微小核糖核酸miR-146a-5p、miR-23a-3p在儿童耐药性癫痫血清中的表达

目的 探讨miR-146a-5p、miR-23a-3p在耐药性癫痫患儿血清中的表达水平及其临床意义.方法 收集68例耐药性癫痫患儿、64例非耐药性癫痫患儿及55例体检健康者静脉血标本,用Hiseq测序法对血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA)测序并测定表达量,用RT-qPCR验证耐药性癫痫患儿血清差异性表达的miR-146a-5p、miR-23a-3p.结果 与非耐药性癫痫比较,Hiseq 测序显示耐药性癫痫患儿血清中,78种miRNA 表达量上升,22种miRNA表达量下降,miR-146a-5p、miR-23a-3p的fold-change分别为1.241和1.302.RT-qPCR结果表明,与非耐药性癫痫miR-146a-5p(1.183±0.848)、miR-23a-3p(1.633±0.970)表达水平比较,耐药性癫痫患儿分别为(1.563±1.831)和(2.119±1.543),表达水平均升高,差异有统计学意义(t 分别为2.142 和2.150,P 均<0.05),而且与非耐药性癫痫用药前比较,二者在耐药性癫痫用药前血清中表达已经上升,差异有统计学意义(t分别为2.381和2.345,P 均<0.05).结论 耐药性癫痫患儿血清miR-146a-5p、miR-23a-3p表达升高,有望成为早期诊断及评估预后的分子标记物.     

凝血酶对脑出血后脑损伤的作用机制

凝血酶在对脑出血后脑组织的损伤中起着重要作用。本文通过介绍凝血酶的化学结构及其受体的分布，从脑水肿，炎症反应，脑缺血损伤，神经元损伤四个方面，对凝血酶在脑出血后脑损伤的作用机制进行综述。最后对小剂量凝血酶 预处理在脑组织中的保护作用进行了展望。     

miR-34a-5p靶向BCAN对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响

目的 探究MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其与短蛋白聚糖(BCAN)的靶向关系.方法 收集36例脑胶质瘤患者的脑胶质瘤组织和因脑外伤行内减压术的36例患者的正常脑组织.体外培养人胶质瘤细胞U373、U251 MG、LN229、A172和人正常星形胶质细胞N...     

高血压脑出血患者外周血miR-155、miR-27a-3p表达水平及其临床意义

目的 研究高血压脑出血(HICH)患者外周血微小microRNA-155(miR-155)、microRNA-27a-3p(miR-27a-3p)表达水平及其临床意义.方法 选取2018年01月-2020年01月四川绵阳四0四医院神经外科收治的100例HICH患者作为研究对象,设为观察组,根据格拉斯哥昏迷(GCS)评分...     

芝麻素对实验性脑出血后脑损伤的保护作用

目的探讨芝麻素对实验性脑出血后继发脑损伤的保护作用。方法采用自体血脑出血模型,随机将小鼠分为假手术组、脑出血组、脑出血后注射芝麻素组。称量脑组织干湿重来观察脑水肿的变化;通过伊文思蓝渗出量评估血-脑屏障的破坏;同时用免疫荧光双标和Western blot方法检测血-脑屏障结构中紧密连接蛋白的表达改变;采用实时荧光定量PCR检测脑出血周围组织中炎症因子IL-1、IL-6和TNF-α的表达水平。结果芝麻素显著减轻了脑出血后脑组织的水含量(P0.05);减少了伊文思蓝的渗出量(P0.001)和紧密连接蛋白的降解;并降低了炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平(均P0.001)。结论芝麻素可能是通过抑制炎症反应,改善血-脑屏障的破坏,减轻脑水肿,从而保护脑出血后继发脑损伤。     

miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞增殖和糖酵解的初步研究

目的研究微小核苷酸125a-5p(miR-125a-5p)在胶质母细胞瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和糖酵解的影响。方法定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测miR-125a-5p在人源胶质母细胞瘤组织中的表达情况;利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测miR-125a-5p对细胞活力的影响;分别利用三磷酸腺苷(ATP)和乳酸试剂盒检测miR-125a-5p对ATP和乳酸生成的影响。结果 miR-125a-5p在胶质母细胞瘤组织中的表达明显低于肿瘤周边组织;miR-125a-5p对胶质瘤细胞具有生长抑制作用;miR-125a-5p减少了胶质瘤细胞中ATP和乳酸的产生;miR-125a-5p和有氧糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-DG)具有协同抑制胶质瘤细胞增殖的作用。结论 miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞的增殖和糖酵解,将来可能是潜在的胶质瘤治疗新靶点。     

miR-146a-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6抑制缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬

目的探究miR-146a-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬的影响。方法将mimic-NC质粒、miR-146a-5p mimic质粒、pc-TRAF6质粒、miR-146a-5p mimic质粒联合pc-TRAF6质粒分别转染N2a细胞,然后构建氧、葡萄糖剥夺(OGD) 1 h/再灌注(R) 24 h模型进行体外实验观察。另取雄性C57BL/6小鼠90只,分为6组(n=15),将上述不同的质粒分别注射至小鼠右脑室,制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型进行体内实验观察。采用qRT-PCR方法检测miR-146a-5p和TRAF6表达,苏木精-伊红染色观察脑组织损伤情况,并进行神经功能评分,流式细胞术检测N2a细胞凋亡,TUNEL检测海马神经元凋亡,蛋白免疫印迹法检测TRAF6、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Beclin1、Atg7和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达。结果①OGD/R和MCAO后miR-146a-5p低表达,而TRAF6高表达,且miR-146a-5p靶向负调控TRAF6;②miR-146a-5p过表达后,MCAO致中脑损伤显著减轻、神经功能改善(P 0. 01);③miR-146a-5p过表达后,可明显降低OGD/R和MCAO神经元凋亡率,下调cleaved caspase-3、Bax、Beclin1、Atg7和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(P 0. 01)。结论 miR-146a-5p过表达通过靶向负调控TRAF6抑制缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬。     

黄连碱上调miR-146a-5p后通过PI3K/AKT通路减轻由MPP+诱导的帕金森病细胞模型损伤

目的探讨黄连碱对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞损伤的影响及其机制。方法用0.3 mmol/L的MPP+处理SK-N-SH细胞作为PD细胞模型,记为MPP+组,以正常培养的细胞作为空白对照组。用浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的黄连碱预处理4h后再用0.3 mmol/L的MPP+处理作为不同浓度黄连碱处理组。将miR-con、miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后再用0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++miR-con组、MPP++miR-146a-5p组;将anti-miR-con、anti-miR-146a-5p转染至SK-N-SH细胞后用20μmol/L的黄连碱预处理4h及0.3 mmol/L的MPP+处理记为MPP++Cop+anti-miR-con组、MPP++Cop+anti-miR-146a-5p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;Western blotting实验检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达水平。结果与空白对照组比较,MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低,活化caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。黄连碱处理及miR-146a-5p过表达后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中细胞存活率显著升高,活化caspase-3表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1、miR-146a-5p表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对SK-N-SH细胞增殖促进和凋亡抑制的作用。黄连碱处理后MPP+诱导的SK-N-SH细胞中p-AKT、p-PI3K表达水平显著升高,低表达miR-146a-5p逆转了黄连碱对p-AKT、p-PI3K表达水平的促进作用。结论黄连碱可促进细胞存活,抑制MPP+诱导的细胞凋亡,其机制可能与miR-146a-5p及PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-27a-3p在高血压性脑出血患者外周血中呈下调表达

目的探讨脑出血患者外周血血清miR-27a-3p的表达情况。方法选取31例脑出血患者(脑出血组)和11例体检健康对照者(对照组),收集临床资料,qRT-PCR法测定外周血血清中miR-27a-3p的表达水平。结果与健康对照组比较,脑出血组血清miR-27a-3p表达呈显著下调(miR-27a-3p相对表达量为0.29),脑出血组血清miR-27a-3p表达水平与血肿体积呈明显线性负相关(相关系数R=--0.502,P=0.004)。结论在脑出血患者外周血血清miR-27a-3p表达水平呈下调趋势,其表达量与血肿体积呈线性负相关关系,可能成为脑出血患者血肿体积的预测指标。     

细胞移植对脑出血脑损伤的保护作用

目前用于脑出血治疗研究的主要细胞有：神经干细胞、遗传工程神经干细胞、骨髓间质干细胞、脐血细胞、胚胎干细胞、重组细胞、微囊化人工细胞等，本文就前5种细胞移植在出血性脑损伤中的保护作用进行综述。干细胞移植在脑出血性动物身上的实验所取得的良好效果，显示细胞移植重建损伤的脑组织、改善脑功能成为治疗脑出血疾病的必然途径。临床实验也取得了一定效果，但要真正应用于临床目前还有许多问题要解决：要想准确的定向诱导细胞分化，需要更深入的研究局部微环境，细胞因子及基因对干细胞分化的作用；细胞移植促进脑出血功能的恢复，其确切的机制还需要进一步研究 ；诱导分化的神经干细胞是否能象正常神经细胞一样能分泌神经递质，是否具有复杂的电生理等。     

首发精神分裂症患者外周血miR-22-3p、 miR-92a-3p表达及其对预后的影响

目的:探讨首发精神分裂症患者外周血微小RNA(miR)-22-3p、miR-92a-3p表达及其对预后的影响。方法:给予65例首发精神分裂症患者(患者组)第二代抗精神病药治疗;治疗前采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测外周血单核细胞中miR-22-3p、miR-92a-3p表达,并与25名健康体检者(对照组)比较;治疗前及1年后随访时分别给予阳性和阴性症状量表(PANSS)、临床总体印象量表(CGI)、社会功能缺陷筛选量表(SDSS)评估以及病中攻击行为评定;分析患者miR-22-3p、miR-92a-3p表达与临床相关因素的关系。结果:患者组miR-22-3p、miR-92a-3p相对表达量明显高于对照组;患者组中,miR-22-3p、miR-92a-3p高表达亚组的病程、病中攻击行为比例明显高于低表达亚组(P均0. 05); miR-22-3p、miR-92a-3p高表达亚组1年后随访时PANSS、CGI、SDSS评分显著高于低表达亚组(P均0. 05);多因素Logistic回归分析显示miR-22-3p、miR-92a-3p是影响首发精神分裂症患者预后的危险因素。结论:首发精神分裂症患者外周血miR-22-3p、miR-92a-3p异常高表达,可能是影响患者病情及预后的危险因素。     

miR-125a-5p靶向MEIS2基因对垂体瘤AtT20细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)是否可靶向调控MEIS2基因表达并分析其对垂体瘤AtT20细胞增殖及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测AtT20细胞及小鼠正常垂体细胞(NPC)中miR-125a-5p及MEIS2 mRNA表达量。采用瞬时转染技术分别将miR-125a-5p mimic质粒、anti-miR-125a-5p抑制剂及si-MEIS2质粒转染至AtT20细胞。双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p与MEIS2的靶基因关系,同时共转染miR-125a-5p mimic与pcDNA-MEIS2验证miR-125a-5p是否通过靶向MEIS2表达发挥作用。MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测各组细胞MEIS2蛋白表达。结果 qRT-PCR检测结果显示,与NPC比较,miR-125a-5p在AtT20细胞中表达水平显著降低,MEIS2 mRNA表达水平显著升高;与miR-NC组比较,miR-125a-5p组miR-125a-5p表达水平显著升高。W...     

反义miR-30a-5p抑制人脑胶质瘤细胞U87生长的体外实验研究

目的 前期发现miR-30a-5p在胶质瘤中表达明显上调,本实验探究敲低miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U87细胞生物学特征的影响.方法 real-time PCR检测转染miR-30a-5p I(miR-30a-5p抑制物)后U87细胞的miR-30a-5p表达水平,流式细胞术、MTT、Transwell、Annexin V法检测细胞周期、生长、侵袭及凋亡的改变;Western blot检测相关蛋白.结果 real-time PCR结果显示miR-30a-5p I可有效降低U87细胞中miR-30a-5p表达,抑制细胞增殖活性,使细胞周期阻滞在G0/G1期,侵袭能力明显受抑,凋亡增加,促增殖蛋白PCNA、促细胞周期进展蛋白Cyclin D1及促侵袭蛋白MMP-9的表达明显下调,而抑制侵袭蛋白TIMP-1及凋亡相关蛋白p53表达明显上调.结论 敲低U87细胞的miR-30a-5p表达可抑制胶质瘤的增殖及侵袭,诱导凋亡;miR-30a-5p可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在候选靶点.

Abstract：

Objective Our previous study had shown that there was overexpression of miR- 30a- 5p in malignant glioma cell lines.In the present study, we aim to investigate the effect of knocking -down miR -30a -5p on the biological characteristics of U87 glioblastoma cells.Method The U87 cells were divided into three groups:control cells,cells transfected with scramble oligonucleotides and cells transfected with miR -30a -5p inhibitors(miR-30a-5p I).Oligonucleotides mediated by lipofectamine were transfected to U87 cells.Real -time PCR was conducted to detect the expression of miR- 30a -5p in transfected cells.The cell proliferation was determined by 3- (4,5- Dimethylthiazol-2-yl) -2,5- diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay and flow cytometry.The cell invasion was evaluated by Transwell assay and cell apoptosis was detected with Annexin V staining Moreover, the relevant molecules regulating proliferation, invasion, cell cycle progression and apoptosis were examined by Western blot analysis.Results The expression of miR - 30a - 5p in the cells transfected with miR - 30a - 5p I was significantly reduced.The cell proliferation activity of U87 cell was inhibited.The cell cycle was arrested in G0/G1 phase, cell invasive ability was attenuated and apoptotic cells were increased in cells transfected with miR -30a -5pI as compared to those of the cells transfected with scrambled siRNA and control cells.The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), matrix metallopeptidase 9 ( MMP - 9) and Cyclin D1 were downregulated while the tissue inhibitor of metalloproteinase1 (TIMP - 1 ) and p53 were upregulated.Conclusions Transfection of miR - 30a-5p I into glioma cells could inhibit the proliferation activity and invasive ability of U87 cell and induce cell apoptosis, miR -30a -5p is a potential target of gene therapy for glioma.     

游离铁在脑出血后继发性脑损伤机制中的作用

铁过载是各种脑退行性疾病常见的病理现象.研究表明由铁离子催化的过氧化反应是造成脑组织损伤的重要原因,目前认为这种反应主要由组织内低分子量的二价铁化合物介导产生[1].     

H-7在脑出血后脑损伤中作用机制的研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂异喹啉磺酰类(H-7)在脑出血后脑损伤中的作用机制。方法SD雄性大鼠随机分为对照组、假手术组、脑出血组、H-7治疗组,采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型,治疗组应用H-7每12 h腹腔注射一次。分别用伊文思蓝(EB)测血脑屏障(BBB)通透性,干-湿重法测脑组织含水量,同时进行组织病理学观察。结果H-7治疗组可以明显改善大鼠脑出血后BBB通透性(P<0.05),血肿周围脑水肿明显减轻(P<0.05),并且减少脑出血后血肿周围炎症细胞浸润。结论H-7通过抑制PKC,减轻脑出血后脑水肿?血脑屏障的开放和炎症细胞浸润,揭示PKC参与了脑出血后脑损伤。     

炎症反应在脑出血后继发性脑损伤中作用机制的研究进展

正脑出血是第二大卒中类型,病死率和致残率高~([1])。目前,脑出血仍然没有统一规范的确切治疗方法。脑出血引起脑损伤的机制仍然不清楚,许多研究表明炎症反应在脑出血继发性脑损伤过程中有重要作用,调控炎症反应有助于减轻继发性脑损伤、脑水肿,改善神经功能障碍~([2,3])。本文就炎症反应在脑     

脑出血后继发性脑损伤的机制与治疗

脑出血具有高发病率和高死亡率的特点。近年研究表明，脑出血产生的继发性脑损伤机 制主要涉及凝血酶诱导、红细胞裂解、毒性反应、氧化损伤和炎症反应等多个方面。根据不同的损 伤机制，应运而生了多种脑出血的治疗策略，但是否能成功应用于临床还有待进一步研究。本文对脑 出血后继发性损伤的潜在机制和新兴治疗方法进行了综述。     

自发性脑出血后继发性脑损伤的影像学研究进展

在自发性脑出血所致原发性损伤的最佳治疗方法尚存争议的情况下,继发性脑损伤带来的影响越来越得到重视。继发性脑损伤是自发性脑出血后必然发生的病理生理过程,诸多研究表明继发性脑损伤对预后有着显著影响。影像学手段是临床研究中用于评估继发性脑损伤最常用的手段,不同的影像学方法均可对明确继发性脑损伤与预后的关系提供一定帮助。本文对继发性脑损伤各种影像学评估方法的研究现状展开综述,希望从中获取继发性脑损伤准确预测方法的新思路。     

铁超载与脑出血后脑损伤的相关性

目的 探讨血清铁蛋白作为体内铁负荷的指标,能否反映脑出血后继发性脑损伤与顸后的相关性.方法 经头颅CT证实符合入选标准的脑出血患者（ICH组）50例,发病后第3天与第28天采用化学发光法测定血清铰蛋白水平,酶联免疫吸附法测定一氧化氮（NO）,并作相应的头颅MRI检查,同时进行临床神经功能缺损程度评分.同期健康对照组（Con组）50例测定血清铁蛋白、NO水平,头颅MRI检查.结果 ICH组患者血清铁蛋白在第3天升高为（397.94±209.70）μg/L,与Con组比较（158.33±96.02）μg/L,差异有统计学意义（t=-7.345 8,P＜0.01）;在第28天明显下降为（162.06±123.50）μg/L,与发病后第3天比较差异有统计学意义（t=8.474 7,P＜0.05）.发病第3天血清NO水平为（43.69±34.08）μmmol/L,与Con组（41.56±42.80） μmmol/L比较差异无统计学意义（t=-0.275 3,P＞0.05）,但与发病第28天（17.42±20.88） μmmol/L比较差异有统计学意义（t=6.147 8,P＜0.01）.在发病第3天临床神经功能缺损程度评分与脑水肿绝对体积相关（B=0.766,P＜0.05）;在发病第28天临床神经功能缺损程度评分与侧脑室体部横径指数（B=16.6852,P＜0.01）、Huckman指数（B =-4.6077,P＜0.01）、脑沟宽度（B=32.3613,P＜0.01）相关.结论 脑出血后血清铁蛋白在发病后第3天升高,同期临床神经功能缺损程度评分与脑水肿绝对水肿体积之间呈正相关,此时的血清铁蛋白水平可能提示脑水肿高峰期水肿体积的大小.在发病第28天呈下降趋势,血清铁蛋白水平的变化可提示脑出血的预后,可能为今后脑出血后水肿的评估和治疗提供线索.