、快速而有效地分析大量核苷酸杂交试验。DNA微阵列技术的应用包括：基因表达分析、多基因突变和多态性检测、疾病诊断和分型、研究疾病分子机制以及药物筛选 和疫苗开发等，本简要介绍了DNA微阵列技术并综述了其在这些方面的应用。     

2010年广州某医疗中心儿童夏季细菌性腹泻的病原学调查

目的研究广州地区小儿夏季细菌性腹泻的病原菌分布。方法采集2010年5～7月广州市妇女儿童医疗中心珠江新城院区腹泻患儿的大便标本进行常规病原菌的分离培养,通过生化反应和血清凝集试验进行鉴定和分型,并使用金标法对空肠弯曲菌抗原进行检测。结果从110份标本中检出44株病原菌,检出率为40.0%。其中致病性大肠埃希菌17株,2岁以下患儿检出15株;空肠弯曲菌12株,2岁以下患儿检出10株;沙门菌6株;念珠菌纯生长6株;产气荚膜杆菌3株。结论广州地区夏季儿童细菌性腹泻的主要病原菌是致病性大肠埃希菌及空肠弯曲菌,两者的易感人群以2岁以下婴幼儿为主。     

重症监护病房中呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性特征

目的探讨重症监护病房（ICU）中呼吸机相关肺炎（VAP）的流行病学、病原菌分布、耐药性特征。方法对广州市3所三级甲等医院ICU发生VAP的53例患者进行前瞻性研究，对病原菌进行细菌鉴定和耐药性分析。结果VAP平均发病时间为机械通气后7．8d。97株病原菌中革兰阴性细菌58株（59．8％），革兰阳性细菌23株（23．7％），真菌16株（16．5％）。最常见病原菌分别为铜绿假单胞菌16株（16．5％），金黄色葡萄球菌13株（13．4％），嗜麦芽窄食单胞菌8株（8．2％），肺炎克雷伯菌8株（8．2％），白色念珠菌8株（8．2％）。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为100．0％；未发现耐万古霉素金黄色葡萄球菌；VAP病原菌存在严重的多重耐药性。结论ICU中VAP的病原菌构成以革兰氏阴性杆菌为主且呈现多重耐药现象，适当的经验性抗菌治疗应以病原学和耐药性的监测结果为依据。     

应用脑脊液分离病原菌短期培养物构建快速检测流程的研究

目的 利用脑脊液分离病原菌短期培养物构建快速鉴定及药敏试验流程,为临床及时抗感染治疗、控制院内感染提供依据.方法 收集2018年11月 –2019年10月北京天坛医院Bact/Alert 3D培养仪报阳的脑脊液样本216例,转种固体培养基后短期培养,使用VITEK-MS质谱分析仪对菌膜进行快速鉴定,使用VITEK-2 ...     

蛋白质芯片在过敏性疾病诊断中的应用

全球超过30%人口患有过敏性疾病，过敏体质者在接触过敏原后会产生IgE抗体，再次接触过敏原后，机体的不同器官会产生速发型过敏反应或迟发型过敏反应。体外检测过敏原特异性IgE是过敏性疾病诊断的重要手段，20世纪80年代以来，分子生物学技术的迅猛发展加速了过敏原分子的鉴定。大量过敏原的鉴定、表征及重组过敏原的生产为分子诊断技术进入临床奠定了坚实基础。近年来，微阵列技术被证实可将过敏原蛋白应用于芯片进行快速的血清学诊断，使用患者少量血清即可得到可靠的检测结果。本文讲述过敏原粗提取物用于过敏性疾病诊断中的不足。重组过敏原的发展、应用促进了组分分辨诊断概念进入临床，介绍了过敏原芯片的发展和应用、过敏原芯片在过敏性疾病中的诊断和应用，并对其将来的发展趋势进行了展望。     

新疆虫媒病毒的分离与鉴定

１９９０￣１９９２年从新疆境内的多种蜱、蚊、病人血清及脑脊液中分离到多株虫媒病毒，经初步鉴定，其中部分为甲属披膜病毒。１９９３年７￣１０月与美国国家疾病控制中心（ＣＤＣ）虫媒传染病防治研究所合作，对上述病毒做进一步鉴定。３５株病毒感染Ｖｅｒｏ细胞，其中２８株可在３￣７ｄ内引起典型的细胞病变。用２８株病毒进行空斑形成试验（ＰＦＴ），其中１９株可在Ｖｅｒｏ细胞中形成空斑，其滴度为ｌｏｇ１０４．７／ｍｌ     

流感嗜血杆菌的蛋白电泳图谱分析

流感嗜血杆菌是引起儿童肺炎、脑膜炎、中耳炎的最常见病原菌之一，目前认为，不可分型流感嗜血杆菌是呼吸道感染的主要病原菌。不可分型的流感嗜血杆菌Ｐ２和Ｐ６蛋白具有制备疫苗的可能。本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳对自呼吸道分离的流感嗜血杆菌进行了蛋白分析。５６株分离株中，肺炎患儿鼻咽分泌物２２株，脑膜炎患儿脑脊液分离株１株，正常儿童咽拭子分离株３３株。５６株流感嗜血杆菌中，不可分型流感嗜血杆菌占多数，为７９％；生物分型中，以Ⅱ型为最高，占４８％，Ⅰ型次之，占２９．６％。电泳分析结果，流感嗜血杆菌约有２０多条…