NDRG2对卵巢癌迁移和侵袭能力的影响3

目的:研究N-myc下游调节基因2(NDRG2)对卵巢癌迁移和侵袭能力的影响。方法:首先应用qRT-PCR实验检测NDRG2在正常卵巢组织和卵巢癌组织中的表达水平。再应用划痕实验和transwell小室实验检测NDRG2对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。最后检测NDRG2对SKOV3细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的影响。结果:在卵巢癌组织中NDRG2的表达水平明显低于正常卵巢组织。NDRG2的表达水平可以影响卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,NDRG2减少MMP-2和MMP-9的表达水平。结论:NDRG2在卵巢癌中作为一个抑癌基因可以影响癌症的侵袭和转移。     

MicroRNA-126对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨microRNA-126(miR-126)对卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭能力的影响,及其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外血管形成能力的影响。方法:利用脂质体瞬时转染miR-126 mimics、mimics NC于SKOV3细胞。Real-time PCR法检测卵巢癌组织及转染前后SKOV3细胞中miR-126的表达,Tanswell小室检测SKOV3细胞的迁移和侵袭情况。分离培养原代HUVECs,利用三维小管形成实验检测HUVECs体外血管形成情况。结果:卵巢癌组织中miR-126的相对表达量(0.29±0.38)显著低于正常卵巢上皮组织(1.18±0.47)(P<0.01)。miR-126 mimics组SKOV3细胞的miR-126相对表达量(5.15±1.00)显著高于未处理组(1.07±0.27)、NC组(0.99±0.20)。转染后,SKOV3细胞的迁移和侵袭能力均显著降低,但HUVECs三维成管数无显著变化。结论:miR-126表达上调能抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外迁移和侵袭能力,miR-126低表达可能与卵巢癌的疾病进展有关。     

miRNA-93在卵巢癌OVCAR3细胞的侵袭和迁移中的作用研究

目的:研究miR-93对卵巢癌细胞系OVCAR3侵袭及迁移能力的影响。方法:用miR-93的成熟模拟物过表达miR-93,用化学合成的特异性抑制物下调miR-93的表达。通过miRNA特异的定量PCR验证miR-93的过表达和抑制效率,采用MTT、软琼脂集落形成和Transwell侵袭实验分析miR-93表达对OVCAR3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。结果:miR-93过表达后,OVCAR3细胞的侵袭和迁移能力显著增强(分别达3.82倍和2.56倍)。降低内源性miR-93的表达后,OVCAR3细胞的侵袭和迁移能力分别下降了66.57%和57.26%。结论:miR-93能明显促进卵巢癌OVCAR3细胞的侵袭和迁移。     

microRNA-106a促进上皮性卵巢癌细胞系迁移和侵袭的研究

目的:探讨microRNA-106a(miR-106a)在上皮性卵巢癌(EOC)细胞迁移和侵袭中的作用,并验证TGFBR2是否系miR-106a的直接靶点。方法:选取具有不同转移能力的EOC细胞系(SKOV-3,A2780),用Real-time RT-PCR检测miR-106a在其中的表达。通过transwell实验,体外分析miR-106a是否具有促进EOC细胞系迁移和侵袭的作用。通过稳定性表达转化生长因子-β受体2(TGFBR2)或者沉默TGFBR2,探讨了miR-106a可能的作用靶点。结果:miR-106a在转移性EOC细胞(SKOV-3)中高表达(P0.05),可在体外促进EOC细胞的迁移和侵袭(P0.05)。这些表型上的改变并非由于miR-106a可同时促进癌症细胞的增殖所引起。miR-106a促进EOC细胞迁移和侵袭的作用是通过抑制TGFBR2来实现的。结论:miR-106a可通过直接抑制抗转移分子而促进EOC细胞的迁移和侵袭。     

Rab25 siRNA抑制人卵巢癌细胞粘附侵袭的实验研究

目的通过RNA干涉抑制Rab25在人卵第上皮性癌的过表达，观察Rab25基因沉默对卵巢癌A2780细胞的生物学效应，探讨Rab25基因沉默对卵巢癌侵袭及转移能力的影响。方法根据基因库上的Rab25mRNA序列，构建针对Rab25的siRNA重组质粒，稳定转染A2780细胞，通过RT-PCR检测Rab25的表达，利用粘附实验和transwell小室实验检测其对细胞的粘附力及侵袭能力的影响。结果成功构建Rab25的siRNA重组质粒，稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达，并且与对照相比，Rab25siRNA可显著影响卵巢癌细胞的侵袭粘附能力（P〈0．01）。结论成功构建Rab25siRNA显著抑制肿瘤细胞的侵袭粘附能力，对Rab25的研究有望为卵巢癌的基因治疗开辟新途径。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞系SKOV3细胞侵袭转移能力及其对尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及尿激酶受体(uPAR)表达的影响。方法:采用0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 3种浓度的As2O3处理人卵巢癌SKOV3细胞,48h后收集细胞,采用Transwell检测细胞的侵袭转移能力,实时定量PCR及免疫细胞化学方法检测uPA、uPAR mRNA及蛋白表达的变化。结果:经不同浓度As2O3处理的细胞,穿过模拟基底膜的数目逐步减少,As2O3明显抑制SKOV3细胞的侵袭转移能力(P<0.05);细胞uPA及uPARmRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著降低(P<0.05),其表达水平随着药物浓度的增加而降低。结论:As2O3可抑制卵巢癌细胞的侵袭转移能力,其机制可能与抑制uPA、uPAR的表达有关。     

Nanog介导FSH诱导卵巢癌转移和侵袭的研究

目的:探讨Nanog在FSH诱导的卵巢癌转移和侵袭中的作用。方法:采用Western blot法检测永生化卵巢上皮细胞Moody,良性卵巢肿瘤细胞Mcv152和卵巢癌细胞Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达。使用FSH以浓度梯度和时间梯度的方式处理SKOV3细胞,Western blot法检测Nanog蛋白表达。使用FSH处理si-Con或si-Nanog转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组:0.1%DMSO+转染空白干扰RNA组(Con+si-Con)、FSH+转染空白干扰RNA组(FSH+si-Con)、0.1%DMSO+转染Nanog干扰RNA组(Con+siNanog)和FSH+转染Nanog干扰RNA组(FSH+si-Nanog)。使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测4组细胞的转移和侵袭能力,Western blot法分析4组细胞中Nanog蛋白表达。应用免疫组化法检测卵巢癌组织中Nanog蛋白表达情况。结果:卵巢癌细胞系Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达明显高于永生化和良性卵巢上皮细胞系(P0.05)。FSH上调Nanog表达以浓度和时间依赖的方式。对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog)的迁移和侵袭能力明显低于实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)(P0.05)。卵巢癌组织中Nanog表达水平明显高于正常卵巢组织(P0.05),Nanog蛋白表达与卵巢癌转移相关。结论:Nanog是FSH重要的下游靶基因,介导FSH诱导的卵巢癌转移作用。     

二甲双胍对卵巢癌细胞侵袭迁移及MTA1表达的影响

目的:体外细胞培养实验检测二甲双胍对卵巢癌细胞SKOV3侵袭迁移能力的影响,以及其对转移相关因子1(MTA1)表达的影响。方法:用不同浓度二甲双胍处理卵巢癌细胞,采用划痕实验和transwell实验检测二甲双胍对细胞侵袭迁移能力的影响,Western blot法检测二甲双胍对细胞中MTA1蛋白表达的影响,qRT-PCR检测二甲双胍对细胞中MTA1 mRNA表达的影响。结果:与对照组(0mmol/L)相比,二甲双胍干预组的细胞迁移速度明显下降(P0.01);作用24h时,2.5mmol/L与5mmol/L组未见差异(P0.05);作用48h时,卵巢癌细胞的迁移速度随着二甲双胍浓度的增加而减弱(P0.01)。随着二甲双胍浓度的增加,穿膜细胞数减少(P0.01);二甲双胍干预组的MTA1 mRNA及MTA1蛋白表达明显降低(P0.05),不同药物浓度之间无差异。结论:二甲双胍抑制SKOV3细胞侵袭迁移,抑制作用与浓度呈正相关,其机制可能与抑制MTA1表达有关。     

姜黄素、佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长的影响

目的:通过研究抑癌剂姜黄素(CCM)、促癌剂佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、细胞形态及细胞周期的影响,探讨肿瘤细胞SKOV3增殖抑制的效应机制.方法:采用MTT法测定CCM、TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率.光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变.流式细胞仪检测细胞周期.结果:TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性,细胞生长停滞于G1/S期.部分细胞出现凋亡形态学改变.TPA抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性.细胞周期发生G1→S期阻滞.结论:CCM、TPA通过抑制细胞增殖,细胞周期发生停滞,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长.     

RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用

目的:探讨RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用。方法:构建RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV3,用RT-PCR和Westernblot检测SKOV3RhoAmRNA及蛋白表达水平;Boyden小室体外侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA的实验组与转染空载体的对照组比较,RhoAmRNA的表达丰度(RhoA/GAPDH)为12.01±1.72,明显高于对照组的6.81±1.24;RhoA蛋白的表达水平(RhoA/β-actin)为4.81±0.56,亦明显高于对照组的3.02±0.32,两者差异都有统计学意义(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验中实验组与对照组平均侵袭百分数分别为(47.60±1.47)%和(22.60±2.40)%(P<0.05),比较划痕后0h与24h的宽度差,实验组和对照组愈合百分比分别为(65±6.4)%和(54±5.5)%(P<0.05);表明转染RhoA后,细胞侵袭和迁移能力明显增强。结论:RhoA增强了卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移能力。     

三氧化二砷、顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3黏附、转移能力的影响

目的 体外观察三氧化二坤(As2O3)、顺铂(DDP)单用和合用对SKOV3细胞黏附、转移等生物学行为的影响及相关机制探讨。方法 采用直接计数法检测As2O3、DDP作用于SKOV3细胞48h后对细胞黏附能力的影响，计算相对黏附率。采用免疫细胞化学法观察As2O3、DDP作用48h后，SKOV3细胞CD44V6、E-cad、MMP2表达的改变。结果 (1)As2O3、DDP单用或合用均能明显减弱SKOV3细胞的黏附能力，且具有浓度依赖性。联合组作用强于单用药物组。(2)As2O3能轻微上调SKOV3细胞E-cad蛋白的表达，降低MMP2表达，明显降低CD44V6蛋白的表达，DDP及联合组也能降低CD44V6及MMP2蛋白的表达，但对E-cad蛋白的表达无影响。结论 As2O3、DDP均能明显抑制SKOV3细胞的黏附能力，其抑制机制与二者下调CD44V6、MMP2表达有关，而As2O3还能同时上调E-cad蛋白表达使癌细胞不易脱落播散。     

siRNA LSINCT5联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LSINCT5联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响。方法:选取SKOV3细胞株,采用小干扰技术将LSINCT5基因片段转入卵巢癌SKOV3细胞中,同时联合顺铂作用于卵巢癌细胞。按不同处理因素将SKOV3细胞分为5组:对照组、NC-siRNA组、顺铂组、LSINCT5-siRNA+顺铂组和LSINCT5-siRNA组。CCK-8检测转染后SKOV3细胞对顺铂的敏感性。显微镜下观察细胞的生长状况及形态变化。Western blot和RT-PCR法分别检测与凋亡相关的Caspase 3蛋白和基因表达水平。结果:CCK-8显示,3μg/ml顺铂作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度。沉默LSINCT5能显著提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。LSINCT5-siRNA+顺铂组中Caspase 3蛋白和mRNA相对表达量均明显高于其他各组(P0.05)。结论:沉默LSINCT5提高了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。沉默LSINCT5联合顺铂能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,促进卵巢癌细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物与卵巢癌的侵袭和转移

卵巢癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，5年存活率低，与其侵袭和转移的特性有关。细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肿瘤的侵袭和转移中起了关键性的作用，ECM的降解主要依靠蛋白水解酶，基质金属蛋白酶是较为重要的一类。大量实验表明基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)介导的细胞外基质的降解对肿瘤的侵袭起着极为重要的作用，而基质金属蛋白酶的组织抑制剂(tissue inhibitor of matrx metalloproteinases,TIMPs)可抑制MMPs的活性，MMPs和TIMPs的平衡失衡可导致肿瘤的浸润转移。本文就近年来有关MMPs的TIMPs在卵巢癌浸润和转移中的作用作一综述如下。     

GNAS-AS1靶向miR-2116-3 p基因表达调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的:探讨GNAS-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法:RT-qPCR法检测正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中GNAS-AS1和miR-2116-3 p表达水平.以SKOV3细胞为研究对象,分别转染GNAS-AS1小干扰RNA、mi...     

PRMT5对卵巢癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响

目的:研究精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)对卵巢癌A2780及SKOV3细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其可能机制。方法:设计并体外合成靶向PRMT5的siRNA序列(si P)及阴性对照序列(si C),分别转染卵巢癌细胞A2780、SKOV3。Brd U掺入实验检测细胞增殖能力;Transwell小室技术检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测PRMT5降调后E-cadherin蛋白表达变化。结果:转染si P后,卵巢癌细胞中PRMT5表达明显降低。A2780细胞中,si P组的Brd U阳性率明显低于si C组[(11.7±1.5)%vs(33.3±1.5)%,P0.001];SKOV3细胞中,si P组的Brd U阳性率明显低于si C组[(18.0±2.0)%vs(35.3±1.5)%,P0.001]。A2780和SKOV3细胞中,si P组的迁移和侵袭细胞数均显著少于si C组和N组,差异均有统计学意义(P0.001)。Western blot法显示,转染后72h,si P组中E-cadherin蛋白表达明显上调。结论:PRMT5参与了卵巢癌细胞的生长增殖和迁移侵袭的过程,干扰其表达能显著减慢细胞的增殖,减弱其迁移和侵袭能力。PRMT5可能通过调控E-cadherin表达参与卵巢癌细胞的迁移和侵袭过程。     

氧化石墨烯递送miRNA-21拮抗剂抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭的研究

目的:探讨氧化石墨烯共轭物(NGO-PEG-dendrimer)运载miRNA-21拮抗剂对卵巢癌细胞迁移和侵袭的作用。方法:原子力显微镜观察石墨烯结构。MTT法检测氧化石墨烯对卵巢癌细胞的毒性。荧光显微镜和流式细胞仪检测氧化石墨烯递送miR-21拮抗剂的效率。Western blot法检测miR-21靶蛋白PTEN表达。体外划痕和侵袭实验检测氧化石墨烯携带anti-miR-21对细胞的迁移和侵袭影响。采用荧光素酶报告基因(Fluc-3xPS)在小鼠模型上监测miR-21拮抗剂在小鼠体内的递送。结果:与树枝状大分子和Lipo2000相比,NGO-PEG-dendrimer显示出更低的细胞毒性和更高的转染效率。NGO-PEG-dendrimer有效地将anti-miR-21递送到细胞质中并且以剂量依赖性方式导致荧光素酶强度和PTEN蛋白表达的上调,并显著抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭。在动物水平上,NGO-PEG-dendrimer递送anti-miR-21导致Fluc-3xPS报告基因移植的小鼠肿瘤区域内的生物发光信号显著增加。结论:NGO-PEG-dendrimer是一种高效的纳米载体,可用于RNA寡核苷酸的体内递送。     

佛波酯诱导人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA突变的研究

目的:研究佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA(mtDNA)突变的诱导作用.方法:提取细胞DNA,进行mtDNA突变的分析,比较各组细胞之间mtDNA突变率和突变类型的差异.结果:mtDNA的突变热点依次是CoⅡ基因、ND5基因、Crytb基因和ND4基因,在mtDNA突变的测序中发现多个基因突变,突变类型主要为A→T,T→A,G→A,T→C,A→G,C→T,其中C→T为突变热点.结论:Cytb基因的突变可能会对线粒体的氧化过程产生显著的影响.人卵巢癌细胞株SKOV3株mtDNA编码区的C0Ⅱ、Cytb、ND4、ND5基因是一个具有高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系.     

降表达SFRP2基因对滋养细胞HTR-8侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨SFRP2基因表达降低对人绒毛膜外滋养细胞HTR-8迁移和侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒转染技术构建稳定降表达SFRP2基因的稳克隆细胞株,Transwell实验和划痕实验评估细胞的侵袭和迁移能力,Western blot法检测相关蛋白水平,平板克隆实验检测细胞的成球能力。结果:慢病毒转染SFRP2基因后,与HTR-8-vector组相比,HTR-8-shSFRP2-1/2组的穿膜细胞数增多、迁移距离增加; Vimentin、N-cadherin、MMP-9、MMP-2和Nanog、Oct4蛋白表达量明显增高,而E-cadherin蛋白表达量降低;细胞克隆形成数增加(P0.05)。给予Wnt抑制剂XAV 939后,Wnt/β-catenin信号通路的活性受到抑制,HTR-8-shSFRP2-1/2组细胞的侵袭、迁移能力及干性减弱。结论:降表达SFRP2基因可促进人绒毛膜外滋养细胞HTR8的迁移、侵袭能力和干性。     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路影响的研究

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株体外生长的影响及对SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路基因表达的影响,探讨莪术醇治疗卵巢癌的分子机制。方法不同浓度莪术醇作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法检测SKOV3细胞的增殖抑制率,实时荧光定量-PCR法检测SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达水平。结果莪术醇对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制作用,其强度随药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。实时荧光定量-PCR法检测证实莪术醇作用后SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达受到明显抑制。结论莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过降调节JAK2、STAT3基因的表达来实现的。     

桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法:选用人卵巢癌SKOV3细胞株进行体外培养,分为不同浓度桦褐孔菌醇组(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)和对照组(未加桦褐孔菌醇)。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定两组对人卵巢癌SKOV3细胞株的作用;应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜观察两组细胞形态学变化;通过免疫组化法比较两组核增殖抗原Ki-67的表达。结果:①作用48小时后,桦褐孔菌醇浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的抑制率分别为(17.16±4.71)%、(35.16±4.26)%和(57.83±3.48)%,与对照组(0)比较差异有统计学意义(P<0.05)。②HE染色光镜下,桦褐孔菌醇组卵巢癌SKOV3肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;倒置显微镜下,桦褐孔菌醇组SKOV3肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力明显减弱。③作用48小时后,桦褐孔菌醇浓度为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的Ki-67阳性表达率分别为(64.67±3.98)%、(43.83±3.06)%和(34.00±2.61)%,与对照组(92.83±3.06)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:桦褐孔菌醇对人卵巢癌SK-OV3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用,并表现出浓度依耐性。