钛表面喷砂－微弧氧化对骨髓间充质干细胞黏附和增殖的影响

目的：比较喷砂酸蚀法（SLA）、微弧氧化法（MAO）和喷砂－微弧氧化法（SL－MAO）处理钛植入体表面对骨髓间充质干细胞（BMMSCs）黏附和增殖能力的影响。方法采用SLA、MAO和SL－MAO处理钛表面（分别为SLA组、MAO组、SL－MAO组）,通过扫描电子显微镜（SEM）分析表面结构特征。分离培养SD大鼠BMMSCs,采用SEM观察细胞黏附情况,噻唑蓝法定量分析细胞增殖情况。结果 SLA组钛表面形成微米－亚微米复合多孔,但存在喷砂颗粒残留。 MAO组钛表面形成亚微米级微孔,但无微米级大孔结构。 SL－MAO组不仅能形成微米－亚微米复合多孔形貌,而且喷砂颗粒残留现象减小。 BMMSCs细胞黏附和MTT法增殖试验显示：第1～9天期间,SL－MAO组细胞数量与MAO组差异无统计学意义（P＞0.05）,MAO组和SL－MAO组细胞早期黏附和增殖速率均显著高于SLA组（ P＜0.05）。结论 SL－MAO能在钛植入体表面形成良好的微米－亚微米复合多孔形貌,其复合多级孔结构优于单纯使用微弧氧化处理,在膜层的完整性方面优于传统的喷砂酸蚀处理。在BMMSCs细胞早期黏附和促进细胞增殖方面,SL－MAO相比SLA具有显著优势,与MAO差异不显著。     

钛钽生物梯度材料在成骨过程中对碱性磷酸酶的影响

目的研究钛钽生物梯度材料在成骨过程中对碱性磷酸酶的影响。方法选取光滑钛片(光滑纯钛组)、经酸蚀水热处理的钛片(酸蚀水热组)、经酸蚀水热处理后等离子喷涂钽的钛片(钽喷涂组)作为研究对象,其中钽喷涂组作为实验组,光滑纯钛组、酸蚀水热组作为对照组,将第3代培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs接种至3组不同的钛片表面,培养3、5、7 d后,采用ALP试剂盒检测3组试件上细胞的ALP水平。结果当细胞培养到第3天时,酸蚀水热组和钽喷涂组的ALP活性高于光滑纯钛组(P<0.05);第5天与第7天时,酸蚀水热组和钽喷涂组的ALP活性明显高于光滑纯钛组,且钽喷涂组高于酸蚀水热组(P<0.05)。结论经酸蚀水热处理过的纯钛表面等离子喷涂钽后,在成骨过程中其表面细胞的ALP活性更高。     

补肾中药成分配伍调控RUNX2、OSX对大鼠BMSCs成骨分化的影响

目的观察补肾代表中药淫羊藿、补骨脂、女贞子、何首乌有效成分对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及向成骨细胞定向分化的影响。方法将65只SPF级SD雌性大鼠随机分为正常对照组、阳性转化液对照组、补肾中药配伍组(补肾中药1组、2组、3组、4组、5组、6组、7组、8组、9组)、非补肾中药对照组(黄芪甲苷组、川芎嗪组)。通过血清药理学方法,对实验大鼠连续灌胃给药3 d后,取材获得含药血清,使用各组大鼠含药血清培养骨髓间充质干细胞6 d、12 d、18 d;用茜素红染色对钙化结节进行成骨细胞鉴定;应用MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖率,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,用实时定量PCR法检测核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)的基因表达。结果补肾中药有效成分不同配伍含药血清作用于体外培养骨髓间充质干细胞72 h,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖。ALP在12 d达到高峰值。Real-Time PCR结果显示补肾中药有效成分能上调RUNX2、OSX的基因表达。结论补肾中药有效成分配伍能提高骨髓间充质干细胞增殖率,促进骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其机制与补肾中药有效成分配伍能上调RUNX2、OSX的基因表达相关。     

大鼠颅骨骨缝间充质干细胞与骨髓间充质干细胞成骨及成脂能力比较研究

目的 分离培养大鼠颅骨骨缝间充质干细胞(CSSCs)、骨髓间充质干细胞(BMSCs),比较两种间充质干细胞体外成骨、成脂诱导的差异.方法 采用出生后5天的SD大鼠,分离培养CSSCs和BMSCs,并进行鉴定.体外对CSSCs和BMSCs进行成骨成脂诱导,采用免疫荧光检测,碱性磷酸酶(ALP)染色,茜素红染色,油红O染色...     

纯钛表面激光熔覆处理的进一步实验研究

目的 探讨激光熔覆后钛表面多孔形貌对细胞黏附、增殖和分化的影响.方法 在氩气保护环境中应用脉冲式掺钕钇铝石榴石晶体(Nd:YAG)对45 μm钛粉颗粒在钛片表面进行激光熔覆,采用场发射扫描电镜(SEM)观察钛片表面微观形貌,能量弥散X射线谱(EDS)检测钛片表面成分;采用小鼠骨髓基质干细胞BMSCs体外培养评价喷砂酸蚀组(A组)和激光熔覆组(B组)的生物相容性.SEM观察BM-SCs在钛表面的黏附状况,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测法和碱性磷酸酶(AKP)活性检测评价钛片对BMSCs增殖和分化的影响.结果 与A组比较,B组互相连通的多孔钛表面更有利于BMSCs的黏附,也有利于BMSCs细胞的增殖和分化.结论 激光熔覆处理钛片表面可促进BMSCs黏附、增殖及分化,有望成为一种有效有前景的钛表面处理方法.     

激素性股骨头坏死模型骨髓间充质干细胞的生物学特性评估

目的评估激素性股骨头坏死模型自体骨髓间充质干细胞增值能力及定向诱导能力。方法建立SD大鼠激素性股骨头坏死动物模型,行病理检查,验证模型。取模型组和对照组的骨髓间充质干细胞进行细胞生物学特性评估。结果联合运用牛血清和激素能够较好地建立激素性鼠股骨头缺血性坏死动物模型,激素性股骨头坏死SD大鼠的骨髓间充质干细胞,增值速率显著慢于对照组(P<0.05),其骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导后ALP染色阳性,但茜素红染色显示钙结节数量少于对照组,向成脂细胞定向诱后油红O染色示脂肪细胞少于对照组。结论实验组骨髓间充质干细胞仍具备干细胞的生物学特性,但相对于对照组其增殖能力减弱,成骨、成脂潜能减弱。     

自然铜发挥“接骨疗伤”功效的有效成分探讨

【目的】观察自然铜与硫氢化钠(NaHS)对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响,初步探讨自然铜发挥"接骨疗伤"功效的可能有效成分。【方法】培养大鼠骨髓间充质干细胞并诱导其转化为成骨细胞,以自然铜与NaHS分别进行干预,采用钙钴法观察成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)表达,采用茜素红染色法观察成骨细胞钙结节表达,并对阳性表达的ALP和钙结节进行积分光密度(IOD)的测定。【结果】ALP染色结果显示:与对照组比较,NaHS组ALP表达水平于7、14 d显著增加,自然铜组ALP表达水平于3、7、14 d显著增加(P0.05);与NaHS组比较,自然铜组3、14 d ALP表达水平显著增加(P0.05)。茜素红染色结果显示:与对照组和NaHS组比较,自然铜组14 d时钙结节表达水平显著增加(P0.05)。【结论】自然铜可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,且二硫化亚铁可能是自然铜起"接骨疗伤"作用的有效成分。     

TPS和TiO2喷砂处理钛片表面对成骨细胞生长影响的体外研究（摘要）

目的研究以TPS和不同粒度TiO2喷砂处理的钛片表面对成骨细胞形态、粘附、增殖和分化的影响．方法采用TiO2对纯钛钛片表面进行喷砂（sandblasted）处理,根据TiO2粒度的不同分为3组,分别为S1（108～130μm）组、S2（216～301μm）组和S3（356～411μm）组．TPS（titanium sprayed plasma surface）表面处理组由StraumanCo提供．600目砂纸打磨组S0（smooth surface,ground surface）作对照．在5组不同表面处理的钛片表面进行成骨细胞培养,采用扫描电子显微镜观察、MTT法、碱性磷酸酶活性（ALP）及骨钙素分泌（OC）检测来比较不同处理的表面对成骨细胞形态、粘附、增殖和分化的影响．     

富血小板纤维蛋白(PRF)体外促进兔骨髓间充质干细胞在钛板表面黏附增殖的研究

目的探讨富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin,PRF）在体外对钛板表面兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymalstem cells,BMSCs）增殖粘附的影响。方法将体外培养的BMSCs植入钛板上,试验组盖PRF,对照组不盖PRF,同时进行BMSCs培养,通过免疫荧光、噻唑蓝（MTT）比色试验检测比较两组细胞的黏附和增殖能力,从而对比评价骨髓间充质干细胞在钛板上粘附和生长增殖情况。结果免疫荧光显示两组钛板上的细胞随时间延长而增多,24h时PRF组细胞形态较好,细胞数量较多。MTT结果显示24h和48h时PRF组MTT值大于对照组,而72h时两组没有统计学差异。结论PRF能够促进兔骨髓间充干细胞在钛表面粘附和增殖。     

TPS和TiO2喷砂处理钛片表面对成骨细胞生长影响的体外研究（摘要）

目的研究以TPS和不同粒度TiO2喷砂处理的钛片表面对成骨细胞形态、粘附、增殖和分化的影响.方法采用TiO2对纯钛钛片表面进行喷砂（sandblasted）处理,根据TiO2粒度的不同分为三组,