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1.
目的 建立葡萄糖酸钙注射液有关物质的测定方法,对高温降解杂质[相对保留时间(relative retention time,RRT)4.18]进行结构鉴定。方法 采用HPLC进行有关物质测定,使用Xbridge C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为含0.1 mol·L-1磷酸氢二钾与1 mmol·L-1四丁基氢氧化铵的混合溶液,用磷酸调节pH值至5.5,检测波长为210 nm。采用HPLC-Q-TOF/MS方法,对RRT 4.18杂质做结构鉴定。结果 有关物质测定方法条件下主成分与杂质分离度良好,RRT 4.18杂质鉴定为5-羟甲基-2-糠酸。5-羟甲基-2-糠酸的线性范围为0.18~2.26 μg·mL-1(r=0.999 0),检测限为0.06 μg·mL-1。结论 建立的方法能准确测定葡萄糖酸钙注射液中的有关物质,可为本品的工艺优化和质量控制提供参考依据。 相似文献
2.
目的:评价超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定人尿液中甲氨蝶呤浓度的不确定度。方法:通过考察测定方法,分析实验过程中的不确定度来源,包括对照品称量、标准溶液配制和样品制备、回收率及基质效应、校正曲线拟合、仪器的精密性、实验温度和对照品纯度等,然后逐一评定并计算合成不确定度和扩展不确定度。结果:置信概率P为95%时,人尿液中甲氨蝶呤低浓度0.06 μmol·L-1和高浓度3 μmol·L-1质控样品的扩展不确定度分别为0.006 5 μmol·L-1和0.20 μmol·L-1。结论:根据不确定度的大小及来源,改良测定方法,提高分析准确性。UHPLC-MS/MS法测定人尿液中甲氨蝶呤浓度的不确定度在低浓度时主要由曲线拟合、生物样品配制和标准液配制、回收率及基质效应引入;高浓度的不确定度主要由生物样品配制和标准液配制、回收率引入。 相似文献
3.
目的: 采用超高效液相色谱法(UPLC)测定风湿骨痛丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱5种成分的含量。方法: (1)乌头碱、次乌头碱、新乌头碱检测方法:色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),ACQUITY UPLC HSS T3预柱(5 mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相为甲醇-0.3 mol·L-1三乙胺(65∶35,V/V),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃,检测波长235 nm,进样量10 μL;(2)麻黄碱、伪麻黄碱检测方法:色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),采用梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温30℃,检测波长210 nm,进样量10 μL。结果: 乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱分离度良好;线性范围依次为4.00~80.04 μg·mL-1(r=0.999 4),4.00~80.02 μg·mL-1(r=0.999 3),4.03~80.57 μg·mL-1(r=0.999 6),6.40~640.25 μg·mL-1(r=0.999 6),6.41~641.34 μg·mL-1(r=0.999 7);检出限依次为2.03,1.98,1.93,3.67,3.73 μg·mL-1;定量限依次为3.98,3.87,4.03,6.37,6.41 μg·mL-1;平均回收率依次为99.06%,98.87%,99.95%,99.92%,100.54%,RSD依次为0.95%,1.55%,1.58%,1.18%,0.91%;风湿骨痛丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱的平均含量依次为0.001%,0.004%,0.004%,0.041%,0.027%。结论: 本研究UPLC方法准确,重复性良好,可测定风湿骨痛丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、麻黄碱、伪麻黄碱的含量,为风湿骨痛丸的质量控制提供参考。 相似文献
4.
目的 建立采用UHPLC-MS/MS同时测定牛奶中5种头孢菌素类药物残留的方法。方法 牛奶样品(约5 g)加10 mL Na2EDTA-McIlvaine提取液提取后,涡旋离心,取中层清液,加入0.1 mol·L-1 NaOH溶液调节pH至8.5,取上清液过HLB固相萃取柱富集并净化。富集浓缩后以Waters ACQUITY UPLC BEH(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色谱柱为分离柱,以0.1%甲酸溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾正离子源,以多反应监测模式进行质谱检测。结果 牛奶中5种头孢菌素类药物在1~20倍定量限浓度范围内有良好的线性关系,所得回收率为88.1%~114%,重复性试验RSD(n=6)均<6.55%,检出限为0.7~1.6 μg·kg-1。结论 本方法专属性好、灵敏度高、准确性好,可多组分同时测定牛奶中的头孢类药物残留。 相似文献
5.
唐杨 《中国现代应用药学》2019,36(1):41-44
目的 建立HPLC测定异维A酸有关物质的方法。方法 色谱柱为NUCLEOSIL 100-3 C18(4.6 mm×150 mm,3 μm),以甲醇-水-冰醋酸(770:225:5)为流动相,流速为1.0 mL·min-1;柱温为25℃,检测波长为355 nm。结果 异维A酸峰与杂质H、I、维A酸、强制降解杂质峰分离良好;异维A酸、杂质H、I和维A酸的线性范围分别为0.000 545 5~21.82 μg·mL-1(r=0.999 9),0.002 856~7.14 μg·mL-1(r=0.999 0),0.002 789~6.97 μg·mL-1(r=0.999 1)、0.017 07~22.76 μg·mL-1(r=0.999 6);检测限分别为0.27,0.60,0.65,5.50 ng·mL-1,定量限分别为0.55,2.85,2.80,17.00 ng·mL-1;杂质H、I和维A酸的平均回收率分别为101.57%,102.02%,101.03%,RSD分别为0.5%,0.8%,1.5%。结论 建立的HPLC方法准确、专属性强,可用于异维A酸有关物质的测定。 相似文献
6.
目的 建立LC-QQQ-MS/MS分析测定苯磺酸氨氯地平中痕量苯磺酸酯类基因毒性杂质苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯的检测方法。方法 采用Agilent Zorbax SB-C18(3.0 mm×100 mm,1.8 μm)色谱柱,以水(含5 mmol·L-1甲酸铵和0.1%甲酸)和甲醇(含5 mmol·L-1甲酸铵和0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,电喷雾离子化(ESI),正离子模式下MRM采集。结果 苯磺酸甲酯定量下限为20 ng·mL-1,苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯定量下限为1 ng·mL-1;方法精密度良好,保留时间和峰面积RSD均<5%(n=10);苯磺酸甲酯在20~1 000 ng·mL-1,苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯在1~1 000 ng·mL-1内呈良好的线性关系,r≥0.998;方法准确度良好,平均加样回收率(n=10)分别为99.77%,100.19%,94.21%和92.43%。5个不同厂家生产的苯磺酸氨氯地平中苯磺酸甲酯的含量均-1),苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯的含量均-1)。结论 该方法可用于苯磺酸氨氯地平中痕量基因毒性杂质苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯含量的检测分析。 相似文献
7.
目的 优化维生素B2片中有关物质的检测方法。方法 采用Welch Ultimate AQ-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长267 nm;柱温30℃。结果 各杂质与主成分峰分离度良好;杂质A在0.008 7~0.053 5 μg·mL-1(r2=0.998 1)、杂质B在0.019 8~0.812 3 μg·mL-1(r2=0.999 8)、杂质D在0.007 3~0.838 7 μg·mL-1(r2=1.000 0)、维生素B2在0.011 3~0.427 6 μg·mL-1(r2=0.999 4)内呈现良好的线性关系;杂质A、杂质B、杂质D平均回收率(n=9)分别为100.1%(RSD=1.6%)、100.6%(RSD=2.0%)和101.1%(RSD=1.1%)。结论 本检测方法专属性强、准确度高,可用于控制维生素B2片中的有关物质。 相似文献
8.
目的 建立HPLC测定愈创木酚磺酸钾有关物质的方法。方法 采用InertSustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.02 mol·L-1磷酸盐缓冲液(20∶80)为流动相,流速1 mL·min-1,柱温35℃,检测波长279 nm。结果 愈创木酚磺酸钾的2个异构体能得到有效分离,主成分与杂质的分离度良好。主成分及其各杂质在各自浓度范围内呈现良好的线性关系(r>0.999);异构体Ⅲ、愈创木酚和杂质Ⅰ的平均加样回收率分别为101.35%,100.78%,99.45%,RSD分别为0.7%,0.7%,1.4%。结论 该方法快速、准确、专属性强,可用于愈创木酚磺酸钾原料药的有关物质检查。 相似文献
9.
目的: 初步探明美托洛尔对伊伐布雷定药代动力学的影响及其机制。方法: 对照组:灌胃给予伊伐布雷定(1.0 mg·kg-1),实验组:相继灌胃给予美托洛尔(1.0 mg·kg-1)和伊伐布雷定(1.0 mg·kg-1),比较两组间伊伐布雷定的药代动力学参数;采用原代肝细胞,分为对照组:伊伐布雷定(0.2、0.5、1 μmol·L-1),实验组:美托洛尔(0.5、1.0、2.0 μmol·L-1)+伊伐布雷定(0.2、0.5、1 μmol·L-1),探讨美托洛尔对伊伐布雷定肝脏摄取的影响。结果: 合用美托洛尔后,伊伐布雷定药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分别增加了121.70%、123.14%、119.80%,而CLz/F值降低了54.49%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。美托洛尔明显抑制肝细胞对伊伐布雷定的摄取,抑制作用随美托洛尔的浓度增加而增强。结论: 美托洛尔可以影响伊伐布雷定药代动力学特征,可能与抑制伊伐布雷定肝脏摄取有关。 相似文献
10.
目的 建立高效液相色谱法测定盐酸丙卡特罗片中的有关物质。方法 采用Waters Symmetry ShieldTM C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),以1.0 mmol·L-1庚烷磺酸钠-甲醇-醋酸(81∶15∶4)为流动相;流速为1.0 mL·min–1;柱温为35℃;检测波长为254 nm。结果 杂质A、B、C线性相关系数均>0.999,其平均回收率为95.0%~105.0%(n=9),校正因子分别为1.0,0.4,0.5。结论 该法专属性强、简便可靠,适用于盐酸丙卡特罗片有关物质检查,为其质量控制提供检测依据。 相似文献
11.
目的:建立高效液相色谱法(HPLC-UV)测定人红细胞中硫唑嘌呤代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGN)和6-甲基巯嘌呤(6-MMP)的浓度,用于炎症性肠病患者治疗药物监测。方法:300μL红细胞裂解液加入二硫苏糖醇溶液(0.5mol·L-1)60μL,40μL高氯酸(70%)沉淀蛋白后,酸性条件下6-TGN水解生成6-硫鸟嘌呤(6-TG),6-MMP水解反应生成4-氨基-5-(甲硫基)羰基咪唑。Diamonsil C8(2)色谱柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇/20mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.1%磷酸),梯度洗脱,流速0.95mL·min-1,柱温30℃,6-TG、6-MMP检测波长分别为340nm和303nm。结果:6-TG在0.12~12μmol·L-1、6-MMP在0.3~30μmol·L-1浓度范围内线性关系良好,批内、批间精密度及准确度满足要求,成功用于炎症性肠病患者的治疗药物监测。结论:本文考察了影响6-TGN和6-MMP水解反应的重要因素,开发出稳健、快速、操作简便的HPLC-UV法,可用于常规监测炎症性肠病患者红细胞中6-TGN及6-MMP浓度,为硫嘌呤类药物个体化治疗提供依据。 相似文献
12.
目的 探讨辣椒素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的影响。方法 体外构建自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞系,分别采用20 μmol·L-1辣椒素(高剂量组)、10 μmol·L-1辣椒素(中剂量组)、5 μmol·L-1辣椒素(低剂量组)和1 μmol·L-1厄贝沙坦(厄贝沙坦组)直接处理细胞或特异性阻断CD36的表达后,再分别用20 μmol·L-1辣椒素(高剂量组)、10 μmol·L-1辣椒素(中剂量组)、5 μmol·L-1辣椒素(低剂量组)和1 μmol·L-1厄贝沙坦(厄贝沙坦组)处理细胞,采用MTT法检测VSMCs增殖情况,Boyden趋化小室检测VSMCs迁移情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)检测平滑肌22a蛋白(smooth muscle 22a,SM22a)和调宁蛋白(Calponin)mRNA和蛋白的表达水平。结果 辣椒素和厄贝沙坦分别处理VSMCs后,与对照组相比,高、中、低剂量辣椒素组和厄贝沙坦组细胞增殖率和迁移率均有所降低,SM22a和Calponin的表达上调;与厄贝沙坦组相比,高剂量辣椒素组SM22a和Calponin的表达有所上调,中、低剂量辣椒素组SM22a和Calponin的表达均有所下调。特异性阻断CD36的表达后,与对照组相比,高、中、低剂量辣椒素组和厄贝沙坦组细胞增殖率降低,迁移率进一步降低,SM22a和Calponin表达上调;与厄贝沙坦组相比,高、中、低剂量辣椒素组SM22a的表达均有所上调,高、中、低剂量辣椒素组Calponin的表达有所下调。结论 高、中、低剂量辣椒素能够通过上调SM22a和Calponin的表达,抑制CD36的表达,来促进自发性高血压大鼠VSMCs由未分化表型向分化表型转化,从而抑制VSMCs的增殖及迁移和高血压血管重构的发生,促进其动脉管壁恢复正常的生理功能,有助于降低血压。 相似文献
13.
目的 优化HPLC测定酮缬氨酸钙含量的方法。方法 HPLC采用CAPCELL PAK C18 MGⅡ柱(250 mmx4.6 mm,5 μm),流动相为高氯酸钠溶液(pH 2.5)-乙腈(96∶4),柱温为35℃,检测波长205 nm,流速1.0 mL·min-1。结果 酮缬氨酸钙在0.025~0.185 mg·mL-1内有良好的线性关系(r=1.000 0),平均回收率(n=9)为100.0%。结论 该方法简便、快速、准确,灵敏度高,重复性好,可用于酮缬氨酸钙的含量测定。 相似文献
14.
目的 建立离子色谱法测定注射用酒石酸吉他霉素中酒石酸含量,通过酒石酸成盐率与pH值、澄清度的相关性研究,评价样品成盐率的合理性。方法 离子色谱法采用IonPac AS19阴离子交换色谱柱(4.0 mm×250 mm,7.5 μm)和IonPac AS19保护柱(4.0 mm×50 mm),检测器为抑制电导检测器,以20 mmol·L-1氢氧化钾溶液为流动相,流速1.1 mL·min-1。吉他霉素原料药与不同质量比的酒石酸进行配伍试验,探讨酒石酸比例与溶液pH值、澄清度的关系。结果 酒石酸浓度为1.0~50.0 μg·mL-1,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.999 8,n=6);定量限为1.0 μg·mL-1;平均回收率为99.5%(RSD=1.6%,n=9)。测定了2个厂家共10批样品,pH值4.2~4.3,酒石酸含量10.9%~11.4%,无显著统计学差异。配伍试验表明,溶液澄清时的酒石酸含量为8.8%~16.1%,溶液澄清时的pH范围为3.4~5.0。结论 本离子色谱法可用于注射用酒石酸吉他霉素中酒石酸含量的测定,2家企业的成盐工艺较为合理。 相似文献
15.
目的 探讨丹参水溶性成分拮抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导HTR8/SVneo细胞凋亡的相关作用机制。方法 以不同浓度(0,100,200,400,800,1 600 ng·mL-1)LPS处理HTR8/SVneo细胞,采用实时定量聚合酶链式反应验证HTR 8/SVneo细胞炎症模型的建立;细胞活力检测试剂盒检测各组细胞活力;划痕试验评估各组细胞向损伤区域迁移能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率并分析各组细胞线粒体膜电位。结果 200 ng·mL-1 LPS干预后HTR8/SVneo细胞的NLRP3炎症小体指标及炎症因子表达量增高(P<0.05)。与LPS组相比,丹酚酸B(0.08 μmol·L-1)、丹酚酸C(0.4 μmol·L-1)、紫草酸(0.08 μmol·L-1)干预后HTR8/SVneo细胞活性明显升高(P<0.01)。与LPS组比较,丹参水溶物质组凋亡率显著降低(P<0.05或P<0.01),线粒体膜电位水平显著升高。结论 丹参水溶物质能够提高LPS干预后HTR8/SVneo细胞活力,改善细胞迁移能力,提高细胞线粒体膜电位,进而抑制细胞凋亡。 相似文献
16.
目的:研究麦冬皂苷B对A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法:细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度麦冬皂苷B处理后A549细胞的存活率;将A549细胞分为对照组和麦冬皂苷B低、中、高(12,24,48 μmol·L-1)剂量组干预24 h,分析细胞克隆形成情况;DCFH-DA、C11-BODIPY、FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧、脂质过氧化水平、Fe2+浓度的荧光强度变化;GSH和MDA试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR法和Western blot法分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况。结果:与对照组比较,A549细胞存活率随麦冬皂苷B药物浓度增大逐渐降低,其IC50为 23.7 μmol·L-1。麦冬皂苷B低、中、高(12,24,48 μmol·L-1)剂量组显著细胞克隆形成(P<0.05)。与对照组比较,OP B低、中、高(12,24,48 μmol·L-1)剂量组显著增强细胞内脂质过氧化水平的荧光强度和脂质过氧化产物MDA 积累(P<0.05),且呈剂量依赖性,OP B中、高(24,48 μmol·L-1)剂量组显著增强细胞内ROS和亚铁离子的荧光强度(P<0.05),明显降低细胞内GSH含量(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组比较,OP B中、高(24,48 μmol·L-1)剂量组显著降低GPX4、SLC7A11 mRNA 水平(P<0.05),只有OP B高(48 μmol·L-1)剂量组显著降低SLC40A1 的mRNA水平;Western blot结果显示,与对照组比较,OP B低、中、高(12,24,48 μmol·L-1)剂量组显著降低SLC7A11的蛋白水平(P<0.05),OP B中、高(24,48 μmol·L-1)剂量组显著降低GPX4、SLC7A11的蛋白水平(P<0.05)。与对照组比较,OP B中、高(24,48 μmol·L-1)剂量组显著降低Nrf2的mRNA水平和Nrf2和HO-1的蛋白水平(P<0.05),而OP B高(48 μmol·L-1)剂量组显著降低HO-1的mRNA水平(P<0.05)。结论:麦冬皂苷B能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路促进细胞铁死亡有关。 相似文献
17.
目的 观察胡椒碱对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的Caspase 3/Bax/Bcl-2信号通路机制。方法 将人胰腺癌PANC-1细胞分为阴性对照组和40,20,10 μmol·L-1胡椒碱组,采用MTT、台盼蓝染色计数及平板克隆形成试验法检测胡椒碱对PANC-1细胞增殖、生长曲线及克隆形成的影响;采用Hoechst 33258染色法观察胡椒碱对PANC-1细胞凋亡形态学的影响;采用RT-PCR和Western blotting法检测胡椒碱对PANC-1细胞Caspase 3、cleaved-Caspase 3、Bax及Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响。结果 MTT、台盼蓝染色计数和平板克隆形成实验结果显示40,20 μmol·L-1胡椒碱可明显抑制PANC-1增殖、细胞生长曲线和克隆形成;Hoechst 33258染色实验显示40,20,10 μmol·L-1胡椒碱有诱导PANC-1细胞凋亡作用;RT-PCR和Western blotting实验结果显示40,20 μmol·L-1胡椒碱可上调PANC-1细胞Caspase 3、Bax mRNA表达水平,上调cleaved-Caspase 3和Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结论 胡椒碱可抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长、增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与调控Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。 相似文献
18.
目的 从民族药山胡椒内生真菌Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1的代谢物中寻找活性先导化合物。方法 采用正相硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及制备型HPLC等对Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1发酵物进行分离纯化,再通过NMR、ESI-MS等鉴定化合物结构,同时采用人乳腺癌细胞(MCF-7)和人肺癌细胞(A549)对这些化合物的抗肿瘤活性进行初步评价。结果 从2株内生真菌次级代谢产物中共分离鉴定了12个化合物:alantrypinone (1)、oryzalactam (2)、phomoindene A (3)、cis-gregatin B (4)、huaspenone B (5)、stigmasta-7,22-dien-3β,5α,6α-triol (6)、ergosterol (7)、1-deoxy-2-demethylviridiol (8)、viridiol (9)、trichodermamides A (10)、chromone (11)、对-羟基苯乙酸(12)。抗肿瘤活性评价结果显示,化合物3 抑制MCF-7细胞增殖活性IC50为(62.9±1.02)μmol·L-1[顺铂(cisplatin,DDP) IC50为(30.1±1.67)μmol·L-1];化合物8 和9 抑制A549细胞增殖活性的IC50分别为(34.6±1.57)μmol·L-1和(44.9±1.74)μmol·L-1[DDP IC50为(20.6±1.42)μmol·L-1]。结论 化合物3 ,8 和9 具有潜在抗肿瘤活性。 相似文献
19.
目的 建立一种高效液相色谱法对维生素B1片剂和原料药有关物质进行检测。方法 采用Waters液相色谱柱Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相A为4.045 g·L-1庚烷磺酸钠溶液(含1%三乙胺,用磷酸调节pH至3.5),流动相B为甲醇-乙腈(1:1),采用梯度洗脱,波长为254 nm,流速为1.0 mL·min-1。结果 分离度溶液中各杂质之间分离度均>1.5,片剂辅料不干扰8个已知杂质出峰,各已知杂质检测限为0.005~0.015 μg·mL-1;在高温、高湿、光照条件下杂质H和未知杂质均有不同程度增长。结论 该方法可以同时运用于维生素B1原料药和片剂的有关物质检测,维生素B1片应在阴凉干燥避光的条件下保存。 相似文献
20.
目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca2+浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca2+浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L-1 PF组和80 μmol·L-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca2+浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。 相似文献