帕金森病患者血浆α-synuclein、LC3、CacyBP/SIP水平与临床症状的相关性

目的 研究帕金森病(PD)患者外周血浆人α-突触核蛋白(synuclein)、微管相关蛋白1轻链(LC)3、钙周期蛋白结合蛋白(CacyBP/SIP)与PD临床症状的相关性.方法 选取47例PD患者(PD组)及25例健康体检者(对照组)血浆,采用CacyBP/SIP-酶联免疫吸附试验(ELISA)分析检测试剂盒、LC3...     

食管鳞癌组织中HIF-1α、Caspase-3蛋白的表达变化及意义

目的 探讨食管鳞癌组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白的表达变化及其与肿瘤浸润、转移的关系.方法 应用免疫组化SP法检测49例食管鳞癌中HIF-1α,Caspase-3蛋白的表达.结果 食管鳞癌组织中HIF-1α、Caspase-3蛋白阳性表达率分别为51.0%(25/49)、34.7%(17/49),与阴性对照组的0、100%相比,P均<0.05.HIF-1α、Caspase-3蛋白表达与食管鳞癌组织浸润深度及有无淋巴结转移有关(P均<0.05),与分化程度无关(P>0.05).HlF-1α、Caspase-3蛋白在食管鳞癌中的表达呈负相关(P<0.05).结论 食管鳞癌组织中存在HIF-1α蛋白的高表达和Caspase-3蛋白的缺失或低表达.这一变化与食管鳞癌的浸润转移有关,其机制可能与HIF-1α蛋白下调Caspase-3蛋白的表达有关.     

重症溃疡性结肠炎患者血清闭锁小带蛋白-1、GATA结合蛋白-3表达与预后有关

目的：检测重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)水平，探讨其与重症UC患者预后相关性。方法：收集重症UC患者97例为重症组，并根据患者预后情况将其分为预后良好组68例和预后不良组29例；另选取轻症UC患者50例为轻症组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组患者血清ZO-1、GATA-3水平，Pearson法分析ZO-1、GATA-3水平与Mayo评分的相关性，受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ZO-1、GATA-3对重症UC患者预后不良的预测价值。结果：与轻症组比较，重症组患者血清ZO-1水平显著降低，血清GATA-3水平、Mayo评分显著升高(P均<0.05);相关性分析显示，重症UC患者血清ZO-1水平与Mayo评分呈负相关(r=-0.650,P<0.05),GATA-3水平与Mayo评分呈正相关(r=0.474,P<0.05);与预后良好组比较，预后不良组患者血清ZO-1水平显著降低，血清GATA-3水平、Mayo评分显著升高(P均<0.05);血清ZO-1、GATA-3及Mayo评分联合...     

miR-325-3p靶向CLDN1调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移

目的 探讨微小核糖核酸-325-3p(miR-325-3p)靶向紧密连接蛋白1(CLDN1)调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移的作用。方法 将对数生长期的人肝癌细胞株SMMC-7721分为四组：阴性对照组、上调组、下调组和正常组。荧光显微镜观察各组细胞转染效率;细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖活性;侵袭小室(Transwell)实验检测各组细胞侵袭和迁移活性;实时-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-325-3p、CLDN1、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测各组CLDN1、ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2蛋白表达及p-ERK1/2水平;双荧光素酶报告基因检测验证miR-325-3p对CLDN1的作用。结果 阴性对照组、上调组和下调组细胞转染效率分别为(91.38±16.21)%、(92.17±15.93)%...     

阿尔茨海默病患者脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L水平变化及意义

目的 观察阿尔茨海默病(AD)患者α-突触核蛋白、β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、总牛磺酸(T-tau)、磷酸化牛磺酸(P-tau)、轻链蛋白(NF-L)水平变化,并探讨其临床意义.方法 AD患者43例(AD组),血管性痴呆(VD)患者51例(VD组),健康体检者30例(对照组),检测各组脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L,应用多因素分析联合5个指标区分AD和VD的灵敏度、特异度.结果 与对照组比较,AD组脑脊液α-突触核蛋白、T-tau、P-tau、T-tau/P-tau、NF-L水平升高,Aβ1-42水平降低(P均＜0.05);与对照组比较,VD组脑脊液α-突触核蛋白、T-tau、P-tau、T-tau/P-tau、NF-L水平升高(P均＜0.05);与VD组比较,AD组脑脊液Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau 水平升高(P均＜0.05).联合5个指标区分AD和VD的灵敏度为93％、特异度为88％.结论 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L在AD中表达升高或降低,联合检测五种指标有可能早期诊断AD及鉴别VD.     

远志皂苷元对Aβ1-42诱导PC12细胞凋亡和自噬的影响

目的:观察远志皂苷元(TEN)对阿尔茨海默病体外模型β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)诱导PC12细胞凋亡和自噬的影响。方法:体外培养PC12细胞,并随机分为对照组(正常生长PC12细胞)、模型组(Aβ_1-42诱导PC12细胞损伤)以及TEN低、中、高剂量组(Aβ_1-42诱导PC12细胞损伤+TEN低、中、高剂量)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白和自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和Beclin-1以及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,模型组细胞活力明显下降(P<0.01),p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01),Caspase-3、Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,TEN各剂量组神经元存活率升高,p-...     

血清Caveolin-1、Caspase-3水平与急性缺血性卒中患者早期神经功能恶化的关系

目的 探讨血清微囊蛋白-1(Caveolin-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)与急性缺血性卒中(AIS)患者早期神经功能恶化(END)的关系.方法 选取AIS患者148例为AIS组,根据其是否发生END分为END组(n=57)、非END组(n=91);同期选取体检健康者53例为对照组.收集各组临床...     

6-羟基多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中14-3-3蛋白表达的研究

目的 应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中14-3-3蛋白的表达变化.方法 在建立6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞PD模型的基础上,分别提取6-OHDA实验组和对照组孵育24 h的细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定出差异蛋白质.结果 DIGE分析发现实验组有一个表达明显上调的差异蛋白质点(P＜0.05),经质谱分析鉴定确认为14-3-3蛋白.结论 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的PD模型中14-3-3蛋白表达上调,提示14-3-3蛋白上调可能与PD的发病机制有关.     

高敏C反应蛋白研究进展

急时相蛋白(acute phase proteins)通常被分为两型：Ⅰ型和Ⅱ型急时相蛋白。Ⅰ型急时相蛋白包括血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A，SAA)、人C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、补体C3、大鼠结合珠蛋白(haptoglobin)和α1-酸性糖蛋白(α1-acid glycoprotein)。Ⅰ型急时相蛋白由白细胞介素-1(interleukin-1，IL-1)样细胞因子诱导包括IL-1α、IL-1β、     

α3神经型尼古丁乙酰胆碱能受体在阿尔茨海默病中的抗炎作用

目的 探讨α3nAChRs在阿尔茨海默病(AD)中的抗炎作用.方法 应用Western印迹,ELISA及实时定量PCR检测各组细胞核因子(NF-κBp65)和炎性趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1),巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白及mRNA表达情况.结果 与对照组比较,淀粉样蛋白(Aβ)处理α3nAChRsiRNA SH-SY5Y细胞NF-κBp65、TNF-α蛋白及mRNA表达增加(P＜0.05);MCP-1、MIP-1α表达变化不明显.结论 Aβ引起SH-SY5Y α3nAChR siRNA细胞NF-κBp65、TNF-α蛋白及mRNA表达升高,α3nAChR可能具有一定抗炎作用.     

妊娠合并心脏病患者MMP-1、GATA6、PTX3水平与不良妊娠结局的关系研究

目的探讨妊娠合并心脏病患者基质金属蛋白酶-1 (MMP-1)、GATA结合蛋白6 (GATA6)、正五聚蛋白3(PTX3)与不良妊娠结局的关系。方法选取2019年1月至2021年1月温州市中西医结合医院收治的妊娠合并心脏病患者42例,根据是否发生不良妊娠结局分为观察组(20例)和对照组(22例),比较两组的妊娠风险及MMP-1、GATA6 m RNA和PTX3水平,分析MMP-1、GATA6 mRNA和PTX3与妊娠风险分级关系及预测不良妊娠结局的价值。结果观察组妊娠风险分级与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组MMP-1、PTX3高于对照组,GATA6 m RNA低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);MMP-1和PTX3与妊娠风险分级呈正相关(r=0.598、0.829,均P<0.05),GATA6 mRNA与妊娠风险分级呈负相关(r=-0.690,P<0.05)。多因素logistic回归分析显示MMP-1、GATA6 m RNA和PTX3是不良妊娠结局的相关影响因素(均P<0.01);联合MMP-1、GATA6 mRNA和...     

Fascin-1在甲状腺癌细胞中表达及其对细胞生物学行为的调控作用

目的研究聚束蛋白(Fascin)-1在甲状腺癌细胞中表达及其对细胞生物学行为的调控作用。方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测人甲状腺癌细胞K1、GTHW3、FTC-133和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中Fascin-1 mRNA和蛋白水平。用Fascin-1 shRNA重组慢病毒感染甲状腺癌细胞,实时定量PCR和Western印迹检测感染效果。噻唑蓝(MTT)方法测定细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Transwell小室检测细胞侵袭能力变化,划痕愈合实验检测细胞迁移能力变化,Western印迹检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9、-2蛋白、活化的Caspase(C-Caspase)-3、-9蛋白水平。结果人甲状腺癌细胞K1、GTHW3、FTC-133中Fascin-1表达水平均显著高于人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1(P0.05)。Fascin-1 shRNA重组慢病毒感可以明显下调甲状腺癌细胞中Fascin-1表达。敲低Fascin-1后的甲状腺癌细胞增殖能力降低,细胞凋亡增多,细胞侵袭和迁移能力下降,细胞中MMP-2、-9蛋白水平降低,C-Caspase-3、-9蛋白水平升高。结论 Fascin-1在甲状腺癌细胞中高表达,敲低Fascin-1抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力,并促进甲状腺癌细胞凋亡。     

分泌型磷脂酶A2对脐静脉内皮细胞分泌和表达MCP-1、ICAM-1的影响

目的 体外研究分泌型磷脂酶A2(sPLA2)对原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌和表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分-1(ICAM-1)的影响.方法 体外培养HUVEC,随机分为6组:空白对照组,5个浓度的sPLA2(终浓度分别为10,1,10-1,10-2和10-3 U/ml),分别与HUVEC共培养24 h后,收集细胞和培养基,采用PCR方法和ELISA方法检测sPLA2作用HUVEC后MCP-1和ICAM-1 的mRNA和蛋白的表达水平.结果 与空白对照组相比,不同浓度的sPLA2刺激HUVEC分泌的MCP-1和ICAM-1蛋白和mRNA表达水平均有所增加,且随着sPLA2的浓度越高,MCP-1和ICAM-1蛋白和mRNA表达水平越高,具有直线相关性.结论 sPLA2可能通过促进分泌炎性因子参与动脉粥样硬化的进程.     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3的纯化及抗体制备

目的制备日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白Sj14-3-3的多克隆抗体与单克隆抗体。方法将合Sj14-3-3重组蛋白的凝胶条带冻干磨粉,免疫家兔,制备抗Sj14-3-3多克隆抗血请;用电洗脱纯化的Sj14-3-3免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗Sj14-3-3单克隆抗体。测定所得抗体效价及特异性鉴定。结果获得大量纯化的表达产物;制备的多克隆抗血清双扩效价达1:8～1:64。获得1株能稳定分泌抗Sj14-3-3单抗的杂交瘤细胞株4D9,单抗亚类为IgG1。此株单抗能与重组Sj14-3-3蛋白发生特异性反应。结论获得了高度敏感、特异的抗Sj14-3-3多克隆抗血清及稳定分泌抗Sj14-3-3单抗的杂交瘤细胞。     

刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达

目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。     

重组chemerin蛋白对3T3-L1脂肪细胞visfatin、MCP-1基因表达的影响

目的重组chemerin蛋白对3T3-L1脂肪细胞visfatin、MCP-1等基因表达的影响。方法 3T3-Ll前脂肪细胞诱导分化至第10天成熟后,分别以不同浓度(0、25、50、100、200 ng/ml)的chemerin蛋白干预12、24、48 h后收集细胞,RT-PCR法检测visfatin、MCP-1等基因的表达情况。结果 chemerin蛋白作用于成熟的3T3-Ll脂肪细胞24 h后,100 ng/ml干预组visfatin的表达与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),50、100、200 ng/ml的chemerin蛋白干预组MCP-1表达与未干预组比较差异显著(均P<0.05);作用48 h后,50、100、200 ng/ml的chemerin蛋白干预组与对照组相比均上调了visfatin与MCP-1的表达(均P<0.05)。结论重组chemerin蛋白上调成熟的3T3-Ll脂肪细胞visfatin与MCP-1基因的表达。     

冠心病病人miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白A水平与病情程度及预后的关系

目的 探讨冠心病病人血清miR-342-5p、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)、细丝蛋白A(filamin A)表达与病情程度及预后的关系。方法 选取2019年5月—2020年11月于我院治疗的95例冠心病病人作为病例组,另选取同期进行健康体检者50名作为健康组,检测两组血清miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白-A表达水平;按照Gensini评分将冠心病病人分为轻度组、中度组、重度组,比较3组病人miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白-A、Gensini评分、斑块稳定性相关指标、炎性因子,采用Pearson相关性分析法分析冠心病病人miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白-A与病情相关指标的相关性;随访1年,根据是否发生主要心血管不良事件(MACE)将病人分为MACE组、非MACE组,比较两组miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白-A表达,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白-A预测冠心病及MACE发生的临床价值。结果 病例组miR-342-5p、LTBP-2、细丝蛋白-A水平高于健康组(P<0.001...     

单核细胞趋化蛋白-1、癌胚抗原和C-反应蛋白在平阳霉素胸膜固定术中的变化及意义

目的 观察胸膜腔内注射平阳霉素(PYM)后胸腔积液(胸水)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)-1、癌胚抗原(CEA)和C-反应蛋白(CRP)水平的变化,探讨PYM胸膜固定术的机制.方法 2009年10月至2010年8月对31例恶性胸腔积液患者胸膜腔内注射PYM,检测注药前及注药后6 h、24 h、48 h胸水中MCP...     

老年住院病人血清胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3与衰弱的相关性研究

目的探讨老年住院病人血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平与衰弱的相关性。方法纳入2018年1月至2019年6月老年医学科年龄≥65岁的住院病人195例,进行衰弱表型评估和老年综合评估,采用ELISA法检测血清IGF-1、IGFBP-3水平,分析其与衰弱的相关性。结果与无衰弱、衰弱前期病人相比,衰弱病人血清IGF-1、IGFBP-3水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。有序多分类Logistic回归分析显示血清IGF-1(OR=0.943,95%CI0.894~0.994,P<0.05)、IGFBP-3(OR=0.397,95%CI0.259~0.607,P<0.001)水平与衰弱显著相关。结论血清IGF-1、IGFBP-3水平与老年住院病人衰弱显著相关,可能成为老年人衰弱的预测指标。     

诺如病毒腹泻患者血清I-FABP、MIP-1α水平检测及诊断价值分析

目的 探讨诺如病毒感染性腹泻患者血清肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)水平检测及诊断价值。方法 纳入本院收治的诺如病毒感染性腹泻患者90例(诺如组),细菌感染性腹泻患者90例(细菌组)及健康志愿者90例(对照组)。酶联免疫吸附法检测血清I-FABP、MIP-1α水平,比较3组血清I-FABP、MIP-1α水平差异。诺如组根据脱水分型将其分为：无脱水(28例)、轻度脱水(37例)与严重脱水(25例),分析不同脱水分型患者血清I-FABP、MIP-1α及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白介素(IL)-6水平。受试者工作特征(ROC)曲线评价血清I-FABP、MIP-1α对细菌感染性腹泻与诺如病毒感染性腹泻的鉴别价值,Pearson法分析血清I-FABP、MIP-1α水平与炎症因子水平相关性,多元线性回归分析诺如组血清I-FABP或MIP-1α水平的影响因素。结果 对照组、诺如组及细菌组患者血清I-FABP[(2.57±0.43)ng/mL、(4.29±0.61)ng/mL、(5.22±0.70)ng/mL]、MIP-1α水平[(...