局部热化疗对大鼠胶质细胞移植瘤血管再生及VEGF表达的影响

目的　研究局部热化疗对鼠胶质细胞移植瘤血管再生及血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响 ,探讨其治疗胶质瘤的机制。方法　在鼠胶质细胞移植瘤动物模型上 ,分组进行局部热疗、化疗和热化疗。用FⅧ RA染色标记血管内皮细胞 ,以微血管密度作为定量检测指标。用免疫组化S P法检测VEGF蛋白表达 ;电镜观察肿瘤微血管结构的变化。结果　热疗、化疗、热化疗组与对照组比较 ,VEGF蛋白表达减低(P <0 .0 1) ,且热化疗有协同作用 (P <0 .0 1)。VEGF表达与MVD间呈正相关 (r=0 .9798,P <0 .0 0 1)。热化疗后肿瘤微血管外径变小 ,血管壁变厚 ,血管减少 ,血管内皮细胞紧密连接增多 ,细胞连接间隙减小 ,有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论　①热疗、化疗和热化疗能抑制肿瘤血管再生 ,且阿霉素与热疗有协同作用 ;②热化疗能降低肿瘤VEGF合成与分泌 ,破坏与减少肿瘤血管再生 ,作为胶质瘤辅助治疗有良好的临床应用前景     

局部热化疗对鼠胶质瘤血管再生及细胞凋亡的影响

目的研究局部热化疗对大鼠胶质瘤血管再生及细胞凋亡的影响，探讨其治疗胶质瘤的机理。方法制作大鼠胶质瘤动物模型并分组，各组分别进行局部热疗、化疗或热化疗。用FVI—RA染色标记血管内皮细胞，以微血管密度作为定量检测指标；用免疫组化S-P法检测VEGF、bax及bcl-2蛋白表达，用透射电镜观察肿瘤细胞及血管结构的变化。结果热疗组、化疗组、热化疗组与对照组比较，发现各治疗组胶质瘤体积明显缩小。重量减轻；VEGF蛋白表达降低，bax蛋白表达增强，bcl-2蛋白表达则无明显变化，VEGF表达与MVD呈正相关。大鼠胶质瘤经热化疗后，肿瘤微血管外径变小，血管壁变厚，血管密度降低，血管内皮细胞紧密连接增多，细胞连接间隙减小，有的血管甚至只能观察到完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论①热疗、化疗、热化疗均能抑制肿瘤血管再生，且化疗与热疗联用具有协同作用，可提高疗效；②热化疗能显著降低肿瘤细胞VEGF的合成与分泌，抑制肿瘤血管再生；③热化疗能增强bax蛋白表达，使bcl-2／bax比值降低，诱导肿瘤细胞凋亡。     

人脑胶质瘤组织Six1、IGF2蛋白表达与临床病理特征、细胞增殖和预后的关系

目的 探讨人脑胶质瘤组织同源异形框基因Six1、胰岛素样生长因子-2(IGF2)蛋白表达与临床病理特征、细胞增殖和预后的关系。方法 选取2016年1月至2018年1月该院切除的80例人脑胶质瘤组织设为观察组,另选取同期该院切除的40例非肿瘤脑组织设为对照组。采用免疫组化法检测两组患者脑组织Six1、IGF2蛋白的阳性表达水平,对比蛋白阳性表达和阴性表达患者的Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)标记指数(LI),并分析Six1、IGF2蛋白表达与患者临床病理特征的关系,用Pearson相关分析Six1与IGF2表达水平的相关性,Kaplan-Meier生存分析研究Six1、IGF2蛋白表达与患者预后的关系,多因素COX回归模型分析人脑胶质瘤患者预后的影响因素。结果 观察组Six1、IGF2蛋白阳性表达率分别为65.00%、47.50%,均明显高于对照组的22.50%、12.50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。人脑胶质瘤患者肿瘤分化程度越低,Six1、IGF2蛋白阳性表达率越高(P<0.05)。Six1、IGF2蛋白阳性表达患者的Ki-67 LI、PCNA LI均明显...     

热疗联合组织因子靶向治疗对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨热疗联合组织因子(TF)靶向治疗在体内和体外对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 用RNA干扰的方法 敲低大肠癌LOVO细胞系中TF的表达,MTT法、流式细胞术、Western blot方法 测定热疗联合TF敲低对LOVO细胞体外增殖抑制及细胞凋亡的影响.将人大肠癌细胞注射到裸鼠腹股沟皮下建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察不同治疗方法 对肿瘤生长的影响.结果 用RNA干扰的方法 可以有效降低大肠癌LOVO细胞系中TF的表达.与单独热疗和单独TF敲低相比,联合治疗能够明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的发生(P<0.05).热疗联合TF敲低能够有效抑制裸鼠体内的肿瘤生长.结论 热疗和TF敲低联合应用能够抑制大肠癌细胞增殖并且诱导其凋亡,热疗联合TF靶向治疗是一个潜在的治疗大肠癌的新策略.     

裸鼠胆囊癌皮下移植瘤超声造影定量参数与血管生成及细胞增殖的相关性

目的 探讨裸鼠胆囊癌皮下移植瘤CEUS定量参数与肿瘤血管生成和细胞增殖状态的相关性。方法 建立裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型,测定CEUS定量参数和微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,并进行相关性分析。结果 成功建立移植瘤20个,最终CEUS成功16个。裸鼠胆囊癌皮下移植瘤PI与MVD、PCNA呈正相关（r=0.635、0.514,P=0.008、0.042）,而CEUS各定量参数与VEGF表达均无相关性（P均>0.05）。裸鼠胆囊癌皮下移植瘤MVD与VEGF、PCNA表达呈正相关（r=0.680、0.650,P=0.004、0.006）,VEGF与PCNA呈正相关（r=0.611,P=0.012）。结论 裸鼠胆囊癌皮下移植瘤PI与MVD、PCNA呈正相关,有助于评估肿瘤的血管生成及细胞增殖状态;MVD、VEGF、PCNA两两之间均呈正相关,表明肿瘤血管生成与细胞增殖之间相互促进,共同促进肿瘤生长。     

胶质瘤端粒酶活性与细胞增殖和VEGF表达的关系的研究

目的 :探讨端粒酶活性表达与细胞增殖活性和VEGF表达的关系。方法 :收集胶质瘤病例 37例 ,其中Ⅱ级组 1 5例 ,Ⅲ级组 9例 ,Ⅳ级组 1 3例。用TPAP法检测端粒酶活性表达 ,以波长 4 5 0nm/ 5 95nm读取OD值检测杂交产物。石蜡切片免疫组化Sp法标记PCNA和VEGF。Mias图象分析系统计数PCNA阳性细胞 (PCNALI)和定义肿瘤有无表达VEGF。结果 :37例胶质瘤中 1 9例 (5 1 35 % )端粒酶活性阳性表达 ,阳性率随肿瘤级别增高而增高 (P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 5 )。 37例胶质瘤平均PCNALI为 5 3± 1 8% ,随肿瘤级别增高而增高 (P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 5 )。端粒酶活性组的PCNALI不高于无端粒酶活性组 (P >0 0 5 )。 37例胶质瘤VEGF表达率为 86 4 9% ,VEGF表达同端粒酶活性无关 (P >0 0 5 )。结论 :胶质瘤瘤细胞端粒酶重新表达与细胞增殖事件的最终发生可能涉及更为复杂的机制 ,与生成或调节VEGF的基因无直接联系或VEGF同肿瘤细胞端粒酶的激活无关     

miR-92b在神经胶质瘤裸鼠移植瘤模型中的作用

目的建立U251胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默miR-92b对U251神经胶质瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法采用神经胶质瘤U251细胞株建立神经胶质瘤的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将shRNA-miR-92b表达的质粒稳定转染U251细胞,筛选稳转细胞采取多点注射的方法注入裸鼠皮下,以阴性质粒和PBS为阴性对照组(shRNA-miR-92b NC组)和空白对照(PBS组);检测裸鼠成瘤体积和重量;real-time PCR检测移植瘤中miR-92b、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达水平;western blot检测移植瘤中的IGFBP-3、β-链蛋白(β-catenin)和钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平;免疫组织化学技术检测移植瘤中IGFBP-3、β-catenin和E-cadherin表达水平。结果移植瘤形成过程中裸鼠未出现死亡,全部裸鼠均皮下成瘤,肿瘤体积检测后发现shRNA-miR-92b转入后显著抑制移植瘤的生长(P0.05);转入shRNA-miR-92b后,移植瘤中的miR-92b表达水平降低,IGFBP-3的表达水平增加(P0.05);western blot结果显示IGFBP-3和E-cadherin蛋白表达升高,β-catenin蛋白表达降低(P0.05);免疫组化结果也显示IGFBP-3蛋白表达升高,β-catenin蛋白表达降低(P0.05)。结论沉默miR-92b表达后可能通过上调IGFBP3、E-cadherin蛋白表达,下调β-catenin蛋白表达,从而抑制神经胶质瘤裸鼠皮下移植瘤的生长。     

营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法复苏培养人脑胶质瘤U251细胞,建立转染小干扰RNA(siRNA)的NAF1组(si-NAF1组)、阴性对照组(si-NC组)、未转染siRNA对照组(control组),采用CCK-8实验检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与control组比较,NAF1-siRNA干预U251细胞后,si-NAF1组NAF1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),其增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞增殖能力下降,克隆形成能力明显减弱,迁移能力明显降低,穿过Transwell膜的细胞数量明显减少(P均<0.05)。si-NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染siRNA后NAF1表达下降,进而下调PCNA水平,抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力;同时MMP-9蛋白表达水平下降,抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。     

人脑胶质瘤手术加局部热化疗研究

目的　探讨脑胶质瘤手术加局部热化疗的可行性和安全性。方法　回顾性分析脑胶质瘤手术加术中、术后间断热化疗等综合治疗 2 4例患者 (综合组 )的资料 ,与同期手术治疗的 46例未行热化疗的脑胶质瘤患者 (对照组 )进行比较。热化疗方法是术中用双极电凝直接加热瘤体残腔化疗药 ,43～ 44℃ ,持续2 5min。术后第 2天始 ,隔日将化疗药注射入埋置于头皮下的Ommaya药囊中 ,并用微波辐射加温 45min ,共 9次。结果　综合组平均生存 3 0 .75个月 ,对照组平均生存 8.85个月 ,综合组较对照组生存年限延长 (P <0 .0 0 1) ,而并发症并未增加。结论　脑胶质瘤术中和术后间断局部热化疗可提高手术疗效 ,减少肿瘤复发 ;微波辅助术后局部化疗药液加温是安全可行的     

肝母细胞瘤细胞凋亡和增殖状况及其相关基因表达的研究

[目的]探讨肝母细胞瘤细胞凋亡和增殖状况及其相关调控基因p53和Bcl-2在各肿瘤中表达的意义.[方法]应用原位末端标记及免疫组化技术检测了38例肝母细胞瘤中细胞凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA),p53和Bcl-2蛋白表达.[结果]肝母细胞中的凋亡细胞数120.6±24.52及增殖细胞数257.64±29.64均显著高于对照组(19.57±1.32,18.28±1.25,均P＜0.001),p53和Bcl-2的表达率(分别为57.8%、36.8%)其表达强度也显著高于对照组(分别为0,17%,P＜0.05),代表细胞增殖活性的PCNA在各型肝母细胞瘤中差异明显(P＜0.01),而凋亡细胞数的差异无意义,细胞凋亡密度高的肿瘤预后较好.[结论]肝母细胞凋亡与增殖平衡调控异常在肝母瘤的发生、发展中可能起重要作用,突变型p53及Bcl-2蛋白均具有抑制细胞凋亡,促进细胞增殖的作用.     

人脑胶质瘤细胞周期素D1的表达及意义

目的:探讨细胞周期素D1(cyclinD1)与胶质瘤的增殖和细胞分裂生长的关系,为胶质瘤的发病机理和新的可能治疗途径提供实验依据。方法:用免疫组化方法检测51例不同级别脑胶质瘤组织和10例脑外伤内减压切除脑组织中cyclinD1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达程度。结果:(1)与对照组相比,胶质瘤组织中存在cyclinD1的过度表达现象,有显著差异(P<0.01)。(2)胶质瘤恶性程度越高cyclinD1表达越强(P=0.042)。(3)51例胶质瘤组织中cyclinD1与PCNA均有不同程度的表达,Spearman相关分析显示两者呈正相关(P<0.01)。结论:cyclinD1在胶质瘤组织中呈过度表达并且随着胶质瘤恶性程度的增高而表达增强,cyclinD1可能参与并促进胶质瘤细胞增殖。     

Hyperthermia induces expression of transforming growth factor-beta s in rat cardiac cells in vitro and in vivo.

Hyperthermia causes changes in expression of TGF-beta mRNA and protein in cultured cardiac cells, as well as in the heart in vivo. 12 h after hyperthermia, primary cultures of neonatal rat cardiomyocytes show a two- to threefold decreased expression of TGF-beta mRNAs which returns to control levels by 48 h after heat shock. In cultures of cardiac fibroblasts, expression of TGF-beta mRNAs increases 5-25-fold, 12-48 h after heat shock, while fetal bovine heart endothelial cells show little change in TGF-beta expression after hyperthermia. In each case, mRNAs for TGF-beta s 1, 2, and 3 are regulated similarly. Hearts isolated from rats exposed to hyperthermia show an initial 20-fold decrease in TGF-beta 1 and 3 mRNA levels which return to control levels by 24 h and subsequently are elevated two- to threefold above normal 48-72 h after heat shock; there is little change in TGF-beta 2 mRNA. Expression of immunoreactive TGF-beta 1 and 3 protein, localized intracellularly in myocytes, follows the same pattern as the mRNA expression. By 72 h, some myocytes show hyperstaining for TGF-beta 1. Staining for extracellular TGF-beta 1/3 exhibits the opposite time course, being most intense 3-6 h after heat shock and returning to control levels by 48 h. The increase in TGF-beta s after hyperthermia could play a role in mediating the reported cardioprotective effects of heat shock.     

顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7 901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法使用MTT法测定细胞增殖,确定顺铂的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24 h和48 h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24 h或48 h的作用效果;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况。结果以24 h时IC40~IC50的药物浓度作为试验的工作浓度,确定CDDP对SGC-7 901和BGC-823细胞的工作浓度分别为5μg/mL和1μg/mL。单纯的43℃热疗60 min在24 h时对2个细胞系均有抑制作用(P<0.05),在48 h时没有显著抑制作用。CDDP 5μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时对SGC-7 901细胞均有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 5μg/mL与热疗联合作用24 h时呈明显的协同作用,在48 h时呈次加作用。CDDP 1μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 1μg/mL与热疗联合作用24 h和48 h均呈明显的协同作用;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况发现,CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.01)。结论CDDP 5μg/mL与43℃热疗60 min联合在24 h时对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用,在48 h时呈次加作用;CDDP 1μg/mL与43℃热疗60 min联合对BGC-823细胞的增殖抑制在24 h和48 h时均呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关。     

miR-26b-3p靶向调控TRA2B表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖和转移

目的探讨miR-26b-3p在神经胶质瘤细胞中的表达,以及其对神经胶质瘤细胞增殖和转移的影响。方法采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测神经胶质瘤组织与癌旁组织中miR-26b-3p与TRA2B的表达水平;通过向神经胶质瘤细胞细胞系中转染miR-26b-3p mimic和inhibitor干扰内源miR-26b-3p的表达,同时检测其靶基因TRA2B蛋白的表达变化;采用CCK-8法检测各组神经胶质瘤细胞增殖能力的变化,以及划痕实验对癌细胞迁移能力进行评估。结果神经胶质瘤患者组织与癌旁组织比较,miR-26b-3p的表达水平显著上调,TRA2B的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,在32例神经胶质瘤患者神经胶质瘤组织中,TRA2B的表达水平与miR-26b-3p表达呈显著负相关(r=-0.510;P<0.05);SHG-44细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著升高,细胞的增殖活性以及转移能力会被抑制;而上调细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著下降,细胞的增殖活性与转移能力会显著提高,相比于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-26b-3p在神经胶质瘤组织中高表达,其可能靶向调控TRA2B的表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖活性与转移能力,在神经胶质瘤的发生发展过程中起着重要的生理功能。     

人脑胶质瘤基质金属蛋白酶-2蛋白和基因的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白质和基因在不同级别人脑胶质瘤的表达特点.方法 按WHO分类标准将35例人胶质瘤标本分为4组,用免疫组化方法检测MMP-2蛋白表达,用RT-PCR分析MMP-2基因表达水平,分析表达水平与肿瘤分级的关系.结果 MMP-2阳性染色主要位于胶质瘤细胞浆和细胞外基质.MMP-2的蛋白表达强度及阳性表达率均随胶质瘤恶性程度的增加而明显增加.随胶质瘤恶性程度的增加,MMP-2mRNA的表达水平明显增加.结论 MMP-2在胶质瘤的侵袭生长中起重要作用.     

不平衡氨基酸EN联合5-FU对大鼠Walker-256癌肉瘤生长的影响

摘要 目的：探讨富含亮氨酸和精氨酸的不平衡氨基酸EN联合5-Fu对大鼠Walker-256癌肉瘤生长的影响。方法： SD大鼠空肠造瘘，皮下接种Walker-256癌肉瘤，36只接种成功之大鼠随机分为A组(平衡氨基酸+NS组)、B组(平衡氨基酸 + 5-Fu组)、C组(富含亮氨酸及精氨酸的不平衡氨基酸 + 5-Fu组)。测定各组治疗后肿瘤重量、抑瘤率、PCNA指数、凋亡指数、肿瘤细胞周期及大鼠生存时间。结果： A、B、C组G0/G1期比例依次增高(P<0.01)；凋亡指数依次增高(P<0.05或P<0.01)；生存时间依次延长(P<0.05或P<0.01)；S期比例依次下降(P<0.01)；PCNA指数依次下降(P<0.01)；瘤重依次下降(P<0.01)。结论：富含亮氨酸及精氨酸的不平衡氨基酸EN能明显抑制肿瘤生长，并能增强5-Fu的抗肿瘤效应。     

Effects of induced hyperthermia on pharmacokinetics of ropivacaine in rats

Ropivacaine is a local anaesthetic used for epidural anaesthesia and postoperative pain relief. Hyperthermia is a very common sign of infection associated with variations in physiological parameters, which may influence drugs pharmacokinetics. The aim of this study was to determine the effects of induced hyperthermia on ropivacaine pharmacokinetics in rats. Two groups of six rats were given a single subcutaneous ropivacaine injection. Hyperthermia‐induced animals were placed in a water bath to obtain a stable mean core temperature of 39.7 °C. After blood samples collection, ropivacaine serum concentrations and pharmacokinetic parameters were determined. Two other groups of six rats were sacrificed 30 min after ropivacaine injection to determine serum and tissues (brain and heart) concentrations. Our results (median ± inter quartile range) reveal a significant increase of the total apparent clearance (0.0151 ± 0.000800 L/min vs. 0.0134 ± 0.00134 L/min), apparent volume of distribution (V_d) (2.19 ± 0.27 L vs. 1.57 ± 0.73 L) and a significant decrease in exposure (488 ± 50.6 mg.min/L vs. 572 ± 110 mg.min/L) in induced‐hyperthermia group. We observed a significant increase in brain ropivacaine concentration in hyperthermic rats (8.39 ± 8.42 μg/g vs. 3.48 ± 3.26 μg/g) and no significant difference between cardiac concentrations in the two groups (5.38 ± 4.83 μg/g vs. 3.73 ± 2.44 μg/g). Results suggest a higher tissular distribution of ropivacaine and an increase in blood–brain barrier permeability during hyperthermia. The hyperthermia‐induced increase in V_d could be responsible for an increase in cerebral ropivacaine toxicity. These experimental data provide a basis for future clinical investigations in relation to local anaesthetic use in hyperthermic patients.     

Protooncogene bcl-2 gene transfer abrogates Fas/APO-1 antibody-mediated apoptosis of human malignant glioma cells and confers resistance to chemotherapeutic drugs and therapeutic irradiation.

The majority of human malignant glioma cells express Fas/APO-1 and are susceptible to Fas/APO-1 antibody-mediated apoptosis in vitro. The sensitivity of Fas/APO-1-positive glioma cell lines to Fas/APO-1 antibody-mediated killing correlates inversely with the constitutive expression of the antiapoptotic protooncogene bcl-2. Here we report that BCL-2 protein expression of human glial tumors in vivo correlates with malignant transformation in that BCL-2 immunoreactive glioma cells were more abundant in WHO grade III/IV gliomas than in grade I/II gliomas. Fas/APO-1 antibody-sensitive human glioma cell lines stably transfected with a murine bcl-2 cDNA acquired resistance to Fas/APO-1 antibody-mediated apoptosis. Forced expression of bcl-2 also attenuated TNF alpha-mediated cytotoxicity of glioma cell lines in the presence of actinomycin D and cycloheximide and conferred partial protection from irradiation and the cancer chemotherapy drugs, cisplatin and BCNU. Preexposure of the glioma cell lines to the cytokines, IFN gamma and TNF alpha, which sensitize for Fas/APO-1-dependent killing, partially overcame bcl-2-mediated rescue from apoptosis, suggesting that multimodality immunotherapy involving cytokines and Fas/APO-1 targeting might eventually provide a promising approach to the treatment of human malignant gliomas.