人发角蛋白桥接周围神经缺损后的相容性和降解性的实验研究

目的：探讨HHK（人发角蛋白）在桥接周围神经缺损后,诱导神经再生及与周围组织的相容和自身的降解情况。方法：用PLGA（聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物）套管装配HHK来桥接SD大鼠10mm长的坐骨神经缺损,术后3、6、9、12周取材,切片做组织学观察。结果：术后3周HHK毛小皮已经开始剥脱降解,并已有大量的雪旺细胞和神经纤维沿HHK长入,6周时HHK已均质化,9周、12周HHK继续降解,长入其间的雪旺细胞和神经纤维更多,排列更加规律。结论：HHK有很好的生物相容性,和可控的降解速率,能很好的诱导神经再生,可以作为支架材料应用于周围神经组织工程研究。     

施万细胞复合人发角蛋白模拟微重力条件培养构建组织工程化神经

目的利用旋转式细胞培养系统模拟微重力条件体外构建人发角蛋白组织工程化神经。方法从乳鼠坐骨神经分离培养施万细胞,将传代施万细胞与人发角蛋白(HHK)在旋转式细胞培养系统内联合培养,分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察施万细胞与HHK的相容性,评价体外构建效果。结果施万细胞分离培养成功,纯度达97%。联合培养后施万细胞在光镜下呈单层或多层贴附于HHK支架表面。扫描电镜下呈细长梭形,生长方向与HHK细丝长轴相一致,随着培养时间的延长其贴附程度加强,数量增加。结论在旋转式培养系统下施万细胞与HHK具有良好的粘附性和相容性,体外构建HHK组织工程化神经初步成功。     

聚乳酸-聚羟基乙酸套管复合不同材料修复周围神经缺损的比较研究

目的：研究聚乳酸-聚羟基乙酸（PLGA）套管复合不同材料修复周围神经缺损的能力,筛选周围神经组织工程的支架材料。方法：分别用装配有聚乳酸-聚羟基乙酸（PLGA）丝和人发角蛋白（HHK）的复合导管桥接大鼠10mm长的坐骨神经缺损,术后3、6、9、12周取材,做组织学检查及计量学分析。结果：两种材料均可以诱导神经再生,雪旺细胞和再生神经纤维沿套管的内外表面和桥接材料间隙迁移长入;3周时两种材料已经开始降解,9周时PLGA丝大部分降解,12周时完全降解,HHK降解速度慢于PLGA丝,6周时材料中段切片免疫组化染色显示PLGA丝组在雪旺细胞数量、神经纤维面积上都高于HHK组,有显著性差异。结论：两种材料均有诱导神经再生的作用,PLGA丝组效果更好;桥接丝外面的桥接套管是否有必要保留仍值得进一步的研究和探讨。     

IL-1β激活后的许旺细胞与人发角蛋白三维培养构建人工神经桥接体

目的 探索白细胞介素-1β（IL-1β）激活后的许旺细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体,修复神经缺损.方法 体外培养纯化的许旺细胞经IL-1β激活前、后与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处.S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白共培养情况,原位杂交法观察人发角蛋白降解及神经生长因子（NGF）在坐骨神经内的表达,移植术4周后检测坐骨神经功能指数.结果 经IL-1β激活后的许旺细胞能更好地黏附于人发角蛋白表面,进行分裂、增殖.3～4周,桥接体内的人发角蛋白开始降解,其周围可见IL-1β激活后的处于增殖分裂期的许旺细胞NGF表达强阳性,坐骨神经功能恢复时间提前.结论 经IL-1β激活后的许旺细胞与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白复合培养构建成人工神经桥接体,具有修复神经缺损的同时还能够加速坐骨神经损伤后功能的恢复.     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法将25只新西兰兔分成3组,对照组不接受手术;另2组切除胫神经10mm,分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断端,术后不同时间分别进行神经电生理检查、解剖和组织学观察。结果术后92d经电生理检查,HHK组较无HHK组功能恢复快。解剖观察发现,神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满,人发部分消失,残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维,神经纤维无序排列,人发被初步降解。术后1年,人发被完全降解,神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生,跨过10mm的缺损间隙,从而修复神经缺损。HHK是制作神经导管的较为理想的材料。     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法 将25只新西兰兔分成3组，对照组不接受手术；另2组切除胫神10mm，分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断功能恢复快，解剖观察发现，神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满，人发部分消失，残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维，神经纤维无序 排列，人发被初步降解，术后1年，人发被完全降解。神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生，跨过10mm的缺损间隙，从而修复神经缺损，HHK是制作神经导管的较为理想的材料。     

神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究

目的探索神经膜（旧称许旺细胞）与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法用10μmol／ml BrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人T神经桥接体，移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋门免疫组化染色鉴定许旺细胞，倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养．石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长，移植入神经缺损处4周后，坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解．黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养．构建成人工神经桥接体．填补神经缺损。     

大鼠坐骨神经再生过程中的施万细胞自噬作用

目的 探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法 横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型,分别于造模后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4、5、7、10、15 d取远断端组织行电镜结构观察。结果 轴突在第0.5天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片,神经膜细胞(Schwann cell, 施万细胞)内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片,并与溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞,1周后见大量幼稚细胞。第7天后施万细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞,内有吞噬泡。结论 大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经施万细胞自噬清除,施万细胞脱分化为施万细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。     

神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究

目的 探索神经膜(旧称许旺细胞)与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法 用10μmol/mlBrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养,石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果 体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长,移植入神经缺损处4周后,坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解,黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论 许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养,构建成人工神经桥接体,填补神经缺损。     

大鼠坐骨神经再生过程中的施万细胞自噬作用

目的 探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法 横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型．分别于造模后0、0．5、1．0、1．5、2．0、3．0、4、5、7、10、15d取远断端组织行电镜结构观察。结果 轴突在第0．5天时从髓鞘脱离，溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片，神经膜细胞(Schwann cell，施万细胞)内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片，并与溶酶体融合形成自噬泡，呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞，1周后见大量幼稚细胞。第7天后施万细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞，内有吞噬泡。结论大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经施万细胞自噬清除。施万细胞脱分化为施万细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。     

Peripheral nerve repair by conduits made of human hair keratin：An experimental study

Objective: To explore the method to repair injured peripheral nerve using conduits made of human hair keratin (HHK). Methods: The tibial nerves of rabbits were transected leaving a gap 10 mm in length between the 2 severed ends, which were either routinely sutured or bridged using HHK nerve conduits. Electro-physiological , anatomical and histological examinations were performed at different time postoperatively. Results: Electrophysiological study showed more obvious improvement in the neural function recovery in rabbits with HHK conduits bridging as compared with that in rabbits with routine suture. In the former group, HHK conduits were gradually degraded and absorbed with large amount of myelinated nerve fibers and Schwann cells regenerated around HHK conduits. In the latter group, however, the nerve tissues around the suture were degenerated and replaced by connective tissues. Conclusion: HHK may induce the regeneration of the nerve fibers and provides an ideal approach to repair nerve damages.     

GDNF基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的应用携带胶质细胞源性神经营养因子基因的逆转录病毒载体质粒(pLXSN-GDNF)对体外培养的雪旺细胞进行基因修饰,并结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)管构建神经移植复合体,用于大鼠坐骨神经缺损的修复,同时对其促轴突再生及神经元保护作用予以检测评价.方法 40只成年Wistar大鼠随机分为4组:A组(n=10) 细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;B组(n=10)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;C组(n=10) GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;D组(n=10)自体神经桥接组.损伤各组12周时应用神经电生理及甲苯胺蓝染色和透射电镜观测神经再生情况,辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术用于脊髓前角运动神经元再生评价.结果 12周时再生神经运动传导速度检测、甲苯胺蓝染色轴突形态计量学分析、透射电镜超微结构观察以及脊髓前角运动神经元再生评价结果提示:C组优于A、B组,而与D组相比无明显差异.结论雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足,而可能达到与自体神经移植相似的效果.     

外源性神经节苷脂GM1对面神经再生的影响

目的：探讨神经节苷脂GM1对面神经损伤再生的影响。方法：建立兔面神经损伤后再生的实验模型，外源性给予GM1，分别在术后2，4，8周观察面神经的组织学及超微结构变化。结果：实验组术后2，4周光镜下可见大量有髓神经纤维排列整齐，髓鞘厚度增加，雪旺氏细胞多见。术后8周时实验组与对照组无明显差异。术后2，4周时，电镜观察实验组再生神经纤维增多，轴索成熟，可见雪旺氏细胞胞体完整。术后8周时实验组与对照组无明显差异。结论：神经节苷脂GM1对兔面神经损伤的早期康复有明显促进作用。     

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的:研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后,再生神经的形态学变化.方法:光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化,免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析.结果:实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维,两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异;两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异.结论:脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用.     

血管束植入神经移植段修复周围神经缺损

目的：观察血管束植入神经移植段重移植神经璺血供的再血管化过程以及与神经再生的关系。方法：用血管束植入和不入血管束神经移植段修复兔２５ｍｍ坐骨神经缺损,采用血管造影,墨汁灌注,电生理检测,光镜,航向电镜,图像分析观察血管束植入后,神经移植段的再血管化过程,神经纤维再生及功能恢复。结果：血管束植入术后３d即有再生血管长入神 经段外膜及束间,３ｗｋ移植神经段再血管化过程完成。而不植入血管束移植神经段再血管     

血管化同种异体神经复合体桥接修复兔坐骨神经缺损的实验研究

目的 探讨将经化学去细胞处理的同种异体神经复合体预血管化处理后移植修复兔长段坐骨神经缺损的可行性,以及早期血管化移植体对神经功能恢复的影响.方法 将雪旺细胞与血管内皮细胞联合培养后种植于经化学去细胞处理的同种异体神经段中,形成预血管化的神经复合体并将其用于修复兔坐骨神经缺损（实验组）,对照组移植体中单纯种植雪旺细胞无血管内皮细胞.术后4、8、16周对2组动物行肌电图检查,观察神经功能恢复情况,然后,手术取材,应用光镜、电镜观察坐骨神经再生和髓鞘形成情况,应用图像分析系统对髓鞘厚度以及有髓神经纤维轴突的直径、数目进行量化分析.结果 大体观察,术后4、8、16周2组动物全身及局部均未出现明显的排斥反应.无论是在足部溃疡恢复,还是在神经传导速度、再生神经纤维的数量、超微结构的恢复方面实验组均优于对照组.结论 应用预血管化的组织工程人工神经移植体修复兔坐骨神经缺损,能有效地促进受损神经的功能恢复.     

生物粘接端端缝合法修复大鼠周围神经损伤的形态学研究

目的用生物粘接端端缝合法修复大鼠周围神经损伤后,研究再生神经的形态学变化.方法选用60只Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组.在手术显微镜下,实验组用生物粘接端端缝合法修复坐骨神经损伤,对照组则采用单纯端端缝合法修复,术后1至6周分期处死取材,用光镜、电镜对比观察神经纤维再生的形态学改变.结果实验组在修复初期雪旺(Schwann)细胞增生明显,不同时间段的神经纤维再生速度、数目、髓鞘厚度明显优于对照组.结论生物粘接端端缝合法,在修复周围神经损伤中可刺激雪旺细胞增殖,缩短Bungner带的形成时间,对神经再生有明显的促进作用.     

大鼠坐骨神经缺损后不同时间修复的效果比较

目的 比较大鼠坐骨神经缺损不同延迟时间后修复的再生效果.方法 大鼠右侧坐骨神经缺损分别预变性0、3、7、14和21 d后,用对侧坐骨神经桥接,术后6周分别行快蓝(Fast blue)逆行荧光示踪、胫前肌湿重称量、再生轴突数目、直径及髓鞘厚度等检测.结果 预变性7 d组的再生轴突数目多、直径大、髓鞘厚,明显优于其他组;3 d组与0 d组无明显差别,14 d和21 d组相对较差.结论 不同延迟时间后修复神经缺损可以对神经再生效果产生不同的影响,以7 d时再生效果最佳.