杆状病毒群的145苏氨酸/蛋氨酸变异体产生的GPⅠbα配体结合区均与vWF结合,vWF结合与亮氨酸多重复区有关

在残基252-287之间,血小板膜糖蛋白(GP)Ib-Ⅸ-Ⅴ的GPⅠba受体复合物携带着血管性假性血友病因子(vWF)结合位点。这个位置氨基末端的亮氨酸多重复区(leucine rich repeats,LRR)包含一个苏氨酸145蛋氨酸(Thr145Met)多态性现象,与人类血小板抗原(HPA)-2系统相关。为了研究这个突变的影     

血管性血友病因子A1分子在大肠杆菌中的可溶性表达及功能鉴定

背景：血管性血友病因子A1通过介导随流血小板在受损血管部位的黏附在初始止血中发挥至关重要的作用,但重组A1在原核中多为包涵体表达,不利于纯化及体外的功能研究。目的：在大肠杆菌中稳定高效表达可溶性野生型血管性血友病因子A1以及突变型血管性血友病因子G1324S,并研究其生物学功能。方法：将血管性血友病因子A1（野生型）、血管性血友病因子G1324S（功能失去型突变体）重组质粒分别转化到感受态细胞DH5α中,筛选提取质粒。将提取的质粒分别转化到大肠杆菌（E.coli）BL21、E.coli M15中,筛选挑单克隆菌于LB培养基,扩大培养。比较溶菌酶破碎法和超声波破碎法两种不同的裂菌方法,使目的蛋白血管性血友病因子A1的可溶性表达,经过Ni柱亲和层析纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的血管性血友病因子A1、血管性血友病因子G1324S纯度和免疫学活性;采用流动腔实验系统分析在不同流体剪应力条件下,血小板在两种目的蛋白上的黏附能力。结果与结论：每100 mL上清液可分别纯化得到5.77 mg血管性血友病因子A1,6.83 mg血管性血友病因子G1324S纯品,并具有较高的纯度和免疫学活性。流动腔结果显示,对每个剪切应力下铺设不同A1分子的底板进行两两比较,随着流体剪应力从0.1 Pa提高1 Pa,G1324S突变组所黏附细胞数下降的幅度（46.8%）要远高于野生型组（20.5%）,说明突变后的A1分子的功能有所减弱。结果表明纯化的蛋白介导血小板黏附的能力与临床特征一致,野生型血管性血友病因子的结合活性明显高于突变型。     

酶联免疫法测定vWF瑞斯托霉素辅因子

血管性血友病（von Willebrand disease，vWD）是一种最常见的遗传性出血性疾病，是由于血浆中血管性血友病因子（vWF）质或量的异常所致。vWF在高剪切力情况下，通过其A1区和A3区分别与血小板膜糖蛋白（GP）Ib／Ⅸ／Ⅴ复合物和血管内皮下胶原结合，介导血小板黏附过程。瑞斯托霉素辅因子活性（vWF：Rcof）测定是检测vWF的功能性试验，目前主要运用智能血小板凝集仪测定，我们建立了一种快速、简便的检测vWF：Rcof的ELISA实验方法，     

血小板膜糖蛋白Ib／IX／V复合物表达变化：健康者与2型糖尿病患者的样本分析

背景：研究已证实血小板活化参与了糖尿病血管病变的发生发展。血小板膜糖蛋白Ib／IX／V复合物是血小板膜上主要的糖蛋白分子之一，是血管性血友病因子和凝血酶的受体，在血小板活化中起重要作用。 目的：观察2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白Ib／IX／V复合物及其组分糖蛋白Ibd表达的变化。 设计：病例一对照实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科。 对象：根据1999年世界卫生组织制定的糖尿病诊断标准选择2005—12／2007-01本院门诊就诊的外周血小板计数〉50×10^9L^-1的2型糖尿病患者51例，男28例，女23例，纳入对象在检查前两周内未服用影响血小板功能的药物。根据病情控制情况将患者分为控制良好组（n=25）和控制不良组（n=26）：根据是否合并血管病变分为合并血管病变组（n=27）和无血管病变组（n=24）。选择同期本院健康体检者23名为健康对照组，年龄、性别与病例组匹配。纳入对象或家属对检测项目和试验知情同意。试验经医院伦理委员会批准。 方法：患者均在清晨就诊时抽取空腹肘静脉血进行检测。健康体检者于来院体检时进行相同检测。①生化指标检测：由本院检验科完成空腹血糖、糖化血红蛋白和空腹面胰岛素的检测。②糖蛋白Ib／IX／V复合物及其组分糖蛋白Ibα的表达的检测：采集清晨空腹静脉血3mL，38g／L枸橼酸钠抗凝后10g／L多聚甲醛固定45min。取50μL固定后全血加至流式检测管，同时分别向不同管中加入20μL糖蛋白Ib／IX／V复合物单克隆抗体CD42a—b-c-d和PE标记的糖蛋白Ibα单克隆抗体CD42b，混匀后室温避光孵育30min，然后CD42a—b-c-d标记的样品中加入20uLFITC标记的羊抗鼠IgG混匀后室温避光孵育30min。于FACS420型流式细胞仪上检测样本平均荧光强度。③血小板聚集率测定：参照文献检测血小?     

血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物表达变化:健康者与2型糖尿病患者的样本分析

背景:研究已证实血小板活化参与了糖尿病血管病变的发生发展.血小板膜糖蛋白Ib/IX/V复合物是血小板膜上主要的糖蛋白分子之一,是血管性血友病因子和凝血酶的受体,在血小板活化中起重要作用.目的:观察2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白Ib/IX/V复合物及其组分糖蛋白Ibα表达的变化.设计:病例-对照实验.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科.对象:根据1999年世界卫生组织制定的糖尿病诊断标准选择2005-12/2007-01本院门诊就诊的外周血小板计数＞ 50×109 L-1 的2型糖尿病患者51例,男28例,女23例,纳入对象在检查前两周内未服用影响血小板功能的药物.根据病情控制情况将患者分为控制良好组(n =25)和控制不良组(n =26);根据是否合并血管病变分为合并血管病变组(n =27)和无血管病变组(n =24).选择同期本院健康体检者23名为健康对照组,年龄、性别与病例组匹配.纳入对象或家属对检测项目和试验知情同意.试验经医院伦理委员会批准.方法:患者均在清晨就诊时抽取空腹肘静脉血进行检测.健康体检者于来院体检时进行相同检测.①生化指标检测:由本院检验科完成空腹血糖、糖化血红蛋白和空腹面胰岛素的检测.②糖蛋白Ib/IX/V复合物及其组分糖蛋白Ibα的表达的检测:采集清晨空腹静脉血3 mL,38 g/L枸橼酸钠抗凝后10 g/L多聚甲醛固定45 min.取50 μL固定后全血加至流式检测管,同时分别向不同管中加入20 μL糖蛋白Ib/IX/V 复合物单克隆抗体CD42a-b-c-d和PE标记的糖蛋白Ibα单克隆抗体CD42b,混匀后室温避光孵育30 min,然后CD42a-b-c-d标记的样品中加入20 μL FITC标记的羊抗鼠 IgG,混匀后室温避光孵育30 min.于FACS420型流式细胞仪上检测样本平均荧光强度.③血小板聚集率测定:参照文献检测血小板聚集率.主要观察指标:①生化指标.②糖蛋白Ib/IX/V复合物及糖蛋白Ibα的表达情况.③血小板最大聚集率.结果:实验纳入的51例2型糖尿病患者和23名健康体检者全部进入结果分析.①生化指标检测结果:控制良好组和控制不良组患者空腹胰岛素与健康对照组比较,差异有显著性意义(P ＜ 0.01).控制不良组患者空腹血糖和糖化血红蛋白均明显高于健康对照组和控制良好组,差异有显著性意义(P ＜ 0.01).②糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物和糖蛋白Ⅰbα表达情况的比较:控制良好组和控制不良组患者糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物和糖蛋白Ⅰbα的表达明显低于健康对照组,控制不良组明显低于控制良好组,差异均有显著性意义(P ＜ 0.05～0.01).无血管病变组和合并血管病变组患者均明显低于健康对照组,差异有显著性意义 (P ＜ 0.01).无血管病变组和合并血管病变组患者糖蛋白Ⅰbα明显低于健康对照组,合并血管病变组明显低于无血管病变组,差异均有显著性意义(P ＜ 0.05).糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物平均荧光强度与空腹血糖、糖化血红蛋白和空腹胰岛素呈明显负相关(r =-0.634,-0.573,-0.649,P ＜ 0.05);糖蛋白Ⅰbα平均荧光强度与空腹血糖和糖化血红蛋白呈明显负相关(r =-0.602,-0.543,P ＜0.05).③血小板聚集功能的比较:2型糖尿病患者血小板最大聚集率较正常人明显升高,差异有显著性意义(t =-3.852,P ＜ 0.01),控制不良组明显高于控制良好组,合并血管病变组高于无血管病变组,差异均有显著性意义(P ＜ 0.05).结论:2型糖尿病患者早期无血管病变时即存在血小板活化,发生血管病变后活化更明显,且血小板活化与血糖呈正相关.血小板糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物作为凝血酶和血管性血友病因子的受体,可能参与了2型糖尿病血管病变的发生发展.     

硝酸甘油对肺心病患者血小板功能及凝血的影响

观察了３３例肺心病毒患者静滴硝酸甘油前后血小板粘附试验、血小板聚集试验、血小板α－颗粒膜糖蛋白－１４０、血浆血栓素Ｂ２，血浆因子Ⅷ促凝活性，血管性血友病因子抗原、纤维蛋白原等的变化。结果显示，用药后上述各项指标均有明显的降低（Ｐ〈０．０１）同时ＰＡｄＴ的降低与ｖＷＦ：Ａｇ的降低相关（Ｐ〈０．０１），并对肺心病患者用药前上述各指标与正常人群作了比较，显示前者血小板及凝血功能增强。结论认为：血小板参与     

血管性血友病的实验诊断

血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)是血管内皮细胞和骨髓巨核细胞合成的一种糖蛋白,正常情况下存在于血浆和血小板(占全血15%)中。vWF 可与血小板膜糖蛋白 GP Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ结合,激活 GPⅡb/Ⅲa 并桥接血小板与vWF,从而促使血小板聚集;vWF 还可介导血小板黏附到内皮细胞损伤后暴露出的胶原表面,使血小板聚集,形成血小板血栓,在一期止血中起重要作用。此外,血浆中的 vWF 还与 FⅧ形成复合物以稳定 FⅧ,在二期止血中发挥重要作用。vWF 缺乏将导致患者出现血管性血友病(von Willebrand     

巨型血小板综合征与血小板型血管性血友病

巨型血小板综合征(BSS)以出血时间延长,血小板减少,血小板形态巨大和明显的出血倾向为临床特征,为常染色体隐性遗传。BSS患者存在着多种类型的基因突变,使血小板功能障碍,其中一种特殊突变使血管性血友病因子被过量清除,导致与血管性血友病相似的出血倾向。     

温心胶囊对冠心病心阳虚证大鼠血小板功能的影响

目的：研究温心胶囊对冠心病心阳虚证大鼠血小板功能的影响。方法：采取高脂饮食，脑垂体后叶素皮下注射及寒冷刺激方法，建立冠心病阳虚证模型。同时观察温心胶囊对血小板功能的影响。结果：温心胶囊组与模型组比较差异显著（P＜0．001）。血浆血管性假血友病因子（VWF）浓度、血栓素B2（TXB2）含量、血小板聚集率、血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa分子数和α颗粒膜蛋白GMP－140含量下降，6－酮－前列环素（6－Keto-PGF1α）含量增高。结论：温心胶囊具有抑制血小板聚集作用。     

高血压病患者血小板活化状态的临床观察

血小板α-颗粒膜蛋白(GMP—140)是近年才发现的一种分子量为140KDa的糖蛋白。当血小板活化脱颗粒时,它表达在活化的血小板膜表面。实验已证明,GMP-140分子数的测定优于血栓烷B_2(TxB_2)和血管性血友病因子(VWF),是判断血小板活化的特异性指标。GMP-140在血小板病理生理功能中起关键作用,但它在高血压病中的分子变化尚不清楚。本文测定了30例高血压病患者血小板GMP-140水平,以了解血小板活化状态在高血压病病程进展中的意义。     

乙肝病毒前C基因区1896位点变异的实验研究

目的探讨慢性乙肝病人血清HBV DNA前c基因区nt1896的变异情况及其与HBV DNA水平及转氨酶（ALT）关系。方法将172例慢性乙肝患者分为两组：大三阳组（106例）和小三组（66例）。检测ALT、HBV DNA及前C区nt1896的变异情况。结果大三阳组与小三阳组HBV DNA阳性率有显著差异（P〈0．05）,nt1896变异率无显著差异（P〉0．05）。小三阳患者中ALT升高组（〉40U／L）HBV DNA（＋）患者nt1896变异率100％,而ALT正常组HBV DNA（＋）患者nt1896变异率30％（3／10）（P〈0．05）。结论大三阳和小三阳慢性乙型肝炎病人都存在较高的前C区nt1896变异率（P〉0．05）。前C区nt1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素。     

8例遗传性凝血因子VII缺陷症患者基因诊断与临床特征分析

目的：探讨8例遗传性凝血因子VII（FVII）缺陷症患者的基因突变类型与临床特征。方法：采用一期法检测患者的FⅦ活性（FVII：C）,用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测其FⅦ抗原（FVII：Ag）水平;并抽提先证者及其家系成员的外周血基因组DNA-PCR扩增FVII基因所有外显子及其侧翼序列．采用DNA直接测序进行基因分析。结果：在8例遗传性FⅦ缺陷症患者中发现9种类型的基因突变,包括3种剪切位点突变和6种错义突变,其中p．Glu76（16）G1n和p．Gly343（283）Asp这2种突变为国际首次报道。1例患者为p．Tyr128（68）Cys纯合突变,其FVII：C〈1％,FⅦ：Ag为l％,临床表型为重度出血;另1例为p．Cys389029）G1y纯合突变,其FⅦ：C为2．7％,FVII：Ag为50％,为交叉反应物质阳性（CRM＋）的FⅦ缺陷症,其临床无出血表现。4例患者携带FVII基因双杂合突变,分别为IVS5—1G〉A和p．Arg350f290）Cys、IVS5．1G〉A和p．Cys389（329）Gly、IVSla＋5G〉A和p．Glu76（16）GIn、IVSla＋5G〉A和p．Gly343（283）Asp突变,其相应的FⅦ：C分别为4．9％、1．8％、2．2％和1．5％,患者临床出血症状较轻或无临床出血表现。2例患者携带单杂合突变,分别为p．Arg337（277）Cy8和IVS5．2A〉G,其FⅦ：C分别为4．5％和1．2％,前者无临床出血表现,后者有反复鼻出血。结论：在8例遗传性FⅦ缺陷症患者中发现了9种类型的FⅦ基因突变,其中2种为新发现突变。IVS5．1G〉A、IVSla＋5G〉A、p．Cys389（329）Gly突变在8例患者中较常见,而FⅦ基因突变及FVII：C情况与患者的临床表型间无相关性。     

The glycoprotein Ibα–von Willebrand factor interaction induces platelet apoptosis

Summary. Background: The interaction of glycoprotein (GP) Ibα with von Willebrand factor (VWF) initiates platelet adhesion, and simultaneously triggers intracellular signaling cascades leading to platelet aggregation and thrombus formation. Some of the signaling events are similar to those occurring during apoptosis, however, it is still unclear whether platelet apoptosis is induced by the GPIbα–VWF interaction. Objectives: To investigate whether the GPIbα–VWF interaction induces platelet apoptosis and the role of 14‐3‐3ζ in apoptotic signaling. Methods: Apoptotic events were assessed in platelets or Chinese hamster ovary (CHO) cells expressing wild‐type (1b9) or mutant GPIb–IX interacting with VWF by flow cytometry or western blotting. Results: Ristocetin‐induced GPIbα–VWF interaction elicited apoptotic events in platelets, including phosphatidylserine exposure, elevations of Bax and Bak, gelsolin cleavage, and depolarization of mitochondrial inner transmembrane potential. Apoptotic events were also elicited in platelets exposed to pathologic shear stresses in the presence of VWF; however, the shear‐induced apoptosis was eliminated by the anti‐GPIbα antibody AK2. Furthermore, apoptotic events occurred in 1b9 cells stimulated with VWF and ristocetin, but were significantly diminished in two CHO cell lines expressing mutant GPIb–IX with GPIbα truncated at residue 551 or a serine‐to‐alanine mutation at the 14‐3‐3ζ‐binding site in GPIbα. Conclusions: This study demonstrates that the GPIbα–VWF interaction induces apoptotic events in platelets, and that the association of 14‐3‐3ζ with the cytoplasmic domain of GPIbα is essential for apoptotic signaling. This finding may suggest a novel mechanism for platelet clearance or some thrombocytopenic diseases.     

凝血因子V、Ⅷ和组织因子与2型糖尿病合并冠心病的关系

目的探讨凝血因子V活性（FV：C）、凝血因子Ⅷ活性（FⅧ：C）和组织因子（TF）在2型糖尿病（T2DM）合并冠心病（HD）诊断中的应用价值。方法测定85例T2DM合并CHD患者[T2DM合并CHD组,根据CHD不同类型再分为T2DM合并急性心肌梗死（AMI）组（19例）、T2DM合并陈旧性心肌梗死（OMI）组（23例）、T2DM合并不稳定型心绞痛（UAP）组（25例）、T2DM合并稳定型心绞痛（SAP）组（18例）]、29例无合并症的单纯T2DM患者（单纯T2DM组）和24名健康对照者（正常对照组）FV：C、FⅧ：C、血浆TF和血管性血友病因子（VwF）活性及血小板聚集率（PAR）,并分析FV：C、FⅧ：C、TF与VwF、PAR的相关性。结果T2DM合并CHD组和单纯T2DM组FV：C、FVIU：C和TF水平均明显高于正常对照组（P〈0．001）,且T2DM合并CHD组明显高于单纯T2DM组（P〈0．01）。T2DM合并CHD组中,T2DM合并AMI组和T2DM合并UAP组FV：C、FⅧ：C和TF水平均明显高于单纯T2DM组（P〈0．001）,且T2DM合并AMI组明显高于T2DM合并UAP组（P〈0．01）;T2DM合并OMI组和T2DM合并SAP组TF水平明显高于单纯T2DM组（P〈0．01）,但FV：C和FⅧ：C水平3组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。FV：C、Fvm：C、TF与VwF、PAR均呈明显正相关（P〈0．01）。结论FV：C和FVIH：C及TF水平可作为T2DM患者并发CHD的诊断指标。TF对判断T2DM合并CHD患者病情的进展有重要价值。     

Characterisation of von Willebrand factor A1 domain mutants I1416N and I1416T: correlation of clinical phenotype with flow‐based platelet adhesion

Summary. Background: Type 2M von Willebrand disease (VWD) results from mutations in the A1 domain of von Willebrand factor (VWF) that reduce its platelet‐binding function. However, currently employed VWF functional static assays may not distinguish between clinical phenotype. Methods: Fifteen individuals from five kindreds with VWF‐A1 domain mutations I1416T or I1416N, correlated with mild and moderate clinical phenotypes, respectively, were investigated. The mutations were reproduced by site‐directed mutagenesis and expressed in HEK293T cells; functional studies of the recombinant mutants, including GPIbα binding using a flow‐based assay, were performed. Results: Plasma from all individuals demonstrated discordant reductions in VWF antigen and platelet‐binding function in the presence of high‐molecular‐weight VWF multimers consistent with VWD type 2M. There was lowered expression and secretion of both mutants compared with wild type (WT) recombinant (r)VWF as well as a significant reduction in GPIbα binding. Binding to collagen was normal and electrophoretic analysis demonstrated a similar multimer distribution between the mutant proteins and wt‐rVWF. GPIbα binding under flow was also significantly reduced for I1416N and I1416T rVWF. Impairment of GPIbα binding was more marked for I1416N rVWF than I1416T under both static and flow conditions: this was in spite of similar VWF:Ristocetin cofactor (RCo) activities in patient plasma and is consistent with a respective clinical phenotype. Conclusions: Our findings have established for the first time that I1416N and I1416T are responsible for a type 2M VWD phenotype and demonstrate that quantification of VWF function under shear stress may provide a more accurate measure of clinical severity than the static functional measurements in current diagnostic use.     

急性髓系白血病患者NPM1、FLT3和C-KIT基因突变的检测及其预后分析

本研究旨在评估NPM1、FLT3和C-KIT基因突变在急性髓系白血病（AML）患者中的发生频率和对预后的影响,并探讨这些突变与临床特点、细胞遗传学及生存情况的关系。对我院2010年8月至2012年10月收治的78例初治AML患者,采用PCR扩增产物直接测序法或毛细管电泳法检测NPM1、FLT3和C-KIT基因的突变情况,了解这些突变阳性患者的临床特征。结果显示,NPM1突变患者在AML中的发生率为14.1%,在正常核型AML中的发生率为26.7%。NPM1基因突变者发病年龄偏高（P〈0.05）,外周血白细胞和血小板数高（P〈0.05）,CD34低表达（P〈0.05）,而在性别比例、骨髓原始细胞比例、血红蛋白浓度、CD117和HLA-DR表达水平、完全缓解（CR）率、总生存（OS）率、复发率方面差异无统计学意义（P〉0.05）。78例AML患者中9例（11.5%）FLT3-ITD突变阳性,3例FLT3-TKD（3.8%）突变阳性,无同一患者同时发生这两种突变;FLT3-ITD突变者外周血白细胞和骨髓原始细胞比例较高（P〈0.05）,总生存率偏低（P〈0.05）,多见于正常核型（P〈0.05）,而在性别比例、年龄、外周血血小板数、血红蛋白浓度、完全缓解率、复发率方面差异无统计学意义（P〉0.05）。FLT3-TKD突变例数较少,未单独进行统计学分析。6例（7.7%）C-KIT突变阳性。C-KIT突变在异常核型AML中的发生率较高（P〈0.05）,复发率较高（P〈0.05）,总生存率较低（P〈0.05）,而在性别、年龄、骨髓原始细胞比例、外周血象、完全缓解率方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：NPM1、FLT3和C-KIT突变检测有利于指导AML患者的治疗及预后评估。     

大肠癌易感基因hMLH1、hMSH2的筛查

目的探讨hMLH1、hMSH2基因多态性与大肠癌发病危险的研究。方法采用大样本随机对照试验,运用PCR和DNA直接测序方法,筛查外周血单个核细胞DNAhMLH1、hMSH2基因多态性。结果 大肠癌组hM-LH1-exon12 1151T→A的突变阳性率为12.20%,与对照组(6.10%)相比,无显著差异(P>0.05);而hMSH2-exon1IVS1+9C→G的突变阳性率为46.70%,与对照组(33.33%)相比差异显著(P<0.05)。在各年龄组间,hMLH1-ex-on12、hMLH1-exon12突变无显著性差异(P>0.05)。危险性分析表明,携带hMSH2-exon1IVS1+9C→G突变发生大肠癌的相对危险性为无基因突变组的1.75倍,若不携带基因突变,其肠癌发病率将降低42.9%;若在人群中无hMSH2-exon1IVS1+9C→G突变发生,则大肠癌的发病率将降低20%。结论hMSH2-exon1IVS1+9C→G突变可作为大肠癌发病的危险因素,并可作为检测指标。     

Type 2M von Willebrand disease variant characterized by abnormal von willebrand factor multimerization

We describe a von Willebrand disease (VWD) variant characterized by low plasma and platelet von Willebrand factor (VWF), impaired ristocetin-induced VWF binding to platelet glycoprotein Ib (GPIb), and abnormal VWF multimer pattern not associated with the absence of large forms. A C-to-T transition at nucleotide 4120 in exon 28 of the VWF gene was found; this mutation introduces a cysteine at the codon for Arg 611 of mature VWF. In addition to the decreased factor VIII (FVIII) and VWF levels, ristocetin-induced platelet aggregation (RIPA) was almost absent, and VWF ristocetin cofactor activity (VWF:RCo) was significantly more decreased than VWF antigen. The patients (mother and son) also showed a defect in VWF collagen-binding activity. Plasma VWF multimers were decreased, with no limit in the size of large forms, and the normal discontinuous multimer organization was replaced by a diffuse smear, especially detectable in the large forms. This picture was emphasized by 1-deamino-8-D -arginine vasopressin (DDAVP) infusion, so that the abnormal VWF multimers appeared to have a molecular weight higher than those present in, or released by, human umbilical vein endothelial cells. DDAVP also increased FVIII and VWF levels but did not normalize the GPIb-dependent VWF functions expressed as RIPA and VWF:RCo. We include this variant in type 2M VWD, focusing on the abnormality in GPIb-dependent VWF function. We advance that this defect depends on the mutation in the GPIb binding domain of VWF rather than the abnormal VWF multimer pattern.     

Toll样受体3对胚胎骨髓来源间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用

背景：课题组前期研究发现胚胎骨髓来源的间充质干细胞促进人Th17细胞增殖,但内在的调节机制尚需阐明。目的：探讨Tol 样受体3对胚胎骨髓来源间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用。 方法：应用免疫磁珠分离正常人 CD4＋ T 细胞,单独或与胚胎来源骨髓间充质干细胞共培养4 d。实时定量PCR测定白细胞介素17、Tol 样受体3及MyD88相关基因的表达水平。〈br〉 结果与结论：相对于CD4＋T细胞单独培养组,间充质干细胞共培养组白细胞介素17 mRNA表达水平明显升高（3.59±0.11 vs.1.14±0.08,P ＜0.01）;进一步发现 Tol 样受体3 mRNA 亦相应升高（3.10±1.60 vs.0.94±0.01,P ＜0.05）。而且,相对于CD4＋T细胞单独培养组,胚胎骨髓来源间充质干细胞共培养组促进了MyD88的表达（2.29±0.05 vs.1.85±0.31,P＜0.01）。研究结果表明Tol 样受体3可能对胚胎骨髓来源间充质干细胞免疫调节Th17细胞发挥作用,为今后潜在的细胞治疗策略提供可能的实验依据。     

转化生长因子β及周期性拉伸应变条件下骨髓间充质干细胞向软骨样细胞的分化

背景：研究表明转化生长因子β对骨髓间充质干细胞的软骨方向分化具有显著的诱导作用。周期性拉伸应变可以模拟软骨细胞在体内的力学环境,对细胞的增殖和分化起着重要的调节作用。目的：探讨转化生长因子β及周期性拉伸应变在诱导骨髓间充质干细胞向软骨样细胞分化过程中是否具有协同作用。方法：取2月龄新西兰大白兔10只,骨穿针穿入股骨髓腔内,抽取骨髓3.0-4.0 mL并分离培养骨髓间充质干细胞,传至3代后随机分为4组,分别为空白组、转化生长因子β组、周期性拉伸应变组以及周期性拉伸应变＋转化生长因子β组,作用1,3,6 d后取出相应细胞,番红O染色观察大体形态,阿尔新蓝染色检测糖胺聚糖水平,ELISA检测上清液基质金属蛋白酶13及基质金属蛋白酶组织抑制剂1水平,RT-PCR检测Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13及基质金属蛋白酶组织抑制剂1 mRNA相对表达量。结果与结论：番红O染色可见细胞呈长梭形或不规则三角形样改变,各实验组较空白组细胞数量及基质分泌增多。作用第3天时转化生长因子β组、周期性拉伸应变＋转化生长因子β组上清液糖胺聚糖水平较空白组均升高（P＜0.05）,周期性拉伸应变＋转化生长因子β组Ⅱ型胶原mRNA相对表达量较空白组增高（P ＜0.05）。结果提示转化生长因子β及周期性拉伸应变均可诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,二者具有明显的协同作用。