首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 93 毫秒
1.
体外制备红细胞的方法大多使用脐血、骨髓或外周动员的CD34+细胞或胚胎干细胞作为起始材料.本研究利用外周血单个核细胞为原料在体外生产成熟红细胞.以血液滤涂白细胞后剩余的白膜层为原料,从中分离出单个核细胞,然后通过4步培养法制备成熟的红细胞.结果表明:经过不同细胞因子组合的诱导以及小鼠基质细胞系MS-5的支持培养,外周血单个核细胞的扩增倍数达到约1 000倍,其中约90%的细胞是与正常红细胞形态相似的无核成熟红细胞.集落形成能力分析显示,本研究培养体系可使单个核细胞中的祖细胞增殖并且只向红系方向分化.结构和功能分析结果表明,体外培养出的红细胞的平均细胞体积(MCV)为118±4fl,比正常红细胞(80-100 fl)稍大.平均血红蛋白含量(MCH)为36±1.2 pg,比正常的红细胞水平(27-31 pg)稍高.红细胞的最大变形指数(DImax)为0.46,接近正常红细胞水平.葡萄糖6磷酸脱氢酶及丙酮酸激酶的含量与年轻红细胞的特性一致.结论:利用外周血白膜层中含有的造血干祖细胞,通过体外培养能够生产出成熟红细胞,它是一种取材方便、成本低廉的红细胞生产原料,本研究培养体系适于利用单个核细胞生产成熟红细胞.  相似文献   

2.
目的:探讨二甲亚砜(DMSO)对外周血单个核细胞(PBMCs)增殖能力和细胞因子分泌能力的影响。方法分别设置含不同终体积分数 DMSO 的细胞培养体系及空白对照,采用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)示踪技术和酶联免疫斑点(ELISPOT)技术分别检测 PBMCs 的增殖能力和细胞因子分泌功能,分析 DMSO 对 PBMCs功能的影响。结果当培养体系中 DMSO 的体积分数为2%时,PBMCs 的增殖功能开始受到明显抑制,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.01);当 DMSO 的浓度为4%时,PBMCs 分泌细胞因子的功能开始受到明显抑制,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.05);并且,DMSO 对 PBMCs 增殖和细胞因子分泌功能的影响存在浓度依赖趋势。结论DMSO 浓度大于2%的培养体系会对 PBMC 产生明显的细胞毒性作用,应采取适当措施减小或规避 DMSO 对实验结果的影响。  相似文献   

3.
目的 建立TaqMan实时荧光定量RT-PCR(rQ-RT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)mRNA含量的方法,探讨PBMC中TRAIL mRNA的检测价值.方法 在TRAIL基因第二和第三外显子区设计特异性引物和荧光探针,用RT-PCR扩增目的片段,实时检测产物的荧光强度,以标准品建立标准曲线,软件自动计算出待测样本中TRAIL mRNA含量,以TRAIL mRNA和β2M mRNA含量的对数比值进行TRAIL mRNA表达水平评价.结果 TRAIL mRNA含量线性范围为(2.9×10^3~2.9×10^9)copies/ml,批内和批间变异系数分别为9.5%和16.7%.30例健康献血员和58例慢性乙肝患者TRAIL mRNA与β2M mRNA浓度的对数比值的(x)±s分别为0.528±0.014和0.775±0.038,两组差异显著,P<0.001.结论 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA水平具有较好的灵敏度和重复性,适用于临床研究.  相似文献   

4.
目的 建立细胞因子的基因检测方法,观察其在临床上的初步应用情况。方法 利用RT-PCR技术检测部分免疫相关性疾病和肿瘤病人外周血或组织中14种细胞因子的表达情况。结果 20例支气管哮喘病人外周血单个核细胞和23例肿瘤病人癌组织主要表达Th2类细胞因子(Ⅱ-4、6、10、13),15例肾病综合征病人主要表达炎性细胞因子(IL-1β、IL-6),16例自身免疫性甲状腺疾病病人主要表达IL-2、IL-4、IL-6,而5例正常人外周血单个核细胞中未检出细胞因子。结论 RT-PCR法检测细胞因子可用来反映多种疾病的病理变化。  相似文献   

5.
目的 探讨卡介苗 (BCG)细胞壁有效成份对人外周血单个核细胞 (HPBMCS)表达细胞因子的刺激作用。方法 获得正常HPBMCS ,采用不同浓度的BCG细胞壁成分体外刺激HPBMCS ,收集培养上清液 ,用ELISA法检测上清液中IL- 4、IL -12和GM CSF的含量。结果 BCG细胞壁成分能诱导HPBMCS产生较高水平的IL-12、GM CSF ,并呈剂量依赖性 ;但对IL- 4的产生没有影响。结论 BCG细胞壁有效成份能有效诱导HPBMCS产生诱导细胞免疫应答的细胞因子IL-12和GM- CSF ,为今后以细胞壁成分替代BCG治疗膀胱肿瘤的可行性及其增强策略的研究提供了依据。  相似文献   

6.
目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)在脓毒症发病机制中的作用。方法选择36例脓毒症患者,30例健康志愿者为对照组,应用RT-PCR方法测定SOCS-3在外周血单个核细胞中的表达,并和患者APACHEⅡ评分进行相关分析。结果SOCS-3在脓毒症组和对照组的外周血单个核细胞中均有表达,脓毒症组较对照组表达显著增加(P〈0.001),SOCS-3 mRNA的表达和脓毒症A—PACHEⅡ评分呈负相关,相关系数(r)为-0.746(P〈0.01)。结论SOCS-3参与了脓毒症的发病过程,SOCS-3的表达在脓毒症患者中可能起着保护作用。  相似文献   

7.
目的研究急性乙型肝炎患者外周血颗粒溶素的表达及其意义。方法收集确诊急性乙型病性毒肝炎患者、无症状乙肝病毒(HBV)携带者和体检健康者全血,分离外周血单个核细胞(PBMC),抽提总RNA,采用MGB探针,以18sRNA为内参,经荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测其颗粒溶素mRNA的表达水平。对照组为90例体检健康者和90例无症状HBV携带者。结果急性期乙肝患者PBMC颗粒溶素表达水平(拷贝/μg)(2.8±3.1)×109显著高于体检健康者(2.2±1.4)×107和HBV携带者缓解期病人(4.5±5.2)×108(P<0.05)。结论采用FQ-PCR检测颗粒溶素的表达水平,有助于临床上监测感染性疾病的病情,为临床诊治提供一些依据。  相似文献   

8.
目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(Blys)及其受体BAFF-R在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况及临床意义.方法 应用流式细胞仪技术,检测90例SLE患者PB-MCs中Blys及其受体BAFF-R的表达,并与45例健康志愿者检测结果 进行比较.分析Blys及BAFF-R的表达与SLE病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系.结果 ①SEE患者PBMCs中Blys及BAFF-R的表述百分率比健康对照组高(均P<0.001).其中,活动期和稳定期SLE患者Blys和BAFF-R的表达率均高于健康对照组(P<0.001或0.01);活动期和稳定期比较,Blys的表达较高(P<0.05),而BAFF-R的表达无统计学差异.②SLE患者PBMCs中Blys的表达水平与SLE疾病活动指数评分呈正相关(r=0.728,P<0.001),与免疫球蛋白IgG、IgM里正相关(r=0.691,P<0.001和r=0.453,P<0.01),与补体C3、C4呈负相关(r=-0.510,P<0.001和r=-0.312,P<0.05).③抗dsDNA抗体(+)组患者PBMCs中Blys的表达较 dsDNA抗体(-)组高(P<0.01).Clq抗体(+)组患者PBMCs中的表达也较C1q抗体(-)组高(P<0.01).结论 Blys及BAFF-R在SLE外周血单个核细胞中的表达率升高.Blys的表达在一定程度上反映病情的活动,并与自身抗体的产生相关.Blys及其特异性受体BAFF-R可能参与SLE的发病.  相似文献   

9.
为了观察抗炎因子白细胞介素10(IL10)对炎症因子白细胞介素6(IL6)诱导人外周血单个核细胞(PBMNC)组织因子(TF)表达的影响,以探讨抗炎因子在急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome,ACS)发病机制的作用,用一期凝固法、ELISA和细胞发色底物分析检测不同浓度的人重组IL10(rhIL10)作用下,人重组IL6(rhIL6)诱导PBMNC的促凝活性(procoagulantactivity,PCA)、TF表达及活性的改变。结果表明:rhIL6培养PBMNC的PCA、TF表达及活性均较对照组显著增加(P<0.01);不同浓度的rhIL10作用PBMNC后,可对PBMNC的PCA、TF表达和活性起不同的抑制作用;在500ng/LrhIL10的作用下,rhIL6诱导的PBMNC的PCA、TF表达和活性均显著降低(P<0.01)。结论:IL10对PBMNC的TF表达和活性抑制可能是ACS重要保护机制,炎症因子和抗炎因子的平衡失调可能是冠状动脉血栓形成的重要因素。  相似文献   

10.
武其文  浦春  方芳 《检验医学与临床》2012,9(16):1971-1973,1976
目的研究Tim-1mRNA及Tim-3mRNA在变应性哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达,探讨其在变应性哮喘发病中可能的作用。方法随机收集临床变应性哮喘患者25例,以健康体检者12例作为对照。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组Tim-1mRNA和Tim-3的mRNA表达,并分析他们与哮喘临床表型之间的关系。结果 Tim-1mRNA和Tim-3mRNA在变应性哮喘患者PBMC中表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),且与患者血清总IgE水平和临床严重程度相关,总IgE水平和临床严重程度分级越高,Tim-1mRNA和Tim-3mRNA表达越高(P<0.05)。结论 Tim-1mRNA和Tim-3mRNA在变应性哮喘患者中表达明显升高,Tim-1mRNA和Tim-3mRNA可能参与变应性哮喘的发生和发展。  相似文献   

11.
目的 分析59例下肢缺血性疾病患者进行自体外周血单个核细胞(MNC)移植的疗效及其与移植MNC数及CD34+细胞数的相关性,探索外周血MNC在下肢动脉缺血性疾病治疗中的优势.方法 对59例患者治疗前静息痛、冷感、间歇性跛行及组织损伤分别进行评分,而后动员并采集自体外周血MNC,于缺血下肢多位点等间距注射.评价治疗后第7天及4个月时的治疗效果,分析注入的MNC数及其中所含CD34+细胞数与疗效的相关性.结果 MNC移植后第7天及4个月时患者的下肢缺血均有不同程度的改善,CD34+细胞数量与疗效的相关系数为0.461(P=0.047),尼莫地平值=0.484+1.055×CD34+细胞数,MNC数量与疗效的相关系数为0.473(P=0.000),尼莫地平值=0.288+0.401×MNC数.结果 显示MNC数量比CD34+细胞数量与疗效的相关性更强.结论 注入的自体外周血MNC数较CD34+细胞数更能反映与临床疗效的相关性.
Abstract:
Objective To analyze the efficacy and its correlation with species of transplant cells of autologous mobilized peripheral blood(PB) mononucleated cells (MNCs) transplantation on 59 patients with lower limbs ischemia. Methods Fifty-nine patients were evaluated with symptoms scores and after that their PBMNCs were mobilized and collected and then injected into the ischemic area at equal distance. They effectiveness and scores were evaluated at 7th day and 4th month after therapy. The correlation of CD34 + cells and of MNCs with effectiveness was analysed respectively, and formula for c orrelations between them and effectiveness was calculated. Results After MNCs injection, the effectiveness was observed both at 7th day and 4th month . The correlation of MNCs with effectiveness was stronger than that of CD34 + cells ( the effectiveness was represented by nimodipine value), According to the formula of nimodipine value, the value of the latter =0.484 + 1. 055 × CD34 + cells number and the former = 0.288 + 0. 401 × MNCs number with a correlation coefficient of R =0. 461( P =0. 047 ) and R =0. 473 ( P =0. 000 ) respectively. Conclusion Autologous mobilized PBMNCs number is a better indicator for effectiveness than CD34 + cells number.  相似文献   

12.
Dietary fibers, including pectin, have been shown to exert a favorable effect on a wide spectrum of pathological conditions. Their positive influence on human health is explained by their anti-oxidative, hypocholesterolemic and anti-cancerous effects. However, little has been reported about their activity on the immune system. Therefore, the present study was undertaken to examine the effect of citrus pectin (CP) on cytokine production by human peripheral blood cells (PBMC). PBMC were incubated without or with CP at different degrees of esterification (DE) (∼30, ∼60 and ∼90% esterified pectin, assigned as DE30, DE60 and DE90, respectively) for detection of IL-1β, IL-1ra, TNFα, IL-6 and IL-10 secretion. Incubation with DE60 and DE90 induced a dose-dependent inhibition of the pro-inflammatory cytokine IL-1β secretion, whereas D30 did not affect this function. However, CP at all three esterification degrees did not alter the secretion of the additional pro-inflammatory cytokines examined, i.e. TNFα and IL-6. Conversely, CP at DE60 and DE90 caused a dose-dependent increased secretion of the anti-inflammatory cytokines IL-1ra and IL-10, whereas D30 did not affect the production of IL-1ra and decreased that of IL-10. The findings indicate that CP possesses the capacity to exert an immunomodulatory response in human PBMC which may have a favorable effect on human health.  相似文献   

13.
背景:神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80%新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0.2%的细胞继续增殖、分化,参与修复。目的:分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。方法:体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。结果与结论:海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。  相似文献   

14.
目的比较K562细胞与人白血病骨髓间充质干细胞(LMSC)共培养前后增殖和凋亡的变化。方法采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析法检测SCG和CCG组K562细胞光密度(OD)值,比较不同培养条件下K562细胞的增殖情况。采用流式细胞仪检测与LMSC共培养后K562细胞周期变化,Annexin V/聚酰亚胺(PI)荧光标记法检测血清饥饿后与LMSC共培养后K562细胞凋亡的变化。结果与LMSC共培养后,K562细胞的增殖受到明显抑制,CCG组OD值明显低于SCG组。流式细胞仪检测细胞周期发现,与LMSC共培养后,G0~G1期细胞比例明显增高,S期细胞比例明显下降,且G2~M期细胞比例也呈上升趋势;CCG+0%FBS组K562细胞凋亡较SCG+10%FBS组明显增多,较SCG+0%FBS明显降低,LMSC有抵抗白血病细胞凋亡的作用。结论 LMSC通过阻滞G0~G1期K562细胞周期而发挥抑制增殖的作用,并能抑制血清饥饿诱导的K562细胞凋亡。  相似文献   

15.
本研究探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对HL-60细胞增殖的影响及相关的分子机制。将单独培养的HL-60细胞作为对照组,与MSC共培养的HL-60细胞作为实验组。在不同时间计数两组HL-60细胞,描绘其时间-数量曲线;流式细胞仪检测2组HL-60细胞的细胞周期、凋亡细胞比例及Survivin和Bcl-2蛋白的表达。结果表明,实验组HL-60细胞的增殖明显受抑,在第5-7天差异显著(P<0.01),实验组HL-60细胞分布于G0/G1期的比例增加〔对照组(47.0±9.0)%vs实验组(70.0±16.0)%,P=0.003)〕,并且出现凋亡峰。实验组HL-60细胞Survivin和Bcl-2蛋白表达同时下调。Bcl-2表达率在对照组为(63.0±9.1)%,实验组为(50.0±14.1)%(P=0.045);Survivin表达率在对照组为(94.0±9.3)%,实验组为(77.0±11.8)%(P=0.006)。结论:骨髓MSC对HL-60细胞的增殖有抑制作用,并促进HL-60细胞凋亡。  相似文献   

16.
目的:探讨人脐带间充质干细胞(UCMSCs)与骨髓间充质干细胞(BMMSCs)在体外对造血干细胞的支持作用。方法分别从人脐带和骨髓中分离、培养间充质干细胞,通过免疫细胞化学染色等方法对其进行表型鉴定;采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞的周期分布,采用甲基纤维素法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位(CFU-Mix),比较 UCMSCs和BMMSCs对脐血单个核细胞细胞周期、CFU-Mix形成能力的影响。结果成功培养获得 UCMSCs和BMMSCs,鉴定结果符合预期;与非共培养组细胞相比,UCMSCs和 BMMSCs共培养均能促进脐血单个核细胞进入增殖周期,并增加其形成CFU-Mix的能力(P<0.05),但UCMSCs和BMMSCs共培养组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功从人脐带和骨髓组织中培养获得间充质干细胞,两种来源的间充质干细胞均能提高脐血单个核细胞的体外增殖能力及 CFU-Mix形成能力,均具有造血支持作用。  相似文献   

17.
目的 体外大量扩增和纯化具有典型表型、形态和功能的树突状细胞(DC),以进行相关基础研究和临床应用。方法 采用免疫磁珠法分离脐血CD34 + 细胞及外周血去B、去T淋巴细胞的单个核细胞( 单核细胞) ,然后以GMCSF、IL4、TNFα、Flt3 配基(FL)、SCF等不同的细胞因子配伍,分别诱生DC,通过流式细胞仪、电镜、光镜分析其特性,同时检测其刺激同种T细胞增殖的能力。结果 脐血与外周血诱生DC的方案不同,由脐血CD34+ 细胞诱导DC 时,GMCSF+ TNFα+ SCF+ FL 组合可使CD1a+ 细胞比例增至(27 .18 ±1-56)% ,明显高于单独应用GMCSF组[(0.65±0 .38)% ] 。外周血单核细胞诱导的DC,则GMCSF+ 高剂量IL4(1000 U/ml) 组合效率最高,诱生的CD1a + 细胞可达(21 .80 ±0-32) % 。两种来源的DC在表型及形态上差异无显著性,两者同样具有刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论 从脐血和外周血均可诱生DC,根据应用目的的不同对其进行选择,这为DC用于临床治疗选择不同细胞来源提供了实验基础。  相似文献   

18.
The purpose of this in vitro study was to determine whether the Gemini PC-2TX infusion pump could safely deliver peripheral stem cells (PSC) for an autologous PSC transplant. For purposes of hypothesis testing, it was assumed that there would be no significant difference in CD34+ cell counts and colony-forming units-granulocyte, macrophage (CFU-GM) when the PSCs were administered by an IMED PC-2TX infusion pump as opposed to an intravenous push method. The American Red Cross collected 50-ml samples of PSCs from four donors by apheresis. These cells were tested for CD34+ using flow cytometry and for functional progenitor cells using a CFU-GM assay. The cells were cryopreserved after testing. For our study, samples were tested simultaneously at a single facility. Each sample was individually thawed and a baseline thaw sample collected; 10 ml of the donor specimen was pushed through a syringe into a specimen container (intravenous push sample). The remainder of the specimen was infused through the IMED Gemini PC-2TX pump into a specimen container (intravenous pump sample). All samples were assayed for CD34+ cell counts and CFU-GM. Data analyses were conducted using the t-test for paired samples, with values of P < 0.05 considered significant. Results failed to demonstrate a statistically significant difference between the CD34+ or CFU-GM results of the intravenous push and intravenous pump specimens. Additionally, we failed to find a statistically significant difference when we compared the intravenous push and the intravenous pump specimens with the baseline thaw sample. The results of this study support the hypothesis that the Gemini PC-2TX infusion pump can safely deliver PSCs for the purposes of stem cell transplantation. J. Cell. Apheresis 13:23–27, 1998. © 1998 Wiley-Liss, Inc.  相似文献   

19.
背景:神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,但正常情况下,神经干细胞数目太少,且大部分处于静息状态,促进其增殖是神经干细胞治疗神经退行性疾病的关键。目的:观察蛇床子素对体外培养的神经干细胞增殖作用的影响,分析其促进增殖能力的作用机制。方法:体外培养神经干细胞,在增殖培养基中培养至第3代,加入不同浓度的蛇床子素(10,50和100μmol/L)作用24 h用CCK-8法检测细胞活力,再培养3,5,7 d后测量神经球半径,用免疫荧光组化法计数Ki67阳性细胞数目;再培养3 d后利用RT-PCR技术检测神经干细胞中Notch 1、Hes 1和Mash 1基因表达的情况。结果与结论:与正常组比较,50,100μmol/L的蛇床子素具有明显促进神经干细胞增殖能力的作用,100μmol/L作用最为显著,可引起Notch 1基因、Hes 1基因上调表达,对Mash 1基因基本无影响,说明蛇床子素对体外培养的神经干细胞具有促进增殖作用,其作用机制可能与激活Notch信号通路上的Notch 1、Hes 1基因有关。  相似文献   

20.
目的观察拟胆碱药卡巴胆碱对肠缺血-再灌注大鼠外周血淋巴细胞和中性粒细胞凋亡及细胞因子mRNA表达的影响,探讨拟胆碱药的抗炎作用机制。方法36只大鼠随机分为手术对照组、肠缺血1h组、肠缺血1h后再灌注1h和2h组、卡巴胆碱 肠缺血1h组及卡巴胆碱 肠缺血1h后再灌注2h组。复制大鼠肠缺血-再灌注模型;肠缺血前10min经肠袋给予卡巴胆碱。检测不同时间点大鼠外周血白细胞计数及分类、淋巴细胞和中性粒细胞凋亡率及白细胞中细胞因子mRNA表达水平。结果肠缺血1h,大鼠外周血白细胞计数减少,淋巴细胞比例增加,中性粒细胞比例减少,再灌注后上述指标均呈反向变化;卡巴胆碱可抑制肠缺血引起的外周血淋巴细胞凋亡率的增加,但增加中性粒细胞的凋亡率。外周血白细胞中致炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF—α)和抗炎细胞因子白细胞介素-10(IL-10)表达在肠缺血1h时均增加,但再灌注后2h,IL-10、IL-4和γ干扰素(IFN-7)表达则明显减少,与TNF—α表达明显增加的趋势相反;卡巴胆碱可改善这一变化。结论卡巴胆碱能减少肠缺血时淋巴细胞的凋亡,调节肠缺血-再灌注时外周血白细胞中致炎和抗炎细胞因子表达失衡,在防治失控炎症反应、脓毒症和多器官功能障碍综合征中具有潜在临床应用价值。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号