缺氧对心肌细胞内游离钙离子浓度和SERCA2表达的影响及薯蓣皂甙的干预作用

目的　研究缺氧对心肌细胞内游离钙离子浓度和肌浆网上的钙离子ATP酶(SERCA2 )的表达的影响及薯蓣皂甙的干预作用。方法　在离体心肌细胞培养基础上制备心肌细胞缺氧模型 ,随机分为 4组 :正常对照组 ,缺氧损伤组 ,薯蓣皂甙组 ,钙拮抗剂组。分别测定各组心肌细胞内游离钙离子的浓度 (FURA2 /AM荧光探针法 )和SERCA2的含量 (Westernblot法 )。结果　缺氧损伤组心肌细胞内游离钙离子的浓度较正常对照组明显增加 ,SERCA2的表达明显减弱 (P均 <0 0 1 ) ;薯蓣皂甙组和钙拮抗剂组心肌细胞内游离钙离子的浓度较缺氧损伤组明显降低 (P <0 0 1 ) ,SERCA2的表达明显增强 (P <0 0 5 )。结论　薯蓣皂甙通过增强肌浆网上钙泵SERCA2的表达减轻缺氧心肌细胞的钙超负荷 ,它对缺氧心肌细胞具有保护作用 ,其作用与钙拮抗剂类似。     

心肌细胞肌浆网Ca2+-ATPase及其相关Ca2+调节蛋白

充血性心力衰竭是大多数器质性心脏病的晚期表现 ,是 65岁以上老年人最常见的住院原因 ,其 5年生存率与恶性肿瘤相当。尽管近 10～ 15年 ,心力衰竭的治疗有了较大发展 ,但仍不能很好地解决心肌收缩和 /或舒张功能障碍这一根本问题 ,于是学者们开始关注心肌钙离子调控蛋白 ,因为心肌细胞胞浆中Ca2 是心肌舒缩活动的中心环节。在细胞内Ca2 的调节中 ,肌浆网Ca2 ATPase (sarcoplasmicreticulumCa2 ATPase ,SERCA2a)起主要作用 ,它的活性和功能直接影响心肌舒缩功能。本文对SERCA2a及与其有密切关系的Ca2 调节蛋白 :受磷蛋…     

肌浆网钙ATP酶高表达对大鼠心肌梗死的影响

目的心肌梗死后心力衰竭主要表现为肌浆网钙释放减少和舒张期细胞浆钙浓度的增加。心肌细胞的肌浆网钙ATP酶(SERCA)起重要的作用。心肌梗死后常伴有SERCA表达的下降。我们通过转基因方法增加SERCA的表达,研究其对心梗后的心肌功能、左心室重构和心律失常的作用。方法将月龄匹配的过表达37%心肌SERCA2a蛋白质的转基因大鼠(TG)和对照野生型(WT)大鼠,通过结扎左冠状动脉诱发心肌梗死。采用动态心电图和心脏超声对心梗后的心律失常和左心室功能进行测定。结果心肌梗死后24hTG的死亡率高于WT(71%对35%,P<0.001),并伴有较高的室性心律失常发生率,后者可被利多卡因所预防。1个月后TG心肌舒张功能明显较WT改善,左心室重构减少,但左室收缩功能无明显改变。结论转基因高表达SERCA2a可以改善心梗后1个月的心肌舒张功能、减少重构,但同时伴有心梗急性期死亡率和心律失常发生率的增高。     

氟桂利嗪阻滞小鼠皮质神经元胞浆钙离子内流的实验研究

目的　研究缺血状态下神经元胞浆内游离钙离子的变化及氟桂利嗪阻滞钙离子内流的作用。方法　用Flu 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的小鼠皮质神经元标记物 ,应用激光共聚焦技术检测缺血条件和加用氟桂利嗪后细胞内荧光强度 (△FI)的变化。结果　给予缺血处理 10min后 ,神经元胞浆内钙离子△FI明显升高(17.5 2± 3.16 ) ;经氟桂利嗪预处理后 ,可以明显抑制钙离子的△FI(9.5 5± 2 .10 ) ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 1) ,氟桂利嗪对无钙培养液缺血神经元胞浆内的钙离子浓度亦有抑制作用。结论　缺血状态下 ,神经元内钙离子明显升高 ,氟桂利嗪抑制胞浆内钙离子的升高 ,除通过阻断胞膜的电压敏感性钙通道外 ,可能还影响细胞内钙池的钙释放功能。     

肌浆网钙ATP酶高表达对大鼠心肌梗死的影响

目的:心肌梗死后心力衰竭主要表现为肌浆网钙释放减少和舒张期细胞浆钙浓度的增加.心肌细胞的肌浆网钙ATP酶(SERCA)起重要的作用.心肌梗死后常伴有SERCA表达的下降.我们通过转基因方法增加SERCA的表达,研究其对心梗后的心肌功能、左心室重构和心律失常的作用. 方法:将月龄匹配的过表达37%心肌SERCA2a蛋白质的转基因大鼠(TG)和对照野生型(WT)大鼠,通过结扎左冠状动脉诱发心肌梗死.采用动态心电图和心脏超声对心梗后的心律失常和左心室功能进行测定. 结果:心肌梗死后24 h TG的死亡率高于WT(71%对35%,P＜0.001),并伴有较高的室性心律失常发生率,后者可被利多卡因所预防.1个月后TG心肌舒张功能明显较WT改善,左心室重构减少,但左室收缩功能无明显改变. 结论:转基因高表达SERCA2a可以改善心梗后1个月的心肌舒张功能、减少重构,但同时伴有心梗急性期死亡率和心律失常发生率的增高.     

Ca^2＋／CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ对神经肽Y诱导心肌细胞内钙重分布的作用

背景神经肽Y(NPY)是中枢神经及末梢神经重要的调节剂,作用广泛,包括调节心脏及血管正常的生理活动,并参与许多心血管疾病的发生发展.研究表明,急性的NPY 刺激可促进心肌细胞钙活动,对心肌产生正性肌力作用.而持续NPY刺激对心肌钙活动的影响及其机制,目前还未见报道.目的 观察NPY刺激对大鼠心肌细胞胞浆钙和肌浆网(SR)内钙分布的影响,以及Ca2 /CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在其中的作用.方法 用100 nmol/L NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24 h,CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93干预.应用荧光染料Fluo-4 AM负载胞浆钙;Fluo-5N AM负载肌浆网内游离钙离子,所有钙影像均由激光共聚焦显微镜记录.应用Western-blot法和免疫荧光法检测Ca2 -ATP酶(SERCA2a)和ryanodine受体(RyR2)两种蛋白的分布及蛋白量的变化.结果 经100 nmol/L NPY刺激24 h后,与对照组相比,心肌细胞胞浆游离钙浓度明显升高(65.3±6.2 VS50.7±4.1,P<0.05),心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组(67.6±8.3 VS 85.5±6.0,P<0.05),而KN-93可抑制上述效应;NPY可增加SERCA2a和RyR2的蛋白表达(SERCA2a:2.4±0.7 VS对照组:1.4±0.3;RyRz:2.3±0.4 vs对照组:1.2士0.4),KN-93可抑制上述作用.结论 CaMK Ⅱ通过影响SERCA2a和RyR2,调控SR的钙转运,进而介导NPY刺激下的细胞内钙重分布效应.     

黄芩苷对白色念珠菌细胞周期和钙镁ATP酶活力的影响

运用流式细胞术、分光光度法,检测黄芩苷对白色念珠菌细胞周期和钙镁ATP酶（Ca^2＋-Mg^2＋ AT-Pase）活力的影响。结果：0．25、0．5、1mg/ml黄芩苷浓度组与无黄芩苷浓度组比较,白色念珠菌处于G0／G1期的细胞数比例增加,细胞增殖指数（PI）下降（P均〈0．01）,Ca^2＋-Mg^2＋ATPase活力降低（P〈0．05）。黄芩苷作用时间对Ca^2＋-Mg^2＋ATPase活力没有明显影响（P〉0．05）。认为黄芩苷具有明显的抗白色念珠菌作用,能抑制白色念珠菌增殖,降低白色念珠菌Ca^2＋Mg^2＋ ATPase活力。     

疟原虫青蒿素耐药分子机制探索

疟疾是严重威胁人类健康的主要传染病之一。尽管以青蒿素为基础的青蒿素联合疗法(ACT)能有效控制疟疾扩散及降低疟疾死亡率,但近年来不断发现的恶性疟原虫对青蒿素和ACT的耐药性引起了广泛的关注。通过回顾相关文献,本文综述了恶性疟原虫多药耐药性基因(Pfmdr1)、恶性疟原虫氯喹耐药性转运蛋白基因(Pfcrt)、恶性疟原虫钙ATP蛋白6基因(Pfatp6)和恶性疟原虫K13基因(Pfkelch13)及其他青蒿素耐药性机制的研究,为进一步探索疟原虫青蒿素耐药分子机制和监控耐药疟原虫的扩散提供参考。     

青蒿素与疟色素的相互作用

青蒿素是由中草药提取的一种倍半萜内过氧化物,有抗疟原虫作用。疟原虫在红细胞内消耗血红蛋白释出血红素而形成疟色素。由于血红素可催化青蒿素及其衍生物的分     

地尔硫对自发性高血压大鼠左心室舒张功能的影响及其可能机制

目的:观察地尔硫对自发性高血压大鼠(SHR)左心室舒张功能的影响,并探讨这种影响是否与肌浆网钙ATP酶(SERCA2)蛋白的表达、活性及心肌纤维化相关。方法:将22只12周龄SHR随机分为地尔硫组(25mg.kg-1.d-1,SHR-D),苯那普利组(10mg.kg-1.d-1,SHR-B)和SHR空白对照组(蒸馏水灌胃,SHR-C);另设WKY大鼠7只为正常对照组(WKY)。灌胃法给药18周后测定左心室心功能,计算左心室/体重比(LVW/BW),Western印迹杂交测定左心室心肌SER-CA2的表达,无机磷比色法检测心肌肌浆网Ca2+ATPase活性。饱和苦味酸天狼星红染色分析胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积(PVCA),估计心肌纤维化程度。结果:SHR-D组和SHR-B组的LVEDP显著低于SHR-C组,SHR-D组和SHR-B组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与SHR-C组相比,SHR-D组与SHR-B组的-dp/dtmax/MAP增加。地尔硫和苯那普利治疗明显增加SERCA2蛋白的表达(SHR-D:0.38±0.07,SHR-B:0.42±0.06,SHR-C:0.47±0.07)与活性(SHR-D:8.2±0.07,SHR-B:10.5±1.95,SHR-C:6.3±0.75)。SHR-D组左心室内膜及心肌小动脉周围的胶原减少,其作用类似于SHR-B组。结论:地尔硫可改善SHR左心室舒张功能,其机制可能与增加SERCA2蛋白的表达及活性,抑制心肌纤维化有关。     

6 Endoscopy

Laparoscopy under sedation is a safe and a well tolerated procedure which can be readily performed in the endoscopy suite. In the investigation of patients with chronic liver disease it is more accurate than histology alone in staging the severity of disease and adds valuable prognostic information. In patients with focal liver disease it has a high degree of sensitivity and this is likely to increase with technological advances, such as sonolaparoscopy. We strongly believe that in many countries diagnostic laparoscopy is an under utilized diagnostic tool which deserves wider incorporation into clinical practice and training programmes.     

Chapter 6

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