结构蛋白及血管形成因子在体表海绵状静脉畸形中的表达及意义

背景：体表海绵状静脉畸形，又称为海绵状血管瘤，是一种较常见而难治的血管疾病，目前对其发病机制了解甚少。目的：研究结构蛋白及血管形成因子在体表海绵状静脉畸形(caverilous venous malformation。CVM)中的表达及意义。设计：研究CVM病理标本中的结构蛋白和血管形成因子的表达。用正常中型静脉和小静脉标本作为对照，半定量分析结果。地点和对象：解放军第二军医大学附属长海医院：1996／2000间手术切除的CVM病理标本25例，正常中型静脉和小静脉标本各12例。干预：采用Envision法免疫组化染色观察CVM、正常中型静脉和小静脉标本中的Ⅳ-型胶原、纤维连接蛋白(Fn)、层粘连蛋白(Ln)等结构蛋白及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)等血管形成因子的表达。主要观察指标：观察Ⅳ-型胶原、Fn、Ln、VEGF、Ang-1在各个标本中的表达强度，分为“-、 、 ”3个等级。结果：Ⅳ型胶原、Fn和Ln在海绵状静脉畸形与在中小静脉中的分布类似，但表达量明显少。畸形组织和小静脉的VEGF表达明显强于中型静脉，小静脉的Ang-1表达明显强于静脉畸形和中型静脉。结论：结构蛋白及血管形成因子表达变化可能是海绵状静脉畸形形成发展的重要因素。Ang-1表达减少可能参与海绵状静脉畸形的血管塑型障碍的发生。     

培养人眼小梁细胞水通道蛋白1与细胞外基质的相关实验研究

目的探讨人眼小梁细胞上水通道蛋白1（aquaporin-1,AQP1）与细胞外基质中纤维连接蛋白（fibronectin,FN）、层粘连蛋白（laminin,LN）、胶原蛋白Ⅰ（collagen Ⅰ,CAI）及胶原蛋白Ⅳ（collagen Ⅳ,CAIV）的相关关系。方法培养的人眼小梁细胞分别给予地塞米松（dexamethasone,DEX）0.4μg/ml（B组）、DEX0.4μg/ml＋AQP1反义寡核苷酸（antisense oligonucle-otides,AS-ODN）0.625μg/ml（C组）、DEX 0.4μg/ml＋AQP1AS-ODN 1.25μg/ml（D组）、DEX 0.4μg/ml＋AQP1AS-ODN 2.5μg/ml（E组）、DEX 0.4μg/ml＋AQP1AS-ODN 5μg/ml（F组）处理,以不加药组为对照组（A组）。5天后,采用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对FN、LN、CAI及CAIV的表达进行检测。结果 0.4μg/ml DEX能刺激培养的人眼小梁细胞FN、LN及CAIV表达明显增强,CAI表达减少,与A组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。在C、D、E、F组,AQP1AS-ODN可以降低由0.4μg/ml DEX引起的FN、LN、CAIV表达增强。同样的,增加由0.4μg/ml DEX引起的CAI表达减少。结论人眼小梁细胞AQP1与细胞外基质中FN、LN、CAI及CAIV关系密切。AQP1的正常表达是细胞外基质适量表达的前提。     

血管生长相关因子在脑血管畸形中的差异性表达

背景：脑血管畸形是在青壮年人群中造成出血性脑卒中的常见病因,畸形血管破裂出血可引发严重的神经功能障碍。脑血管畸形的形成及发病原理尚不明确。现代分子生物学的研究表明血管生长相关因子在脑血管畸形中可能存在异常表达。目的：评价血管生长相关因子在脑畸形血管中的表达差异,探讨血管生长相关因子与脑畸形血管形成的关系。方法：选择脑血管畸形患者与颅内出血开颅治疗患者各50例,通过免疫组织化学染色方法检测脑血管畸形标本和开颅治疗患者颞浅动脉标本中血管因子的表达差异。结果与结论：正常颞浅动脉中血管生长相关因子（血管内皮生长因子和转化生长因子α）几乎不表达,畸形血管中两者高表达（P〈0.05）。结果证实,与正常血管相比,脑血管畸形患者血管内皮生长因子和转化生长因子α的表达存在明显差异,脑畸形血管患者血管组织可表达更多的血管内皮生长因子和转化生长因子α。     

肾间质纤维化大鼠肾脏细胞外基质成分变化与益气活血治法的影响

目的:观察益气活血法中药制剂对肾间质纤维化大鼠肾组织细胞外基质成分纤维连接蛋白、层粘连蛋白和胶原蛋白Ⅳ表达的影响,分析其抗肾间质纤维化的机制.方法:实验于2007-07/10在首都医科大学解剖与组织胚胎学系实验室完成.①材料:Wister雄性大鼠30只随机分为模型组,中药大、中、小剂量组,西药组和假手术组6组,每组5只.益气活血法中药生黄芪15 g,当归10g,赤白芍10g,丹参30g,黄芩10 g,车前草15 g,牛膝15 g等经水提醇沉得4.4 kg/L生药提取液.②方法:假手术组手术但不结扎输尿管,其他5组制备单侧输尿管梗阻致肾小管间质纤维化模型.手术前2 d开始灌胃给药:中药大、中、小剂量组分别给予益气活血中药提取液0.072,0.036,0.018 mL/(kg·d),给予福辛普利钠10 mg/(kg·d),模型组及假于术组给予相同体积的生理盐水,1次/d,连续2周.③评估:术后14 d处死大鼠,观察梗阻肾组织病理改变,免疫组化法检测肾组织纤维连接蛋白、层粘连蛋白和胶原蛋白Ⅳ的表达,通过医学病理图像分析系统对其积分吸光度进行统计学分析.结果:30只大鼠全部进入结果分析.①模型组层粘连蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅳ的积分吸光度高于假手术组(P<0.05).②中药小剂量组胶原蛋白Ⅳ的积分吸光度低于模型组(P<0.05),层粘连蛋白和纤维连接蛋白积分吸光度与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05).③中药大、中剂量组和西药组层粘连蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅳ的积分吸光度均低于模型组(P<0.05),中药大、中剂量组胶原蛋白Ⅳ的积分吸光度低于西药组(P<0.05).结论:益气活血法可以通过下调层粘连蛋白,纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅳ在肾组织的表达,从而减少细胞外基质的过度聚集,抑制或延缓肾间质纤维化.     

早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达

背景:基质蛋白是构成血管壁的必不可少的重要成分,为血管壁的完整性和血管壁细胞发挥生理功能提供了必要的框架,并参与对细胞和平滑肌的调控。目的:构建早期动脉瘤模型大鼠评价基质结构蛋白在形成过程中的表达差异性。方法:将28只健康雄性SD大鼠随机分为2组:对照组(n=8)和模型组(n=20)。模型组大鼠以结扎左侧颈总动脉和右侧肾肾动脉致高血压方法建立脑动脉瘤模型;对照组大鼠仅暴露左侧颈动脉分叉和双侧颈动脉。模型组大鼠分别于造模后15,30 d处死,取大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分组织进行免疫组化染色,分析纤维连接蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与结论:与对照组相比,造模后30 d时模型组大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分中纤维连接蛋白表达水平差异无显著性意义(P>0.05),而Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减少(P<0.05)。提示大鼠早期脑动脉瘤形成过程中的结构蛋白表达存在差异性并发生动态变化,血管壁基质结构蛋白降解是动脉瘤形成主要机制之一。     

结构蛋白及血管形成因子在体表海绵状静脉畸形中的表达及意义

背景体表海绵状静脉畸形,又称为海绵状血管瘤,是一种较常见而难治的血管疾病,目前对其发病机制了解甚少.目的研究结构蛋白及血管形成因子在体表海绵状静脉畸形 (cavernous venous malformation,CVM)中的表达及意义.设计研究 CVM病理标本中的结构蛋白和血管形成因子的表达,用正常中型静脉和小静脉标本作为对照,半定量分析结果.地点和对象解放军第二军医大学附属长海医院 1996/2000间手术切除的 CVM病理标本 25例,正常中型静脉和小静脉标本各 12例.干预采用 Envision法免疫组化染色观察 CVM、正常中型静脉和小静脉标本中的Ⅳ-型胶原、纤维连接蛋白(Fn)、层粘连蛋白(Ln)等结构蛋白及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)等血管形成因子的表达.主要观察指标观察Ⅳ-型胶原、 Fn、 Ln、 VEGF、 Ang-1在各个标本中的表达强度,分为"-、+、" 3个等级.结果Ⅳ型胶原、 Fn和 Ln在海绵状静脉畸形与在中小静脉中的分布类似,但表达量明显少.畸形组织和小静脉的 VEGF表达明显强于中型静脉,小静脉的 Ang-1表达明显强于静脉畸形和中型静脉.结论结构蛋白及血管形成因子表达变化可能是海绵状静脉畸形形成发展的重要因素.Ang-1表达减少可能参与海绵状静脉畸形的血管塑型障碍的发生.     

层粘连蛋白在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与预后的相关性

目的研究层粘连蛋白(LN)在卵巢上皮性肿瘤中的表达情况及其与卵巢癌临床特征和预后的相关性。方法选取2001年1月至2006年12月在哈尔滨医科大学附属第一医院治疗的正常卵巢20例、良性卵巢肿瘤30例、交界性卵巢肿瘤30例、恶性卵巢肿瘤60例,采用免疫组织化学方法检测组织中LN的表达情况。结果在正常卵巢、良性、交界性与恶性4组之间,LN的表达阳性程度比较,差异有统计学意义(Hc=24.127,P<0.01);基底膜表达的完整性分级比较,差异亦有统计学意义(Hc=53.263,P<0.01)。LN在癌巢基底膜表达的完整性与临床分期、组织分化程度、淋巴结转移、腹水形成及术后生存时间有关:临床分期晚、组织学分化差、淋巴结转移、腹水形成及术后生存时间短的肿瘤,比临床分期早、组织学分化好、无淋巴结转移、无腹水及术后生存时间长的肿瘤LN表达明显减少甚至缺失(P均<0.01);而恶性肿瘤不同组织学分型间LN的表达无统计学差异(P>0.05)。结论 LN作为细胞黏附相关因子与恶性肿瘤的浸润和转移有关,癌巢周围层粘连蛋白的缺失可作为判断肿瘤恶性程度和预后的指标,可望成为判断卵巢癌预后的独立性因素。     

血清粘附蛋白测定在肾脏疾病中的意义

为探讨血清粘附蛋白在肾脏疾病中变化的意义。采用一步夹心固相酶免疫法检测血清Ⅳ型胶原水平。用放射免疫法测定血清层粘连蛋白和透明质酸水平。结果为血清Ⅳ型胶原、层粘连蛋白和透明质酸水平在肾脏疾病时均较正常对照组有不同程度的增高，且血清Ⅳ型胶原和透明质酸水平与肾脏疾病进展及硬化程度密切相关。结论为血清粘附蛋白代谢的变化在肾脏疾病中起一定作用，并可作为临床早期监测和判断肾病严重程度的一项辅助指标。     

肝纤维化指标在慢性丙型肝炎患者血清检测中的意义

众所周知,丙型肝炎(下称丙肝)是一种经肠道外传播的肝炎病变,50%～70%的人感染丙肝后成为慢性肝炎.慢性丙肝的发病机制是:丙肝感染引发机体中各种细胞免疫和免疫分子的改变,以免疫病理损害为主[1].     

骨组织工程细胞外基质材料

本文阐述了理想骨组织工程基质材料的研制要求,介绍了几种可降解聚合物在骨组织工程中的应用现状,并重点介绍了聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物的优缺点和相应的改进方法。     

Efficacy of thermoresponsive,photocrosslinkable hydrogels derived from decellularized tendon and cartilage extracellular matrix for cartilage tissue engineering

Tissue engineering using adult mesenchymal stem cells (MSCs), a promising approach for cartilage repair, is highly dependent on the nature of the matrix scaffold. Thermoresponsive, photocrosslinkable hydrogels were fabricated by functionalizing pepsin‐soluble decellularized tendon and cartilage extracellular matrices (ECM) with methacrylate groups. Methacrylated gelatin hydrogels served as controls. When seeded with human bone marrow MSCs and cultured in chondrogenic medium, methacrylated ECM hydrogels experienced less cell‐mediated contraction, as compared against non‐methacrylated ECM hydrogels. However, methacrylation slowed or diminished chondrogenic differentiation of seeded MSCs, as determined through analyses of gene expression, biochemical composition and histology. In particular, methacrylated cartilage hydrogels supported minimal due to chondrogenesis over 42 weeks, as hydrogel disintegration beginning at day 14 presumably compromised cell–matrix interactions. As compared against methacrylated gelatin hydrogels, MSCs cultured in non‐methacrylated ECM hydrogels exhibited comparable expression of chondrogenic genes (Sox9, Aggrecan and collagen type II) but increased collagen type I expression. Non‐methacrylated cartilage hydrogels did not promote chondrogenesis to a greater extent than either non‐methacrylated or methacrylated tendon hydrogels. Whereas methacrylated gelatin hydrogels supported relatively homogeneous increases in proteoglycan and collagen type II deposition throughout the construct over 42 days, ECM hydrogels possessed greater heterogeneity of staining intensity and construct morphology. These results do not support the utility of pepsin‐solubilized cartilage and tendon hydrogels for cartilage tissue engineering over methacrylated gelatin hydrogels. Methacrylation of tendon and cartilage ECM hydrogels permits thermal‐ and light‐induced polymerization but compromises chondrogenic differentiation of seeded MSCs.     

椎管内硬膜外海绵状血管瘤的MRI表现及鉴别诊断

目的探讨椎管内硬膜外海绵状血管瘤的MRI表现及鉴别诊断价值。方法对6例椎管内硬膜外海绵状血管瘤患者均行MRI检查。行快速自旋回波序列矢状位T1加权像（T1WI）TE/TR 12/630,T2加权像（T2WI）TE/TR 100/3 000,横轴位（T2WI）TE/TR 100/2 800,5例行冠状位（T2WI）TE/TR 100/2 800。6例均行增强扫描,使用钆喷替酸葡甲胺0.1 mmol.kg-1经肘静脉注射,注完药后即行横轴位、冠状位和矢状位T1WI（参数同T1WI平扫）。并与硬膜外其他病变进行鉴别。结果 6例患者中,肿瘤位于胸段椎管硬膜外5例,颈胸段1例,均沿脊髓长轴生长。其中脊髓背侧2例,可见环绕脊髓生长,呈钳状;左后侧1例,右后侧3例,沿相邻椎间孔向外生长;梭形4例,长椭圆形2例,两端尖锐,呈鼠尾状或毛笔尖状。6例肿瘤信号强度在T1WI呈等高或稍高信号。T2WI呈均匀高信号5例,T2WI呈不均匀稍高信号1例。结论椎管内硬膜外海绵状血管瘤是较少见的良性病变,并有其特征性表现。MRI是目前最为可靠的术前检查手段,但最终确诊仍须结合临床及病理检查。     

Fetal subcutaneous cells have potential for autologous tissue engineering

Major congenital malformations affect up to 3% of newborns. Infants with prenatally diagnosed soft tissue defects should benefit from having autologous tissue readily available for surgical implantation in the perinatal period. In this study, we investigate fetal subcutaneous cells as cellular source for tissue engineering. Fetal subcutaneous biopsies were collected from elective terminations at gestational Week 20–21. Cells were isolated, expanded, and characterized in vitro. To determine cell coverage, localization, viability, and proliferation in different constructs, the cells were seeded onto a matrix (small intestine submucosa) or in collagen gel with or without poly(ε‐caprolactone) mesh and were kept in culture for up to 8 weeks before analysis. Angiogenesis was analysed through a tube‐forming assay. Fetal subcutaneous cells could be expanded until 43 ± 3 population doublings, expressed mesenchymal markers, and readily differentiate into adipogenic and osteogenic lineages. The cells showed low adherence to small intestine submucosa and did not migrate deep into the matrix. However, in collagen gels, the cells migrated into the gel and proliferated with sustained viability for up to 8 weeks. The cells in the matrices expressed Ki67, CD73, and α‐smooth muscle actin but not cytokeratin or CD31. Fetal cells derived from subcutaneous tissue demonstrated favourable characteristics for preparation of autologous tissue transplants before birth. Our study supports the theory that cells could be obtained from the fetus during pregnancy for tissue engineering purposes after birth. In a future clinical situation, autologous transplants could be used for reconstructive surgery in severe congenital malformations.     

软组织海绵状血管瘤的彩色多普勒超声诊断分析

目的：探讨二维及彩色多普勒显像在软组织海绵状血管瘤诊断中的应用价值。方法：对15例软组织海绵状血管瘤行二维及彩色多普勒血流检查分析。结果：软组织海绵状血管瘤二维表现为形态多样的管状、分格状结构，相互交通。内可见强光斑回声。彩色多普勒显像示大部分有丰富血流信号，呈缓慢连续性。部分内无血流信号的挤压周围软组织后可见血流信号充盈。结论：二维及彩色多普勒显像对软组织海绵状血管瘤诊断具有重要的临床价值。     

猪小肠与犬食管脱细胞基质（ECM）构建组织工程化人工食管的比较研究

背景骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有多向分化潜能,来源广泛、分离方便、增殖迅速,是目前公认的组织工程最佳种子细胞;脱细胞基质膜（ECM）有良好的组织相容性,充足的孔隙率,利于种子细胞的附着、增殖,并诱导细胞沿“模具”的性状生长、分化,是组织工程的理想支架材料。目的为比较研究骨髓间充质干细胞在体外在不同的支架材料上复合生长情况,分别与猪小肠脱细胞基质（IECM）;犬自体食管脱细胞基质（EECM）和人工补片（ePTFE）做对比研究。方法使用物理方法和化学方法制备ECM,扫描电镜观察其表面结构。体外提取分离培养犬骨髓间充质干细胞,做流式细胞学鉴定后,取第三代BMSCs分别与IECM、EECM、ePTFE复合培养,HE染色和扫描电镜观察。结果 ECM为白色菲薄,半透明的膜状物,扫描电镜可见其清晰的纤维网状结构,具有良好的立体三维空间结构,并且之间相互连通。BMSCs经流式细胞学鉴定CD29、CD44、CD90、CD105表达率几乎100%,而CD34、CD45几乎不表达。BMSCs与载体支架复合培养15d后,做HE染色切片观察,细胞与IECM、EECM复合生长率良好,与ePTFE较差。结论复合培养后的IECM组与EECM组生物性状较为接近,同时IECM的来源更加广泛,是组织工程化人工食管支架材料的更好选择。     

The effects of fibrin and fibrin‐agarose on the extracellular matrix profile of bioengineered oral mucosa

Several studies have developed efficient oral mucosa constructs using different types of scaffold. However, the changes in the morphology and gene and protein expression profile that could occur in these artificial constructs remain unknown. This study compared the histology and expression of several extracellular matrix molecules in human artificial oral mucosa developed using two different types of scaffolds: fibrin and fibrin‐agarose. To that end, bioengineered oral mucosa stromas were constructed from biopsy samples of human oral mucosa and the substitute generated was analyzed at different periods of time in culture. Histological analysis was carried out by light and transmission electron microscopy and the expression of collagen types I, III, and VI, the proteoglycans decorin and biglycan, and the different chains of laminin, were assessed by immunoperoxidase technique. This study found that fibrin scaffolds accelerated fibroblast growth and remodeling of the scaffold, thus enhancing collagen fibrillogenesis. In the fibrin‐agarose scaffold, the morphology and organization of the fibroblasts did not change during the culture period. All extracellular matrix proteins analyzed were expressed in both scaffolds. However, in fibrin scaffolds, these proteins were widely distributed and replaced the scaffold during the follow‐up period. These results show that the substitutes generated showed histological and molecular similarities with native human oral mucosa stroma. In addition, it was observed that the nature of the biomaterial influenced the behaviour of the oral stromal fibroblasts, thereby modulating their growth, protein synthesis, and collagen fibrillogenesis. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片的构建

背景：研究发现充足的血供是骨组织修复与再生必不可少的条件。
　　目的：应用血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞构建出复合细胞膜片。
　　方法：体外分离培养SD大鼠血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞,将两种细胞直接共培养,经成膜诱导10 d后构建出复合细胞膜片并对获得的膜片进行大体、倒置显微镜及苏木精-伊红染色观察。将血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞分别应用荧光标记液标记后,观察膜片诱导过程中两种细胞的分布及交流情况。对复合细胞膜片进行碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色,观察其成骨分化能力。
　　结果与结论：血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞直接共培养成膜诱导10 d后可成功获得复合细胞膜片,两种细胞在成膜诱导过程中存在细胞间接触。获得的膜片由多层细胞及细胞外基质构成,经碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色结果证实该膜片具有较强的成骨分化能力,为进一步将血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片应用于骨缺损的修复提供了条件。