肿瘤坏死因子-α诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:应用肿瘤坏死因子d(TNF-α)诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨建立可靠胰岛素抵抗(IR)细胞模型的方法.方法:3T3-L1前脂肪细胞经3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,将其与20,10,5μg·L-1TNF-α共孵育,100 nmol·L-1胰岛素作用30 min刺激脂肪细胞糖转运.以葡萄糖氧化酶法测定培养基上清液葡萄糖含量,观察TNF-α对脂肪细胞糖摄取的影响,鉴定IR模型.结果:TNF-α抑制胰岛素诱导前、后的脂肪细胞糖转运,抑制作用呈剂量依赖性,其中20 μg·L-1TNF-α的抑制率分别为79.2％和81.4％(P＜0.05).结论:肿瘤坏死因子α可诱导3T3-L1脂肪细胞产生IR,这种细胞模型简便、可靠.     

肿瘤坏死因子-α诱导脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立及评价指标

[目的]确定运用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)建立胰岛素抵抗模型的最适时间与剂量,并通过检测TNF-α对葡萄糖转运体4(GLUT4)表达及膜转位的影响探讨模型成立的评价指标。[方法]用不同浓度(5、10、15、20、25 ng/mL)的TNF-α作用于3T3-L1脂肪细胞不同的时间(48、72、96 h),建立胰岛素抵抗模型。另外,分别采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和高内涵筛选技术检测模型组细胞GLUT4蛋白表达及分布情况。[结果]与对照组相比,10 ng/mL TNF-α作用3T3-L1脂肪细胞96 h后的模型组的葡萄糖摄取及GLUT4的表达均有显著的降低;加入胰岛素后,对照组的葡萄糖摄取及GLUT4的表达有明显的升高,而模型组无明显变化;胰岛素抵抗模型中,GLUT4膜转位显著降低,差异有统计学意义。[结论] 10 ng/mL的TNF-α作用3T3-L1脂肪细胞96 h有利于建立胰岛素抵抗模型。此外,葡萄糖摄取结合GLUT4的蛋白表达及膜转位可作为胰岛素抵抗模型建立的评价标准。     

葫芦巴4－羟基异亮氨酸对高糖诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的 研究葫芦巴活性成分4－羟基异亮氨酸（4-hydroxyisoleucine, 4-HIL）对高糖诱导的小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）胰岛素抵抗的作用及其机制。方法 以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,予以不同浓度4-HIL（5、10、20 μmol/L）进行干预。采用［3H］－脱氧-D-葡萄糖摄入法检测葡萄糖摄取率,PCR法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）mRNA表达量,ELISA法检测细胞上清TNF-α蛋白水平。以棕榈酸（palmitic acid,PA）为对照。结果 25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制了63％;PCR显示脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达较正常脂肪细胞明显增高（P<0.05）;ELISA显示细胞上清中的TNF-α分泌量增加70 pg/mL（P<0.05）。PA组表现出类似结果。分别加入5、10、20 μmol/L 4-HIL作用24 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激所产生的葡萄糖转运分别增加35％、50％、60％;PCR检测显示,脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达随着药物浓度的增加呈递减趋势,与模型组及PA组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,药物干预后脂肪细胞培养基上清TNF-α分泌水平分别下降10、18、39 pg/mL（P<0.05）。结论 4-HIL可以显著改善高糖诱导的小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,同时4-HIL能够抑制TNF-α的分泌。     

苦瓜总皂苷对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞炎症因子的影响

目的探讨苦瓜总皂苷对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法采用MTT法确定苦瓜总皂苷浓度,利用油红"O"染色法鉴定脂肪细胞的形成,用地塞米松处理脂肪细胞复制胰岛素抵抗细胞模型,添加苦瓜总皂苷作用24 h后,运用实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT-q PCR)检测脂肪细胞中TNF-α和IL-6的m RNA表达,酶标记免疫吸附测定法(ELISA)检测培养液中TNF-α和IL-6蛋白含量变化。结果选定用于实验的苦瓜总皂苷的作用时间为24 h,浓度为苦瓜高剂量组(5 mg·m L~(-1))、苦瓜低剂量组(2.5 mg·m L~(-1));诱导分化3T3-L1细胞12 d形成成熟细胞;地塞米松处理3T3-L1脂肪细胞48 h胰岛素抵抗脂肪细胞模型复制成功;苦瓜总皂苷干预3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞后,葡萄糖摄取量显著增高(P0.01),TNF-α和IL-6的表达和蛋白分泌显著降低(P0.01),并呈浓度依赖性。结论苦瓜可以改善胰岛素抵抗细胞模型的胰岛素抵抗状态,与降低炎症因子表达相关。     

附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型葡萄糖摄取的影响

目的:研究附子多糖对胰岛素抵抗脂肪细胞模型葡萄糖摄取的影响,并对其机理进行探讨。方法:1.将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,在培养液中加入不同浓度的附子多糖,干预培养24h,测定其对葡萄糖消耗及细胞活力的影响,由此确定进一步实验的工作浓度。2.用高糖和高胰岛素联合诱导培养脂肪细胞,造成胰岛素抵抗脂肪细胞模型,实验设对照(control,CON)组,模型(model,MOD)组,附子多糖(Fuzi Polysaccha-ride,FPS)组,罗格列酮(rosiglitazone,ROS)组,干预培养24h,通过H3葡萄糖的摄取实验鉴定各组脂肪细胞对3H-葡萄糖的摄取率。结果:1.附子多糖从0.025g/L到0.8g/L均促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的消耗,浓度为0.8g/L时细胞消耗量最大,比对照组增加25%。MTT结果示,除0.8g/L、0.4g/L外,其它浓度对脂肪细胞活力无明显影响(与对照组比较P>0.05)。结果示:1附子多糖最适作用浓度为0.2g/L。2以模型组作为3H-葡萄糖摄取正常基值,各自摄取率,对照组为模型组的399.5%,附子多糖组、ROS组分别为模型组的318.0%、462.6%,与模型组比均有显著差异(P<0.01),与ROS组也存在显著差异(P<0.01)。结论:1.附子多糖在对脂肪细胞毒副作用较小的基础上可促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的消耗。2.附子多糖可促进胰岛素抵抗模型脂肪细胞对3H-葡萄糖的摄取。     

七种滇产植物改善胰岛素抵抗作用研究

目的:研究乌墨、望江南等7种滇产植物对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞糖摄取的影响,以及乌墨根提取物对胰岛素抵抗小鼠的改善作用。方法:采用地塞米松诱导形成胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞模型,观察乌墨、望江南等7种滇产植物对该细胞模型葡萄糖消耗的影响;采用高脂诱导形成胰岛素抵抗小鼠模型,观察乌墨根的乙醇提取物对其葡萄糖耐量和胰岛素耐量的影响。结果:乌墨根的乙醇提取物(10mg/L)和望江南叶的乙醇提取物(10mg/L)明显增加胰岛素抵抗细胞葡萄糖的消耗量,并有一定的浓度依赖性;乌墨根乙醇提取物可明显改善胰岛素抵抗小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素耐量。结论:乌墨根的乙醇提取物和望江南叶的乙醇提取物能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取,改善胰岛素抵抗状态;此外,乌墨根的乙醇提取物还能改善胰岛素抵抗小鼠的胰岛素抵抗状态。     

五味清浊散对3T3-L1细胞TNF-α浓度和基因表达的影响

目的:观察五味清浊散(WQS)对脂肪细胞血糖浓度和TNF-α水平及其mRNA其表达的影响。方法:药物处理48h后,采用GOD-POD法检测3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型培养液中葡萄糖浓度,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-α基因mRNA的表达。结果:WQS使脂肪细胞IR模型培养液葡萄糖、TNF-α浓度降低,并下调TNF-α基因mRNA的表达。结论:WQS有显著的降糖作用,并下调TNF-α水平。     

小檗碱对白介素-6诱导胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响

目的:观察小檗碱对白介素-6(IL-6)诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响。方法:选用IL-6诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型。以20μg·L-1IL-6培养48 h,将3T3-L1脂肪细胞随机分为正常对照组、模型组、吡格列酮组(50μmol.L-1)和小檗碱高、中、低剂量组(10,20,50μmol.L-1),以葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖消耗量,观察小檗碱对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响,鉴定IR模型;采用实时荧光定量PCR技术测定脂肪细胞脂联素基因mRNA水平。结果:模型组葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平与正常对照组比较,均显著降低(P<0.05);小檗碱高、中、低剂量组及吡格列酮组均能显著增加葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平(P<0.05)。结论:小檗碱可增加白介素-6诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素基因mRNA的表达,改善胰岛素抵抗状态。     

中药鬼箭羽提取物对脂肪细胞葡萄糖摄取作用的影响

目的：在对中药鬼箭羽药效学研究的基础上，初步探讨其各提取组份SML-1，SML-2，SML-3，SML-4对于脂肪细胞的降糖作用机制。方法：采用分离的大鼠脂肪细胞，用高浓度葡萄糖和胰岛素诱导脂肪细胞胰岛素抵抗模型，观察鬼箭羽各提取组份对于胰岛素抵抗模型脂肪细胞的葡萄糖摄取的影响以及对于正常脂肪细胞，低浓度胰岛素刺激脂肪细胞的影响。结果：鬼箭羽各提取组份SML-1，SML-2，SML-4(10μg/ml)对脂肪细胞葡萄糖的基础摄取率有所提高。SML-2，SML-3(100μg／ml)；SML-1，SML-2，SML-3，SML-4(10μg/m1)；SML-1，SML-3，SML-4(1μg／ml)；SML-1，SML-2，SML-3(0．1μg／ml)对于低浓度胰岛素(1．2nmol／L)刺激的外周葡萄糖摄取均有协同增强作用。SML-1，SML-2，SML-3，SML-4(100μg／ml)；SML-1，SML-2，SML-3，SMI-4(10μg／ml)；SML-1，SML-2(1μg／ml)；SML-1，SML-2(0．1μg／ml)可以提高胰岛素抵抗脂肪细胞的葡萄糖摄取水平。结论：鬼箭羽各提取组份可以促进正常脂肪细胞低浓度胰岛素刺激脂肪细胞的葡萄糖摄取，促进胰岛素抵抗脂肪细胞的葡萄糖摄取可能是其降糖作用机制之一。     

软脂酸制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的方法

目的用软脂酸（PA）诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨用PA制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）模型的方法。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,用油红O染色法鉴定细胞。用不同浓度的PA（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L）干预3T3-L1脂肪细胞24h,收集各组细胞培养液,用葡萄糖氧化酶法测定各组细胞培养液葡萄糖的含量,观察PA对3T3-L1脂肪细胞糖摄取的影响。结果 0.25mmol/L PA就可明显抑制成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的摄取（P〈0.01）,且呈浓度依赖性。与对照组相比,0.25mmol/L PA组、0.5mmol/L PA组、1.0mmol/L PA组葡萄糖摄取率分别下降5.25%、10.29%、14.54%。结论在胰岛素刺激下,0.25mmol/L PA作用于3T3-L1脂肪细胞24h就可诱导细胞产生IR,且随着浓度的增加其效果逐渐增强。     

没食子儿茶素促进脂肪细胞吸收葡萄糖研究

目的探讨没食子儿茶素对脂肪细胞在高浓度葡萄糖条件下吸收葡萄糖的作用。方法应用3T3-L1前脂肪细胞分化模型,测定在脂肪细胞中没食子儿茶素对葡萄糖吸收的作用和对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果没食子儿茶素可促进脂肪细胞中高浓度葡萄糖(30 mmol/L)条件下由胰岛素刺激的葡萄糖吸收,加快3T3-L1前脂肪细胞的分化。结论没食子儿茶素可增加脂肪细胞葡萄糖吸收并促进3T3-L1前脂肪细胞分化,提示没食子儿茶素可有效改变血糖浓度和改善胰岛素抵抗。     

蒲公英提取物改善胰岛素抵抗的体外实验研究

目的探讨蒲公英提取物对地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞模型的作用。方法培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导分化为脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况,同时采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,观察不同剂量蒲公英提取物(0.1,0.3,1,3,10,30μg/ml)对前脂肪细胞与胰岛素抵抗细胞培养基中葡萄糖浓度的影响。结果与空白组比较,蒲公英提取物各剂量组前脂肪细胞的MTT值均升高,除0.3μg/ml剂量组外,均具有显著性差异(P<0.001),且呈量效关系;脂肪细胞的MTT值无显著性差异;与空白组比较,蒲公英提取物能明显降低前脂肪细胞与胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖含量(P<0.001)。结论蒲公英提取物可以促进前脂肪细胞的增殖,对脂肪细胞活力无影响;对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。     

地黄寡糖对3T3-L1脂肪细胞增殖及胰岛素抵抗的作用

目的：探讨地黄寡糖对脂肪细胞增殖和胰岛素抵抗的影响。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况,同时采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,检测地黄寡糖对细胞培养基中葡萄糖浓度的影响。结果：在DMEM高糖培养基中,地黄寡糖可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制3T3-L1脂肪细胞增殖,作用呈明显量效关系；使3T3-L1前脂肪细胞及3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量增加,呈明显量效关系；地黄寡糖能明显增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,增强对胰岛素的敏感性。结论：地黄寡糖可以促进前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的增殖,地黄寡糖对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。     

胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞模型的建立及鉴定

目的建立胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞模型.方法培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化为脂肪细胞,采用地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型,检测不同时间段细胞培养基中葡萄糖浓度的变化,同时运用RT-PCR技术检测抵抗素(Resistin)基因的表达.结果随着时间的变化培养基中的葡萄糖浓度逐渐降低,在96 h达到胰岛素抵抗的最高峰,此时模型组的Resistin基因表达较空白组升高了约3倍.结论将3T3-L1脂肪细胞置于1μmol/L地塞米松环境中24 h,该细胞对胰岛素的作用产生抵抗,此胰岛素抵抗状态可以维持216 h.     

葛根素对3T3-L1前脂肪细胞分化及胰岛素抵抗模型糖代谢的影响

目的:研究葛根素(Pur)对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响,以及在胰岛素抵抗状态下对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢的影响。方法:不同浓度Pur干预3T3-L1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响;油红O染色法检测其对前脂肪细胞分化过程及成脂的影响;地塞米松诱导3T3-L1细胞建立胰岛素抵抗模型,用不同浓度Pur进行干预,测定细胞的葡萄糖消耗量。结果:Pur(3～300μmol/L)对3T3-L1前脂肪细胞增殖无明显影响;Pur(30～300μmol/L)促进3T3-L1细胞的分化成脂,增加胰岛素抵抗状态下3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖代谢,且具有量效关系。结论:Pur能够促进3T3-L1细胞的分化成脂,增加胰岛素抵抗状态下3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖代谢,改善胰岛素抵抗。     

基于3T3-L1细胞的不同黄连炮制品"止消渴"药效比较研究

目的:系统运用生物效应法从细胞途径探索不同黄连炮制品"止消渴"的药效差异,为黄连治疗2型糖尿病的临床有效用药提供科学依据。方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,观察不同黄连炮制品对细胞增殖、分化的影响,对胰岛素抵抗模型细胞培养液中葡萄糖消耗量的影响。结果:不同黄连炮制品均能明显或部分降低培养液中葡萄糖的含量,提高脂肪细胞葡萄糖的利用率,改善胰岛素抵抗,在一定剂量范围内促进3T3-L1前脂肪细胞的增值,抑制前脂肪细胞的分化;且与黄连生品相比较,萸制黄连、酒蒸黄连和酒炙黄连对上述改善作用更为明显。结论:不同黄连炮制品具有改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,增强脂肪细胞对葡萄糖摄取和利用的能力,从体外细胞水平上表现出改善胰岛素抵抗的作用,与黄连生品相比较,萸制黄连、酒蒸黄连和酒炙黄连"止消渴"疗效更优。     

黄连改善胰岛素抵抗药效物质基础研究

目的:从细胞途径多方面观察黄连药材、部位及其成分等对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化及脂肪细胞胰岛素抵抗的影响,探索黄连改善胰岛素抵抗的药效物质基础。方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,采用地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和胰岛素共同诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞,并建立胰岛素抵抗模型。依据黄连传统用药经验,观察黄连"药材-部位-生物碱成分"对脂肪细胞分化的影响,对胰岛素抵抗模型细胞培养液中葡萄糖消耗的影响。结果:除非生物碱部位在6.0μg.L-1具有明显促进分化作用外,其余各组无论黄连水提物、不同提取部位还是不同生物碱成分均能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,其中单体成分盐酸黄连碱在浓度16.5μmol.L-1时抑制作用最为明显;同时,各组也均能降低培养液中葡萄糖的含量,提高葡萄糖的利用率,改善胰岛素抵抗,作用与马来酸罗格列酮相似,其中单体成分盐酸药根碱在浓度10.5μmol.L-1时改善作用明显优于其余各成分。结论:黄连具有明显改善胰岛素抵抗,抑制前脂肪细胞分化的作用,其疗效可能是各成分协同作用的结果;同时其抑制分化作用也提示黄连在增加细胞对葡萄糖摄取的同时不会引起脂肪的聚集而造成体重增加,这对防治与胰岛素抵抗相关的代谢综合征或并发症具有一定临床意义。     

消渴丸主要化学成分对胰岛素抵抗脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的:观察消渴丸主要化学成分对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化及对胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖消耗、游离脂肪酸的影响。方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,药物干预48 h后,采用MTT法检测消渴丸主要化学成分对其增殖的影响,采用油红O染色法观察对其分化的影响。取分化成熟的脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,采用葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)检测培养液中葡萄糖消耗量;比色法检测游离脂肪酸浓度。结果:与溶媒对照组比较,部分消渴丸主要化学成分能显著促进前脂肪细胞增殖及分化(P0.05或P0.01);与溶媒对照组比较,大多数消渴丸主要化学成分能明显促进胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗、抑制游离脂肪酸的产生(P0.05或P0.01)。结论:部分消渴丸的提取物能够促进前脂肪细胞增殖以及分化,多数消渴丸的提取物能够改善胰岛素抵抗。     

小檗碱抑制IKKβ Ser 181磷酸化改善高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的 研究小檗碱对高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制.方法 以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时以阿司匹林作为阳性对照,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄人法观察葡萄糖的转运率,用Western blotting 检测IKKβ蛋白,IKKβSer 181磷酸化,IRS-1蛋白,IRS-1 Ser 307磷酸化,PI-3K p85蛋白,GLUT4蛋白的表达.结果 25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h使3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制60%,IKKβ Ser 181磷酸化、IRS-1 Ser 307磷酸化的表达增加,IRS-1和PI-3K p85蛋白的表达减少;同时加入小檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应.但高糖、小檗碱、阿司匹林对3T3-L1脂肪细胞IKKl3蛋白、GLUT4蛋白的表达无明显影响.结论 小檗碱可以明显改善高糖诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能是小檗碱通过抑制IKKβ Ser 181磷酸化,使IRS-1丝氨酸残基磷酸化减少而酪氨酸残基磷酸化增加,调节胰岛素信号蛋白的表达来实现的.