大鼠“肾俞”穴区与肾上腺神经支配的相关性研究

目的:探索"肾俞"穴与肾上腺相关感觉、交感和运动神经元的分布特征,揭示"肾俞"穴与肾上腺之间的神经解剖学联系。方法:以6只正常SD大鼠作为实验对象,将Alexa荧光素488结合霍乱毒素亚单位B(AF 488-CTB)注射在大鼠第2腰椎(L)左侧相当于人体肾俞穴的位置,将Alexa荧光素594结合霍乱毒素亚单位B(AF 594-CTB)注入肾上腺实质。3d后灌流固定,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜对脊神经节、交感神经链和脊髓标记到的神经元进行观察。结果:被AF 488-CTB和AF 594-CTB标记的神经元均出现在相应神经组织的左侧,与大鼠"肾俞"穴区和肾上腺相关的感觉神经元主要分布于胸(T)10至L 2节段脊神经节,并分别集中在T 12—T 13和T 11—T 12脊神经节中,T 12—L 1脊神经节中分布有少量的AF 488/594-CTB双标记神经元。在腰部交感神经链仅观察到由AF 488-CTB和AF 594-CTB各自标记的交感节后神经元,而在T 11—T 13节段脊髓侧角中只有AF 594-CTB标记的交感节前神经元。在颈(C)7—C 8以及T 11—L 1节段脊髓前角观察到AF 488-CTB标记的运动神经元。结论:大鼠"肾俞"穴区和肾上腺在感觉和交感神经支配方面存在节段性联系,这种联系可能是针刺"肾俞"穴调节肾上腺功能的神经解剖学途径。     

降钙素基因相关肽在大鼠“合谷”穴区相关感觉和运动神经元中的表达

目的:综合运用神经示踪和荧光免疫组织化学技术揭示合谷穴区相关感觉和运动神经元的化学表达。方法:先将荧光素594结合霍乱毒素亚单位B(AF 594-CTB)分别注入4只大鼠"合谷"穴区确定与其相关神经元在脊神经节和脊髓中的分布,然后在对应的组织切片上用降钙素基因相关肽(CGRP)免疫染色方法显示所标记神经元的化学特征。结果:所有AF 594-CTB标记的神经元均出现在示踪剂注入侧的脊神经节和脊髓前角。所标记的感觉神经元以C 7脊神经节为中心分布在C 5-T 1的脊神经节中,其中73.5%表现为CGRP阳性;所标记的运动神经元以C 8节段为中心分布在C 6-T 1脊髓前角的后外侧部,全部表现为CGRP阳性。结论:CGRP广泛存在于支配合谷穴区的感觉和运动神经元中,提示针刺合谷穴可能会通过这些神经元对CGRP发挥调节作用。     

大鼠“承山”穴的神经解剖学特征——霍乱毒素亚单位B结合荧光素488法

目的:应用霍乱毒素亚单位B结合荧光素488(CTB-Alexa 488)新一代荧光示踪技术研究大鼠"承山"穴神经解剖学特征。方法:用微量注射器将5μL 0.05%CTB-Alexa 488分别注入4只雄性SD大鼠"承山"穴。在40~48 h后将动物灌流固定,取出脑、脊髓和双侧腰部脊神经节,并制成组织切片,后直接用荧光显微镜系统观察和记录被CTB-Alexa 488显示的神经标记。结果:被CTB-Alexa 488标记的神经元在荧光光栅450~490的条件下呈绿色,均位于示踪剂注入侧的相关神经组织中。其中标记的一级感觉神经元分布在L4-L5的脊神经节,而被标记的一级运动神经元呈柱状分布在L4-L5节段脊髓前角第Ⅸ层的中外侧部。结论:应用CTB-Alexa 488荧光示踪技术成功揭示了与"承山"穴相关的初级感觉和运动神经元在脊神经节和脊髓的分布规律。     

大鼠“京骨”和“大钟”原络配穴的神经解剖学基础——霍乱毒素亚单位B结合荧光素488和594双标法

目的:用霍乱毒素亚单位B结合荧光素488和594(cholera toxin subunit B conjugated with Alexa Fluor 488,594,CTB-Alexa 488,594)双标记示踪技术揭示"京骨"和"大钟"穴在大鼠神经系统中的特异性联系,探讨原络配穴的神经解剖学基础。方法:用微量注射器将0.1%CTB-Alexa 488和CTB-Alexa 594两种示踪剂各5μL分别注入3只雄性SD大鼠后肢"京骨"和"大钟"穴区。72 h后将动物灌流固定,取出脑、脊髓和脊神经节,并制成组织切片,然后直接用荧光显微镜系统观察和记录被标记的神经元。结果:在相应的激发光下,CTB-Alexa 488和594标记的神经元分别呈绿色和红色,双重标记的神经元呈黄色,均位于示踪剂注入侧的相关神经组织中。在所标记到的神经元中,与"京骨"和"大钟"穴相关联的感觉神经元集中在L4~L5脊神经节,少量分布在L3和L6脊神经节,其中双标的感觉神经元主要出现在L4~L5脊神经节;与两穴相关联的运动神经元以L4~L5节段为中心呈柱状分布在L3~L6节段脊髓前角第Ⅸ层的后外侧部。结论:应用CTB-Alexa 488和594荧光双标记示踪技术观察到了与原穴"京骨"和络穴"大钟"相关的感觉和运动神经元在脊神经节和脊髓的分布规律。     

循经电针刺激可激活穴区皮下感觉传入神经-CB-HRP示踪研究

本实验是将1％CB－HRP5μl分别注入大鼠一侧“足三里”或“乳中”穴区皮下,追踪不同节段脊神经节内被标记细胞,观察穴区皮下感觉传入神经的节段性分布及循经电针刺激对此节段性分布的影响,结果发现：“足三里”穴区皮下感觉神经末梢主要投射至L4、L5两脊神经节,“乳中”穴区皮下感觉神经主要投射至T4、T5、T6脊神经节;循经电针刺激可激活“足三里”或“乳中”穴区皮下感觉神经末梢,使其摄取HRP能力增强,因而同一脊神经节阳性标记细胞数增加,不同脊神经节出现阳性标记细胞的节段扩大。以上结果为循经感传的跨神经节段性传入提供了一些形态学依据。     

大鼠“内关”穴区一氧化氮合酶阳性神经的来源

采用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行追踪与还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH-d)相结合方法 ,观察大鼠“内关”穴区一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经纤维的来源。结果 :当 HRP注入“内关”穴后 ,在脊神经节的颈 6至胸 1 (C6-T1)节和脊髓前角观察到 HRP-NOS双标记神经元。结论 :“内关”穴区有 NOS阳性感觉和运动神经纤维分布。     

电针对胫神经中不同纤维成分再生的促进作用

本文用HRP法,观察损伤大鼠左侧胫神经,电针患侧“环跳”和“三阴交”穴.在手术后15天,电针组脊神经节及脊髓前角内标记细胞数量较同期对照组显著增多。我们认为:(1)电针对胫神经干中感觉纤维及躯体运动纤维终末向各自支配区的再生具有明显地促进作用;(2)阳极电极置于环跳穴,阴极置三阴交穴,以电脉冲形式刺激神经干,此电针法对神经再生的促进作用可能具有独特的双重效果。     

P物质阳性表达神经纤维在大鼠心包经五输穴局部皮肤组织中的分布

目的:通过观察P物质(SP)阳性表达神经纤维在心包经五输穴中井、荥、输、经、合每个腧穴局部皮肤中的显微结构特征,揭示不同腧穴之间神经支配的差异。方法:将6只正常大鼠用4%多聚甲醛经过心脏灌流后取下"中冲""劳宫""大陵""间使""曲泽"穴区局部皮肤组织,制成20μm厚的矢状切片,用荧光免疫组织化学和组织化学方法进行染色,其中SP标记神经纤维,鬼笔环肽用于标记皮肤的各层组织以及血管样结构,然后用荧光显微镜和共聚焦显微镜对所标记的组织标本进行观察和记录。结果:从整体显微结构上看,SP主要标记的是皮肤组织中的细神经纤维。SP阳性表达神经纤维在浅层的表皮和真皮层以游离的单纤维方式存在,在深层的皮下组织中则以神经纤维束的方式存在。通过计数大鼠心包经五输穴各穴区浅层中游离神经纤维的数量和长度,观察到SP阳性表达神经纤维在"中冲"和"劳宫"穴区之间的分布密度差异无统计学意义(P0.05),在"大陵""间使""曲泽"各穴区之间的分布密度也差异无统计学意义(P0.05),而SP阳性表达神经纤维在前面2个穴中的分布密度显著高于它们在后面3个穴中的分布密度(P0.01)。同时,SP阳性表达神经纤维多与血管样结构伴行。结论:本研究表明SP阳性表达神经纤维在大鼠心包经五输穴各穴区皮肤中的分布密度从肢体远端到近端呈减少的趋势,从神经纤维的数量上反映出了不同穴区神经支配的相对特异性。     

针刺抑痛进行子宫切除时的脊髓初级抑痛

实验用HRP 逆行神经示踪法,观察了兔、猫子宫初级感觉神经元的分布情况。结果显示,其传入的脊髓节段,与命门、脊中、秩边、足三里、三阴交等穴区感觉神经传入的脊髓节段,有广泛的重叠;且兔、猫子宫初级感觉神经元均以小细胞为主。从而提出,在针刺抑痛进行子宫切除手术时,脊髓水平初级抑痛的可能。     

内关,公孙配伍相关性的神经解剖学研究

目的　对内关、公孙配伍机理及两穴配伍应用能调节胃等内脏功能,从神经解剖学角度进行探讨。方法　运用ＣＢ－ＨＲＰ神经示踪法。结果　两穴配伍应用可使相应的感觉神经元和运动神经元阳性标记细胞,在数量上增多和节段性分布扩大;阳性运动神经元树突皆向第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ层特异性延伸;能使在孤束核、腹腔神经节和背根神经节的阳性标记细胞明显减少。结论　提示内关、公孙配伍应用,其针刺信息在脊髓内经中间内、外侧核的神经元纤维感传至相应脊髓节段,再分别通过与交感神经、副交感神经形成突触联系,形成两穴配伍在脊髓层次的协同增效关系。同时通过两穴在脊髓内相应神经元向孤束核的投射纤维产生突触联系,实现对胃等内脏传入信息在脊髓和孤束核水平的调节整合作用     

辣根过氧化物酶追踪“足三里”穴的脊髓投射研究

采用辣根过氧化物酶 (CT HRP)追踪足三里穴的脊髓投射方法 ,观察了足三里穴和对比区的神经在脊髓神经节的不同数标记的神经细胞 ,证实了足三里穴与非穴位的HRP追踪发现在脊髓节段上基本相同 ,但在节段的标记数目上却有明显的不同 ,两组相比差异有显著性意义 (P <0 0 1或P <0 0 5)。证明穴位区的神经传导功能比非穴位区强 ,针刺时可能在脊髓的相应节段产生不同功能表现 ,在穴区与非穴区局部存在着不同的神经构筑。     

大鼠“太溪”穴区与神经系统的节段和区域相关性研究——辣根过氧化物酶法

目的:用辣根过氧化物酶(HRP)神经示踪技术揭示太溪穴区与周围和中枢神经系统的相关性联系。方法:将5μL1%HRP分别注入10只雄性SD大鼠内踝尖与跟腱之间的中点凹陷处(相当于人体足少阴肾经的太溪穴)。36 h后将动物灌流固定,取出大脑、延髓、脊髓和L1-L6双侧的背根神经节,然后将各部位的组织切片进行四甲基联苯胺组织化学染色来显示HRP标记的神经元及神经纤维终末。结果:所有HRP标记均出现在示踪剂注入侧的相关神经组织中。被HRP标记的神经节细胞分布在L4-L6的背根神经节,数量依次为L5L4L6,而被HRP标记的运动神经元呈柱状分布在L4-L6节段脊髓前角第Ⅸ层的后外侧部和中外侧部;同时,被HRP标记的跨神经节细胞中枢端神经纤维投射集中分布在L4-L6节段脊髓后角第Ⅰ、Ⅱ层的中间部,并散在分布于薄束核的中间部。结论:应用HRP神经示踪技术证明,与"太溪"穴区相关的初级神经元传出及其中枢传入在背根节、脊髓和薄束核的对应部位分别表现为节段或区域性的联系方式。     

大鼠“合谷”穴区感觉和运动神经的节段性分布(HRP法研究)

实验用辣根过氧化酶(HRP)法研究了大鼠“合谷”穴区的感觉和运动神经的节段性分布。结果证明“合谷”穴区的感觉神经胞体位于颈_5—颈_8脊神经节内,支配“合谷”穴区的运动神经胞体位于脊髓颈_5—颈_8四个节段的前角后外侧部。并对“合谷”穴在针刺中所起作用的形态基础进行了讨论。     

足三里穴区不同层次感觉和运动神经元的节段性分布研究

对“足三里”穴区不同层次感觉和运动神经元的节段性分布进行了研究。结果证明“足三里”穴区皮内、皮下、肌层的感觉运动神经的节段性分布略有不同。因此,认为肌层的经穴神经分布可能与经脉脏腑相关的关系更为密切。     

心经与相应脏腑及五官联系途径的形态学研究──经线区域感觉神经元与交感节后神经元的节段分布

研究经线相关区域感觉神经无节段支配及交感节后神经元的起源，对经络脏腑相关、针灸治疗及经络实质探讨均有重要价值。心脏传入神经元的节段支配已有较多的研究，而心经有关的经线区域的节段支配至今未见报道。故我们对18只家兔及10只Wistar大鼠的前肢心经及心包经的有关穴位，注射20％HRP，观察两经区域神经节段支配情况。结果发现：（1）心经和心包经相关区域感觉神经元分布较广（C5－T2），心经相对集中于C7－T1，而心包经相对集中于C6－T2。提示两经感觉神经元在节段分布上与心脏的节段支配大体相同，但有相对差异性。（2）两经相关区域感觉神经元的数量，大型标记神经细胞明显少于中、小型。提示两经区域的感觉传入以直径较细的神经纤维为主；由于支配血管的主要是细神经纤维，所以血管及其神经装置在躯体循经感传中可能起着重要作用。（3）分布于家兔心经及心包经相关区域的交感节后神经元胞体位于预下、胸1和胸2交感神经节，这与支配心脏的交感节后神经元主要部分相重叠，这可能是两经穴位治疗心脏疾病的机理。     

电针对"关元"穴区初级感觉传入神经元节段分布的影响

目的:用CB-HRP示踪法对大鼠“关元”穴传入的神经节段分布进行研究。方法:SD大鼠随机分成对照组和电针组,分别在“关元”穴注入0.03?-HRP 20μL。注射后,电针组动物每天给予“关元”穴电针30 min,共3 d。84 h后,观察两组动物的双侧相应节段的背根神经节(DRG)中阳性标记细胞的形态学变化和数量的变化。结果:在两组动物的T11~L3双侧DRG中,都存在有与“关元”穴相关的CB-HRP标记细胞;电针组的标记细胞总数显著高于对照组;标记细胞总数分布最多的节段,对照组在L3,电针组比对照组高一节段,在L2;两组标记细胞的形态学观察,均可分为大、中、小三型细胞,其中以小型细胞占多数。结论:针刺大鼠“关元”穴,可使穴位区局部感觉神经初级传入功能活动加强,L2可能是针刺“关元”穴信号传入脊髓的主要途径。     

电针三阴交穴和血海穴对实验性类痛经大鼠痛调节机制的影响

目的：通过观察电针同一经脉上的同神经节段支配的不同属性穴位对大鼠实验性类痛经反应和中枢痛觉调制系统内阿片肽类物质的影响,探讨经穴效应是否存在特异性。方法：动情间期3月龄SD雌性大鼠64只,随机分为盐水组、模型组、三阴交组、血海组,每组16只。除盐水组外,其余各组大鼠均以苯甲酸雌二醇和缩宫素制备类痛经大鼠模型。模型制备后,给予穴位组即刻电针。随即观察大鼠的扭体反应,并应用免疫组化法和ELISA法分别检测大鼠相应节段脊髓背角浅层κ-受体的表达和PAG内ENK、β-EP的含量。结果：模型制备后,大鼠扭体潜伏期明显缩短,扭体次数和评分明显增加（P〈0.01）。电针两穴后,扭体评分和次数均明显减少（P〈0.01）,且电针三阴交穴扭体潜伏期明显延长（P〈0.05）;电针三阴交和血海穴可使各节段脊髓背角浅层κ-受体均有明显表达（P〈0.05,P〈0.01）;但电针三阴交穴的L2、S1节段IOD值比血海穴明显升高（P〈0.01,P〈0.05）;电针三阴交穴可使PAG内ENK和β-EP（P〈0.01）含量明显升高。结论：电针同一经脉上的同神经节段支配的不同属性穴位均可缓解大鼠的类痛经反应,并可调节中枢痛觉调制系统内的阿片肽类物质的含量。但穴位属性不同。调节效应不同。特定穴的调节效应优于非特定穴。说明经穴效应具有相对特异性。     

针刺麻醉行甲状腺手术常用穴位的形态学研究

目的:探讨针麻行甲状腺手术常用穴位扶突穴、合谷穴及内关穴的感觉传入及其与甲状腺感觉传入在颈脊神经节的汇聚与整合,揭示针麻行甲状腺手术的形态学基础。方法:①实验用成年雄性Wistar大鼠24只,随机分为合谷穴、内关穴、扶突穴和甲状腺4组(每组6只),将辣根过氧化物酶(HRP)分别注入上述穴区及甲状腺内,观察穴位和甲状腺的感觉传入。②雄性Wistar大鼠18只随机分为甲状腺-扶突穴组、合谷-甲状腺组、内关-甲状腺组(每组6只),分别将荧光素碘化丙啶(PI)、双苯甲亚胺(Bb)注入上述3个穴位和甲状腺,观察穴位和甲状腺的传入感觉在脊神经节的汇聚及神经节细胞的分支投射。③雄性Wistar大鼠24只随机分为正常组、针刺组(每组12只),手针针刺以上穴位及"足三里"和非穴位,用免疫组织化学方法观察穴区局部缝隙连接蛋白43(Cx 43)表达。结果:①HRP结果显示,3个穴位与甲状腺的感觉传入在C 3-C 5脊髓节段存在汇聚与重叠。②扶突穴注入PI、甲状腺注入Bb,合谷穴注入PI、甲状腺注入Bb,内关穴注入PI、甲状腺注入Bb后,3组出现的单标记神经元分布的部位部分不同,但均在C 3-C 6的脊神经节观察到双标记神经元。③免疫组化染色结果显示,不同穴位针刺组Cx 43表达均高于正常对照组(P<0.05);各穴位处Cx 43的表达显著高于非穴位处(P<0.05);非穴位处针刺后Cx 43表达的变化与非针刺非穴位组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:扶突穴、合谷穴、内关穴及甲状腺的传入投射在颈脊神经节存在汇聚与分支投射,为针麻行甲状腺手术提供了新的形态学依据,同时也证实穴位针刺可以调节穴位局部缝隙连接蛋白的表达以影响局部细胞间的信息交流。     

降钙素基因相关肽阳性表达神经纤维在大鼠“内庭”“足三里”“伏兔”穴区皮肤组织中的分布

目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)阳性表达神经纤维在大鼠后肢不同穴区局部组织中的分布特征。方法:5只正常实验大鼠用4%多聚甲醛经过心脏灌流后取下"内庭""足三里""伏兔"穴区局部皮肤组织,制成20μm厚组织切片,经CGRP荧光免疫组织化学方法染色后,用鬼笔环肽和核酸特异性荧光染料DAPI进行组织化学复染,再使用共聚焦显微镜进行观察和记录CGRP阳性表达神经纤维、鬼笔环肽标记的血管样结构以及DAPI标记的细胞核在这3个穴区的分布情况。结果:在"内庭""足三里""伏兔"穴区局部组织中看到CGRP阳性表达神经纤维分布在真皮和皮下组织,主要集中在血管样结构周围,其数量和长度以"内庭"穴区居多,"足三里"和"伏兔"穴区依次减少(P0.01)。微细血管样结构在这3个穴区的分布也有依次减少的趋势。结论:CGRP阳性表达神经纤维是穴区局部组织中的重要成分,其数量从肢体远端穴区到近端穴区依次减少。这一形态学结果提示针刺肢体远端的穴位可能获得更强的针感。     

“合谷”“内关”“扶突”穴与甲状腺的初级传入神经联系:荧光双标记法

目的:观察"合谷""内关""扶突"穴区与甲状腺区之间的传入神经联系途径,为针刺该3穴区行甲状腺针麻手术机制提供形态学依据。方法:30只Wistar雄性大鼠分为合谷-扶突穴组、内关-扶突穴组、甲状腺-扶突穴组、合谷-甲状腺组、内关-甲状腺组,每组6只。分别采用荧光素碘化丙啶(PI)及双苯甲亚胺(Bb)从上述穴区皮下和甲状腺周围微量注射。PI注射后60 h、Bb注射后12 h将动物以常规方法灌流固定,剥取颈节段脊神经节及脊髓,荧光显微镜下观察PI、Bb单双标记细胞。结果:所有组中PI及Bb单标记细胞在C1-T1脊神经节均可见到,其中"合谷"穴与"内关"穴PI单标记细胞集中分布在C4-C8脊神经节,"扶突"穴与甲状腺Bb单标记细胞集中分布在C1-C6脊神经节。合谷-扶突穴组、内关-扶突穴组、合谷-甲状腺组、内关-甲状腺组双标记细胞主要分布于C3-C7脊神经节,甲状腺-扶突穴组双标记细胞分布于C1-C4脊神经节。在脊髓前角也可见少量单标记细胞,约占同一节段脊神经节全部标记细胞数的8%左右,并可见散在的双标记细胞。结论:"合谷""内关""扶突"之间及3穴位与甲状腺之间均存在双标记细胞,即上述穴位之间及穴位与甲状腺之间存在由外周到脊髓的联系途径,为这些穴位组方配伍使用在甲状腺手术针麻过程中发挥镇痛作用的机制提供了形态学依据。