食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测

目的利用荧光定量PCR技术，建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒，研究其灵敏度、特异性，并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中，8株副溶血弧菌结果均为阳性，而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性；纯菌条件下定量检测低限10cfu／ml；对模拟样本直接进行，检测低限为10^3cfu／g，经培养增菌后，检测低限则达到2cfu／g。结论该方法特异性强、敏感性高，操作简便快速，检验周期仅需36h，扩增与检测在封闭单管进行，可避免常规PCR方法易污染缺陷，具有很好的推广应用前景。     

双重PCR快速检测副溶血弧菌

目的:建立一种快速、敏感、特异的双重PCR方法检测副溶血弧菌.方法:根据GenBank收录的副溶血弧菌tdh、trh、tlh基因序列用vtII软件分别设计引物,应用多重PCR技术同时扩增副溶血弧菌的特异性基因tdh、trh、flh.结果:副溶血弧菌标准株和实验菌株均能扩增一条或两条目的带,扩增产物tdh、trh、tlh片段大小分别为224,466,381 bp.结论:tdh、trh基因分别存在于不同副溶血弧菌株中,而tlh基因在不同副溶血弧菌中都广泛存在,具有种属特异性,因此可以用来特异快速的检测副溶血弧菌.     

一种快速检测副溶血弧菌的PCR方法

目的建立一种简便、快速、准确检测副溶血弧菌的方法。方法根据Genbank收录的副溶血弧菌tlh基因序列设计合成引物 ,扩增tlh基因 ,用该方法检测副溶血弧菌标准株和分离株。结果用快速检测副溶血弧菌的PCR方法 ,菌液稀释到 2 .4× 10 2 cfu·mL- 1作PCR仍可扩增出目的片断 ;所有副溶血弧菌标准参考株及待检的副溶血弧菌均可扩增出一大约 130 0bp的特异条带 ;将扩增的tlh基因测序结果与Genbank中已收录的tlh基因序列比较 ,两序列的同源性达99%。结论该检测方法快捷、特异性好、敏感性高 ,可以作为副溶血弧菌的常规检测方法     

沈阳市副溶血弧菌重复序列PCR分型

目的 探讨重复序列PCR对临床分离株副溶血弧菌进行分型的可行性;从分子水平了解沈阳市流行的副溶血弧菌菌型特征.方法 利用基因外重复回文序列-PCR(PEP-PCR)和肠细菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)对40株临床分离副溶血弧菌基因组DNA进行扩增,对扩增的DNA电泳指纹图谱进行分型分析.结果 40株副溶血弧菌呈现不同程度的基因多态性.基因外重复回文序列-PCR分辨力指数可达到0.953,40株菌株分为16个型,优势菌型为G型,占总菌数的20.0%.肠细菌基因间共有重复序列-PCR分辨力指数为0.5;40株菌株可分为4个型,优势菌型为D型,占总菌数的67.5%.结论 重复序列PCR可以用于副溶血弧菌临床分离株的分子分型研究,其分型敏感程度优于血型分型.     

应用PCR检测副溶血弧菌的耐热溶血毒素基因tdh

副溶血弧菌可引起食物中毒或急性胃肠炎，尤其在夏季，常可从食用不洁海产品而导致食物中毒的病人肛拭标本中分离到。目前一般认为该菌的热稳定性溶血毒素(TDH)是重要的毒力因子。TDH可在莪萋氏血平板上产生一种特殊的溶血现象，称作神奈川现象(Kanagawa phenomenon，KP)^[1]。临床上分离出的副溶血弧菌株几乎都是KP阳性，因此通常认为KP阳性为产毒株，KP阴性为非产毒株。     

副溶血弧菌质粒检测

副溶血弧菌质粒检测副溶血弧菌质粒研究课题协作组目前，血清学分型是对副溶血弧菌进行流行病学研究的唯一常规实验室诊断方法。质粒图谱检测是以细菌所含质粒构成的特异性电泳图谱为基础的分子流行病学方法，已广泛应用在沙门氏菌感染等流行病学调查［１，２］。我们曾在...     

副溶血弧菌快速检测的进展及其应用

副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus,简称VP)是一种广泛分布于海洋与盐湖中的嗜盐性细菌,海产品中常有此菌,它是引起食源性疾病的主要病原之一,是我国沿海地区食物中毒和夏季腹泻的重要病原[1].由于我国物流频率迅速增加,内地省份也与沿海地区一样,频繁报告由VP感染引起的消化道疾病,严重威胁人们的身体健康并造成经济财产的巨大损失.为有效控制病原的发生扩散,准确即时的检测手段正是预防控制VP传播的关键所在.通常鉴定方法是分离培养、镜检观察、生化鉴定、嗜盐性试验等,不仅耗时,且操作复杂,灵敏度有限.现代分子生物学方法具有特异性高、快速灵敏的优势.因此,逐渐成为现代检验学的发展趋势.国外已将分子生物技术引入食品检验中[2],我国学者也已对食品VP的分子生物学检测进行了研究和应用[2,3].     

应用PCR法检测副溶血性弧菌

目的 研究副溶血性弧菌的PCR检测方法。方法 引物选择副溶血性弧菌耐热溶血素（TDH）上的基因，应用PCR法，检测副溶血性弧菌。结果 PCR能检测经选择性增菌液培养的副溶血性弧菌，扩增片段在430bp：结论 应用PCR检测副溶血性弧菌，具有快速、特异、灵敏和简便的特点。     

副溶血弧菌的分子生物学研究进展

本文介绍近年国外学者关于副溶血弧菌(VP)的分子生物学研究的一些进展,着重介绍了VP质粒的发现、质粒的有关功能、VP的毒力因子溶血素、溶血素的基因位点及其流行病学方面的意义。 VP首次于1950年从污染的食品中分离出来,是日本食物中毒的主要致病因子。在世界范围内也是污染海产品,导致食物中毒的重要致病因子。在此就VP的分子生物学研究进展     

食品中副溶血弧菌FQ-PCR快速检测方法的研究

目的利用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株8株及同源、非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测。同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测。结果该方法有良好的特异性:8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其它24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,16株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性:阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间相关系数达到0.9871。在纯培养的条件下,其检测低限为10cfuml。对32个模拟样本直接进行定量检测,则检测低限在102cfug;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfug。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景。     

从黄花鱼中检出一株副溶血弧菌

1998年 8月中旬 ,我们对本市饮食业进行卫生学监测时 ,从某海产品销售处的黄花鱼中检出一株副溶血弧菌 ,现将结果报告如下 :1　材料与方法1.1　样品来源 :以无菌手续称取上述黄花鱼 1g1.2　培养基 :购于卫生部上海生物制品研究所1.3　微量生化管 :由上海医学化验所供给 ,部分自     

副溶血弧菌的致病性及检测方法

副溶血弧菌是沿海地区的一种嗜盐性细菌,其生长快,繁殖速度高,常通过感染多种海产品而引发人的食物中毒发生,近年来,由副溶血弧菌引起的食源性疾病日益增多,到目前为止,O3:K6型副溶血弧菌菌株已引起了亚洲、欧洲、美洲、非洲等多个国家的大流行。随着由副溶血弧菌引起疾病的规模不断增加和频发,人们对其也更加关注,各种检测方法逐渐取代传统的生化鉴定实验,尤其是在食品微生物检测、流行病学调查以及医院感染监控等方面发挥越来越重要的作用。本文就副溶血弧菌的基础特性,致病性及目前的检测方法作一综述。     

一起由副溶血弧菌引起的食物中毒的实验室检测

目的：对一起可疑食物中毒的病原菌相关实验室检测。方法：参照GB／T7489、WS／T．9-1996对食物中毒患者肛拭子进行致病菌检测，并对分离的可疑致病菌进行毒力基因检测、随机扩增多态性分析（RAPD）和药敏试验。结果：11份患者肛拭标本中，8份（占72．7％）分离出副溶血弧菌，血清分型均为03：K6；毒力基因检测为tdh阳性，trh阴性；RAPD结果显示，8株副溶血弧菌具有相似的RAPD图谱。结论：结合流行病学资料、可疑致病菌检测、毒力基因检测及随机扩增多态性分析结果，证实该起食物中毒是由副溶血弧菌引起，致病毒素主要为tdh编码的TDH。     

改良分子信标—实时PCR快速检测副溶血弧菌

目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 ,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段     

一起副溶血弧菌食物中毒

20 0 0年 10月 1日 ,我县孝丰镇某酒店因中、晚两次婚宴 ,共设酒席 30桌 ,导致 6 6人发生副溶血性弧菌食物中毒 ,现将调查结果报告如下。流行病学调查1　个案调查两次婚宴共设酒席 30桌 ,有 30 0人就餐。由于就餐者都散居各处 ,再加上宴请者未能及时提供全部就餐者名单 ,根据所掌握的以及宴请者提供的 10 0位就餐者展开了个案调查 ,发生食物中毒有 6 6人 ,其中中餐就餐 190人 ,发病39人 ;晚餐就餐 110人 ,发病 2 7人 ;没有中、晚两餐都就餐者。发病距就餐最短 7小时 ,最长 48小时 ,平均发病时间 2 2小时。症状以腹痛、腹泻、呕吐为主。腹泻…     

副溶血弧菌PCR快速检测

目的 为建立副溶血弧菌的快速、敏感、特异的PCR检测方法. 方法选择gyrB基因作为靶序列设计一对引物,用该引物对副溶血弧菌和10株非副溶血弧菌进行PCR扩增,并且用此方法对30份临床标本进行检测. 结果扩增片断表现出极好的剐溶血弧菌特异性,最低检出限为190 cfu/ml. 结论本实验建立的PCR检测方法为一种简便、快速、敏感、特异的副溶血弧菌检测方法.     

一起副溶血弧菌引起的食物中毒调查报告

1999年 10月泰州市某酒店在举办婚宴时 ,由于管理不善 ,在冷菜加工制作过程中 ,致使冷荤菜被副溶血性弧菌污染 ,导致 2 5 3人发生食物中毒。现将调查处理情况报告如下。1　案例调查及初步分析10月 3日上午 ,泰州市卫生防疫站接到报告 ,称 10月 2日晚在某酒店吃婚宴酒席后 ,不少客人相继出现急性胃肠炎的症状 ,并已到医院就诊。当日食品卫生监督员分赴各就诊单位及酒店进行现场调查。据调查 ,酒店 10月 2日晚婚宴 2 8桌酒席的客人中 ,相继 88人发生食物中毒 ,最短潜伏期 1.5小时 ,最长潜伏期 2 7小时 ,平均 13小时 ,发病高峰集中于 3日晚 8～…     

一起由副溶血弧菌引起食物中毒的检测结果报告

目的对一起可疑食物中毒的病原菌进行相关实验检测。方法按照GB/T4789-2003《食品卫生微生物学检验》对分离的菌株进行生化鉴定、毒力因子检测、动物毒力试验、药敏试验。结果4份患者肛拭标本分离出4株副溶血弧菌。毒力因子KP溶血试验阳性,可致小白鼠7 h内死亡,对氨苄青霉素类耐药。结论结合流行病学调查和实验室检测结果,证实该起食物中毒是由副溶血弧菌引起。     

副溶血弧菌越冬的研究

目的：探讨副溶血弧菌在低温不同水中越冬的能力。方法：用涂布平板法对水中可培养菌数进行计数。结果：在4－6℃水中，可培养菌数逐渐下降，在海水和人工海水中均存活5个月以上，而在自来水中仅为2周。结论：副溶血弧菌能在海水和人工海水中以原形越冬，越冬后仍保持原有毒力和生化特征。